IL-31在哮喘小鼠中的动态表达及对肺泡上皮细胞表达CCL11和CCL22的影响

目的通过观察IL-31在OVA诱导小鼠哮喘模型中的动态表达及IL-31对肺泡上皮细胞表达趋化因子CCL11和CCL22的影响,探讨IL-31在哮喘气道炎症中的作用。方法常规OVA法建立小鼠哮喘模型,于末次激发后取肺组织HE染色及AB-PAS染色,收集支气管肺泡灌洗液(BALF)进行白细胞和嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测血浆中IgE、IL-4、IFN-γ、IL-31水平,荧光定量PCR检测肺组织IL-31R mRNA表达水平,同时体外培养小鼠肺泡上皮细胞,用IL-31处理24 h后检测CCL11和CCL22 mRNA的表达水平。结果成功构建哮喘小鼠模型,哮喘小鼠BALF中白细胞总数、嗜酸性粒细胞百分比和血浆中IgE水平明显增多。哮喘小鼠肺组织病理切片见中性粒细胞、EOS浸润。哮喘小鼠血浆中Th2类细胞因子IL-4水平明显高于对照组,Th1类细胞因子IFN-γ明显低于对照组。哮喘小鼠血浆IL-31水平和肺组织IL-31R mRNA表达水平明显增高,第2周至第8周虽略有降低但仍明显高于对照组。IL-31作用小鼠肺泡上皮细胞24h后,趋化因子CCL11、CCL22mRNA表达增高。结论IL-31通过刺激趋化因子表达募集炎性细胞,促进气道炎症的发生发展。     

乳胶致小鼠气道炎症的研究

目的：以乳胶为致敏原，建立具有哮喘主要特征的小鼠模型，研究乳胶与气道炎症之间的关系。方法：乳胶腹腔注射与滴鼻诱发BALB／C小鼠气道炎症，在激发后2，4小时行支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数分类、肺组织病理检查、血清总IgE及乳胶特异性IgE(sIgE)测定并检测IL-5、IFN-γ的表达。结果：乳胶诱发后，实验组小鼠BALF中细胞总数及嗜酸粒细胞百分比升高；肺组织病理切片示支气管上皮增生、脱落，粘液腺分泌现象，支气管痉挛、收缩，炎症细胞浸润；血清总IgE及乳胶sIgE水平升高；BALF及肺组织局部IFN-γ减少，IL-5增高。结论：用乳胶蛋白作为致敏原，采用腹腔致敏与多次滴鼻激发可使BALB/C小鼠发生气道炎症，具有与变应原诱导的人类哮喘迟发反应相一致的主要特征：气道变应性炎症；外周血IgE浓度升高；肺组织中Th2型CK表达占优势。     

大蒜素抑制TGF-β1/SMAD2通路减轻哮喘小鼠气道炎症并调节气道重塑

目的探究大蒜素对支气管哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的作用机制。方法随机选取健康雌性BALB/c小鼠,分对照组、哮喘模型组和大蒜素处理组,每组8只。采用卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型,取小鼠支气管肺泡灌洗液进行炎细胞计数,HE染色观察肺组织病理学变化、 Masson染色观察肺气道重塑情况,免疫组织化学染色法检测肺组织α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,ELISA检测小鼠血清白细胞介素4(IL-4)、γ干扰素(IFN-γ)的水平,Western blot法检测小鼠肺组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和SMAD家族成员2(SMAD2)、 SMAD7的表达水平。结果与哮喘模型组比,大蒜素能显著抑制哮喘小鼠肺泡灌洗液中炎性细胞数量的增加并减轻炎性细胞的浸润、平滑肌增生及胶原蛋白沉积。同时,大蒜素能降低血清中IL-4的水平,升高IFN-γ的水平,抑制肺组织中TGF-β1、 SMAD2、α-SMA蛋白表达,增加SMAD7蛋白表达。结论大蒜素可通过抑制TGF-β1/SMAD2通路减轻哮喘小鼠气道炎症并调节气道重塑。     

抗小鼠TLR2胞外段单表位抗体TSP-2对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘气道炎症的影响

目的观察抗小鼠TLR2胞外段单表位（mTLR2ECD）抗体（TSP-2）对OVA诱导的小鼠过敏性哮喘气道炎症的影响。方法用肺泡灌洗、组织切片及特异染色、免疫组化、ELISA法检测TSP-2对小鼠哮喘模型的气道炎症和炎症细胞的浸润以及肺组织中肺泡及支气管结构的影响。结果发现静脉给予抗体TSP-2能有效抑制气道炎症和炎症细胞的浸润。主要表现在肺泡灌洗液中的白细胞浸润减少、减轻血清中OVA特异性IgE抗体的降低以及抑制OVA诱导的小鼠肺泡毛细血管充血水肿等病理变化。结论抗体TSP-2对过敏性哮喘的病理变化有一定的抑制作用。     

不同剂量脂多糖预处理对哮喘小鼠肺部炎症的影响的研究

目的:研究不同剂量脂多糖(LPS)通过诱导肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达, 探讨其对哮喘小鼠肺部炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A, 低剂量LPS处理组(0.1 mg/L LPS OVA)B, 高剂量LPS处理组(100 mg/L LPS OVA)C, 对照组(生理盐水)D.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量, 实时荧光定量PCR法测定AM的TLR4的表达, 光镜观察肺组织病理变化.结果:与A组相比较, B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P＜0.05), 而IFN-γ差异无统计学意义(P＞0.05), C组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著降低, IFN-γ显著增高(P＜0.05);与A组相比, B组与C组AM的TLR4mRNA表达均明显增高(P＜0.05), 两组间差异无统计学意义;光镜下, A组支气管黏膜下水肿, 黏液腺增生, 可见大量以嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润.B组与C组上述情况未见减轻, 并出现肺泡腔及间质充血, 中性粒细胞等大量的炎症细胞浸润, D组管腔内无黏液栓, 气道周围无炎症细胞浸润, 肺泡壁结构完整.结论:低剂量LPS(0.1 mg/L)诱导哮喘小鼠AM的TLR4高表达, 使肺部炎症加重, 而高剂量LPS(100 mg/L)可能会减轻变态反应症状.     

OVA-Fc融合基因疫苗对哮喘小鼠的疗效观察

目的探讨OVA-Fc融合基因疫苗治疗哮喘小鼠气道炎症和气道高反应性的效果。方法分别将制备的OVA-Fc-pcDNA3．1质粒、OVA-pcDNA3．1质粒、pcDNA3．1质粒，皮下免疫Balb／c哮喘小鼠模型，40d后，观察肺组织的病理变化，并检测肺泡灌洗液中细胞总数及嗜酸粒细胞计数，细胞因子的含量以及血清中OVA特异的IgE抗体的水平。结果OVA-Fc-pcDNA3．1基因修饰的DNA疫苗免疫小鼠后，能有效抑制哮喘小鼠肺组织的炎细胞浸润，肺泡灌洗液中细胞总数明显下降（P〈0．05），嗜酸性粒细胞的总数明显下降（P〈0．05），肺泡灌洗液中IL-10、INF-Y的分泌增加（P〈0．05），血清中OVA特异的IgE抗体能有效的得以控制（P〈0．05）。结论OVA-Fc-pcDNA3．1基因修饰的DNA疫苗可较OVA变应原基因更强的特异性地抑制哮喘小鼠的气道炎症，有望对哮喘的治疗具有重要的价值。     

雾化吸入干扰素γ阻断GATA-3表达防治哮喘的实验研究

目的 研究雾化吸入IFN-γ对支气管哮喘（哮喘）防治作用及其机制。方法 以Balb/c小鼠采用卵蛋白（OVA）、氢氧化铝建立哮喘模型（C组），于23d至30d雾化吸入IFN-γ 12μg 1次/d，31d时取肺泡灌洗液（BALF）测定细胞成分，白细胞介素4（IL-4）、白细胞介素5（IL-5）浓度，取血测定血浆IgE水平，观察肺组织病理学变化及GATA-3的表达。设正常对照组（A组）和哮喘模型PBS处理组（B组）。每组小鼠12只。结果 ①C组BALF中的嗜酸性粒细胞（EOS）数量明显低于B组（P〈0．01）；②C组BALF中的IL-4和IL-5的水平明显低于B组（P〈0．01）；③C组血浆中总IgE和OVA特异性IgE水平显著低于B组（P〈0．01）；④B组支气管平滑肌肥厚，黏膜充血、水肿，黏膜层增厚，并有EOS为主的炎性细胞浸润，管腔内可见黏液栓，支气管壁周围有EOS为主的炎症细胞浸润，而C组小鼠的上述炎症性改变则明显减轻；⑤免疫组化显示B组肺组织中GATA-3的表达明显增加，而C组GATA-3的表达明显减少。结论 雾化吸入IFN-γ可抑制哮喘鼠IL4、IL5的合成，抑制气道炎症，抑制EOS在气道内的炎性浸润及降低血浆总LgE和OVA特异性LgE水平，其机制可能与IFN-γ阻断GATA-3的表达，从而继发抑制Th2型反应有关。     

HDM通过肺泡巨噬细胞TLR4诱导哮喘小鼠气道炎症的机制研究

目的:研究HDM通过肺泡巨噬细胞(AM)Toll样受体4(TLR4)的高表达及诱导AM的活化,探讨其对哮喘小鼠气道炎症的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为哮喘模型组(OVA)A,HDM处理组(HDM+OVA)B,对照组(生理盐水)C.用卵白蛋白(OVA)致敏与激发建立小鼠哮喘模型;HE染色观察小鼠气道及肺组织病理变化;光学显微镜下观察小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞分类及计数;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测小鼠BALF上清中IL-4、IL-5、IL-13和IFN-γ的含量,实时定量PCR法测定AM的TLR4的表达,流式细胞技术(FCM)检测AM的CD80、CD86的表达.结果:与A组相比,B组BALF上清中IL-4、IL-5和IL-13的水平显著增高(P<0.05),而IFN-γ差异无统计学意义(P>0.05),与A组相比,AM的TLR4mRNA表达明显增高(P<0.05),CD80的表达差异无统计学意义,CD86的表达水平显著增高,差异有统计学意义(P<0.05).结论:HDM通过AM的TLR4的高表达诱导AM的活化,加重哮喘的气道炎症.     

IL-27对哮喘小鼠气道炎症的影响

目的研究IL-27对卵白蛋白(OVA)激发哮喘小鼠气道炎症的影响。方法 24只雌性BALB/c小鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及IL-27组,每组8只。应用OVA建立哮喘模型,IL-27组小鼠应用1μgIL-27(溶于50μlPBS中)滴鼻给药,观察3组小鼠肺组织病理改变,计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中嗜酸性粒细胞;ELISA法测定小鼠BALF中IL-4和IFN-γ浓度,RT-PCR测定肺组织T-bet mRNA的表达量。结果 IL-27组小鼠肺组织炎症反应明显轻于哮喘组小鼠;IL-27组小鼠BALF中嗜酸性粒细胞计数为(2.21±0.33)×107/L明显低于哮喘组的(12.82±2.17)×107/L(P0.01);IL-27组小鼠BALF中IL-4浓度为(20.4±3.2)μg/L,明显低于哮喘组的(61.3±13.1)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠BALF中IFN-γ浓度为(50.3±6.3)μg/L,明显高于哮喘组的(11.1±3.3)μg/L(P0.05);IL-27组小鼠肺组织T-bet mRNA表达量(吸光度积分比值)为(0.268±0.048),明显高于哮喘组的(0.130±0.012)(P0.05)。结论 IL-27可能通过增强T-bet mRNA的表达增强Th1反应,减少BALF中嗜酸性粒细胞数量,进而减轻了哮喘小鼠肺组织炎症反应。     

哮喘小鼠肺组织中转录因子RORγt的表达与气道炎症的关系

目的:探讨Th17细胞转录因子RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织中的表达及其与哮喘气道炎症的关系.方法:采用卵清蛋白(OVA)致敏方法建立支气管哮喘小鼠模型;BALB/c小鼠30只随机分为对照组、哮喘组、地塞米松治疗组各10只.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)、血清中白细胞介素17(IL-17)水平;HE染色评价各组小鼠气道炎症情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测肺组织IL-17、RORγt mRNA表达水平;免疫印记(Western blot)方法检测肺组织RORγt蛋白表达水平.结果:哮喘组小鼠肺组织RORγt mRNA、蛋白水平及IL-17水平均明显高于对照组和地塞米松治疗组(P＜0.05),RORγt蛋白表达量与嗜酸性粒细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、BALF、外周血中IL-17含量、肺组织IL-17 mRNA表达量均呈正相关关系(r＝0.789、0.795、0.902、0.669、0.806、0.883,P值均＜0.01).结论:RORγt在支气管哮喘小鼠肺组织呈高表达,其表达水平与气道炎症密切相关,参与了哮喘气道炎症的发生过程.