慢性酒精中毒对大鼠腺垂体LH细胞的影响

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用 4%多聚甲醛行全身灌流。取脑垂体 ,Bouin液固定、脱水、石蜡包埋 ,5μm厚切片常规脱蜡处理。用鼠抗人L H抗体 (1∶ 40 0 0 ) ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。40倍接物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用镜下测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其平均值作为细胞的直径。结果如下 :1对照组免疫染色阳性细胞的直径随年龄增长无明显变化。 3个…     

慢性酒精中毒对大鼠腺垂体ACTH细胞影响的研究

本实验选用 Wistar大鼠 ,实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时麻醉下经心脏用 4%多聚甲醛行全身灌流后取脑垂体 ,Bouin液固定、脱水、石蜡包埋 ,5 μm厚切片常规脱蜡处理。用兔抗鼠 ACTH抗血清工作液 ,SP系列试剂盒免疫组织化学方法染色。 40倍物镜下用测试网格分别计数免疫染色阳性细胞总数、强阳性细胞数。选择细胞轮廓完整、没有重叠的细胞 ,用镜下测微尺测量阳性细胞的最长径及最短径 ,取其中间值作为细胞的直径。结果如下 :16个月实验组免疫染色阳性细胞的直径大于其对照组。而 18个月…     

雌激素替代治疗大鼠海马结构PKC阳性细胞的变化

目的 :观察雌性大鼠行去势后以及雌激素替代治疗海马结构蛋白激酶C ( proteinkinaseC ,PKC)阳性细胞的变化 ,通过该模型研究绝经期后女性情绪烦躁、记忆下降等神经精神症状的分子机制。方法 :将大鼠分为对照组、去势 3个月组和去势后雌激素替代治疗 3个月组 ,用免疫组织化学方法检测海马结构PKC阳性细胞的变化。结果 :PKC阳性细胞主要分布于下托和齿状回的颗粒层 ,其中齿状回内的阳性细胞较下托的多。去势 3个月组与对照组相比 ,齿状回内的PKC阳性细胞没有显著性减少 (P >0 .0 5 ) ,下托PKC阳性细胞显著减少 (P <0 .0 5 ) ;雌激素治疗组与对照组相比 ,下托细胞数量有所减少 ,但无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :海马结构下托PKC阳性细胞的减少可能在绝经后女性情绪烦躁、记忆下降等症状中起重要的作用。     

慢性酒精中毒大鼠腺垂体分泌细胞形态学改变的电镜观察

选用 Wistar大鼠分实验组和对照组。实验组饮用 2 0 %医用酒精 ,对照组正常饮水。分别于喂养 3个月、6个月和 18个月时断头处死动物 ,取脑垂体入 2 .5 %戊二醛磷酸缓冲液固定 ,1%锇酸后固定。丙酮逐级脱水 ,Epon812包埋 ,L KB超薄切片机 40～ 5 0 nm厚切片。透射电子显微镜观察 ,比较了腺垂体生长激素细胞、促性腺激素细胞、促肾上腺皮质激素细胞和催乳激素细胞在洒清中毒组的形态学变化。结果显示洒精中毒组上述内分泌细胞的细胞间隙变宽 ,细胞核固缩 ,核周隙增大。内质网扩张明显 ,局部成池。细胞内颗粒电子密度减低或深浅不一。生长激…     

饮酒对小鼠睾丸生精小管一氧化氮合酶、增殖细胞核抗原表达及细胞凋亡影响的研究

目的　探讨酒精对小鼠睾丸的组织结构、内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)、增殖细胞核抗原 (PCNA)及细胞凋亡的影响。　方法　用 5 %、10 %及 15 % 3种不同浓度的酒精作用于 2 2d龄小鼠 ,取睾丸做石蜡切片、HE染色 ;用免疫组织化学方法检测睾丸eNOS、细胞增殖的变化 ;TUNEL法检测细胞凋亡的变化 ,并进行统计学分析。　结果　随着酒精浓度的增大 ,睾丸组织结构发生明显改变 ,生精小管的直径逐渐减小 ,eNOS阳性细胞面积密度逐渐增大 ,单位面积内PCNA阳性细胞和凋亡细胞数目增加 ,高浓度酒精组与其他组差异极显著 (P <0 0 1)。　结论　酒精可使生精小管的直径变小 ,eNOS及PCNA表达增强 ,凋亡细胞增加并随酒精浓度的增大而变化加重。这可能是过量饮酒导致生精细胞减少 ,生殖能力降低的重要因素。     

运动应激对大鼠胃肠道5-HT免疫反应细胞的影响

目的　探讨力竭游泳对大鼠胃肠道 5 HT免疫反应细胞 (5 HTIR细胞 )的影响。方法　本研究以力竭游泳大鼠为运动模型 ,游泳后即刻取大鼠胃窦、十二指肠、空肠和回肠用免疫组织化学SP法检测 5 HT ,用图像分析系统测定胃肠 5 HTIR细胞数和平均灰度。结果　 (1)游泳后胃窦 5 HTIR细胞数虽与对照组无明显差异 ,但阳性细胞的平均灰度却明显下降 (P <0 .0 5)。 (2 )十二指肠、空肠、回肠 5 HTIR细胞数都明显下降 ,与对照组相比有显著性差异 (P <0 .0 5) ,但只有空肠 5 HTIR细胞平均灰度明显增加 ,与对照组间有明显差异 (P <0 .0 5)。结果　胃肠道不同区域 5 HTIR细胞以不同的反应方式应答运动应激。     

肠易激综合征患者分泌5-羟色胺的肠嗜铬细胞形态及功能改变

目的　研究肠易激综合征 (IBS)患者的肠嗜铬(EC)细胞及其合成和储存 5 HT的功能变化。方法　按罗马Ⅱ诊断标准 ,并依其分型标准区分腹泻型及便秘型IBS。取IBS患者肠镜活检标本进行Envision法免疫组化染色。部分活检标本电镜下观察EC细胞形态及功能。免疫组化染色及电镜观察均设正常对照组。结果　腹泻型IBS组免疫组化染色阳性细胞数为 15 90± 5 0 9(每 10 0个细胞 ) ,便秘型IBS组为14 73± 2 73,对照组为 7 2 7± 2 5 0。便秘组和腹泻组间差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,但两组IBS患者免疫组化染色阳性细胞数和对照组比较 ,…     

黄连素对豚鼠结肠平滑肌细胞膜钙离子激活钾通道和延迟整流钾通道的影响

目的　探讨黄连素治疗运动性腹泻的机制。方法　取EWG B豚鼠 ,体重 2 5 0g～ 35 0g ,雌雄不拘 ,于实验前 2 4h禁食 ,12h禁水。击枕处死动物 ,取近端结肠约 5cm ,分离黏膜层和浆膜层得到肌条。将肌条剪成 2mm× 4mm小块 ,用含 1%Ⅱ型胶原酶、1%胰蛋白酶抑制剂、2 %牛血清白蛋白的消化液于 37℃消化 15min左右后洗净消化酶 ,实验前反复吹打得单个豚鼠结肠平滑肌细胞。取细胞悬浮液约 0 1mL接种于细胞灌流槽中 ,使细胞自然沉降、贴壁。用充灌电极内液的玻璃微电极在倒置显微镜下封接细胞形成高阻封接 ,然后击破细胞膜 ,然后分别用PSS和含B…     

组织细胞样麻风一例

患者女 ,2 3岁。因面部及四肢皮肤结节 5个月于 2 0 0 1年 1月 9日到我院皮肤科就诊。 5个月前患者面部及四肢皮肤出现结节 ,伴皮肤发痒 ,不痛 ,温、触觉障碍。无发热及关节疼痛等。体检 :患者面若桃花色 ,双眉几乎完全脱落 ,面部有水肿性红斑 ,额部及四肢多发性皮下结节 ,直径 0 .5～1.0ｃｍ不等 ,活动 ,多数结节表面未见明显异常 ,少数有溃破。取左额部皮肤结节送检。病理检查 :梭形皮瓣组织一块 ,皮肤表面微隆起 ,未见明显异常。切面可见一直径约 0 .7ｃｍ的灰白色质硬区。镜下观察 :表皮未见明显异常 ,表皮下有一薄层无细胞浸润带 ,真皮…     

免疫增强状态下大鼠淋巴结中ACTH免疫阳性细胞数量变化与免疫功能的相关关系

目的 :研究在免疫增强应答中 ,淋巴结促肾上腺皮质激素免疫阳性 (ACTH- ir)细胞数量的动态变化以及与体液、细胞免疫的相关关系。方法 :取成年雄性 SD大鼠建立动物模型。在免疫增强过程中 ,按不同时序取样五次 ,分别检测血清 Ig G含量与颌下淋巴结单位面积中 ACTH- ir细胞和 CD2 5阳性细胞数量的动态变化。结果 :ACTH- ir细胞数量在初次免疫刺激后显著上升 ,在第 6天达到峰值 (P<0 .0 5 )。此后随机体免疫状况增强而迅速下降 ,于第 2 6天降到最低值 (P<0 .0 5 )。多因素相关分析显示 (ACTH- ir)细胞和 CD2 5阳性细胞在数量上呈负相关关系 ;而 (ACTH- ir)细胞数量与 IL- 2 ,Ig G含量间未发现有相关关系。结论 :结果提示在免疫增强状态下 ,CD2 5阳性细胞对 (ACTH- ir)细胞可能具有竞争性抑制作用。     

运动对大鼠额叶和纹状体一氧化氮合酶阳性细胞的影响

目的　研究运动对运动中枢神经型一氧化氮合酶阳性细胞的影响。方法　将大鼠分为对照组和运动组 ,运动组大鼠游泳 5d ,用免疫组织化学方法检测额叶、纹状体一氧化氮合酶阳性细胞的变化。结果　运动组额叶、纹状体一氧化氮合酶阳性细胞的染色比对照组深 ,运动组额叶阳性细胞数量平均每张切片为 (7.2± 1.9)个 ,比对照组 (2 .4± 0 .6 )个明显增加 (P <0 .0 5 ) ,运动组纹状体阳性细胞数量平均每张切片为 (35 .0± 7.2 )个 ,也比对照组 (8.2± 1.3)个增加显著 (P <0 .0 1)。结论　运动增加了运动中枢一氧化氮合酶阳性细胞的表达     

用碳-铂复型与免疫电镜技术对人脑胶质瘤细胞系BT_(325)整装细胞骨架的研究

人脑胶质瘤细胞系BT_(325)细胞用含Triton X-100的缓冲液处理后,用针对波形纤维蛋白(vimentin)的单克隆抗体,与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗血清进行间接免疫荧光染色。在荧光显微镜下观察后,将细胞用酒精逐级脱水,然后进行临界点干燥。将干燥后的细胞进行碳-铂喷镀,所得到的碳-铂复型用透射电镜观察。用本法可清晰地观察到完整的细胞骨架,以及微管、微丝与中间丝的形态与分布。在经vimentin单克隆抗体免疫染色的细胞内,中间丝直径较粗;在用GFAP抗血清染色后,只有部分细胞内中间丝直径较粗。如将Triten处理的细胞先用甲醛固定后,再进行免疫染色,中间丝直径增加较少;但如果先进行免疫染色后再用甲醛固定,中间丝直径显著增加。这与免疫荧光观察结果相一致,说明甲醛固定对中间丝分子上的抗原位点起破坏或遮蔽作用。     

海洛因依赖对大鼠睾丸表皮生长因子、β-内啡肽阳性细胞及血清卵泡刺激素的影响

目的 探讨海洛因依赖对大鼠睾丸表皮生长因子(EGF)、β-内啡肽(β-EP)阳性细胞的影响和血清卵泡刺激素(FSH)的变化. 方法 成年雄性SD大鼠55只,随机分为正常对照组、盐水对照组及海洛因依赖组.皮下注射海洛因建立海洛因依赖大鼠模型,分别于模型建立的第10、17、24、31、38天取睾丸组织.采用免疫组织化学SABC法、细胞计数、图像分析方法及放射免疫测定技术进行研究. 结果 1. 与正常及盐水对照组比较,海洛因依赖组大鼠睾丸EGF阳性细胞免疫染色强度有所增强,平均灰度值明显低于正常及盐水对照组,但细胞数量有所减少(P<0.05).2. 海洛因依赖组大鼠睾丸β-EP阳性细胞数量有所减少(P<0.05),免疫染色强度较正常对照组和盐水对照组有所减弱,平均灰度值逐渐增高(P<0.05).3.放射免疫测定结果表明,血清FSH在第10天水平较低,第17天有所增高. 结论 海洛因依赖期间,大鼠睾丸EGF阳性细胞的分泌功能增强,β-EP阳性细胞的分泌功能减弱,两者细胞数量均有所减少,血清FSH分泌量有所改变.提示,睾丸内分泌细胞在海洛因依赖期间可能参与了机体神经内分泌的调节过程.     

胰岛α细胞培养上清液对INS-1细胞胰岛素释放与合成的影响

在培养的INS 1细胞中 ,分别加入不同比例的胰岛α细胞培养上清液 (以下简称上清液 ) ,在不同浓度葡萄糖的刺激下 ,分别孵育不同时间 ,用放射免疫法测定INS 1细胞培养基中的胰岛素含量。在 2 0mmol L葡萄糖浓度下 ,不同刺激时间 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于 0 %上清液 (以下简称对照组 ,P <0 0 5或0 0 1 )。在 0、1 85mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液对INS 1细胞的胰岛素分泌无明显作用 ,而在 5 6、1 6 7和 5 0mmol L葡萄糖刺激时 ,不同浓度的上清液刺激INS 1细胞分泌的胰岛素显著高于对照组 (P <0 0 5或 0 0 1 )。RT PCR结果显示 ,在 1 6 7mmol L葡萄糖刺激 4、1 2和 2 4h后 ,30 %上清液对INS 1细胞胰岛素mRNA水平均无明显影响。提示胰岛α细胞培养上清液对糖刺激的INS 1细胞的胰岛素分泌有促进作用 ,但不影响胰岛素的生物合成     

穹窿海马伞损伤对大鼠学习记忆和海马GFAP阳性神经胶质细胞的影响

为探讨穹隆海马伞损伤鼠学习记忆能力与海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞之间的关系 ,切断 SD成年大鼠左侧穹窿海马伞 ,用 Y迷宫和免疫组织化学结合图像分析系统测试大鼠学习记忆能力和海马胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的变化状况及它们的相互关系。结果显示 :损伤 2周后 ,损伤组损伤侧海马 CA1 区辐射层和齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的数密度较正常组分别增多 3 0 .2 9%和 3 0 .15 % (都为 P<0 .0 1) ,胞体面积分别增加 16.0 4%和 19.42 % (都为 P<0 .0 1) ,齿状回分子层胶质纤维酸性蛋白阳性细胞体密度增大 19.40 % (P<0 .0 5 )。经相关分析 ,大鼠学习记忆能力与海马 CA1 区胶质纤维酸性蛋白阳性细胞数密度呈负相关 (r=-0 .83 6,P<0 .0 1) ,与齿状回数密度呈负相关 (r=-0 .792 ,P<0 .0 1)。提示海马星形胶质细胞可能参与学习记忆过程     

汉防己对胸腺细胞Fas和Fas-L表达的影响

目的探讨防己（Radix Stephaniae Tetrandrae）对小鼠胸腺的细胞的影响及其作用机制。材料与方法取昆明小鼠的胸腺细胞,随机分为阴性实验组（元防己）、阴性对照组（用0．05MPBS代替一抗）和3个药物实验组（其浓度分别为10μg／ml、50og／ml、100／μg／ml）,分别培养1h、6h、12h、24h后,利用免疫细胞化学的方法检测细胞内Fas和Fas-L的阳性细胞的表达。结果随着汉防己煎剂浓度的增高及作用时间的延长,实验组Fas和Fas-L的阳性细胞表达率显著增高（P〈0．05）。结论防己可以诱导小鼠胸腺的细胞的凋亡。     

离体培养的生后大鼠脑室下层神经元前体细胞免疫细胞化学和形态学研究

为了探讨生后大鼠脑室下层神经元前体细胞离体培养时的神经活性物质特征和形态学特征 ,本研究以细胞特异性的抗体进行免疫细胞化学反应并测量了这些细胞的形态学指标胞体平均直径和胞体椭圆率 (胞体最小径与最大径的比值 )。取脑室下层细胞接种于覆有多聚赖氨酸的 2 4孔培养板 ,培养液为 Neurobasal Medium( Gibco) /B2 7,培养条件为 5 % CO2 ,3 7℃。结果如下 :在培养 1d时 ,绝大多数 (大于 90 % )脑室下层源细胞呈 β-3型微管蛋白阳性 ,且这些细胞也都表达多唾液酸神经粘连分子。此时 ,大多数β-3型微管蛋白阳性细胞胞体呈椭圆形 (胞体平均直径为 8.42± 1.0 3μm;胞体椭圆率为 0 .5 7± 0 .12 ) ,且在其两极各长出一短的、无分支的突起 ;并有近 2 0 %者为球形无突起细胞 (胞体平均直径为 7.2 0± 1.0 4μm) ,且它们大多呈细胞与细胞相连接状态。随着培养时间的延长 ,这些细胞亦呈上述椭圆形有突起样细胞变化 ,但仍可见它们呈串珠样连接。培养至第 3～5 d,这些脑室下层源细胞的体积增大 (胞体平均直径为 9.0 7± 1.0 7μm)、突起较前增长但仍几无分支。免疫细胞化学反应显示 ,此时培养中的脑室下层源细胞仍大多呈β-3型微管蛋白阳性和多唾液酸神经粘连分子阳性。至培养的第 7d,这些β-3型微管蛋白阳性     

VEGF对大鼠海马回神经干细胞体外增殖和分化的影响

目的： 观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠海马回神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法: 自生后第3 d的SD大鼠脑海马区分离NSCs，进行体外培养并传代，分为2组：（1）VEGF组加入150 μg/L VEGF的培养液培养；（2）对照组未加VEGF。培养7 d后，撤除VEGF，分别在第7 d及第11 d通过相差显微镜观察细胞形态，并用免疫荧光方法检测nestin和NF的表达，计算各组免疫染色阳性细胞率。结果: 在VEGF作用下第7 d，VEGF组nestin阳性细胞率为52.19%±7.95%，多于对照组的29.26%±4.12%（P<0.01），NF阳性细胞率为22.33%±4.13%，对照组仅有38.62%±5.31%（P<0.01）；在实验第11 d，VEGF组NF阳性细胞率为43.10%±3.70%，对照组仅30.56%±4.16%，P<0.01。结论: 本实验提示VEGF能促进NSCs的增殖,并抑制其分化。     

不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞比率的研究

目的 比较不同时间点人胚胎脑神经干细胞分化为神经元和胶质细胞的比例.方法 取胎龄8～12 周的人胚胎脑海马,机械分离成单细胞悬液,以2×106 个细胞/ml接种到含h-EGF、h-bFGF和h-LIF的DMEM/F12培养液中.用1?S诱导神经干细胞球分化,12 h后行RNA-结合蛋白(musashil)免疫细胞化学鉴定,分别在2、5、7、14和23 d时行β-Ⅲ微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin/Tuj1)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)和半乳糖脑苷脂(galc)免疫细胞化学鉴定.结果 诱导分化12 h时细胞球中绝大部分细胞为Musashil阳性细胞,第2 d时有少量的β-ⅢTubulin和GFAP阳性细胞,未见galc阳性细胞;第7 d时β-Ⅲ Tubulin阳性细胞数目最多,约为细胞总数的48.2%,以后逐渐下降,而GFAP阳性细胞数目在第2～23 d内呈逐渐增加趋势,到第23 d时达细胞总数的65.3%;随分化时间延长,只能检测到极少量的galc阳性细胞.结论 1?S可促使人神经干细胞分化为中枢神经系统的3种主要细胞类型,且其分化为神经元和胶质细胞的比例在不同时间点上有显著差异.     

乙型肝炎病毒X和p53对肝癌细胞生长的影响

目的　探讨乙型肝炎病毒X(HBx)基因与p5 3在损伤情况下的相互作用及对肝癌细胞生长的影响及作用机制。方法　通过构建正义及反义野生型 (wt)p5 3 ,与HBx分别单转染或共转染含wtp5 3 ( + )、HBV( - )的人肝癌细胞株SMMU 772 1细胞 ,在吡柔比星的诱导下 ,用流式细胞仪检测对细胞凋亡的影响 ,及HBx对细胞周期的影响 ,并通过检测含p5 3结合位点p2 1Waf1启动子荧光素酶活性来观察HBx是否通过p5 3影响p2 1Waf1的表达 ,以及绘制细胞生长曲线观察HBx对SMMU 772 1细胞生长的影响。结果　在吡柔比星的诱导下 ,HBx能够促进细胞凋亡 ,转染空载体组及pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %和 12 66%。但HBx对外源性p5 3诱导的细胞的凋亡具有抑制作用 ,转染空载体、正义pcDNA3wtp5 3及正义pcDNA3wtp5 3 +pcDNA3HBx组细胞凋亡率分别为 5 3 2 %、11 72 %、4 67%。同时处在G0 ～G1期瞬时表达及稳定转染HBx细胞数较对照组分别减少 4 79% ,10 2 5 %。而且HBx可抑制p2 1Waf1启动子荧光素酶的活性 (P <0 0 5 )及促进细胞生长。结论　细胞在DNA损伤因素的作用下 ,HBx可能通过抑制p5 3导致p2 1Waf1的表达降低 ,引起停滞在G0 ～G1期的细胞减少 ,导致肿瘤细胞仍能继续分裂增殖形成恶性生长