HIF-1α通过TLR4/NF-κB信号通路对 心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤的保护机制分析

目的分析缺氧诱导因子1α(HIF-1α)通过TLR4/NF-κB信号通路保护心肌缺血-再灌注(MIRI)大鼠心肌损伤的作用机制。方法将30只SD大鼠随机分为对照组、MIRI组和HIF-MIRI组各10只,HIF-MIRI组于造模前24 h腹腔注射二甲基乙二酰基甘氨酸(DMOG,20μg/g),MIRI组和HIF-MIRI组大鼠采用手术结扎法制备MIRI模型,对照组只打开心包,不结扎。造模成功后,HE染色检测各组大鼠心肌组织损伤;试剂盒检测血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)水平; ELISA法测定心肌组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-1β和IL-6水平;实时荧光定量(RT)-PCR测定HIF-1αmRNA的表达; Western Blot检测HIF-1α、Toll-样受体4(TLR4)、核转录因子(NF-κB)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(Caspase)-3的表达。结果与对照组相比,MIRI组和HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6水平显著升高(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA的表达显著上调(P 0. 01),HIF-1α、TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著上调(P 0. 01);与MIRI组相比,HIF-MIRI组大鼠血清CK-MB和LDH水平、炎症因子TNF-α、IL-1β和IL-6显著下降(P 0. 01),心肌组织HIF-1αmRNA和蛋白的表达显著上调(P 0. 01),TLR4、NF-κB和Caspase-3蛋白的表达显著下调(P 0. 01),HE染色显示心肌组织的病理变化明显减轻。结论 HIF-1α可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路抑制炎症因子的释放,降低机体炎症因子水平,改善MIRI心肌损伤。     

乌司他丁对脓毒症大鼠血清肌钙蛋白Ⅰ及心肌肿瘤坏死因子-α、内皮素-1的影响

目的 探讨不同剂量乌司他丁(UTI)对脓毒症大鼠心肌损伤的保护作用及其可能机制.方法 40只雄性SD大鼠按随机数字表法均分为正常对照组、假手术组、模型组及UTI小剂量组、大剂量组5组.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立脓毒症模型,24 h后取动脉血及左室心肌,检测血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)及心肌组织匀浆上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内皮素-1(ET-1)水平,观察心肌组织病理改变.结果 模型组血清cTnI及心肌TNF-α、ET-1水平较正常对照组明显升高[cTnI(μg/L):7.58±0.53比1.05±0.21,TNF-α(pg/g):945.6±72.0比238.2±35.2,ET-1(pg/g):776.8±123.9比170.1±28.3,均P＜0.01].UTI小剂量组血清cTnI及心肌TNF-α、ET-1水平与模型组比较差异无统计学意义[cTnI(μg/L):7.21±0.51比7.58±0.53,TNF-α(pg/g):910.5±96.6比945.6±72.0,ET-1(pg/g):714.0±66.7比776.8±123.9,均P＞0.05].UTI大剂量组血清cTnI及心肌TNF-α、ET-1较模型组明显减低[cTnI(μg/L):4.30±0.84比7.58±0.53,TNF-α(pg/g):430.5±75.6比945.6±72.0,ET-l(pg/g):377.1±39.0比776.8±123.9,均P＜0.01].结论 大剂量UTI对脓毒症心肌损伤具有保护作用,其机制可能通过抑制心肌TNF-α、ET-1的表达而实现;小剂量UTI可能对脓毒症心肌损伤无保护作用.     

脓毒症大鼠心肌内皮素-1、肿瘤坏死因子-α表达与心肌损伤的关系

目的:研究脓毒症时心肌损伤与心肌内皮素-1(ET-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的关系.方法:24只雄性SD大鼠随机均分为3组,正常对照组、假手术组、脓毒症组,每组8只.采取盲肠结扎穿刺术(CLP)建立脓毒症模型,24 h后动脉采血及分离左心室心肌,检测大鼠血清心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTn Ⅰ)、心肌匀浆上清液中TNF-α、ET-1浓度.并分别观察心肌显微及超微结构改变.结果:脓毒症组大鼠血清cTn Ⅰ较正常时照组及假手术组明显升高(P<0.01),心肌出现典型变性及超微结构损伤;心肌TNF-α、ET-1较正常对照组及假手术组明显升高(P<0.01).脓毒症组血清cTn Ⅰ与心肌TNF-α、ET-1水平正相关(γ值分别为0.967和0.958,P<0.001).结论:脓毒症时心肌损伤与心肌TNF-α、ET-1水平上调有关.     

缺氧诱导因子-1α对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用及其信号转导

目的 观察缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)对大鼠心肌缺血/再灌注损伤(IRI)的保护作用及蛋白激酶C(PKC)信号转导作用.方法 采用结扎冠状动脉左前降支30 min、再灌注180 min的方法建立IRI动物模型.将32只雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、IRI组、缺血预处理(IPC)组、IPC加PKC抑制剂组(IPC+Ⅰ组,IPC前静脉注射PKC抑制剂白屈菜季铵碱5 mg/kg),每组8只.再灌注180 min后取出心脏,测定HIF-1α、血红素氧合酶1(HO-1)的mRNA和蛋白以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白的表达;心内取血测定白细胞介素-8(IL-8)和髓过氧化物酶(MPO)水平.结果 与假手术组比较,IRI组心肌HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白及caspase-3蛋白表达均明显增多(HIF-1α mRNA:0.849±0.032比0.356±0.022,HIF-1α蛋白:0.762±0.042比0.324±0.016,HO-1 mRNA:0.862±0.045比0.332±0.012,HO-1蛋白:0.792±0.044比0.335±0.031,caspase-3蛋白:0.371±0.015比0.061±0.012,均P＜0.01),血IL-8、MPO显著升高[IL-8:(812±26)ng/L比(72±13)ng/L,MPO:(78.7±2.9)kU/L比(13.3±1.5)kU/L,均P＜0.01].与IRI组比较,IPC组HIF-1α、HO-1的mRNA和蛋白表达(HIF-1α mRNA,1.412±0.039,HIF-1α蛋白:1.362±0.045,HO-1 mRNA:1.523±0.038,HO-1蛋白:1.420±0.041)明显增多,caspase-3蛋白表达(0.129±0.019)明显降低(均P＜0.01),血IL-8[(432±59)ng/L]和MPO水平[(43.2±5.9)kU/L)明显降低(均P＜0.01).IPC+Ⅰ组各指标与IRI组无明显差异.结论 HIF-1α对心肌IRI具有重要保护作用,HIF-1α的表达是依赖PKC激活的,PKC是HIF-1α表达的重要信号转导通路.     

脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α的表达及其与肝脏损伤的关系

目的 分析脓毒症大鼠肝脏缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平的表达、血清乳酸水平、转氨酶水平及肝脏病理损伤的变化;探讨HIF-1α与乳酸、肝脏转氨酶及病理损伤是否存在相关性.方法 将清洁SD大鼠150只分为正常组50只,假手术组50只,盲肠结扎术(CLP)手术组50只.CLP组于手术成功后的第6、12、24、48及72小时分别取10只处死,并于每个时间点取10只正常组大鼠和10只假手术组大鼠作为相应时间点的对照.在各时间点取肝脏组织进行病理学分析,测定血HIF-1 α、乳酸及转氨酶水平.比较各时间点血乳酸、转氨酶及HIF-1α水平的表达是否存在差异,并探讨HIF-1α与肝脏损伤指标及病理变化间的联系.结果 CLP组大鼠肝细胞6h组开始出现损伤,12 h、24h和48 h损伤逐渐加重,损伤在CLP后48 h最重;CLP组6h、12 h和24 h HIF-1α水平的表达与正常组和假手术组相比明显增高,差异有统计学意义(P＜0.05);CLP 12 h和24h乳酸、ALT及AST水平均明显升高,与正常组和假手术组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);HIF-1α水平与乳酸水平、血清ALT水平均存在正相关性(r值分别为0.631、0.436,P＜0.05).结论 脓毒症大鼠血HIF-1α与乳酸及谷丙转氨酶水平存在相关性,与肝脏病理损伤时间基本相同,HIF-1α可作为预测脓毒症肝脏损伤的主要指标.     

β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响

目的：探讨β1受体阻滞剂对脓毒症大鼠心肌损伤的影响和机制。方法将健康雄性大鼠72只随机分为对照组、脓毒症组、治疗组,每组24只。脓毒症组采用盲肠结扎穿孔法（ CLP）建立脓毒症模型,对照组仅剖腹而不进行CLP。脓毒症组和对照组在关腹后皮下注射生理盐水3 mL／100 g;治疗组除皮下补液外,经尾静脉注射艾司洛尔15 mg／（ kg? h）持续静脉泵入,分别于3、6、12、24 h采集标本,在每个时间点每组大鼠均为6只,观察三组血清肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、心肌组织核转录因子－κB p65（NF－κB p65）、心肌肌钙蛋白I（cTnI）的变化。结果与对照组比较,脓毒症组在各时间点血清TNF－α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF－κB p65表达均显著升高（P＜0.05）;与脓毒症组比较,治疗组在各时间点血清TNF－α浓度、cTnI浓度及心肌组织NF－κB p65表达均降低（ P＜0.05）。结论β1受体阻滞剂艾司洛尔可减轻脓毒症大鼠心肌损伤,其机制可能与抑制心肌NF－κB p65的表达,降低血清促炎介质的产生有关。β1受体阻滞剂能改善脓毒症失控的炎症反应以及保护心肌功能。     

烟碱对心肌缺血/再灌注损伤大鼠炎症细胞因子的影响

目的 探讨烟碱对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠炎症细胞因子的影响.方法 50只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、I/R组、烟碱高剂量(400μg/kg)组、烟碱低剂量(40μg/kg)组及α-银环蛇毒素(α-BGT,1μg/kg)组5组,每组10只.采用结扎心脏左冠状动脉前降支30 min、再灌注90 min制作大鼠心肌I/R损伤模型;假手术组仅穿线不结扎.制模前30 min各药物组颈静脉注射相应剂量药物干预,假手术组和I/R组给予等量生理盐水.于再灌注末取右颈动脉血,测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)、IL-10浓度和肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)活性;然后处死动物,取缺血区心肌组织测定髓过氧化物酶(MPO)活性;采用免疫组化和逆转录-聚合酶链反应检测心肌组织细胞间黏附分子-1(ICAM-1)蛋白及mRNA表达,并观察心肌超微结构.结果 与假手术组比较,I/R组血浆TNF-α、IL-8、IL-10、CK-MB、cTnI、心肌MPO活性及ICAM-1蛋白和mRNA表达均显著升高[TNF-α(ng/L):158.7±32.7比31.5±5.8,IL-8(ng/L):0.71±0.06比0.30±0.04,IL-10(ng/L):69.0±7.8比41.4±4.3,CK-MB(U/L):2 540±169比1 120±102,cTnI(μg/L):26.2±4.6比0.9±0.2,MPO(U/g):4.2±0.6比1.6±0.4,ICAM-1蛋白:0.210±0.025比0.100±0.018,ICAM-1 mRNA:1.82±0.23比1.18±0.20,P＜0.05或P＜0.01],病理学显示心肌组织损伤较重.与I/R组比较,烟碱高剂量组血浆TNF-α、IL-8降低[TNF-α(67.3±9.8)ng/L,IL-8(0.47±0.04)ng/L],IL-10升高[(147.5±12.5)ng/L],CK-MB、cTnI及心肌MPO活性、ICAM-1蛋白和mRNA均降低[CK-MB(1 282±145)U/L,cTnI(4.7±1.4)μg/L,MPO(2.5±0.4)U/g,ICAM-1蛋白0.140±0.026,ICAM-1 mRNA 1.31±0.25,P＜0.05或P＜0.01],心肌组织损伤减轻;而烟碱低剂量组和α-BGT组上述指标与I/R组比较差异无统计学意义.结论 烟碱可阻断内皮细胞表达黏附分子,阻断中性粒细胞黏附、游出,改善抗炎/促炎反应平衡,从而拮抗大鼠心肌I/R损伤时的过度炎症反应.     

缺氧诱导因子-1α在失血性大鼠心肌中的表达

目的 探讨不同程度失血大鼠心肌细胞中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1ɑ,HIF-1α)蛋白和mRNA的表达及意义.方法 选用清洁级SD大鼠,建立不同程度的失血模型,随机分为假手术对照组(CON)、失血10%(10-BL)组、失血20%(20-BL)组和失血30%(30-BL)组,利用Powerlab八道生理记录仪监测心功能指标,采用RT-PCR检测HIF-1α mRNA在失血后30 min、1 h大鼠心肌组织中的表达情况,并用免疫组化染色检测HIF-1α在心肌细胞中的分布.结果 不同程度失血后,心功能均降低,1 h比30 min降低明显(P<0.05);RT-PCR半定量结果 显示,与CON组相比,10-BL、20-BL、30-BL组HIF-1α mRNA表达逐渐增高(P<0.05);免疫组化结果 表明,HIF-1α主要分布在心肌细胞细胞质中,在细胞核内也有分布.结论 随失血程度增加,时间延长,HIF-1α表达增加,HIF-1α可能参与失血导致的低氧状态下心肌代谢的适应性调节.     

丙酮酸乙酯对重症急性胰腺炎大鼠TNF-α HMGB1及IL-10表达的影响

目的 探讨丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate,EP)对重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)TNF-α、HMGB1及IL-10表达的影响.方法 逆行胰胆管牛磺胆酸钠制作SAP模型.48只雄性SD大鼠随机分为SAP组、SAP+EP组、假手术组.采用RT-PCR检测胰腺组织TNF-α、HMGB1及IL-10的表达,采用Western-blot检测胰腺组织HMGB1的表达,采用ELISA检测外周血清TNF-α、HMGB1及IL-10表达.结果 假手术组TNF-α、HMGB1及IL-10表达较低,SAP发生后TNF-α、HMGB1及IL-10表达升高,丙酮酸乙酯治疗后TNF-α、HMGB1表达降低,IL-10表达进一步升高.结论 丙酮酸乙酯通过抑制TNF-α、HMGB1的表达,促进IL-10的表达,起到治疗SAP的作用.     

黄芪甲苷对妊娠期高血压模型大鼠胎盘组织中HIF-1α、sFLT-1和PLGF表达水平的影响

目的探讨黄芪甲苷对妊娠期高血压(HDCP)模型大鼠胎盘组织中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、可溶性血管内皮生长因子受体-1(sFLT-1)和胎盘生长因子(PLGF)表达水平的影响。方法将30只SD孕鼠随机分为对照组、模型组和黄芪组各10只。于妊娠第12天,模型组和黄芪组灌胃亚硝基左旋精氨酸甲酯10 mg/kg,连续7 d,建立大鼠HDCP模型,对照组灌胃等量生理盐水。于妊娠第16天,黄芪组灌胃20 mg/kg黄芪甲苷溶液,模型组和对照组分别灌胃等量的生理盐水,1次/d,连续灌胃6 d。于妊娠第12天、16天、17天及21天测尾动脉血压和24 h尿蛋白含量;处死后,采用ELISA法测定血清中白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western Blot胎盘组织中HIF-1α、sFLT-1和PLGF的表达。结果与对照组相比,模型组和黄芪组尾动脉血压、24 h尿蛋白含量、血清IL-6和TNF-α、HIF-1α和sFlt-1蛋白和mRNA表达水平均显著升高(P 0. 05),模型组PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著下降(P 0. 05),黄芪组PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P 0. 05);与模型组相比,黄芪组尾动脉血压、24 h尿蛋白含量、血清IL-6和TNF-α、HIF-1α和sFlt-1蛋白和mRNA表达水平均显著下降(P 0. 05),PLGF的蛋白和mRNA表达水平显著升高(P 0. 05)。结论黄芪甲苷可以使HDCP大鼠的HIF-1α和sFlt-1的表达下调,PLGF的表达上调,对HDCP具有一定的治疗作用。     

乙酰半胱氨酸对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注后低氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1基因表达的影响

目的:观察乙酰半胱氨酸(NAC)对糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)后低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA表达变化的影响.方法:用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病大鼠模型,动物分为正常假手术组(Cs组)、正常I/R组(CI/R组)、正常I/R+NAC组(CN组)、糖尿病假手术组(Ds组)、糖尿病I/R组(DI/R组)、糖尿病I/R+NAC组(DN组),每组12只,共72只.检测各组心肌梗死范围(IS/AAR)、HI-1α和HO-1 mRNA表达.结果:Cs组检测不到HIF-1α和HO-1 mRNA表达,Ds组检测到少量HIF-1α和HO-1 mRNA表达;DI/R组HIF-1α和HO-1 mRNA表达低于CI/R组(P＜0.05),IS/AAR大于CI/R组(P＜0.05);DN组HIF-1α和HO-1 mRNA表达高于DI/R组,但低于CN组(P＜0.05);IS/AAR小于DI/RR组,但大于CN组(P＜0.05).结论:NAC可部分恢复糖尿病大鼠心肌I/R后HIF-1α和HO-1 mRNA表达,减小心梗面积,有一定的治疗效果.     

来氟米特对糖尿病肾病大鼠炎性因子的影响研究

目的研究免疫抑制剂来氟米特对糖尿病肾病(DN)模型大鼠血清及肾组织白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠45只,随机分为假手术组(15只)、模型组(15只)和来氟米特组(15只)。制作DN大鼠模型成功后,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平,并采用RT-PCR方法检测3组大鼠肾组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达。结果 ELISA法检测结果显示,模型组与来氟米特组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α均显著高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05);来氟米特组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平较模型组降低,差异有统计学意义(P0.05)。RT-PCR检测结果表明,与假手术组大鼠比较,模型组和来氟米特组肾组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达量均显著升高,差异有统计学意义(P0.05),而来氟米特组肾组织IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达则明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05)。结论来氟米特可以抑制DN大鼠肾组织炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α表达,从而延缓DN进展。     

己酮可可碱对内毒素血症大鼠心肌的保护作用

目的探讨己酮可可碱(PTX)对内毒素血症大鼠心肌损伤的保护作用。方法采用直接注射内毒素的方法建立大鼠急性内毒素血症模型。18只Wistar大鼠随机分成3组:①假手术组(S);②内毒素组(L);③PTX组(P)。以放射免疫分析法分别测定各组大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,免疫组织化学法测定心肌组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、核因子-κB(NF-κB)表达。结果内毒素组血清TNF-α水平与假手术组比较明显增强(P<0.01),心肌组织中ICAM-1、NF-κB蛋白水平与假手术组比较也明显增强(P<0.01);予PTX干预后,血清TNF-α水平和心肌组织中ICAM-1、NF-κB蛋白水平与内毒素组比较明显减弱(P<0.01)。结论血清TNF-α及心肌组织中ICAM-1、NF-κB参与了内毒素所致心肌损伤,PTX可以下调TNF-α、ICAM-1及NF-κB,表达,减轻内毒素对心肌组织造成的损伤,保护心肌组织。     

蕨麻正丁醇提取物对心肌缺血/再灌注损伤大鼠肿瘤坏死因子-α水平的影响

目的 探讨蕨麻正丁醇提取物对心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响.方法 50只Wistar大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组和蕨麻提取物高、中、低浓度预处理组,每组10只.右心房取血,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清TNF-α含量,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测心肌组织中TNF-α mRNA和蛋白表达.结果 与假手术组比较,模型组及蕨麻提取物中、低浓度预处理组血清TNF-α水平及心肌组织TNF-α mRNA[吸光度(A)值]和蛋白表达均明显升高,以模型组升高更显著[血清TNF-α(μg/L):93.8±5.3比46.5±4.2,心肌组织TNF-α mRNA:0.79±0.11比0.37±0.10,心肌组织TNF-α蛋白:0.92±0.09比0.49±0.11,均P＜0.05];与模型组比较,蕨麻提取物高、中、低浓度预处理组TNF-α均明显降低,以蕨麻提取物高浓度预处理组降低更显著(血清TNF-α:44.0±2.9,心肌组织TNF-α mRNA:0.33±0.09,心肌组织TNF-α蛋白:0.45±0.18,均P＜0.05).结论 TNF-α在大鼠心肌I/R损伤过程中表达上调,用蕨麻正丁醇提取物进行干预可降低TNF-α的表达.     

戊四氮诱导的癫痫对发育期大鼠海马内低氧诱导因子-1α和血红素加氧酶-1的影响

目的探讨发育期大鼠癫痫持续状态对其海马内低氧诱导因子-1α(HIF-1α)和血红素加氧酶-1(HO-1)表达的影响。方法 21 d SD大鼠随机分为2组:生理盐水组(NS组)、戊四氮(PTZ)致癫痫持续状态模型组(模型组)。1%PTZ(80 mg/kg)予大鼠腹腔注射诱导建立癫痫持续状态模型,生理盐水组予等量生理盐水腹腔注射,采用免疫组化和Western blot分别检测海马内HIF-1α、HO-1蛋白和阳性细胞数的表达。结果 HIF-1α、HO-1蛋白在正常生理状态下(NS组)均表达,而且表达平稳;在模型组存在明显的表达时程和表达高峰变化,HIF-1α蛋白1 h即有表达,4 h增多,8 h达高峰,然后逐渐下降;HO-1蛋白1 h少量表达,4~8 h逐渐增多,12 h达高峰,后渐下降。结论癫痫持续状态后,HIF-1α和HO-1表达升高可能是癫痫后的一个重要的脑保护机制。     

血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α及其靶基因诱导型一氧化氮合酶表达的影响

目的 观察血必净注射液对脓毒症大鼠低氧诱导因子-1α(HIF-1α)及其靶基因诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 104只Wistar大鼠按随机数字表法分为正常对照组、假手术组、模型组和血必净治疗组,采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症大鼠模型,血必净组于CLP后2、12、24、36、48、60 h经阴茎背静脉注射血必净注射液4 ml/kg,其余各组注射等量生理盐水.各组分别于CLP后6、12、24、72 h分别活杀大鼠取肝脏,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肝组织HIF-1α和iNOS的蛋白表达,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HIF-1α和iNOS的mRNA表达.结果 与正常对照组比较,模型组CLP后6 h HIF-1α和iNOS蛋白表达均迅速升高,其中HIF-1α蛋白表达24 h升高幅度最明显,iNOS蛋白表达12 h达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h差异仍有统计学意义(P<0.05或P<0.01);血必净治疗组HIF-1α、iNOS 蛋白表达受到明显抑制,CLP后12、24、72 h HIF-1α、iNOS蛋白表达均较模型组显著降低(P<0.05或P<0.01).模型组CLP后6 h HIF-1α、iNOS mRNA表达开始升高,12 h均达高峰,随时间延长逐渐降低,但至72 h仍明显高于正常对照组(P<0.05或P<0.01);血必净注射液能显著抑制肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达升高,CLP后6、12、24、72 h肝组织HIF-1α、iNOS mRNA表达均明显下调,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论 血必净注射液能抑制脓毒症大鼠HIF-1α及其靶基因iNOS的表达.     

高渗盐水对缺血/再灌注损伤肝脏血红素加氧酶-1表达的影响

目的 探讨高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用及其机制。方法 25只SD大鼠随机分为假手术组、血红素加氧酶-1（HO-1）抑制剂锌原卟啉（ZnPP）组、缺血／ig灌注组、高渗盐水预处理组及ZnPP干预组，每组5只。建立大鼠局部肝脏缺血／再灌注损伤模型，于缺血／再灌注后6h测定血清丙氨酸转氨酶（ALT）活性、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量、肝组织髓过氧化物酶（MPO）活性及肝组织内皮素1（ET1）含量；采用逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）和蛋白质免疫印迹法（Westernblot）检测肝组织HO-1mRNA和蛋白表达；光镜和电镜下观察肝脏病理学改变及肝窦情况。观察使用ZnPP后，高渗盐水预处理对肝脏缺血／再灌注损伤的保护作用。结果 肝脏缺血／再灌注后血清ALT活性、TNF-α含量及肝组织MPO活性、ET-1含量均明显升高（P均d0．01），HO-1mRNA和蛋白表达明显增强。高渗盐水预处理明显增强缺血／再灌注后肝脏HO-1mRNA及蛋白表达，降低血清ALT、TNF-α水平及肝组织MPO活性和ET-1含量，肝脏微循环明显改善；使用ZnPP以后，高渗盐水预处理的保护作用消失。结论 高渗盐水预处理通过增强HO-1表达，对肝脏缺血／再灌注损伤产生保护作用。     

丁香叶提取物通过调控SIRT1/PGC-1α/NRF1信号通路改善急性胰腺炎大鼠肝损伤

目的 探讨丁香叶提取物对急性胰腺炎(AP)大鼠肝组织的保护作用,以及沉默信息调节因子1(SIRT1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)/核呼吸因子(NRF1)信号通路所发挥的作用.方法 将60只SD雄性大鼠随机分成对照组、AP组和低剂量、中剂量、高剂量组(低剂量、中剂量、高剂量丁香叶提取物),每组12只.除对照组外,其余各组大鼠均构建AP大鼠模型,并给予相应剂量的丁香叶提取物灌胃治疗.无菌条件下解剖大鼠,剥离肝脏,计算肝脏系数;检测血清中血清淀粉酶(AMY)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血清炎性因子[白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量;检测肝脏组织氧化应激指标[超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)];HE染色检测肝组织病理学变化;Western blot检测肝脏组织中SIRT1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平.结果 对照组大鼠肝脏组织结构正常;AP组大鼠肝脏组织结构损伤严重,且大量炎性细胞浸润;低剂量、中剂量、高剂量组大鼠肝脏组织病理损伤明显改善,炎性细胞浸润减少.与对照组相比,AP组大鼠肝脏系数及AMY、ALT、AST、IL-6、TNF-α、MDA水平升高(P＜0.05);SOD和GSH-Px水平及SIRT1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P＜0.05).与AP组相比,低剂量、中剂量、高剂量组大鼠肝脏系数,AMY、ALT、AST、IL-6、TNF-α、MDA水平降低(P＜0.05);SOD和GSH-Px水平及SIRT1、PGC-1α、NRF1蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丁香叶提取物可能通过激活SIRT1/PGC-1 α/NRF1信号通路,降低氧化应激和炎症反应,改善AP大鼠肝组织损伤.     

硫化氢在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用

目的 研究硫化氢(H2S)在脓毒症大鼠心肌损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠60只,月龄3～4个月,体质量180 ～220 g,随机(随机数字法)分为4组:对照组(Ⅰ组)、脓毒症组(Ⅱ组)、脓毒症+ NaHS(H2S供体)预处理组(Ⅲ组)、脓毒症+PAG(H2S代谢酶CSE抑制剂)组(Ⅳ组),每组各15只.采用盲肠结扎穿孔法制作脓毒症大鼠模型,观察各组大鼠血流动力学改变,测定心肌组织中H2S的变化,采用RT-PCR方法观察CSE mRNA表达,采用髓过氧化物酶(MPO)测定试剂盒测定各组心肌组织MPO含量,用ELISA方法检测心肌组织TNF-α、IL-1β的表达,光学显微镜下观察心肌形态学改变.结果 与Ⅰ组相比,Ⅱ组血压下降,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β、MPO含量出现不同程度增加(P＜0.01或P＜0.05),CSE mRNA表达水平提高(P＜0.05);与Ⅱ组相比,Ⅲ组血压下降更为显著,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β含量增加,MPO活性增强(P＜0.05),但CSE mRNA表达水平并无显著改变;与Ⅱ组相比,Ⅳ组血压水平接近,心肌组织中H2S、TNF-α、IL-1β 含量均降低,MPO活性减弱(P＜0.05),CSE mRNA表达水平下降(P＜0.05).四组心肌组织形态学损伤由轻到重依次为Ⅰ、Ⅳ、Ⅱ、Ⅲ.结论 脓毒症大鼠心肌组织CSE/H2S体系上调,给予H2S可以升高脓毒症大鼠心肌组织中MPO、TNF-α、IL-1β水平,加重心肌损伤,给予H2S抑制剂可以减轻心肌损伤.     

莱菔硫烷对重症急性胰腺炎大鼠肺组织内血红素加氧酶-1及环氧合酶表达的影响

目的探讨莱菔硫烷对重症急性胰腺炎(SAP)肺组织血红素加氧酶-1(HO-1)及环氧合酶(COX)表达的影响。方法将72只大鼠随机分为对照组(N组)、SAP模型组(SAP组)和莱菔硫烷组,每组各24只,分别于术后3、6、12h对各组进行肺损伤评分、检测肺组织湿干比(W/D)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、HO-1mRNA、COX mRNA的表达量。结果 SAP组的各指标均明显高于N组(P0.05);莱菔硫烷组的病理评分、肺W/D值、TNF-α、IL-1β、COX-2mRNA表达量较SAP组明显降低(P0.05),HO-1mRNA表达量较SAP组明显升高(P0.05);相关性分析示HO-1mRNA表达量与COX-2mRNA、TNF-α、IL-1β的表达水平呈明显负相关(P0.05)。结论莱菔硫烷增加了SAP肺组织中HO-1的表达量从而减轻急性肺损伤,这可能与通过抑制COX表达有关。