SZ-21拮抗血管生成的初步研究

本研究的目的是从SZ-1，-2，-21，-51，-65及262(GPⅡb/Ⅲa McAb)中筛选出与ECV304（人脐静脉内皮细胞株）起反应的单抗，研究其抗血管生成的能力。用流式细胞仪筛选与ECV304起反应的单抗，用酶标法检测反应的单抗对ECV304、肺癌细胞株A549粘附、迁移的作用，采用鸡绒毛尿囊膜（CAM）血管生成分析法观察其体外抗血管生成作用，以Annexin Ⅴ TITC盒检测单抗对A549细胞的凋亡作用。结果表明：筛选出了与ECV304起反应的SZ-21，其对ECV304与基质纤连蛋白（Fn）、胶原蛋白（Col）Ⅳ间粘附、迁移均有抑制作用，鸡绒毛尿囊膜经TNF-α诱导血管生成后SZ-21可抑制其新生。进一步研究发现SZ-21对肿瘤细胞A549（肺癌细胞株）与基质Fn，ColⅣ间粘附、迁移亦有拮抗作用，对A549细胞可诱导其凋亡。结论：SZ-21通过对整合素（integrin）β3的抑制和诱导凋亡的作用表现了抗血管生成的能力，整合素与Fn，ColⅣ的结合部位也不限于RGD序列，而具有不同的识别信号。     

葡萄糖漂移对血管内皮细胞生存的影响

该研究应用培养人脐静脉内皮细胞株ECV304在5,20,及5/20mmol/L葡萄糖浓度条件下,通过MTT,AnnxenV-FITC检测细胞生存抑制率及凋亡率观察,探讨葡萄糖漂移对血管内皮细胞的作用。结果显示恒定性高葡萄糖细胞生存率低于正常浓度,而波动葡萄糖浓度的生存率较恒定高浓度葡萄糖更低。结论:血糖漂移对血管内皮细胞的损害较恒定性高血糖更严重。是独立于恒定性高血糖之外的血管内皮细胞伤害因素。     

创伤弧菌溶细胞素vvhA融合蛋白细胞毒活性相关分子机制的探讨

目的:研究创伤弧菌溶细胞素vvhA融合蛋白(rVvhA)诱导人脐静脉内皮细胞(ECV304)凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化。方法:应用MTT法、Hochest33342/pI荧光双染、流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳分析rVvhA对人ECV304细胞诱导凋亡的影响;比色法测定rVvhA诱导人ECV304凋亡过程中caspase-3,-8,-9活性变化。结果:MTT结果显示rVvhA具有降低人ECV304细胞的存活率活性;浓度为2.0HU/ml的rVvhA作用人ECV304,12小时后,其诱导凋亡的活性高于对照组和浓度为0.5HU/ml的rVvhA处理组,具有剂量依赖性;浓度为2.0HU/mlrVvhA处理组加40μMcaspase全酶抑制剂(Z-VAD-FMK)后凋亡率较2.0HU/mlrVvhA处理组有一定程度降低。浓度为2.0HU/mlrVvhA处理人ECV304细胞30分钟后caspase-3活性开始增高,于3小时达高峰,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),caspase-8,-9活性无明显变化。结论:rVvhA对人ECV304具有凋亡诱导的生物学活性,caspase-3可能与活性rVvhA诱导的人ECV304凋亡有关。     

重组腺病毒Ad-Endo对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究人内皮抑素(endostatin,Endo)对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响.方法:利用腺病毒载体系统AdEasy-1及AAV 293细胞构建并包装出携带Endo基因的重组腺病毒Ad.Endo,感染人脐静脉内皮细胞ECV 304,Western-blot检测Endo蛋白表达,流式细胞术及Hochest 33258染色检测ECV 304细胞凋亡情况,并绘制细胞生长曲线.结果:病毒感染48 h后检测到Endo蛋白表达,ECV 304细胞在Ad-Endo感染后细胞增殖受到抑制.流式细胞术及Hochest 33258染色均检测到细胞凋亡增加.结论:重组腺病毒Ad-Endo在体外可抑制ECV 304细胞的增殖并诱导细胞凋亡.这可能是Endo抑制血管生成的重要机制.     

三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子1表达的影响

背景：氧化低密度脂蛋白能诱导血管内皮细胞活化和黏附分子表达,在动脉粥样硬化形成早期起重要作用。三七总皂苷在心血管系统方面具有保护血管内皮细胞、显著改善动脉粥样硬化病变程度的药理作用。目的：验证三七总皂苷对氧化型低密度脂蛋白损伤内皮细胞后血管细胞黏附分子1的表达及与人单核细胞黏附的影响。设计、时间及地点：体外实验,分组对照,于2007—03／2008—05在北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部重点实验室完成。材料：原代人脐静脉内皮细胞为美国CascadeBiologics公司产品;三七总皂苷（血塞通冻干粉针）为黑龙江珍宝岛制药有限公司产品,成分为三七总皂苷,批号：20040207。方法：以培养原代人脐静脉内皮细胞作为靶细胞,用氧化型低密度脂蛋白造成人脐静脉内皮细胞损伤模型。将培养的人脐静脉内皮细胞分为5组：氧化型低密度脂蛋白组（100mg／L）、氧化型低密度脂蛋白＋三七总皂苷组（终浓度分别为200,100,50mg／L）、正常对照组。主要观察指标：光镜下观察细胞形态变化,四甲基偶氮唑盐法检测细胞活性;采用蛋白定量法检测人脐静脉内皮细胞与单核细胞的黏附率;用流式细胞仪测定人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达。结果：氧化型低密度脂蛋白作用人脐静脉内皮细胞后12,24．h时,人脐静脉内皮细胞损伤明显,细胞活性显著降低,人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率显著升高,人脐静脉内皮细胞的血管细胞黏附分子1的蛋白表达水平也均明显升高,_均明显高于正常对照组（P〈0．05,P〈0．01）,而三七总皂苷能使氧化型低密度脂蛋白损伤的人脐静脉内皮细胞形态趋于正常,活性增强,并明显降低人单核细胞与人脐静脉内皮细胞的黏附率,以及显著降低血管细胞黏附分子1的蛋白的表达水平,与氧化型低密度脂蛋白组相比均有显著性差异（P〈0．05,P〈001）,这种作用随着剂量的增加而增强。结论：三七总皂苷能通过下调血管细胞黏附分子1的表达抑制单核一血管内皮细胞黏附,从而发挥对血管内皮细胞的保护作用,这可能是其治疗动脉硬化闭塞症的机制之一。     

胰岛素样生长因子Ⅰ抑制氧化型低密度脂蛋白诱导内皮细胞凋亡的体外试验

目的：胰岛素样生长因子Ⅰ作为重要的促细胞生长因子之一，其对内皮细胞凋亡影响的报道不多。实验拟验证和探讨胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的抑制作用及可能机制。 方法：实验于2006—12／2007—07在华中科技大学同济医学院协和医院心血管疾病研究所完成。①实验材料及分组处理：取人新鲜脐带（产妇或家属签署知情同意书）分离培养人脐静脉内皮细胞，分为：胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）＋胰岛素样生长因子Ⅰ组（1×10^-9mmol／L）、氧化型低密度脂蛋白（200mg／L）组、正常对照组。分别在细胞培养24h后加入。②实验评估：采用四甲基偶氮唑盐法测定细胞活力；DAPI细胞核荧光染色法观察细胞凋亡的形态学变化及细胞凋亡率的测定；并进行内皮细胞caspase-3活性的检测。 结果：①氧化型低密度脂蛋白可明显抑制人脐静脉内皮细胞增殖，胰岛素样生长因子Ⅰ与氧化型低密度脂蛋白共同加入后，细胞增殖率明显上升（P〈0．05）。②氧化型低密度脂蛋白可诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡，而加入胰岛素样生长因子I刺激后细胞凋亡率降低（P〈0．05）。③caspase-3活性检测表明与对照组相比，氧化型低密度脂蛋白能明显上调caspase-3的表达，而胰岛素样生长因子Ⅰ＋氧化型低密度脂蛋白组caspase-3活性则降低（P〈0．05）。 结论：胰岛素样生长因子Ⅰ对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡具有抑制作用，可能与其下调caspase-3蛋白表达有关。     

VEGF反义RNA促骨髓瘤细胞凋亡及抑制内皮细胞形成血管作用的体外研究

本研究探讨血管内皮细胞生长因子（VEGF）反义RNA对人多发性骨髓瘤细胞系U266增殖、凋亡及内皮细胞ECV304体外血管形成的影响和以VEGF反义RNA进行多发性骨髓瘤（MM）基因治疗的可行性。将VEGF121反向克隆入真核表达质粒pIRES2-EGFP构建重组质粒AS-VEGF，酶切、测序鉴定。用此真核表达重组质粒转染人骨髓瘤细胞系U266，G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR、Westernblot法分别检测阳性克隆中VEGFmRNA和蛋白的表达；利用MTT法、流式细胞术检测转染细胞增殖、凋亡的变化；利用基质胶中内皮细胞ECV304的网络形成检测血管形成。结果表明：获得了携带反义VEGF基因的真核表达重组质粒AS-VEGF；VEGF121反义RNA部分阻断了U266细胞中VEGF的表达，转染重组质粒的U266细胞VEGFmRNA和蛋白表达都较对照组细胞有明显减少，细胞的增殖受到抑制，凋亡增加。转染重组质粒的细胞培养上清在基质胶中作用ECV304细胞后的血管形成较对照组亦有明显减少。结论：VEGF反义RNA可以下调VEGF表达，从而抑制骨髓瘤细胞系U266增殖，增加其凋亡并抑制血管形成。     

石榴提取物对氧化应激血管内皮细胞保护作用的比较

目的：比较了石榴果肉、果皮提取物对氧化应激人脐静脉内皮细胞（ECV304）的保护作用。 方法：实验于2003—10／2004-04在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所营养研究室完成。①人脐静脉内皮细胞分成正常对照、阴性对照、维生素E（阳性对照）、石榴果肉与果皮提取物组，正常与阴性对照组不加任何受试物，维生素E、石榴果肉与果皮提取物组分别加入α-生育酚或石榴果肉、果皮提取物培养液预孵24h，然后阴性对照、维生素E、石榴果肉与果皮提取物组加入氧化型低密度脂蛋白诱导氧化损伤。②以锥虫蓝染色法和噻唑蓝比色法测定细胞活力。③以酶法测定乳酸脱氢酶活性。④以Griess试剂法测定一氧化氮含量。⑤以二苯基己三烯探针法测定细胞膜流动性。⑥以蛋白含量差异法计算单核细胞一内皮细胞黏附率。⑦以缺口末标记法检测细胞凋亡。 结果：①氧化应激状态下，维生素E或果皮．果肉提取物可使人脐静脉内皮细胞存活率有显著性升高；乳酸脱氢酶释放减少，一氧化氮分泌有所恢复；并可防治细胞膜微黏度的升高；对细胞抗氧化力值与超氧化物歧化酶活性有显著保护作用；可抑制血管内皮细胞与单核细胞黏附率升高和细胞凋亡发生。②石榴果皮．果皮提取物上述作用具有一定的剂量依赖关系。相同浓度下，石榴果皮提取物的作用强于石榴果肉提取物。 结论：石榴果皮、果皮提取物具有防治人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用，对细胞一氧化氮分泌和凋亡也有调节作用。石榴果皮提取物的作用更为显著，有效成分有待进一步研究。     

石榴提取物对氧化应激血管内皮细胞保护作用的比较

目的:比较了石榴果肉、果皮提取物对氧化应激人脐静脉内皮细胞(ECV304)的保护作用。方法:实验于2003-10/2004-04在解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所营养研究室完成。①人脐静脉内皮细胞分成正常对照、阴性对照、维生素E(阳性对照)、石榴果肉与果皮提取物组,正常与阴性对照组不加任何受试物,维生素E、石榴果肉与果皮提取物组分别加入α-生育酚或石榴果肉、果皮提取物培养液预孵24h,然后阴性对照、维生素E、石榴果肉与果皮提取物组加入氧化型低密度脂蛋白诱导氧化损伤。②以锥虫蓝染色法和噻唑蓝比色法测定细胞活力。③以酶法测定乳酸脱氢酶活性。④以Griess试剂法测定一氧化氮含量。⑤以二苯基己三烯探针法测定细胞膜流动性。⑥以蛋白含量差异法计算单核细胞-内皮细胞黏附率。⑦以缺口末标记法检测细胞凋亡。结果:①氧化应激状态下,维生素E或果皮、果肉提取物可使人脐静脉内皮细胞存活率有显著性升高;乳酸脱氢酶释放减少,一氧化氮分泌有所恢复;并可防治细胞膜微黏度的升高;对细胞抗氧化力值与超氧化物歧化酶活性有显著保护作用;可抑制血管内皮细胞与单核细胞黏附率升高和细胞凋亡发生。②石榴果皮、果皮提取物上述作用具有一定的剂量依赖关系。相同浓度下,石榴果皮提取物的作用强于石榴果肉提取物。结论:石榴果皮、果皮提取物具有防治人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤的作用,对细胞一氧化氮分泌和凋亡也有调节作用。石榴果皮提取物的作用更为显著,有效成分有待进一步研究。     

银杏黄酮苷元对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素、LOX-1表达的影响

目的：探讨银杏黄酮苷元（ginkgetin aglycone,GA）对氧化低密度脂蛋白（oxidized-low density lipoprotein,ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞P-选择素和植物血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1（lectin—like oxidized low density lipoprotein receptor-1,LOX-1）表达的影响。方法：培养人脐静脉内皮细胞株ECV304,分为对照组、ox-LDL组、LOX-1拮抗剂聚肌苷酸加ox-LDL混合刺激组（聚肌苷酸组）、不同含量GA加ox-LDL混合刺激组（GA6．25mg／L组、GA12．5mg／L组、GA25mg／L组和GA50mg／L）,通过逆转录聚合酶链式反应检测P-选择素mRNA和LOX-1mRNA表达,用ELISA检测各组培养基上清中P-选择素蛋白含量,辣根过氧化物酶免疫组织化学法检测LOX．1蛋白,并作比较。结果：OX-LDL上调内皮细胞P-选择素和LOX-1表达（P〈0．05）;6．25～50mg／LGA明显抑制OX-LDL诱导的内皮细胞P-选择素mRNA和LOX．1mRNA和蛋白表达（P〈0．05）;聚肌苷酸可部分或完全阻断OX-LDL诱导的内皮细胞P．选择素mRNA、LOX-1mRNA及其蛋白表达（P〈0．05）。结论：GA通过抑制LOX-1表达而降低内皮细胞合成和分泌黏附分子P-选择素,这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。     

小干扰RNA下调cyclophilin-D蛋白表达对内皮细胞抗氧化损伤的作用

背景:线粒体基质中的Cyclophilin-D蛋白(CypD)在线粒体损伤过程中起着特殊作用。目前对于CypD蛋白与血管内皮细胞功能的关系,以及CypD蛋白在动脉粥样硬化和血管狭窄发生、发展中的作用仍未明确。目的:观察小干扰RNA基因沉默对内皮细胞CyPD蛋白表达及氧化应激损伤、凋亡的影响。方法:采用含500μmol/LH2O2的PBS液处理ECV304细胞,小干扰RNA沉默ppif基因以建立CyPD蛋白缺陷型细胞凋亡模型,空白对照组以单纯PBS液处理。流式细胞仪检测ECV304细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构。结果与结论:CyPD缺陷模型组细胞凋亡率为(32.51±6.6)%,明显低于500μmol/LH2O2处理组(52.57±5.84)%,P=0.001。电镜观察结果显示,CyPD缺陷型细胞模型组细胞凋亡数量明显较500μmol/LH2O2处理组减少,形态改变也较轻,多为早期凋亡特征。提示下调CyPD蛋白水平可明显减轻血管内皮细胞氧化应激损伤和凋亡。     

地氟醚预处理对缺氧/复氧损伤时核因子-κB转导通路效应分子的影响

目的：探讨地氟醚预处理对于核因子（NF）-κB信号转导通路激活后效应分子的影响。方法：选用人脐静脉内皮细胞株（ECV304）。将细胞分为5组：（1）空白对照组;（2）缺氧/复氧（A/R）组;（3）A/R＋肿瘤坏死因子-α（TNF-α,10ng.mL-1）刺激组（A/R＋TNF-α组）;（4）地氟醚1.0MAC预处理＋A/R组（Des＋A/R组）;（5）地氟醚1.0MAC预处理＋A/R＋TNF-α（10ng.mL-1）刺激组（Des＋A/R＋TNF-α组）。应用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法分别检测各组细胞的细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）和白细胞介素-8（IL-8）的基因表达水平。结果：A/R组较对照组细胞的ICAM-1、VCAM-1和IL-8mRNA表达水平均有所增加;而经地氟醚预处理后,Des＋A/R组细胞的mRNA表达较A/R组有明显降低。结论：地氟醚预处理可抑制TNF-α刺激的内皮细胞表面黏附分子及炎性介质的基因表达水平。     

丹参酮ⅡA对NB4所诱导的ECV304细胞促凝活性影响的机制探讨

目的：研究丹参酮ⅡA（TanⅡA）对急性早幼粒细胞白血病（APL）细胞株NB4细胞诱导的血管内皮细胞株（ECV304）促凝活性（PCA）的影响,并对其机制作初步探讨。方法：（1）分别用1．0μg／mL TanⅡA、0．3μg／mLATRA、0．01%DMSO、PRMI1640处理NB4细胞24、48和72h,取其上清液作为条件培养基（hNB4-CM）。将这些CM分别与ECV304细胞在37℃共同孵育0、4、8和12h,用反复冻融法制备ECV304细胞裂解液,采用一期凝血法测定其PCA;采用ELISA法测定条件培养基中的TNF-α。（2）ECV304细胞与1．0μg／mL TanⅡA及TanⅡA72h-NB4-CM在37℃共同分别孵育6、12、24和48h,并以ATRA和DMSO分别作为阳性和阴性对照,用上述相同方法测定ECV304细胞裂解液的PCA。结果：（1）1．0μg／mL TanⅡA可以诱导NB4细胞分化,其作用NB4细胞的培养基有一定的升高ECV304细胞PCA的作用,该作用在孵育4h时达高峰,之后ECV304细胞PCA逐渐下降。与0．3μg／mLATRA的作用无统计学差异（P〉0．05）。（2）1．0μg／mL的TanⅡA对TanⅡA-72h-NB4-CM促ECV304细胞PCA有抑制作用,其强度随作用时间增加而增加,与1．0μmol／L ATRA比较,P〉0．05。（3）TanⅡA作用NB4细胞的培养基中TNF-α浓度,在作用前7h内随作用时间增加而增加,与0．3μg／mL ATRA比较无差异（P〉0．05）。结论：TanⅡA能诱导NB4细胞分化,后者在分化过程中释放的TNF-α可能与ECV304细胞PCA活性升高有关;TanⅡA又能抑制TanⅡA-NB4-CM增强ECV304细胞PCA的作用。     

内皮抑制素相互作用蛋白HT036基因的全长克隆及其促血管上皮细胞凋亡的分子机制

目的：克隆与内皮抑制素（endostatin）相互作用蛋白HT036基因的全长，进一步验证其与内皮抑制素的相互作用，初步阐明其促血管上皮细胞凋亡的分子机制。 方法：实验于2004—10／2006-03在解放军总医院呼吸科实验室、军事医学科学院放射医学和生物工程研究所实验室完成。①根据已知HT036的EST序列设计引物。应用RACE技术，从人胎肝cDNA文库获取该基因全长。②采用免疫共沉淀和Western Blot验证HT036蛋白与内皮抑制索在真核细胞内存在相互作用。③利用真核瞬时表达载体pCDNA3．1（＋）在EVC304细胞中瞬时表达HT036蛋白，转染了HT036基因的EVC304细胞为试验组（重复两次）；没有转染HT036基因的细胞为对照组，用流式细胞仪检测HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响。 结果：①HT036基因全长克隆及生物信息学分析结果：利用RACE技术成功获得HT036基因的全长，并在GENEBANK进行了注册，注册号AY775560。②免疫共沉淀和Western—blot的验证结果：证实HT036蛋白能与内皮抑制素在真核细胞中相互作用。③HT036基因对细胞凋亡和细胞周期的影响：成功构建了表达HT036基因的真核表达载体，两次试验转染ECV304细胞后24h的凋亡率平均为23．63％，而对照组仅为0．10％。 结论：获得了一与内皮抑制紊相互作用的新的蛋白HT036基因的全长，初步表明HT036参与了内皮抑制索调节的血管生成过程，并对血管上皮细胞具有促进凋亡的作用。     

抗VEGF抗体介导靶向超声造影剂的体外实验研究

目的以抗血管内皮因子（VEGF）抗体为配体研制能与血管内皮细胞特异性结合的靶向脂质体超声造影剂并检测其体外寻靶能力。 方法以静电吸附法将抗VEGF抗体连接到脂质体造影剂微泡的表面；体外培养ECV304人血管内皮细胞，用免疫荧光法检测靶向造影剂与其体外结合能力，以普通造影剂为对照组。 结果所制备的靶向超声造影剂与普通微泡无显著差异；免疫荧光实验结果显示靶向造影剂能在体外与血管内皮细胞特异性结合。 结论携抗VEGF抗体的脂质体靶向造影剂能通过静电吸附法成功制备，且在体外能与血管内皮细胞特异性结合。     

碱性成纤维细胞生长因子荧光真核表达载体构建及对过氧化氢诱导血管内皮细胞凋亡的影响

背景：已证实外源性碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）可抑制血管内皮细胞凋亡。目的：构建表达bFGF的荧光真核表达载体,探讨其对过氧化氢（H2O2）诱导的血管内皮细胞凋亡和凋亡相关蛋白的影响。方法：通过基因亚克隆构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,利用脂质体介导将bFGF基因导入人脐静脉内皮细胞内,通过荧光观察和RT-PCR检测基因的表达。实验分为3组,对照组（转染pcDNA3.1）、过氧化氢组（转染pcDNA3.1＋H2O2）和bFGF转染＋过氧化氢组（转染pcDNA3.1-bFGF-GFP＋H2O2）,流式细胞术测定细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3 P17活性亚单位和Bax蛋白表达。结果与结论：成功构建荧光真核表达载体pcDNA3.1-bFGF-GFP,该载体转染人脐静脉内皮细胞后,bFGF mRNA显著增加,并可观察到绿色荧光。与对照组相比,过氧化氢组细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量都明显增加（P〈0.01）,而bFGF转染＋过氧化氢组的细胞凋亡率和caspase-3 P17活性亚单位、Bax蛋白的表达量则比过氧化氢组显著降低（P〈0.01）。证实bFGF基因转染能抑制过氧化氢诱导的血管内皮细胞凋亡,其作用机制可能与调控Bax蛋白表达和caspase-3活性有关。     

胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨胰岛素对烧伤血清诱导血管内皮细胞凋亡的影响及相关机制.方法 体外常规培养内皮细胞系ECV304,随机分为正常对照组(n=6),体积分数15%(V/V)正常大鼠血清培养;烧伤血清刺激组(n=6),体积分数15%(V/V)自制烧伤大鼠血清培养,血清采自背部30%TBsAIII 烫伤大鼠模型;胰岛素处理组(n=6),体积分数15%(V/V)自制烧伤大鼠血清中加入10-7M/L胰岛素培养;刺激6 h后采用原位末端标记法(TUNEL)观察内皮细胞凋亡、免疫组织化学染色和蛋白印迹法枪测抗凋亡蛋白bcl-2及eNOS的蛋白表达变化,数据以表示,均数比较采用单凶素方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 与正常对照组比较,烧伤血清促进内皮细胞捌亡(18.5%±3.1%),免疫组化染色bcl-2平均吸光度低(0.14±0.02),蛋白印迹实验显示bel-2(0.36 4±0.12)和p-eNOS(0.55±0.28)表达降低(P<0.01).相对十烧伤血清刺激组,胰岛素处理组细胞凋亡显著减少(9.6 4±2.8%),免疫组化染色bcl-2平均吸光度升高(0.21±0.03),蛋白印迹实验显示bcl.2(0.94 4-0.25)和p-eNOS(0.89±0.16)表达明显恢复(P<0.01).eNOS在各组中无明显变化.结论 胰岛素明显抑制烧伤血清诱导下的内皮细胞凋亡并增加扰凋亡蛋白bcl-2的表达,此作用町能与eNOS的磷酸化有关.