肺癌石蜡包埋组织及新鲜标本组织芯片制备方法学探讨

目的：探讨和建立石蜡包埋组织和新鲜冷冻标本制备组织芯片的方法，以及在基因表达分析中的应用。方法：选取肺癌石蜡包埋组织90例，新鲜液氮冻存肺癌及癌旁组织20例，常规切片HE染色下确定穿刺部位，石蜡包埋组织芯片制作按Kononem等方法（1998），每例穿取0.6mm组织柱2条，制备180点阵组织芯片；而新鲜组织芯片参考Fejzo等方法（2001），并略作改良，制备50点阵组织芯片。所有组织芯片模块，经4цm切片、常规组织学染色和免疫组化染色，以评价其在形态学及基因表达分析中应用的可行性。结果：180点阵石蜡包埋肺癌组织芯片，组织排列整齐，HE染色后组织形态可观察率在98%以上；p53、c-myc、bcl-2、bax和Ki-67等免疫组化染色后，肺癌组织可见不同程度的抗原表达，组织点阵的形态可观测率在89%-95%之间。新鲜组织芯片经HE染色后，形态可观测率和基因表达可分析率在70%左右。结论：手工法组织芯片制备简便易行，使用组织少，不破坏原蜡块；实验均一性、可比性好，且节省试剂。与常规组织切片相比，2点0.6mm组织可以获得原蜡块95%以上的信息，完全可以用于组织形态学和蛋白水平上的基因表达分析；新鲜组织芯片技术已经初步建立，但尚有待于进一步完善制备技术和mRNA分析方法。     

二次包埋法手工制作病理学教学组织芯片

目的探讨手工制作教学组织芯片方法的可行性。方法利用组织芯片制备系统,通过二次包埋法,手工制作病理教学组织芯片,经HE染色,光镜下检测组织芯片制作质量。采用四川省病理技术专业委员会对石蜡切片HE制片质量评定得分标准对切片进行评分,并与传统教学组织切片比较。结果组织微阵列(TMA)蜡块中的组织芯点排列整齐,与受体蜡块融合紧密;组织芯片切片基本完整,厚薄均匀,经HE染色后组织形态可利用率为94%～100%,切片质量评分优秀率79%,良好率10%。二次包埋法手工制作的教学组织芯2片与传统组织切片制作方法制作的教学组织切片质量无明显差异性(χ=3.073,P0.05)。结论二次包埋法手工制作教学组织芯片方法简便易行,经济实用低消耗,具有高效快速染色均一性好、自身内对照和可比性强的特点,可在病理教学中推广应用。     

洪水浸泡蜡块对病理检测质量影响的观察

目的观察洪水浸泡后的蜡块对HE染色、免疫组织化学标记及分子病理检测的影响, 评估受损的病理蜡块是否有保存价值及能否满足后续检测要求。方法清洗蜡块表面淤泥, 消毒液浸泡, 自然干燥后, 选取不同年份、不同标本类型的蜡块, 行HE染色、免疫组织化学标记及分子病理检测, 与之前档案中的检测结果进行对比, 观察前后检测结果的差别。结果 HE染色镜下显示细胞胞质和胞核红蓝对比明显, 着色均匀, 细胞结构清晰;免疫组织化学染色显示阳性结构清晰, 定位准确;分子病理检测结果与之前结果一致。结论病理档案资料保存中, 组织前期处理及封蜡非常关键, 极端情况下能最大限度保障病理组织的完整性。     

组织芯片的Feulgen反应和免疫组化染色

组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列(tissue microarray)技术，由Kononen等于1998年首先建立并报道，是将数十至上千个小组织整齐有序地排列在一张载玻片上而形成的缩微组织切片。组织芯片体积小，信息含量大，一次实验可获得大量结果，能用于HE常规染色、特染、免疫组化和原位杂交等各种染色技术，有广阔的应用前景。     

滴染平台与浸染平台用于HE染色的对比与探讨

正全自动染色封片体系具有封片量大、稳定性好、效率高、相对环保等优点,普遍应用于病理学实验室,并逐渐代替手工操作。浙江省台州医院病理科多年来一直用浸染式的Leica全自动染色封片体系。2017年1月又引进了VENTANA HE600全自动染色体系。作者从1周的染色质量和仪器性能方面对比3种染色体系的差异,现报道如下。1材料与方法1.1材料随机抽取2016年已行HE染色并符合质控要     

分色方法在常规HE染色过程中的对比分析

目的 对比分析不同分色方法在常规HE染色过程中的分色效果.方法 选取石蜡切片120张,随机分为四组,在常规HE染色过程中分别采用1%盐酸水溶液,1%盐酸酒精溶液、5%冰醋酸水溶液、5%冰醋酸酒精溶液中分色,统计比较两组染色时间、脱片率及染色效果等.结果 四组比较,1%盐酸酒精溶液组脱片率最高位33.3%,5%冰醋酸酒精溶液组脱片率为10.0%.5%冰醋酸酒精溶液的作用时间为(18.2±2.0)s,更易操作,且细胞核的着色程度较传统盐酸溶液更加鲜艳.结论 选用5%冰醋酸水溶液在常规HE染色过程中进行分色,与组织作用较温和,时间相对较长,对组织分化程度易掌握,细胞核染色与传统盐酸分色比较色彩更鲜艳,更蓝,胞质和胞核对比比较鲜明.     

水溶性伊红Y不同配置法对HE染色效果的影响

HE染色效果除与组织是否新鲜、固定是否及时以及脱水包埋过程是否恰当有关外,染色液的配置和使用也是重要的环节之一,染色液的质量最终决定染色的效果[1].本实验室使用伊红染色剂均是水溶性伊红Y,在长期的工作实践中发现,采用不同的伊红配置法所得的染液,HE染色效果差异明显,为了使染色效果更佳、更稳定和更可控,我们对伊红的配置方法和染色效果进行对比实验,现将实验过程及结果详述如下.     

三种类型的苏木精在HE染色中的效果比较

自1863年Waldeyer倡导使用苏木精染色细胞核,伊红染色细胞质,使不同组织和细胞成分呈现不同颜色和产生不同的折射率,HE染色一直被广泛应用于病理形态学诊断、教学和研究。在实际工作中使用的苏木精通常为自然氧化或人工氧化两种,将自然氧化和人工氧化的苏木精以1∶1比例混合成混合苏木精,染色效果很好,现将这三种类型的苏木精在HE染色中的效果介绍如下。     

陈旧肾脏HE染色切片退掉盖玻片后行免疫组化检测

<正>在临床和科研工作中切片大部分都是以HE染色树胶封片,这样可样将切片长期保存。但是往往因为原有组织块丢失而或其他原因需要在原有石蜡HE染色切片原位基础上行免疫组织化学检测。本文就上述问题做了尝试并得到了较好的效果。1材料与方法实验室中存放的陈旧HE染色小鼠肾脏组织切片     

应用凝集素芯片检测细胞膜表面糖链种属特异性

目的应用凝集素芯片检测小鼠和兔不同组织细胞膜表面的糖链类型,探求不同物种间相同组织细胞膜表面糖复合物在种群免疫和细胞功能中的作用。方法选择22种凝集素,利用生物芯片点样仪制备芯片,选用牛血清白蛋白（BSA）为阴性质控,马铃薯凝集素（STL）为阳性质控。分别用胶原酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ消化小鼠和兔的肾、脾、肝组织,制备细胞悬液,并加入吖啶橙荧光标记细胞。将细胞悬液分别滴加至凝集素芯片中,利用凝集素与糖链的特异亲和性捕获细胞,激光扫描仪检测芯片中各凝集素位点的荧光信号强度,行常规HE染色后于荧光显微镜下观察各凝集素位点所捕获的细胞形态,并分析不同胶原酶消化对检测结果的影响。结果小鼠和兔相同组织的细胞膜表面糖链类型基本相同,仅个别位点略有不同。在GNA、LTL、HHL、NPL位点,兔脾细胞均为阴性,小鼠脾细胞均为阳性。在BPL、WFA位点,兔肾细胞均为阴性,小鼠肾细胞均为阳性;在MAL-I位点,兔肾细胞为阳性,小鼠肾细胞为阴性。MPL、WBA、LTL、SBA、BPL、WFA、MAL-I、AAL、BCL位点,兔肝细胞均为阳性,小鼠肝细胞均为阴性;在NPL位点,小鼠肝细胞为阳性,兔肝细胞为阴性。DSL、STL位点,小鼠和兔各组织细胞检测结果均为阳性;在EEL、DBA位点,小鼠和兔各组织细胞检测结果均为阴性。在GNA位点,兔脾组织经胶原酶Ⅱ消化后可见极少量细胞,经其他2种胶原酶消化后则未见捕获细胞。兔肾组织以及小鼠的脾和肾组织经3种胶原酶消化后,检测结果无明显差异。在BCL位点,兔肝组织经胶原酶IV消化后捕获细胞最多,其次为胶原酶Ⅱ,胶原酶Ⅰ最少。结论通过制备的凝集素芯片成功检测了小鼠和兔不同组织细胞膜表面的糖链特异性。小鼠和兔相同组织的细胞膜表面具有相同类型糖链,但不同组织之间细胞膜糖链类型也存在其特异性,这可能与组织分化及其功能密切相关。     

采用紫BL与蓝B2R对组织切片染色的观察

目的寻找制备简单、效果良好、来源丰富的组织切片染色剂。方法应用27种直接服装染料对小鼠肝脏组织切片进行染色效果观察,发现其中的紫BL和蓝B2R染色能够清晰显示中央静脉和肝细胞核等结构,再用紫BL和蓝B2R对心脏、肾脏和睾丸组织切片进行染色效果观察。结果紫BL和蓝B2R用蒸馏水溶解后即可使用,配制简单,在5 min内完成。它们对心脏、肾脏和睾丸组织切片染色后,心肌横纹、肾小囊腔、生精细胞等结构清晰可辨,与HE染色结果类似。结论紫BL与蓝B2R比苏木素制备简单,同时它们的组织切片染色效果良好,来源丰富。因此,可能部分替代苏木素。     

陈旧褪色病理教学HE切片颜色恢复技术探讨

在病理学实习教学中,病理常规HE切片是重要的教学工具.对病理学教学切片要求所选病例典型,组织切片应完整、无皱褶、无摺叠、无破损,并且切片染色鲜艳,红蓝对比鲜明.由于时间的关系,一些教学切片发生褪色,其中主要是苏木精颜色的减退,有些切片甚至完全褪色,整张切片呈现一片红色,从而严重影响了教学效果.本文旨在在原有HE染色的基础上,探索一种促染方法,改善这些褪色教学切片的颜色,恢复其鲜艳的红蓝对比颜色,使其发挥正常的教学作用.     

“套餐式”组织芯片法在免疫组化室内质控中的应用

免疫组化染色是病理工作中不可或缺的项目,要获得一致的、准确的免疫组化结果,室内质控尤为重要。要做到病理质控的标准化,高端产品全自动免疫组化仪完全可以达到要求,但因其价格昂贵,在短缺资金的医院存在困难。我们在工作过程中摸索出了以"套餐式"组织芯片法[1]作为室内质控的标准化方法,便于室内质控,现介绍如下。     

正丁醇联合松节油替代二甲苯用于石蜡包埋

目的 寻找一种能够替代二甲苯透明剂的组织石蜡包埋方法。 方法 使用正丁醇和松节油的混合物替代常规石蜡包埋过程中无水乙醇、二甲苯的作用,收取卷茎蓼干预的多发性脑梗模型大鼠的脑、肾、胃、肝、十二指肠组织进行石蜡包埋,最终根据石蜡切片的效果、HE染色以及免疫组织化学结果对这种新型脱水程序做出评价。 结果 正丁醇和松节油的混合物可以替代常规石蜡包埋程序中无水乙醇的脱水、二甲苯的透明作用。经正丁醇、松节油混合物处理后的组织切片流畅,组织无变脆、变硬;HE染色后,新型脱水处理组织的细胞核、细胞质分明,组织的着色度、色泽、透明度与常规脱水程序无差异;通过大鼠不同组织做免疫组织化学染色,经对比结果与常规包埋组织免疫组织化学染色无差异。 结论 正丁醇联合松节油用于组织脱水既能够避免二甲苯对人的毒性作用,还可以减少无水酒精过度脱水对组织的破坏。     

实验室信息系统在HE切片质量改进中的应用

正影响HE切片质量的因素很多,从标本固定到取材、脱水、包埋、切片、染色等每个环节都可能会影响到切片的质量。国家卫计委2015年颁布的《病理专业医疗质量控制指标》中指出"标本规范化固定率"和"HE染色切片优良率"两个指标跟切片质量息息相关。本中心病理部围绕这两个质控指标,应用实验室信息系统的功能在日常工作中实时采集相关的质控数据,建立HE切片质量反馈机制,从而改进和提高HE切片质量。1 材料与方法1.1 材料本中心自主研发的实验     

冰醋酸在调节HE染色中的作用

随着分子生物学技术和免疫组化技术在病理诊断中的广泛开展,对组织的固定方法提出了更高的要求,目前适用于分子生物学技术和免疫组化技术的石蜡包埋组织均用10%中性福尔马林固定,效果最好.但是用10%中性福尔马林固定的组织用原配方经HE染色后,效果却不如普通10%福尔马林固定的组织好.为了使10%福尔马林固定的组织达到理想的HE染色效果,我们通过对染色配方及染色时间进行改良和调整,并反复实践,取得了较好的效果.     

甘草附子汤加减方通过抑制GSDMD介导的焦亡治疗CIA大鼠的作用机制研究

目的：探讨甘草附子汤加减方（GCFZD）抑制gasdermin D (GSDMD)介导细胞焦亡途径对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠的治疗效果。方法：SD大鼠尾跟部注射由牛Ⅱ型胶原与弗氏佐剂混合形成的乳化剂，构建CIA大鼠模型并对其关节炎指数进行评估，将成功诱发关节炎的30只雄性SD大鼠随机分为模型组、甘草附子汤低（4 g/kg）、中（8 g/kg）和高（16 g/kg）剂量组及甲氨蝶呤（1 mg/kg）组，每组6只，连续给药30 d。测定大鼠的体重、关节炎指数和足爪肿胀指数；X线影像学观察骨质破坏和软组织厚度改变；HE染色观察脾脏和关节组织病理学改变；番红O-固绿染色观察关节软骨改变；TUNEL染色观察关节内细胞焦亡发生情况；Western blot测定TLR4、caspase-1、NLRP3和GSDMD蛋白表达；real-time PCR和ELISA测定IL-1β、IL-6和IL-10细胞因子表达。结果：与模型组相比，GCFZD治疗显著改善CIA大鼠软组织肿胀和骨质破坏，降低脾脏和胸腺指数；HE染色结果显示，GCFZD治疗减轻CIA大鼠脾脏和踝关节组织病理学改变；番红O-固绿染色结果...     

T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3对宫颈癌细胞生物学行为及肿瘤免疫微环境的影响

目的：探讨T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim-3)对宫颈癌体内外生长进展及免疫微环境的影响。方法：免疫组化染色和qRT-PCR检测宫颈癌组织及癌旁组织中Tim-3表达；将HeLa细胞随机分对照组、NC shRNA组（转染阴性对照NC shRNA慢病毒质粒）、Tim-3 shRNA组（转染Tim-3 shRNA慢病毒质粒），qRT-PCR和Western blot检测转染效果，CCK-8检测细胞增殖活性，EdU染色检测细胞增殖，Transwell检测细胞迁移与侵袭；注射转染Tim-3 shRNA或NC shRNA慢病毒质粒的HeLa细胞构建移植瘤裸鼠模型，定时测量肿瘤体积，21 d后抽取腹主动脉血，称量瘤体质量，HE染色、TUNEL染色和免疫组化染色检测肿瘤组织生长，ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-12表达，流式细胞术检测肿瘤浸润性免疫细胞亚群变化。结果：宫颈癌组织Tim-3表达较癌旁组织显著升高（P<0.01）；转染成功获得Tim-3低表达的HeLa细胞，与对照组比较，Tim-3 shRNA组HeLa细胞增殖活性下降（P<0.01）,EdU标记阳...     

骨桥蛋白在大鼠肝缺血/再灌注损伤中的作用

目的 研究大鼠肝缺血/再灌注损伤(HI/RI)过程中骨桥蛋白(OPN)的作用。方法 将大鼠分为假手术组(sham)和缺血/再灌注(I/R) 6、12和24 h组，每组6只。苏木精-伊红染色(HE染色)观察肝组织的形态学变化；比色法检测大鼠血浆中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平及肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量；RT-qPCR测定肝组织OPN mRNA表达；ELISA测定肝组织OPN含量。结果 与sham组相比，HE染色提示I/R后肝细胞有明显的变性和坏死，以I/R 24 h组最为明显；血浆中AST和ALT水平增高，I/R 12 h时最显著(P<0.01);肝组织中MDA含量升高、SOD活力降低，I/R 24 h最显著(P<0.01);肝组织OPN mRNA表达量在I/R各组均有显著升高(P<0.01),OPN含量在I/R 24 h组显著增加(P<0.05)。结论 OPN参与了大鼠HI/RI的发生，它可能是评价肝脏损伤的重要指标。     

肠道杯状细胞蓝染与苏木精pH值的关系

正常规HE制片工作中,病理工作者使用相同的试剂及染色程序,但肠道杯状细胞胞质着色较重,而其他组织染色正常。肠道杯状细胞是由肠黏膜基底干细胞分化而来,形似高脚杯,内含黏液颗粒,HE染色通常呈淡蓝色或空泡状。由于肠道杯状细胞核质对比减弱,影响制片质量,严重时需要重新制片、更换苏木精试剂来达到满意的染色效果。然而,重新制片及更换新试剂会增大工作量及成本,还会造成组织损耗。