吲哚美辛诱导的胃癌细胞凋亡与Wnt/β-连接蛋白信号通路及其下游凋亡调控蛋白的关系

目的:探讨Wnt/β-连接蛋白(Catenin)信号通路及其下游凋亡调控蛋白Bcl-2和Caspase-3的表达与吲哚美辛引起的胃癌细胞凋亡的关系.方法:用终浓度为50、100、200 μmol/L的吲哚美辛干预SGC7901细胞24 h,并设不加吲哚美辛的对照组.用CCK8法检测细胞增殖活性,用TUNEL法检测涂片中胃癌细胞的凋亡率,用Western blot法检测细胞内β-Catenin、Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达.结果:SGC7901细胞在50 μmol/L的吲哚美辛作用24 h后细胞存活率为(92.71±4.81)％,100和200 μmol/L浓度组的细胞存活率则明显降低.对照组细胞的凋亡率为0,吲哚美辛干预后的细胞的凋亡率明显升高.对照组β-Catenin和Bcl-2蛋白表达最高而Caspase-3表达最低.吲哚美辛干预后β-Catenin和Bcl-2的表达明显降低,Caspase-3表达明显增高,且表现出明显的浓度依赖性.结论:Wnt/β-Catenin信号通路在吲哚美辛引导的SGC7901细胞凋亡过程中发挥重要的作用,其下游调控蛋白Bcl-2、Caspase-3共同参与了这一过程的调控.     

青蒿琥酯对结肠癌HCT116细胞间黏附分子蛋白表达的影响

目的：研究青蒿琥酯对结肠癌细胞锚着不依赖性增殖及其细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）基因蛋白表达的影响。方法：以人结肠癌细胞株HCT116为模型，以软琼脂集落培养试验检测青蒿琥酯对肿瘤细胞的增殖抑制效应；Western blot方法检测青蒿琥酯作用前后细胞ICAM-1蛋白表达的变化。结果：青蒿琥酯能有效地抑制结肠癌细胞HCT116的恶性增殖，且呈剂量依赖性。青蒿琥酯能有效地抑制ICAM-1基因蛋白表达，作用呈时间和浓度依赖性。结论：青蒿琥酯可明显抑制结肠癌HCT116细胞增殖，可能与下调ICAM-1表达有关。     

吲哚美辛诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有β-catenin/c-myc信号转导途径的抑制

目的：研究吲哚美辛对HL-60细胞的增殖抑制和凋亡诱导效应,从β-catenin信号转导途径揭示其分子机制。方法：以不同浓度的吲哚美辛(0,25,50,100,200,400μmol/LL)作用于HL-60细胞,以锥虫蓝染色确定干预后的HL-60细胞活力;分析HL-60细胞增殖能力;DNA梯状胶电泳鉴定细胞凋亡。Western印迹证明凋亡调节蛋白caspase-3的裂解激活以及β-catenin,c-myc蛋白质的表达。结果：吲哚美辛能明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞凋亡,并表现出浓度和时间依赖性;HL-60细胞凋亡伴有caspase-3蛋白的表达上调和裂解活化;β-catenin蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调和降解;c-myc蛋白表达呈吲哚美辛浓度依赖性下调。结论：吲哚美辛能抑制HL-60细胞增殖和诱导HL-60细胞凋亡。β-catenin→c-myc信号转导途径受抑与吲哚美辛的抗白血病效应存在一定的联系。     

RNAi沉默STAT3基因对结肠癌HCT116细胞侵袭的调控

目的:观察RNA干扰沉默STAT3基因对结肠癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法:应用STAT3小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人结肠癌细胞系HCT116后,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA表达,软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,Boyden小室模型试验检测癌细胞的侵袭性,琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡。结果:STAT3 siRNA可有效抑制结肠癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,STAT3 siRNA转染可诱导结肠癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关。结论:STAT3 siRNA可抑制结肠癌细胞的恶性侵袭,其机制与诱导失巢凋亡有关。     

吲哚美辛显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用

目的:研究吲哚美辛联合伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞增殖的抑制作用,并从Wnt/β-Catenin信号通路角度探讨其抗增殖作用的分子机制。方法:采用MTT法明确吲哚美辛在各细胞中的最佳作用浓度及时间;采用MTT法和甲基纤维素集落形成实验检测伊马替尼、吲哚美辛以及两者联合对各细胞增殖能力的影响;采用流式细胞术鉴定细胞周期及细胞凋亡的变化;Western blot检测经两种药物处理的细胞内pβ-catenin(S33/37/T41)、p GSK-3β(Ser9)和C-M YC蛋白的表达情况。结果:吲哚美辛抑制细胞增殖的最佳作用浓度和时间分别为80μmol/L和48 h;吲哚美辛联合伊马替尼对细胞的增殖抑制作用明显优于单一药物处理;在KCL22和K562/G01细胞株中联合用药组的细胞周期均被阻制在G0/G1期;联合用药组的细胞凋亡数目明显高于单一药物处理组;与对照组或单一药物处理组相比,联合用药组细胞内pβ-catenin、β-catenin、p GSK-3β(Ser9)和C-MYC蛋白表达明显下调。结论:吲哚美辛可显著增强伊马替尼对KCL22和K562/G01细胞的增殖抑制作用和诱导细胞凋亡,并通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路调控细胞的增殖。     

吲哚美辛对CML细胞增殖抑制效应与STAT信号转导途径抑制相关

本研究的目的是观察吲哚美辛作用下慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖抑制过程中JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达水平的变化及细胞内分布，揭示吲哚美辛抑制CML细胞增殖的分子机制。采用MTT及台盼蓝拒染法检测吲哚美辛对CML细胞的增殖抑制作用，用Western blot分析CML细胞JAK2、STAT1和STAT5蛋白质表达，用间接免疫荧光技术观察STAT1和STAT5在吲哚美辛干预的CML细胞中的定位及变化，结果表明：400μmol／L浓度的吲哚美辛能明显抑制CML细胞增殖及STAT1、STAT5蛋白质表达，但对JAK2蛋白无影响；STAT1和STAT5主要分布于细胞胞浆中。结论：吲哚美辛可抑制CML细胞增殖，其机制可能与药物下调STAT1、STAT5蛋白质表达或与阻断细胞生长信号传导有关。     

吲哚美辛对喉癌细胞Hep-2增殖与凋亡及COX-2蛋白表达的影响

目的探索吲哚美辛对喉癌细胞增殖与凋亡的作用以及对细胞COX-2蛋白表达的影响。方法Hep-2细胞暴露于含吲哚美辛（125，250，500μM）的培养基中，培养24小时，用MTT方法检测各组药物与溶剂对照组相比对细胞增殖的影响；用台盼蓝染色法检测吲哚美辛对细胞活力的影响；吖啶橙染色法观察吲哚美辛（250μM）对细胞形态的影响；流式细胞仪分析法检测吲哚美辛（250μM）对细胞周期和细胞凋亡的影响，Western blot检测吲哚美辛对细胞COX-2蛋白表达的影响。结果吲哚美辛使Hep-2细胞增殖及细胞活力明显降低，细胞形态发生明显变化，细胞质萎缩而细胞核相对较大，S期细胞分数明显增加，细胞出现凋亡峰，而COX-2蛋白表达量增加。结论吲哚美辛强烈抑制Hep-2细胞增殖与细胞活力，明显改变细胞初始形态，阻滞细胞从S期向G2／M期转化，并诱导其凋亡，吲哚美辛对Hep-2细胞的上述作用机制与COX-2的特异性抑制途径无关。     

Gab2对结肠癌细胞细胞外黏附作用的影响

;目的探讨Gab2对结肠癌细胞外黏附作用的影响。方法选取SW620和HCT116两种结肠癌细胞系,建立Gab2表达降低和Gab2表达升高的稳定细胞株。将实验NOD/SCID小鼠分为3组,每组10只。(1)对照组;接种scr/MGC803体结肠癌细胞;(2)Gab2降低组;接种Gab2降低的siGab2/MGC803结肠癌细胞;(3)Gab2升高组;接种Gab2升高的Gab2/MGC803结肠癌细胞。检测细胞迁移能力,测量肿瘤的大小和侵袭范围及细胞凋亡情况。结果处理后3组细胞迁移数计算结果显示,Gab2降低组的细胞迁移数显著低于Gab2升高组和对照组(P<0.05)。各组NOD/SCID小鼠均在接种40 d后处死,比较接种前与接种后小鼠体质量,Gab2降低组显著低于Gab2升高组、对照组,对照组低于Gab2升高组。测量瘤体积,Gab2升高组高于Gab2降低组、对照组。Gab2降低组瘤体积抑制率显著高于对照组(P<0.05)。相关分析发现,MMP-2、MMP-9蛋白的表达与Gab2蛋白表达呈正相关。结论 Gab2可有效调控体外细胞迁移数,显著抑制小鼠结肠癌细胞侵袭及转移,通过调节MMP-2、MMP-9蛋白表达,从而抑制结肠癌生长及转移。     

低分子柑橘果胶对结肠癌细胞奥沙利铂敏感性的影响

目的:比较奥沙利铂单药及联合低分子柑橘果胶(LCP)体外抑制结肠癌细胞的增殖效应,探讨LCP是否影响人结肠癌细胞对化疗药物奥沙利铂的敏感性。方法:不同浓度的奥沙利铂单药及联合LCP作用于对数生长期的人结肠癌细胞HT29、HCT116、SW116、SW480,通过形态学观察、四甲基偶氮唑盐法(MTT)细胞活力测定等检测对人结肠癌细胞敏感性的影响。结果:不同浓度的奥沙利铂对结肠癌细胞的生长均有抑制作用,而不同浓度的LCP抑制作用不明显,LCP与奥沙利铂联合作用于人结肠癌细胞可增强奥沙利铂对人结肠癌细胞的抑制效果。结论:LCP能增加奥沙利铂对人结肠癌细胞的敏感性,为将LCP推向结直肠癌治疗的临床试验和提高结直肠癌疗效提供理论依据。     

miR-320a靶向FOXQ1抑制结肠癌细胞增殖和侵袭的分子机制

目的探讨miR-320a在人结肠癌细胞中的生物学行为,并初步阐明miR-320a对癌基因FOXQ1的靶向调控机制。方法采用qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-320a和FOXQ1的表达;用miR-320a mimics转染结肠癌细胞株HTC-116;采用CCK-8法、克隆形成试验检测miR-320a对结肠癌细胞增殖的影响,采用Transwell小室分析miR-320a对结肠癌细胞侵袭能力的影响;双荧光素酶报告基因和Western Bloting验证miR-320a对FOXQ1的靶向调控作用。结果 QRT-PCR结果显示miR-320a mimics明显上调miR-320a在HCT-116细胞中的表达;CCK-8法和克隆形成试验显示上调miR-320a表达显著抑制结肠癌细胞增殖;Transwell试验表明上调miR-320a可抑制HCT-116结肠癌细胞侵袭;蛋白印迹实验显示上调miR-320a降低FOXQ1蛋白在结肠癌细胞中的表达,双荧光素酶报告基因试验进一步确认miR-320a可以调控FOXQ1的表达。结论过表达miR-320a可以抑制结肠癌细胞增殖、侵袭,这种抑制作用是通过靶向调控FOXQ1来实现的。     

全反式维甲酸对人卵巢癌细胞株COC2中β-连环蛋白表达的影响

目的检测全反式维甲酸(ATRA)干预前后人卵巢上皮性癌细胞株COC2中β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨ATRA对卵巢上皮性癌细胞β-catenin的作用。方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Westernblot)检测经1、5、10μmol/LATRA干预前后COC2细胞株中β-cateninmRNA及蛋白的表达水平。结果 (1)ATRA干预COC2细胞后影响细胞增殖,10μmol/LATRA组未见细胞增殖,并见少量细胞碎片。(2)β-catenin mRNA及蛋白的表达水平均有降低,并呈现ATRA浓度依赖性。结论 ATRA作用于卵巢上皮性癌细胞株COC2后可降低细胞中β-catenin的表达,进而抑制细胞增殖,达到抗卵巢上皮性癌的作用。     

肝X受体激动剂GW3965对人结肠癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨激活肝X受体(liver X receptors,LXRs)对人结肠癌细胞增殖的影响。方法:采用实时定量聚合酶链反应检测人结肠癌细胞HCT116和Lovo中LXRα和LXRβ的mRNA表达;LXRs激动剂GW3965分别处理2种细胞后,以CCK-8法检测细胞生长曲线的变化,流式细胞仪检测细胞增殖周期的变化,蛋白印迹法检测AMPK、mTOR和p70S6K蛋白及相应磷酸化蛋白的表达变化。结果 :设定LXRαmRNA在HCT116细胞的表达水平为1,LXRβmRNA在HCT116和Lovo细胞中的相对表达量分别是LXRαmRNA在HCT116细胞表达水平的3.1倍和4.6倍。经10μmol/L和20μmol/L的GW3965处理48 h及72 h后,2种结肠癌细胞的生长都受到明显抑制(P<0.05);相应G1~G0期细胞百分比显著增多,而S期细胞百分比明显减少(P<0.01);磷酸化AMPK蛋白(p-AMPK)的表达水平在HCT116和Lovo细胞中分别上升了2.97倍和3.48倍(P<0.05);p-mTOR和p-p70S6K在HCT116细胞中的表达分别下降了33.14%和38.44%,在Lovo细胞中的表达分别下降了51.68%和31.52%(P<0.05)。结论:激活LXRs可通过干预细胞周期和AMPK-mTOR-S6K信号通路抑制结肠癌细胞增殖。     

盐酸埃克替尼诱导肺癌HCC827细胞周期阻滞及其机制研究

目的 研究国家一类新药盐酸埃克替尼（Icotinib）对人非小细胞肺癌细胞HCC827的增殖抑制及细胞周期的影响,并探讨其作用机制.方法 实验分为空白组、对照组和Icotinib处理组,采用四甲基偶氮唑盐法（MTT）检测Icotinib对人肺癌HCC827细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞周期变化;Western blot检测相关蛋白表达,应用SPSS 13.0进行统计学分析.结果 Icotinib以时间-剂量依赖的方式抑制HCC827细胞增殖,48 h的IC50为0.60 μmol/L,72 h的IC50为0.06 μmol/L;Icotinib诱导HCC827细胞发生明显的G1期阻滞并具有剂量依赖性.进一步对周期相关蛋白检测发现,Icotinib处理组较对照组相比,显著上调p21蛋白表达,抑制cyclin D1及cyclin A表达,但对cyclin E作用不明显.检测还发现Icotinib处理组明显下调ERK的磷酸化水平.结论 Icotinib能够明显抑制HCC827细胞增殖,引起细胞G1期阻滞,其机制可能与上调p21及抑制cyclin D1、cyclin A蛋白表达水平相关.并且MAPK/ERK信号通路在其介导的生物学效应中起重要作用.     

尼莫地平对人结肠癌细胞系增殖的影响

目的：探讨分析尼莫地平对人结肠癌细胞系（HCT）增殖的影响。方法采用不同剂量的尼莫地平作用于HCT细胞,通过细胞的生长动力学检测、细胞凋亡的流式细胞仪测定、瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态。结果0．1～20．0μmol/L的尼莫地平加入HCT细胞培养基和对照组比较,12、24h后吸光度值均有明显差异,说明不同浓度尼莫地平对HCT细胞的增殖均有一定抑制作用,而在48h后,20．0μmol/L的尼莫地平作用于HCT细胞,抑制率可达35．67％。尼莫地平的浓度增高,G0～G1期的HCT细胞百分率逐渐升高,当尼莫地平浓度为10．0、20．0μmol/L,G0～G1期的百分率明显高于对照组的百分率,而S期的百分率则明显低于对照组的百分率,差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论在一定剂量范围内,随着尼莫地平浓度的升高可以有效抑制HCT的增殖,为肿瘤的治疗提供新的方法。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

黄芩苷对耐阿霉素白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响

本研究探讨中药黄芩苷对耐阿霉素人髓系白血病细胞株HL-60／ADR增殖、凋亡的影响。应用MTT法绘制细胞生长曲线,观察黄芩苷对HL-60／ADR细胞增殖的影响;应用Annexin V FITC／PI双染流式细胞术、DNA片段化、TdT酶介导的原位缺口末端标记（TUNEL）法检测细胞凋亡;RT—PCR检测黄芩苷作用不同时段后c-myc、bcl-2等凋亡相关基因mRNA的表达水平;Western blot法检测凋亡及信号通路相关蛋白C—MYC、BCL-2、pro—caspase-3、PARP、BAD等的表达变化。结果表明,黄芩苷能明显抑制HL-60／ADR细胞增殖所测得的细胞倍增时间为48小时,半数抑制率为28μmol;Annexin V FITC／PI法检测到早期凋亡细胞、DNA片段化,TUNEL法检测到晚期凋亡细胞,细胞凋亡率呈浓度依赖性（20、40、80μmol／L）。黄芩苷作用HL-60／ADR细胞不同时段（12、24、48小时）后C-myc、bcl-2基因mRNA的表达,并随着作用时间的延长而逐渐减弱,C—MYC、BCL-2、procaspase-3、PARP（116kD）蛋白的表达逐渐下降,PARP（85kD）及BAD蛋白表达逐渐增强,呈时间依赖性。结论：黄芩苷能有效抑制HL-60／ADR细胞增殖,诱导其凋亡,上述凋亡相关基因及信号通路相关蛋白可能参与了黄芩苷抑制HL-60／ADR细胞增殖和诱导凋亡的过程：     

miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白通路对结直肠癌细胞增殖的影响

目的探究miR-142-3p靶向Wnt/β-链蛋白(β-catenin)通路对结直肠癌(CRC)细胞增殖的影响。方法选取2018年1月—2020年10月收治的66例CRC的肿瘤组织及其相邻正常组织。同时培养正常人结肠上皮细胞NCM460和CRC细胞系(HT29、LoVo、HCT116、Caco2、SW480细胞)。通过qRT-PCR检测CRC肿瘤组织、正常组织、正常人结肠上皮细胞与CRC细胞系中miR-142-3p表达水平;经免疫蛋白印迹法检测CRC细胞系中β-catenin表达水平;采用CCK-8法和流式细胞术检测miR-142-3p过表达后对CRC细胞增殖的影响;经免疫蛋白印迹检测过表达miR-142-3p对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响;采用双荧光素酶报告基因检验miR-142-3p与β-catenin编码基因CTNNB1的靶向关系。结果miR-142-3p在CRC肿瘤组织和CRC细胞系中的表达显著下降(P<0.05);β-catenin在CRC细胞系中的表达显著升高(P<0.05);过表达miR-142-3p可靶向结合CTNNB1,显著抑制Caco2、LoVo和HT29细胞的增殖和Ki67+细胞比例,抑制β-catenin、c-myc和Cyclin D1的表达(P<0.05)。结论miR-142-3p可通过靶向调节β-catenin的表达,干扰Wnt/β-catenin通路,抑制CRC细胞的增殖。     

黄芩提取化合物单体SBX抗白血病效应及机制研究

本研究探讨黄芩提取化合物单体成分SBX对不同人白血病细胞株的抗白血病效应及其可能的相关机制。体外培养人HL-60、NB4、U937、K562、Jurkat细胞,应用CellTiter-Glo发光法进行细胞活力检测,筛选出敏感细胞株,应用流式细胞术检测SBX对敏感细胞细胞周期的影响,应用蛋白Pathway Array技术检测SBX对敏感细胞蛋白表达的影响。结果显示,SBX(10-200μmol/L,72 h)对各种类型的人白血病细胞均有抑制作用,并呈浓度依赖性(r值分别为0.86,0.88,0.95,0.94,0.96),对HL-60细胞抑制作用最强。流式细胞术显示SBX(50,100μmol/L,48h)对HL-60细胞周期的影响主要是引起G0/G1期阻滞。蛋白Pathway Array技术分析SBX(50μmol/L,48 h)对HL-60蛋白表达的影响显示,p-PKCα/βⅡ、p-p38、Cdc25B、XIAP蛋白表达水平上调,而p-AKT、p-SAPK/JNK、cyclin E、Notch4、Cdk4、Cdc2、Akt、Bcl-2、Bax、cdc42、TNF-α、p27、CaMKKa蛋白表达水平下调。结论:SBX能够抑制各种类型人白血病细胞的增殖,其中敏感细胞株为HL-60。SBX主要影响HL-60的EGFR、Ras/Raf/MAPK和Notch信号传导通路,并通过这些信号传导通路影响细胞周期相关蛋白表达的水平,导致细胞周期G0/G1期阻滞。