雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响

背景:类风湿性关节炎是常见的自身免疫性疾病。近年来雷公藤多甙广泛应用于类风湿性关节炎治疗,其治疗过程中对关节滑膜炎症的影响及对类风湿性关节炎的预防作用有待研究。目的:观察雷公藤多甙对佐剂性关节炎模型大鼠踝关节相关指标的影响。设计:随机对照动物实验。单位:四川大学基础医学与法医学院组织胚胎学与神经生物学教研室。材料:选用20只健康清洁级雌性SD大鼠,体质量(200±15)g,鼠龄二三个月,由四川大学实验动物中心提供。氟氏完全佐剂为Sigma公司产品,雷公藤多甙为湖南株州制药三厂产品(批准文号:湘卫药准字(2005)第055172号。剂量:10mg/片)。方法:实验于2004-05/2006-03在四川大学组织胚胎学和神经生物学教研室完成。抽签法随机将大鼠分为正常组、模型组、预防组及治疗组,每组5只。正常组不造模,不给药物治疗;模型组于实验开始后,分别在各个大鼠左后足垫部皮下注射氟氏完全佐剂0.2mL,不给药物治疗;预防组造模方法同模型组,造模后第7天开始灌胃给予雷公藤多甙,用药剂量以大鼠体表面积换算公式计算,1次/d,每次30mg/kg,共7d;治疗组造模方法同模型组,造模后第19天开始灌胃给予雷公藤多甙,方式和疗程同预防组。①采用足跖容积法于造模前,造模后2,10,15,19,22,26d不同时间点观察记录大鼠原发侧与继发侧关节后肢肿胀程度。②根据其余未注射的3只肢体的病变程度及指间趾间关节是否发炎,评价大鼠关节炎指数(0分:肿胀度≤5%;1分:肿胀≤15%;2分:15%<肿胀≤30%;3分:30%<严重肿胀≤60%;4分:肿胀>60%),把每个关节的得分累计起来,即为每只大鼠的关节炎指数。③造模后28d取材,将大鼠灌注固定后,取完整踝关节切片,苏木精-伊红染色后观察大鼠踝关节滑膜组织的改变。主要观察指标:各组大鼠关节肿胀程度、关节炎指数及踝关节滑膜组织学观察。结果:大鼠20只均进入结果分析。①造模2d后,除正常组外,其他各组大鼠原发侧关节均出现明显肿胀,造模2～26d各时间点大鼠足跖容积均大于正常组(t=2.315～3.041,P<0.05);预防组大鼠造模后10,15,19,22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.064～2.683,P<0.05);治疗组大鼠造模后22,26d原发侧足跖容积小于模型组(t=2.112～2.578,P<0.05)。造模15d后,模型组和治疗组大鼠继发侧足跖容积均大于正常组(t=2.201～2.546,P<0.05),预防组大鼠造模15,19,22,26d继发侧足跖容积小于模型组(t=2.373～2.425,P<0.05);治疗组大鼠造模26d继发侧足跖容积小于模型组(P<0.05)。②造模14d,模型组大鼠关节炎指数为(8.3±2.0)分,预防组为(0.4±0.95)分,预防组较模型组明显降低(t=2.64,P<0.05);造模26天,治疗组为(7.3±1.3)分,明显低于模型组(11.2±0.9)分(t=3.26,P<0.05)。③正常组大鼠踝关节腔内干净,关节软骨表面光滑,软骨无退行性变,滑膜组织无增生。模型组大鼠原发侧踝关节滑膜增生,滑膜细胞数量增多,体积增大,排列为多层;滑膜下组织水肿,充血,炎性细胞浸润。模型组继发侧继发性病变表现为滑膜增生,踝关节滑膜下组织水肿。预防组原发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜炎症反应减弱,增生程度减轻。继发侧踝关节滑膜未见明显增生。治疗组原发侧及继发侧踝关节滑膜与模型组比较,滑膜组织增生减少,炎症反应减轻。结论:雷公藤多甙能显著减轻大鼠足跖关节肿胀度,关节炎症指数,减轻踝关节滑膜病理改变,且能预防继发性病变的出现。     

三七总皂甙对佐剂性关节炎大鼠踝关节炎症及核因子-κB表达水平的影响

目的:观察三七总皂甙对佐剂性关节炎(AA)大鼠踝关节炎症和核因子-κB(NF-κB)表达水平的影响,探讨三七总皂甙治疗类风湿关节炎(RA)可能的作用机制。方法:24只雄性lewis大鼠随机分为正常对照组、模型组、三七总皂甙组和地塞米松组。大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型,采用关节炎指数评估大鼠关节炎的情况,将大鼠踝关节病理切片分别做常规HE染色和免疫组化染色,对HE染色切片用光镜观察炎细胞浸润和滑膜细胞增生的情况,对免疫组化染色切片进行NF-κB表达的半定量分析。结果:三七总皂甙治疗2周后,大鼠多发性关节炎指数有所下降,与模型组比较差异有显著性(P<0.05),HE染色切片显示三七总皂甙组与模型组比较,关节炎症差异有显著性(P<0.05),免疫组化染色切片显示三七总皂甙组NF-κB表达下调,与模型组比较,差异有显著性(P<0.05)。结论:三七总皂甙有改善大鼠关节滑膜炎症,抑制NF-κB表达的作用,这可能是三七总皂甙治疗RA的作用机制之一。     

挑筋法诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡的实验研究

目的:实验研究挑筋法对佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡影响。 方法:将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、挑筋组,每组10只,实验中建立佐剂型关节炎模型,运用TUNEL法检测挑筋法对大鼠滑膜细胞凋亡的影响。 结果:致炎后模型组大鼠后踝关节红、肿,大鼠跛行,体质量下降,跖围与体质量分别为(25.48±2.16)mm,(123.4±12.8)g,经挑筋疗法治疗后大鼠后踝关节红、肿消失,跖围、体质量分别为(22.15±1.17)mm,(132.5±14.2)g,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.001)。运用TUNEL检测各组滑胞细胞凋亡发现挑筋组和药物组出现明显的细胞凋亡,两者凋亡率分别为(43.81±3.84)％,(51.58±9.73)％,两者差异有显著性意义(P<0.05),药物组细胞凋亡率高于挑筋组。 结论:挑筋法诱导佐剂型关节炎大鼠滑膜细胞凋亡,故可能通过抑制和减少滑膜细胞的过度增生治疗炎性疾病。     

靶肌肉注射环磷酸腺苷对周围神经再生的作用

目的:观察靶肌肉注射外源性环磷酸腺苷对大鼠坐骨神经再生的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-03在华中科技大学同济医学院协和医院骨科实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠48只,制备大鼠左侧坐骨神经挤压伤模型。实验动物随机数字表法分为3组,每组16只,高剂量组:腓肠肌内注射0.2mL环磷酸腺苷1mg。低剂量组:腓肠肌内注射注射0.2mL环磷酸腺苷0.1mg。对照组:腓肠肌内注射0.2mL生理盐水。术后每日给药1次,共4周。术后4,8周时检测左侧小腿三头肌湿质量。术后8周时检测坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及形态学观察神经再生情况。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。①术后4,8周时高剂量组和低剂量组大鼠左小腿三头肌湿质量显著高于对照组[术后4周分别为(1.70±0.58),(1.26±0.71),(0.91±0.24)g;术后8周分别为(2.26±0.62),(1.65±0.16),(1.24±0.37)g],且高剂量组明显高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。②术后8周高剂量组和低剂量组坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及有髓神经纤维计数、髓鞘厚度、轴突直径均高于对照组[运动神经传导速度分别为(33.54±2.65),(26.96±4.12),(19.83±2.74)m/s;复合肌肉动作电位波幅分别为(2.435±1.257),(1.867±0.566),(1.218±0.647)mV;复合肌肉动作电位潜伏期分别为(2.946±0.658),(4.537±0.932),(5.825±1.043)ms;有髓神经纤维计数分别为(1693±201),(1357±185),(876±124)个;髓鞘厚度分别为(1.149±0.138),(0.924±0.086),(0.633±0.105)μm;轴突直径分别为(1.045±0.150),(0.794±0.095),(0.512±0.138)μm],且高剂量组显著高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:靶肌肉注射环磷酸腺苷可促进周围神再生,高剂量环磷酸腺苷对神经再生具有更好的促进作用。     

胶体磷酸铬32P治疗类风湿膝关节炎临床疗效观察

【目的】探讨胶体磷酸铬^32P在治疗类风湿关节炎膝关节受累的临床价值。【方法】对40例病人50膝关节关节腔内注射胶体磷酸铬^32P和得宝松，并观察其疗效。【结果】于3个月左右起效，6个月左右效果明显，有效期可持续1～3年。【结论】胶体磷酸铬^32P治疗类风关膝关节炎操作简便，安全有效，副作用少。     

三七总皂甙对佐剂性关节炎大鼠踝关节炎症及核因子-κB表达水平的影响

目的：观察三七总皂甙对佐剂性关节炎（AA）大鼠踝关节炎症和核因子-κB（NF-κB）表达水平的影响。探讨三七总皂甙治疗类风湿关节炎（RA）可能的作用机制。方法：24只雄性lewis大鼠随机分为正常对照组、模型组、三七总皂甙组和地塞米松组。大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂建立AA模型，采用关节炎指数评估大鼠关节炎的情况，将大鼠踝关节病理切片分别做常规HE染色和免疫组化染色，对HE染色切片用光镜观察炎细胞浸润和滑膜细胞增生的情况．对免疫组化染色切片进行NF-κB表达的半定量分析。结果：三七总皂甙治疗2周后，大鼠多发性关节炎指数有所下降，与模型组比较差异有显著性（P〈0．05），HE染色切片显示三七总皂甙组与模型组比较．关节炎症差异有显著性（P〈0．05），免疫组化染色切片显示三七总皂甙组NF—κB表达下调，与模型组比较．差异有显著性（P〈0．05）。结论：三七总皂甙有改善大鼠关节滑膜炎症，抑制NF—κB表达的作用，这可能是三七总皂甙治疗RA的作用机制之一     

脑缺血不同时期胰岛素样生长因子-1在大鼠脑内的表达及其意义

目的:观测脑缺血不同时期胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfac-tor,IGF)在脑内的表达,同时探讨IGF-1生物制剂对脑缺血损伤的保护作用。方法:将55只SD大鼠单纯随机分为3组,正常对照组5只,用药组和非用药组各25只。后两组分别再按缺血时间分为1,3,5,7,10d组,每组5只大鼠。除正常对照组外,均建立脑缺血模型,造模后1h非用药组侧脑室内注射生理盐水;用药组侧脑室内注射IGF-1,定时间处死动物,取脑组织固定。免疫细胞化学ABC法,动态观测不同时期大脑皮质IGF-免疫反应阳性细胞数的变化情况。结果:脑缺血后第1,3,5,7天大脑皮质IGF-1免疫反应阳性细胞数非用药组分别为(13.6±0.41),(14.9±0.67),(15.6±0.89),(13.2±0.69)个,较正常对照组(12.2±0.56)个明显增高,差异有显著性意义(t=2.03～3.23,P<0.05或0.01);用药组为(14.5±0.95),(16.3±0.79),(17.1±0.65),(14.2±0.45)个,较相应非用药组比较均有增高趋势,差异有显著性意义(t=1.90～3.06,P<0.05,0.01)。结论:脑缺血损伤后IGF-1表达有明显变化,同时提示了IGF-1可能在脑缺血损伤中起保护作用。     

胶体磷酸铬32P放射治疗膝关节滑膜炎:28例随访

背景:可以用来治疗滑膜炎的核素种类繁多,物理特性差异较大.目的:观察采用胶体磷酸铬32 P关节腔内放射治疗膝关节滑膜炎的近期疗效.方法:2008-01/2009-12采用胶体磷酸铬32 P关节腔内放射治疗膝关节滑膜炎28例,比较患膝治疗前后的MRI影像、主动活动度和Lysholm膝关节评分变化.结果与结论:患者治疗后随访均超过14个月.MRI显示关节内滑膜增生情况有不同程度的好转.Lysholm评分从术前的59.05±11.90提高至随访时的80.22±10.16(P <0.01),优良率为86%.膝关节主动活动度从治疗前(82.78±11.01)°提高至(107.50±11.66)°(P<0.01).除有2例患者自觉肿痛症状较治疗前无明显改善外,所有患者均未见感染、关节僵硬、深静脉血栓及软组织坏死等并发症.表明胶体磷酸铬32P关节腔内放射治疗膝关节滑膜炎是一种安全有效的方法.     

刺血疗法对急性痛风性关节炎大鼠局部抗炎因子的影响

目的探讨刺血疗法治疗急性痛风性关节炎的相关抗炎分子机制。方法 60只Sprague-Dawley大鼠等分为正常组、正常刺血组、假手术组、模型组、刺血组、药物组。右踝关节腔注射尿酸钠建立急性痛风性关节炎大鼠模型。药物组以布洛芬灌胃治疗,正常刺血组和刺血组在右侧昆仑穴点刺放血。治疗前后测量各组大鼠踝关节周径。用RT-PCR法和Western blotting法检测大鼠踝关节白细胞介素(IL)-10、IL-4 m RNA和蛋白表达。结果治疗后刺血组较正常组踝关节周径增大(P0.05),较模型组、药物组周径减小(P0.05)。刺血组较正常组、模型组、药物组踝关节IL-10 m RNA的相对表达量升高(P0.05),较正常组、模型组IL-10蛋白表达增加(P0.05);刺血组踝关节IL-4 m RNA和蛋白表达较正常组有升高趋势,但无显著性差异(P0.05)。结论刺血疗法通过促进局部IL-10表达发挥抗炎作用,可能是其治疗急性痛风性关节炎的作用机制之一。     

一种改良方法制备大鼠痛风模型及其炎症和疼痛效应评价

目的:采用一种改良方法制备急性痛风性关节炎大鼠模型,并对造模后大鼠出现的急性痛风性关节炎的主要症状,即关节局部炎症和疼痛进行分析和评价。最后验证吲哚美辛是否能够对该模型大鼠发挥有效镇痛作用。方法:实验一:把24只雄性SD大鼠采用随机数字表法分为模型组和对照组(n=6)。模型组大鼠左踝后侧沿跟腱内侧以30~40°方向穿刺关节腔,注射1.25 mg/50μl尿酸钠,制备大鼠急性痛风性关节炎模型。对照组则以同样方式注射等量磷酸盐缓冲液。对两组大鼠造模前及造模后的2 h,4 h,8 h,24 h和48 h踝关节肿胀程度测量,进一步利用动物行为学方法对大鼠疼痛行为学指标进行检测,包括自发性疼痛行为评分、机械缩爪阈值和热痛敏潜伏期。实验二:将12只雄性SD大鼠随机分为模型组和对照组(n=6),造模后24 h对其踝关节滑膜组织进行病理学分析。实验三:把18只雄性SD大鼠随机分为模型组、对照组和治疗组(n=6)。模型成功建立后,进一步利用行为学方法观察腹腔注射吲哚美辛后对模型大鼠4 h,8 h,24 h机械缩爪阈值的影响。结果:实验一:利用改良法造模2 h后,与对照组相比,模型组大鼠踝关节开始出现明显肿胀,模型组踝关节肿胀情况可持续48 h以上。造模2 h后,模型组大鼠开始出现自发性疼痛行为,并且机械缩爪阈值开始出现显著降低(P<0.05)。造模4 h后,热痛敏潜伏期也开始出现显著下降(P<0.05)。模型组大鼠上述各项疼痛指标一直持续到模型建立后的第24 h(P<0.01)。实验二:模型组大鼠踝关节滑膜组织相比对照组出现广泛炎性细胞浸润。实验三:吲哚美辛可以有效缓解该模型大鼠机械痛过敏情况(P<0.05)。结论:采用该改良方法制备急性痛风性关节炎大鼠模型方法简单,重现性好,可引发大鼠出现明显关节炎症及疼痛等急性痛风性关节炎表现的主要临床症状。并且非甾体抗炎药对该模型可发挥显著镇痛作用。因此提示这一方法可用于急性痛风性关节炎动物模型制备,并用于镇痛药物的筛选,值得进一步推广。