淋巴细胞培养法检测血中分枝杆菌及其L型的初步研究

目的建立一种快速诊断外周血分枝杆菌及其L型的培养方法,并对其进行初步评价.方法取肺癌病人和牛型分枝杆菌L型感染小鼠的血液注入1640培养基内,常规进行淋巴细胞培养,7 d后制备滴片并进行抗酸和免疫组化染色,其结果与溶血离心培养法和滴片法比较.结果7例肺癌病人外周血细胞培养法有2例查见分枝杆菌或其L型,感染小鼠心脏血检测均阳性.结论在进行淋巴细胞转化试验和染色体检查的同时,淋巴细胞培养法可用于检测血中分枝杆菌及其L型,可缩短培养时间,方法简便.     

一种新型快速检出分枝杆菌变色液体培养基的评价

结核病的早期发现主要靠实验室诊断 ,涂片抗酸染色(或荧光染色 )找抗酸杆菌阳性率低 (10 %～ 2 0 % ) ;常用的固体培养基阳性率虽可达 40 %。但时间长。尽管ＢＡＣＴＥＣ46 0ＴＢ检测系统能快速检出分枝杆菌 ,但其仪器及试剂价格昂贵、且有放射性污染[1 ] 。近年来 ,变色液体培养基在国外应用的越来越广泛[2 ] 。我们将一种新型的分枝杆菌快速变色液体培养基与改良罗 琼 (Ｌｏｗｅｎｓｔｅｉｎ Ｊｅｎｓｅｎ ,Ｌ Ｊ)培养基进行了比较研究 ,现将结果报道如下。一、材料1 标准菌株 :人型结核分枝杆菌、浅黄色分枝杆菌、草分枝杆菌、戈登分枝杆…     

基因芯片快速分枝杆菌鉴定技术与涂片抗酸染色技术的临床应用比较

目的比较基因芯片快速鉴定分枝杆菌与经典涂片抗酸染色镜检技术的临床应用效果,评估两种方法的优劣性。方法2011~2014年间以基因芯片与涂片抗酸染色两种技术对深圳市所有综合性医院临床怀疑有分枝杆菌感染的标本进行检验。χ2检验两种方法阳性率的差异性。结果共有标本2 481例,涂片抗酸染色技术检出阳性标本193例,阳性率7.8%。基因芯片技术检出阳性标本317例,阳性率12.8%。基因芯片鉴定技术比涂片抗酸染色技术阳性率高,两者间比较差异有统计学意义(P0.05)。317例阳性标本经基因芯片技术分类为263例结核分枝杆菌(MTB),27例脓肿分枝杆菌,18例胞内分枝杆菌,3例胃溃疡分枝杆菌,3例鸟分枝杆菌,1例戈登分枝杆菌,1例海分枝杆菌,1例堪萨斯分枝杆菌。结论基因芯片技术快速、准确,阳性率比涂片抗酸染色技术高。菌株的分类鉴定,有利于临床明确病源,对个体化抗分枝杆菌感染治疗有指导意义。     

分枝杆菌培养系统分离诺卡菌的应用分析

目的探讨Bact/ALERT 3D全自动分枝杆菌培养系统用于诺卡菌分离的可行性。方法收集2018年1月至2019年4月临床送检分枝杆菌培养呼吸道标本,采用氢氧化钠-N-乙酰-L-半胱氨酸预处理标本,接种Bact/ALERT分枝杆菌培养瓶并上机培养;对阳性培养瓶采用抗酸染色与弱抗酸染色、接种哥伦比亚血平板及罗氏固体培养基分离菌株;采用VITEK MS质谱仪或16S rRNA基因扩增与测序技术进行诺卡菌菌种鉴定。结果 6 592份呼吸道标本中分离分枝杆菌998株;分离诺卡菌51株,其中皮疽诺卡菌44株、新星诺卡菌2株、盖尔森基兴诺卡菌2株、星形诺卡菌1株、豚鼠耳炎诺卡菌1株和非洲诺卡菌1株。结论 Bact/ALERT 3D全自动分枝杆菌培养系统可用于呼吸道标本中诺卡菌分离培养。     

分枝杆菌L型的诱导及形态学观察

目的在液体培养基中加入异烟肼(INH)诱导分枝杆菌形成L型,并观察其形态、细胞结构及染色性的变化.方法在92-3 TBL液体培养基中加入不同浓度INH,分别接种H37Ra、牛型结核杆菌和堪萨斯分枝杆菌,抗酸染色观察细菌形态及染色性的变化.结果诱导H37Ra与牛型结核杆菌,INH浓度以1.25μg/ml为最佳,生成的L型呈缠绕成团的长丝体,涂片不易散开,抗酸染色阴性,偶见菌体内有抗酸阳性球状体,细胞壁染色示菌体浓染缺壁.诱导堪萨斯分枝杆菌以10μg/ml浓度INH为最佳,杆菌型与L型丝状体一直并存,细胞壁染色示丝状体浓染缺壁.扫描电镜示L型株呈缠绕成团的长丝状,丝状体可见分枝,偶见有成堆的圆球体.透射电镜示L型株长丝体和圆球体细胞壁缺失,菌体内电子密度较低.微区图谱分析显示H37Ra诱导生成的L型稳定株细胞膜厚度的平均值(44 995nm)明显大于原菌型细胞膜与细胞壁厚度之和的平均值(27 969nm),P＜0.001.结论INH临床应用中耐药菌株的出现,可能与其有关;液体培养基中诱导的分枝杆菌生成L型以丝状体为多见.     

冰冻保存M-H琼脂的质量评价

目的 评价冰冻(-20℃)保存对M-H琼脂培养基的质量效果及有效期.方法 1将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,在1月、3月、6月、1年、2年后取出,隔水加热浇制成平板,用标准质控菌株做质量监测;2将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,1个月后取出,加热融解浇制一部分平板后再冰冻1天,如此反复6次,每次均用标准质控菌株来鉴定其质量.结果 1用标准质控菌株鉴定各期限冰冻保存的M-H琼脂培养基的质量,均与新鲜时一样,用丁胺卡那霉素或庆大霉素药敏试纸监测的抑菌圈直径均符合质量控制鉴定标准.2用标准质控菌株鉴定反复冻融6次以内的M-H琼脂培养基的质量均与新鲜时一样,均符合质量控制鉴定标准.结论 冰冻保存不影响M-H琼脂培养基的质量,其有效期长达2年,且可反复冻融6次,该保存法适用于基层医院,也为商品化批量生产提供了长期保存方式,值得推广应用.     

冰冻保存M-H琼脂的质量评价

目的 评价冰冻(-20℃)保存对M-H琼脂培养基的质量效果及有效期.方法 1将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,在1月、3月、6月、1年、2年后取出,隔水加热浇制成平板,用标准质控菌株做质量监测;2将预先制好并经灭菌后的M-H琼脂培养基置于-20℃保存,1个月后取出,加热融解浇制一部分平板后再冰冻2天,如此反复6次,每次均用标准质控菌株来鉴定其质量.结果 1用标准质控菌株鉴定各期限冰冻保存的M-H琼脂培养基的质量,均与新鲜时一样,用丁胺卡那霉素或庆大霉素药敏试纸监测的抑菌圈直径均符合质量控制鉴定标准.2用标准质控菌株鉴定反复冻融6次以内的M-H琼脂培养基的质量均与新鲜时一样,均符合质量控制鉴定标准.结论 冰冻保存不影响M-H琼脂培养基的质量,其有效期长达2年,且可反复冻融6次,该保存法适用于基层医院,也为商品化批量生产提供了长期保存方式,值得推广应用.     

深圳市盲法复检结核病痰涂片室间质控效果评价

目的为了评价深圳市各区结核病防治机构结核病实验室对痰涂片制作的质量和镜检的能力,提高结核病实验室痰涂片镜检质量。方法按照“中国结核病防治规划痰涂片镜检质量保证手册”的要求,采用盲法复检痰涂片,2005年每季度对各区结核病防治机构进行一次痰涂片室间质控。结果抗酸杆菌阳性片符合率100.0%、阴性片符合率98.4%,痰细胞合格率93.8%,涂抹大小合格率100.0%,厚薄合格率96.0%,染色合格率98.8%,痰膜脱落合格率100.0%。结论深圳市结核病痰涂片镜下观察和肉眼观察质量符合国家质量控制标准,盲法复检痰涂片室间质控更具科学性。     

PCR-RFLP技术用于脓肿分枝杆菌群鉴定的初步研究

目的 探讨PCR-RFLP分子鉴定技术对脓肿分枝杆菌群鉴定的应用价值.方法 收集2009-2010年在福建省肺科医院、北京市朝阳区疾病预防控制中心、北京解放军总医院抗酸染色阳性菌株46株.根据2004年分枝杆菌检验手册临床检验常分离菌鉴定程序,用DNA直接测序方法为对照,以hsp65(441 bp)和rpoB(380 bp)基因的特异片段为分子标识,采用PCR-RFLP对脓肿分枝杆菌群临床分离菌株进行菌种鉴定.结果 接种L-J、PNB和TCH培养基,鉴定为结核分枝杆菌30株,非结核分枝杆菌16株.其中10株非结核分枝杆菌的培养特性和主要生化反应同脓肿分枝杆菌( ATCC 19977)结果一致.经hsp65 PCR-RFLP鉴定,9株菌株的指纹图谱为235和200 bp( BstEⅡ)/145、70、60、55、50和40 bp(HaeⅢ),1株菌株的指纹图谱为235和200 bp(BstEⅡ)/200、70、60和50 bp(HaeⅢ).经rpoB PCR-RFLP鉴定,10株临床菌株的指纹图谱是105、95和80 bp(MspⅠ)/130、100 bp和90 bp( HaeⅢ).DNA测序分析,9株分离株与脓肿分枝杆菌群脓肿亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％;1株分离株与脓肿分枝杆菌群马赛分枝杆菌亚种hsp65和rpoB基因序列匹配度均为100％.结论 PCR-RFLP是一种快速、有效鉴定脓肿分枝杆菌的方法,且hsp65 PCR-RFLP的鉴定效果优于rpoB PCR-RFLP.     

探讨制备尿液微量蛋白质控液

以乙二醇作为稳定剂制备三种不同浓度的液态质控尿液，并保存于4℃和-20℃，分别作为期一年的稳定性试验，同时作瓶间差分析，结果表明：4℃保存的三种不同浓度的质控尿液分析物M—TP浓度基本稳定；-20℃保存的三种不同浓度的质按尿液，除低浓度的标本外，其余各分析物M—TP浓度也基本稳定，低浓度的标本其M—TP含量约有所降低。瓶间差试验显示三种不同浓度的M—TP含量基本均一，瓶间差极小。认为该院自制的尿液微量蛋白质控液具有可接受的稳定性，可作为室验室推广使用。     

检测结核分枝杆菌的BSL-2实验室污染状况的实验评价

目的通过检测生物安全二级（BSL-2）实验室结核分枝杆菌（MTB）的污染情况,对BSL-2实验室安全性进行评估。方法用FA-2型撞击式空气微生物采样器采集MTB检验前、中、后的空气样本收集于血平板和生理盐水采样介质;用物表采样规格板和棉拭子采集物体表面样本。血平板采集的空气样本孵育后,挑取菌落行革兰染色镜检和16S rRNA菌种鉴定。物表样本和以生理盐水为介质的空气样本经N-乙酰-L-半胱氨酸（NALC）/NaOH前处理,采用MTB特异性荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测MTB;同时接种改良罗氏中性培养基和MTB液体培养基培养MTB。结果改良罗氏中性培养基未见分枝杆菌生长,液体培养基检出的2例分枝杆菌经测序证实分别属于MTB复合群和脓肿分枝杆菌;有2%（15/779）的样本MTB核酸阳性,且均来自进行药敏试验的2个BSL-2实验室;有26.7%（8/30）的来自生物安全柜的血平板采样的样本平皿菌落量达2＋或以上,测序分析显示主要为葡萄球菌属、芽孢杆菌属、不动杆菌属。结论受检医院BSL-2实验室MTB污染状况总体可控,但进行MTB药敏试验的实验室应重点加强生物安全防护。     

结核病实验室痰检室间质量控制方法及效果评价

目的 掌握结核病实验室痰检室间质量控制(EQA)方法,并对我省2005 EQA实施的效果进行评价.方法 对各市县级实验室结核菌痰涂片开展EQA,省级参比室进行终级质控考核,结果与2002～2004年做比较.结果 我省EQA地区覆盖率已达100%,质控频率为1次/季度;2005年全省复检痰片4 376张,镜检阳性符合率(95.1%)较2002～2004年(99.7%～100%)略有下降,痰片肉眼观察总体符合率较2002～2004年略有下降.但EQA实施期间,2005年各季度的痰片阳性符合率较前一季度都有不同程度的上升(92.6%～97.4%),痰片肉眼观察总体符合率也呈逐季度上升趋势.结论 EQA的双盲法室间质控,可有效地扩大质控范围和质控质量,使室间质控结果更加真实可靠.     

活性雾离子对分枝杆菌的消毒效果评价

目的 评价活性雾离子智能空气消毒机对分枝杆菌的灭菌效果,为分枝杆菌感染的有效控制提供新的技术。方法 依据《消毒技术规范》（2002版）进行活性雾离子消毒效果评价试验。采用分枝杆菌评价代表菌株龟分枝杆菌脓肿亚种ATCC93326株,常规培养,制备108 cfu/mL的菌液,取10μL菌液滴加在布片及不锈钢片两种载体上,经活性雾离子智能空气消毒机喷雾消毒2、6、12、24 h后洗脱,洗脱液倍比稀释后,取100μL涂布于7H10+10%油酸–牛血清白蛋白–葡萄糖–过氧化氢酶（OADC）平板,培养4 d,菌落计数,计算杀灭率及杀灭对数值。结果 消毒作用6 h时,活性雾离子对分枝杆菌的杀灭率达97.95%;延长消毒时间至12及24 h,杀灭率>99.99%,杀灭对数值>3.0。不同材质的载体效果有差异,对钢片上结核菌的杀灭效果略好于布片。结论 人机共存型活性雾离子能有效杀灭分枝杆菌,活性雾离子智能空气消毒机适用于分枝杆菌的空气及物表消毒,有效控制分枝杆菌感染。     

MGIT 及BacT/Alert MP液体培养基检测分枝杆菌效果的评价

目的 评价 BacT/Alert MP、MGIT 960 7 mL、MGIT 4 mL 3种液体培养基检测分枝杆菌的效果.方法收集肺结核病疑似患者的149份抗酸染色涂阳、188份涂阴痰标本,分别采用BacT/Alert MP、MGIT 960 7 mL、MGIT 4 mL以及罗氏培养基(L-J)进行分离培养效果比对.另...     

糖尿病患者右小腿脓肿分枝杆菌感染菌种鉴定分析

目的对糖尿病患者右小腿感染病原菌进行菌种鉴定分析。方法对病原菌进行温度生长试验（28℃、37℃及45℃）、革兰染色和抗酸染色,采用16SrDNA序列分析技术结合生化试验进行菌种鉴定。结果病原菌能在麦康凯琼脂28℃及37℃下生长,而45℃不生长。经16SrDNA序列分析技术鉴定为龟/脓肿分枝杆菌,同源度98.5%。生化试验结果为枸橼酸盐（28℃）阴性,28℃5%NaCl培养基生长试验阳性,病原菌鉴定为脓肿分枝杆菌。结论脓肿分枝杆菌是引起糖尿病患者右小腿感染的病原菌,16SrDNA序列分析技术结合生化实验可用于NTM的菌种鉴定。     

结核分枝杆菌稳定L型致病性的研究

目的探讨结核分枝杆菌稳定L型的致病性.方法将不同浓度结核分枝杆菌稳定L型纯培养物经腹部皮下注射感染豚鼠,观察动物局部皮肤反应、腹股沟淋巴结肿大情况、结核菌素试验、病理变化、病变组织涂片染色及分离培养.结果剂量为2×104个/ml的结核分枝杆菌稳定L型注射后15d发生腹股沟淋巴结肿大,但局部皮肤未见红肿.2×106个/ml在12d后可见腹股沟淋巴结肿大,局部皮肤也未见红肿.病变组织病理切片是非特异性改变,切片抗酸染色未见抗酸菌但可见抗酸阴性的圆球体,分离培养未能够检出结核分枝杆菌L型或细菌型.结论结核分枝杆菌稳定L型仍然具有致病性,但毒力显著减弱,大剂量时能够引起动物局部组织发生非特异性的炎性病变.     

临床检验室间质量评价计划主要问题以及研究进展

室间质量评价（能力验证）作为实验室检测质量提高的一种重要手段，在实验室全面质量管理的过程中起到了非常重要的作用。目前的室间质量评价计划不论是在评价限的设置还是靶值的制定以及质控品的制备和选择方面都存在一些问题。本文回顾了室间质量评价计划的发展历程，详细阐述了室间质量评价计划目前存在且需亟待解决的问题，同时明确指出室间质量评价计划未来的发展方向。     

精子形态学分析的标准化与质量控制

摘要： 精子形态学分析可以评估精子的受精能力。但由于精子洗涤、涂片、染色方法的不同,以及不同技术人员判断标准的不同,可以导致精子形态学分析结果有很大差异。因此,精子洗涤时的离心速度、精子悬液浓度、精子涂片染色方法、染色时间和染色时的温度等均需标准化,并需建立精子形态学分析的标准操作程序。正常和异常精子形态应以严格的WHO标准来判断,并需进行有效的培训来统一。精子形态学分析的质量控制非常重要,定位质控片和带质控功能的计算机辅助精子形态分析系统,以及实验室技术人员对精液分析质量控制认识的加强,可以促进精子形态学分析的室内和室间质量控制尽早在临床实验室开展。     

易导致细菌鉴定失误的因素分析

我科自1983年开始参加细菌室间质控,10多年来,体会到要做好这一工作,除需备有可靠的培养基、生化反应试剂等外,还与选择适当的培养条件,观察结果的方法与时间、检验人员的知识和经验丰富与否有关。否则就有可能造成假阴性或假阳性反应,导致鉴定上的错误。现将历年来部分世界卫生组织及全国分发的室间质控菌株在鉴定过程中容易产生判断失误的实验结果综合报告如下。 鉴定细菌菌株1983年～1990年为WHO室间质控菌株96株,1991～1998年为全国室间质控菌株96株,易导致判断失误的室间质控菌株为25株。培养基均为本科自行配制,按VITEK…     

变色液体培养基快速检测分枝杆菌的临床应用评价

目的对变色液体培养基快速检测分枝杆菌进行评价.方法通过对113例已确诊肺结核病人,24例非结核病人的晨痰分别用一种新型的分支杆菌快速变色液体培养基与改良罗氏培养基进行培养,同时做涂片抗酸染色.结果变色液体培养基阳性率54.9%(62/113),平均检出时间12天(3～17天);改良罗氏培养基阳性率52.2%(59/113);平均报告时间29天(14～42天);两者阳性检出率差异无显著性(x=0.16,P＜0.05).24例非结核病人,痰抗酸染色,改良罗氏培养基,变色液体培养基检测均为阴性结果.结论变色液体培养基检测分支杆菌阳性率高,报告时间短,不需特殊仪器设备,值得在各实验室推广应用.