骨髓间充质干细胞下调类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞TLR8及TLR9的表达

背景：间充质干细胞能够缓解类风湿性关节炎小鼠的症状,但是其机制还不清楚。 目的：观察骨髓间充质干细胞对类风湿性关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9等的影响。 方法：DBA/1J小鼠随机分3组,非造模组不造模,阳性对照组和实验组制备Ⅱ型胶原诱导的小鼠类风湿性关节炎模型。实验组尾静脉注射移植大鼠骨髓间充质干细胞。 结果与结论：与阳性对照组比较,实验组小鼠关节直径明显减小,关节炎症细胞浸润程度明显降低,但比非造模组略高;小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8、TLR9和白细胞介素1β的水平较阳性对照组明显降低(P < 0.01或P < 0.05);阳性对照组与实验组中TLR8与TLR9的表达均无明显相关性(P > 0.05)。说明骨髓间充质干细胞下调了类风湿关节炎小鼠脾脏单个核细胞表达TLR8及TLR9的水平,但TLR8与TLR9的表达无相关性。     

IL-1β通过诱导TLR4表达增强协同LPS刺激引起的狼疮小鼠B细胞的功能异常

目的:探索IL-1β对SLE模型小鼠脾脏B细胞功能的影响。方法:磁珠分选纯化正常小鼠及SLE模型小鼠脾脏B细胞。用不同浓度的IL-1β或LPS联合IL-1β处理分选的B细胞后,CCK8检测B细胞增殖情况,流式细胞仪检测B细胞的活化及TLR4的表达,实时定量PCR方法分析细胞因子的表达。结果:获得的B细胞纯度高达95%。IL-1β不影响正常小鼠和SLE小鼠脾脏B细胞的增殖,也不影响共刺激分子CD80和CD86的表达。但IL-1β可上调SLE小鼠B细胞中CD40、CD69、IL-6及IL-10的表达。进一步,IL-1β与LPS协同可增强SLE小鼠B细胞的CD40及CD69表达。IL-1β还可上调SLE小鼠B细胞中TLR4的表达。结论:IL-1β可能通过诱导TLR4表达来增强LPS刺激引起的SLE小鼠的B细胞功能异常,提示控制感染和抑制炎症可能达到减缓SLE病程的目的。     

Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎模型IL-25表达水平的变化及意义

目的以Ⅱ型胶原诱导的DBA/1小鼠关节炎模型为研究对象,动态观察其IL-25的表达水平,探讨IL-25与关节炎发生发展的关系及其可能的机制,为寻找新的类风湿性关节炎免疫干预新途径积累实验数据。方法采用RT-PCR法扩增目的基因,构建mIL-25标准质粒,QRT-PCR检测模型鼠脾脏及其关节病变局部IL-25的表达水平;应用ELISA技术检测模型鼠血清和脾细胞培养上清IL-25蛋白的含量。结果在Ⅱ型胶原诱导的小鼠关节炎的发病过程中,模型鼠脾细胞和关节滑膜组织IL-25的mRNA表达水平、均呈持续上升趋势,与对照小鼠相比差异显著(P<0.05)。这种IL-25蛋白和转录水平的表达,随着关节炎症程度的增加而升高。此外,模型鼠脾细胞对ConA的刺激表现出强IL-25表达性应答。结论 IL-25的表达水平与Ⅱ型胶原诱导的关节炎的发生发展密切相关。     

苦参碱对oxLDL诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制研究

目的:探讨苦参碱对氧化型低密度脂蛋白(ox LDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制。方法:ox LDL处理人主动脉血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型。CCK-8实验分析细胞活力和增殖。实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10和IL-13的mRNA水平。流式细胞术分析细胞凋亡。蛋白印迹检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA),细胞凋亡标记蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关蛋白X(Bax),信号转导及转录激活子3(STAT3)和信号转导及转录激活子5(STAT5)的表达。结果:与对照组相比,造模组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA水平大大提高,抗炎因子IL-10和IL-13的mRNA水平则显著降低(P0.01)。与造模组相比,模型加药组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA水平显著降低,抗炎因子IL-10和IL-13的mRNA水平明显升高(P0.05)。造模组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显高于对照组,模型加药组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显低于造模组(P0.05)。与对照组相比,造模组Ki-67、PCNA和Bax的表达显著升高,Bcl-2显著降低(P0.01)。与造模组相比,模型加药组Ki-67、PCNA和Bax的表达明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.05)。造模组p-STAT3和p-STAT5相对蛋白表达量显著高于对照组(P0.01)。模型加药组p-STAT3和p-STAT5相对蛋白表达量明显低于造模组(P0.05)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib组Ki-67、PCNA和Bax的表达明显减少,Bcl-2表达明显增多(P0.05);模型加药+Ruxolitinib组Ki-67、PCNA和Bax的表达显著减少,Bcl-2表达显著增多(P0.01)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib组及模型加药+Ruxolitinib组IL-1β和TNF-α的mRNA水平都明显降低,IL-10和IL-13的mRNA水平都明显升高(P0.05)。结论:苦参碱可通过抑制JAK/STAT3通路的活化起到抗炎和抑制血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用。     

TLR8在小鼠DC2.4细胞中的表达及其作用

目的探讨应用CL075和Poly(dT)后,TLR8及其相关细胞因子IL-12、IL-10在小鼠DC2.4细胞中的表达情况。方法常规培养DC2.4细胞,光学显微镜观察未刺激组、Poly(dT)刺激组、CL075和Poly(dT)共同刺激组细胞的形态变化;Real-timePCR测定TLR8、IL-12、IL-10的mRNA表达;ELISA测定IL-12、IL-10的蛋白表达;Western blot测定TLR8的蛋白表达。结果未刺激及Poly(dT)刺激组细胞较幼稚,树突较短且少。CL075和Poly(dT)刺激组细胞活化,树突增多且伸长;Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12、IL-10的mRNA及蛋白表达量与阴性对照组相比均无统计学意义。CL075和Poly(dT)刺激组DC2.4细胞中TLR8、IL-12的mRNA及蛋白表达量较阴性对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而IL-10的mRNA及蛋白表达量则明显低于阴性对照组(P<0.01或P<0.05)。结论应用CL075和Poly(dT)后,TLR8、IL-12在小鼠DC2.4细胞中的表达水平明显升高,而IL-10的表达水平则明显降低。     

天抗(TK)对脂多糖诱导小鼠炎症模型的抗炎作用及其机制

目的研究天抗(TK)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠炎症模型的抗炎作用及机制研究。方法将42只昆明小鼠随机分为正常对照(NC)组、模型对照(LPS)组、地塞米松(DXM)组、天抗低(TK-L)、中(TK-M)和高(TK-H)剂量组(0.2,0.8和3.2 g/kg)。各组分别灌胃给药7 d后,腹腔注射30 mg/kg的LPS诱导小鼠急性炎性模型,6 h后处死小鼠,检测小鼠脾脏指数,ELISA测定小鼠血清中IL-1β、IL-6和TNF-α的表达水平;生化法检测小鼠血清中SOD和MDA的表达;qRT-PCR检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p65、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA的表达水平;Western blot检测小鼠脾脏TLR4、MyD88、TRAF6、p-p65和p65蛋白表达水平。结果与LPS组相比,TK组小鼠的脾脏指数明显降低,血清和脾脏组织中IL-1β、IL-6、TNF-α和MDA水平显著下降,SOD水平明显升高,小鼠脾脏组织的TLR4、MyD88、TRAF6和p-p65等蛋白及mRNA表达水平均明显降低。结论天抗对LPS诱导的小鼠急性炎症模型具有抗炎作用,其作用机制可能是通过TLR4/MyD88/NF-κB(p-65)信号通路抑制炎症因子的释放。     

苦参碱对oxLDL 诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制研究

目的:探讨苦参碱对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管平滑肌细胞炎症反应及增殖凋亡的影响及分子机制。方法:oxLDL 处理人主动脉血管平滑肌细胞建立动脉粥样硬化模型。CCK-8 实验分析细胞活力和增殖。实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-10 和IL-13 的mRNA 水平。流式细胞术分析细胞凋亡。蛋白印迹检测增殖标记蛋白细胞增殖核抗原-67(Ki-67)和增殖细胞核抗原(PCNA),细胞凋亡标记蛋白B 细胞淋巴瘤-2(Bcl-2) 和Bcl-2 相关蛋白X(Bax),信号转导及转录激活子3(STAT3)和信号转导及转录激活子5(STAT5)的表达。结果:与对照组相比,造模组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA 水平大大提高,抗炎因子IL-10 和IL-13 mRNA 水平则显著降低(P<0.01)。与造模组相比,模型加药组促炎因子IL-1β和TNF-α的mRNA 水平显著降低,抗炎因子IL-10 和IL-13 的mRNA 水平明显升高(P<0.05)。造模组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显高于对照组,模型加药组细胞增殖倍数和细胞凋亡率明显低于造模组(P<0.05)。与对照组相比,造模组Ki-67、PCNA 和Bax 的表达显著升高,Bcl-2 显著降低(P<0.01)。与造模组相比,模型加药组Ki-67、PCNA 和Bax 的表达明显减少,Bcl-2 表达明显增多(P<0.05)。造模组p-STAT3 和p-STAT5 相对蛋白表达量显著高于对照组(P<0.01)。模型加药组p-STAT3 和p-STAT5 相对蛋白表达量明显低于造模组(P<0.05)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib 组Ki-67、PCNA 和Bax 的表达明显减少,Bcl-2 表达明显增多(P<0.05);模型加药+Ruxolitinib 组Ki-67、PCNA 和Bax 的表达显著减少,Bcl-2 表达显著增多(P <0.01)。与造模组相比,模型加药组和模型+Ruxolitinib 组及模型加药+Ruxolitinib 组IL-1β和TNF-α的mRNA 水平都明显降低,IL-10 和IL-13 的mRNA 水平都明显升高(P<0.05)。结论:苦参碱可通过抑制JAK/ STAT3 通路的活化起到抗炎和抑制血管平滑肌细胞增殖和凋亡的作用。     

肝X受体激动剂诱导获得的小鼠耐受性树突状细胞与天然耐受性树突状细胞的比较

目的 通过与天然耐受性树突状细胞(N-tDCs)比较来探讨肝X受体(LXR)激动剂诱导获得的小鼠耐受性树突状细胞T-tDCs的免疫耐受特性.方法 获取小鼠骨髓来源单个核细胞,以白细胞介素(IL)-4和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)辅以LXR激动剂(T0901317)诱导7d后,检测细胞表型、进行混合淋巴细胞反应、调节性T细胞(Tregs)体外诱导实验等;或继续以脂多糖(LPS)诱导其成熟,进行表型分析.利用BALB/c DO11.10 RAG-/-小鼠来源的CD4+T细胞进行Tregs诱导实验,并与磁珠阴性分选从小鼠脾脏获得CD4+ DCs (N-tDCs)进行对照研究.结果 与N-tDCs比较,T0901317诱导7d时的T-tDCs形态更接近普通DCs,CD80、CD86、MHC-Ⅱ类分子表达略低,但均为中低表达,CCR7表达水平相近.N-tDCs具有更强的抑制能力,当特异性抗原鸡卵清白蛋白(OVA)存在时,N-tDCs可以更强地诱导Tregs的生成,而T-tDCs可以分泌更高水平的IL-10.结论 T-tDCs与N-tDCs以不同的方式发挥免疫抑制作用.     

核因子-κB诱骗剂局部应用对胶原诱导性关节炎大鼠治疗作用的研究

探讨核因子-κB诱骗剂(NF-κB decoy)局部应用对Ⅱ型胶原诱导关节炎(CIA)大鼠的治疗作用及其对滑膜基质金属蛋白酶-3(MMP-3)、IL-17、TGF-β表达的影响。建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,用NF-κB诱骗剂注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、CIA模型组和实验组。42d后观察各组关节炎指数、病理指标,采用ELISA法检测各组大鼠关节液中IL-17、IL-12和TGF-β的水平,免疫组织化学方法检测关节组织MMP-3、TGF-β和IL-17表达。与对照组比较,CIA模型组大鼠关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显升高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的积分光密度(IOD)值明显增加;实验组经NF-κB诱骗剂注射后,与CIA模型组比较,关节炎指数、关节液中IL-17、IL-12水平均明显降低,而TGF-β的含量显著增高,滑膜组织MMP-3、IL-17阳性表达的IOD值明显降低,TGF-β阳性表达的IOD值显著增高。NF-κB诱骗明显减轻CIA大鼠的关节炎症状,延缓关节破坏的进展,对CIA有较好的治疗作用。     

MMP-2、9在TRAP+单个核和多核细胞的表达及其在关节软骨损伤中的作用

目的:观察在胶原诱导的C57BL/6小鼠类风湿性关节炎(CIA)模型中,基质金属蛋白酶-2、9在耐酒石酸盐酸性磷酸酶(TRAP)阳性的单个核及多核细胞中的表达及其在关节软骨损伤中的作用。方法:注射鸡II型胶原免疫C57BL/6小鼠建立CIA模型。在CIA小鼠滑膜及滑膜软骨交界处,用酶组织化学及免疫组化染色分别检测TRAP 细胞的数量及细胞质内MMP的表达与软骨损伤的关系。结果:酶组织化学法检测表明TRAP 单个核及多核细胞增多的数量与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.903,P<0.01)。免疫组化染色显示TRAP 细胞胞质内有MMP-2、9的表达,且表达的增多与CIA小鼠软骨的破坏程度呈正相关(rs=0.954,P<0.01)。结论:在CIA小鼠病变关节增生的滑膜组织及浸润到软骨表面的滑膜组织中的TRAP 单个核及多核细胞可表达MMP-2、9,表达的增多与软骨的破坏呈正相关,这些细胞在关节软骨的损伤中起到重要的作用。     

宿主的遗传背景对呼吸道感染沙眼衣原体后Treg产生的影响

目的 探讨宿主的遗传背景对呼吸道感染沙眼衣原体后调节性T细胞(Treg)产生的影响.方法 对衣原体感染具有明显易感性差异的C57 BL/6(C57)和C3H/HeN(C3H)小鼠鼻腔吸入1×103 IFU沙眼衣原体小鼠肺炎菌株(Chlamydia muridarum,Cm),于感染后不同天数处死小鼠.利用细胞内细胞因子染色技术检测小鼠脾脏单个核细胞CD4+ CD25+T细胞、Foxp3+ CD4+ CD25+T细胞百分率,利用RT-PCR技术检测小鼠肺组织Treg细胞分泌的相关细胞因子IL-10和IL-2的mRNA表达水平,并比较Cm呼吸道感染不同时期C57和C3H小鼠Treg免疫应答水平的差异.结果 Cm感染在两组小鼠均诱导较高水平的CD4+ CD25+T细胞、Foxp3+ CD4+ CD25+T细胞产生及IL-10、IL-2mRNA表达.感染后第3天和第7天,高易感性的C3H小鼠脾脏CD4+ CD25+T细胞、Foxp3+ CD4+CD25+T细胞扩增水平,以及肺组织细胞因子IL-2 mRNA的表达水平均高于C57小鼠,感染后第14天,C3H小鼠IL-10 mRNA表达水平明显高于C57小鼠.结论 衣原体呼吸道感染在高易感性的C3H小鼠诱导高水平的Treg的增殖及Treg相关细胞因子IL-10、IL-2的表达,从而对衣原体特异的Th1免疫应答抑制作用增强,在小鼠衣原体呼吸道感染易感性差异中发挥重要作用.     

甲氨蝶呤对胶原诱导的关节炎小鼠Tfh细胞的影响及其机制研究

目的：研究甲氨蝶呤对胶原诱导关节炎（CIA）小鼠Tfh细胞的影响,初步探讨其治疗RA的可能免疫机制。方法：建立CIA小鼠关节炎模型,随机分为对照组、模型组、甲氨蝶呤组和布洛芬组。采用免疫组化方法检测脾脏中CXCR5+ Tfh细胞的含量;流式细胞术检测脾脏中Tfh细胞的数量及表型;ELISA法检测血清中IL-21和IL-6水平;RT-PCR法检测滑脾脏中转录因子Bcl-6和IL-21的相对表达量。结果：与模型组相比,甲氨蝶呤组及布洛芬组小鼠关节的肿胀程度减轻,AI评分降低(P<0.05);脾脏中Tfh细胞数量、转录因子IL-21相对表达量及血清中IL-21和IL-6水平显著减少(P<0.05)。结论：甲氨蝶呤可能通过调节转录因子IL-21、血清细胞因子IL-21和IL-6表达水平,调节Tfh的数量及表型和分布,从而影响RA的转归。     

B7-1抗体阻断B7/CD28信号通路对Pristane肾病的治疗作用

目的:探讨B7-1抗体阻断B7-1/CD28信号通路对小鼠Pristane肾病的治疗作用。方法:将8周龄雌性C57BL/J6小鼠随机分为3组,正常对照组予生理盐水0.5ml/只,造模组与治疗组予Pristane0.5ml/只后,分别予鼠同型IgG抗体(造模组)或鼠抗人B7-1抗体(治疗组)200μg/只,第10天分别检测局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞的活化及脾脏B细胞表面活化分子的变化;每月定期检测血清中抗核抗体(ANA)及尿蛋白,七个月后处死动物HE染色观测肾脏病理变化和冰冻切片直接免疫荧光法观察免疫复合物(IC)的沉积情况。结果:第10天,相对于正常对照组、治疗组和造模组小鼠局部淋巴结和脾脏中吞噬细胞、树突状细胞均有不同程度的活化,治疗组活化程度明显低于造模组(P0.05),脾脏B细胞表面CD21、CD40、CD86等分子上调程度低于造模组(P0.05);4个月后治疗组和造模组小鼠血清均检测到ANA,但治疗组的血清抗体滴度较造模组低(P0.05);治疗组7个月后,尿蛋白含量低于造模组,肾脏HE结果显示治疗组小鼠肾脏病理改变轻于造模组,直接免疫荧光检测可见治疗组免疫复合物荧光强度弱于造模组,正常对照组小鼠肾脏没有明显的病理改变。结论:鼠抗人B7-1抗体对Pristane肾病具有一定的治疗效果。     

Graves病小鼠模型发病中调节性B细胞的表达变化

目的:观察Graves病(GD)小鼠模型脾脏调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)及相关细胞因子表达量的变化,探讨Bregs在GD发生、发展中的免疫调节作用。方法:将6周龄BALB/c雌性小鼠随机分为对照组(肌注空载腺病毒)、GD组(肌注TSHR-A亚单位-腺病毒建立GD小鼠模型)。每3周免疫1次,第3次免疫3周后处死。留取小鼠血清,化学发光法检测FT4水平,细胞培养生物学方法检测TSAb活性。取甲状腺,制备石蜡切片行HE染色。取脾脏,部分制成单个核细胞悬液,行三标记免疫荧光染色、流式细胞分析CD1dhiCD5+CD19+Bregs比例;部分脾脏提取总RNA,实时定量RT-PCR检测Bregs相关细胞因子白细胞介素10(IL-10)mRNA和转化生长因子-β(TGF-β)mRNA的表达水平。结果:发生GD的小鼠甲状腺滤泡细胞增生肥大,且血清FT4及TSAb水平升高。小鼠血清TSAb与FT4水平呈显著正相关(r=0.90,P<0.01);TSHR-A亚单位-腺病毒免疫组发生GD的小鼠脾脏CD19+B细胞较对照组明显升高(P<0.05),B细胞中CD1dhiCD5+CD19+Bregs所占比例和脾组织IL-10 mRNA、TGF-βmRNA表达量较对照组明显降低(P<0.05);且血清TSAb活性与CD1dhiCD5+CD19+Bregs占脾脏B细胞比例、脾组织IL-10 mRNA、TGF-βmRNA表达量均呈显著负相关(P<0.05)。结论:TSHR-A亚单位-腺病毒免疫建立的GD模型中Bregs表达存在缺陷,提示Bregs表达可能在GD的发生及发展中发挥免疫调节作用,且GD疾病严重程度可能与Bregs缺乏程度有关。     

基于TLR4 / NF-κB 信号通路探讨通痹胶囊对胶原诱导型关节炎治疗机制的研究

目的:基于TLR4/NF-κB信号通路研究通痹胶囊对胶原诱导型关节炎(CIA)的治疗机制。方法:48只SD大鼠随机分为对照组、模型组、雷公藤组(0. 01 g/kg)和通痹胶囊低(0. 075 g/kg)、中(0. 150 g/kg)、高(0. 300 g/kg)剂量组,每组8只;使用牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂(CFA)建立大鼠CIA模型;采用HE染色观察滑膜组织病理情况,ELISA检测大鼠血清中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,Western blot检测滑膜组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)和核因子κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:与正常大鼠相比,模型大鼠关节肿胀度均显著升高,通痹胶囊治疗后关节肿胀度显著降低,模型组滑膜组织增生明显,炎症细胞浸润,关节软骨破坏,通痹胶囊治疗明显改善滑膜组织的增生,降低炎症细胞的浸润;模型组大鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白水平显著升高,通痹胶囊处理后显著降低血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达;与通痹胶囊高剂量组相比,TLR4激动剂处理显著提高血清中IL-1β、IL-6、TNF-α水平和滑膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达。结论:通痹胶囊可以通过抑制TLR4/NF-κB信号通路,降低炎性反应,显著改善CIA症状。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。     

白细胞介素-8mRNA与反复自然流产的相关性

目的:探讨反复自然流产患者绒毛、蜕膜和外周血单个核细胞白细胞介素-8(IL-8) mRNA 的表达与反复自然流产的相关性.方法:采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术,检测 30 例反复自然流产患者(病例组)和 30 例正常妊娠妇女(对照组)绒毛、蜕膜及外周血单个核细胞内 IL-8 mRNA 表达水平的相对含量(%).结果:在绒毛组织中,病例组 IL-8mRNA 的表达明显高于对照组;在蜕膜组织中,病例组 IL-8 mRNA 的相对含量为(68.57±4.73)%,对照组的为0;在外周血单个核细胞中,病例组 IL-8 mRNA 的表达高于对照组.结论:病例组绒毛、蜕膜组织及外周血单个核细胞中 IL-8 mRNA 表达水平显著升高,提示 IL-8 可能与反复自然流产相关.     

注射用免疫核糖核酸Ⅱ的免疫调节及对顺铂的增效减毒作用

目的探讨注射用免疫核糖核酸Ⅱ(BP素)对顺铂(DDP)的增效减毒作用及对S180荷瘤小鼠的免疫调节作用。方法建立小鼠S180皮下移植瘤模型,随机分组,采用腹腔注射给药,连续给药10 d,通过白细胞(WBC)计数、骨髓有核细胞计数,取肿瘤、胸腺、脾脏称重,计算抑瘤率、胸腺指数、脾脏指数以及MTT法检测刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾脏T淋巴细胞增殖,观察BP素对顺铂的增效减毒作用。通过ELISA法检测血清中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平,通过腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率的测定评价BP素对S180荷瘤小鼠的免疫调节作用。结果 BP素与DDP联合应用可显著提高DDP对S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用(P0.01),明显改善DDP化疗所致的脾脏指数下降,外周血WBC数、骨髓有核细胞数的减少及脾脏T淋巴细胞增殖抑制等毒副作用(P0.01或P0.05);单用BP素可显著降低荷瘤小鼠血清中的IL-1β、IL-6、TNF-α水平(P0.01或P0.05),提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率(P0.01)。结论 BP素对DDP具有增效减毒作用,并对S180荷瘤小鼠具有免疫调节作用。     

急性轮状病毒腹泻小儿单个核细胞Toll样受体的变化

目的研究轮状病毒腹泻小儿单个核细胞Toll样受体的变化。方法收集3岁以下因急性轮状病毒腹泻来复旦大学附属儿科医院就诊的小儿75例,以荧光定量RT-PCR方法检测外周血单个核细胞TLR2,3、4、7、8 mRNA的表达情况。结果起病时间在3d以内的小儿外周血单个核细胞中TLR2、3、4、7、8 mRNA的表达水平都有明显升高,P均<0.05。其中TLR2、3、8 mRNA表达在发病7d和14d时仍高于对照组,P均<0.05。TLR4 mRNA的表达在病情较重的患儿比较轻的患儿高,P<0.05。结论多种TLR参与了轮状病毒引发的宿主免疫应答反应的启动和调节。     

肝再生增强因子对大鼠脾单个核细胞增殖及IL-2产生能力的影响

目的：通过体外实验探讨rALR对脾脏单个核细胞是否具有直接的免疫调控作用和作用特点。方法：以3H-TdR掺入法检测脾脏单个核细胞在不同处理情况下的增殖状况：①不同剂量的rALR与5μg/ml ConA同时加入；②5μg/ml ConA预刺激脾脏单个核细胞10和32小时后，再加入30μg/ml rALR；③30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时，再加5μg/ml ConA刺激。以环孢霉素A作为阳性对照，以转空质粒的酵母表达上清提取物作为阴性对照。以放免法检测培养上清中IL-2分泌情况。结果：不同剂量的rALR与ConA同时加入时，能以剂量依赖方式明显抑制ConA对脾脏单个核细胞的促增殖作用。ConA预刺激脾脏单个核细胞10、32小时后，再给予30μg/ml rALR仍可明显抑制脾脏单个核细胞的增殖，但用30μg/ml rALR预处理脾脏单个核细胞至30小时，并不影响脾脏单个核细胞对ConA刺激的反应能力。ConA＋rALR（30μg/ml）组的IL-2分泌在24小时明显低于ConA组。结论：rALR对ConA活化的脾脏单个核细胞增殖有明显的抑制作用，而对未活化的脾脏单个核细胞则无明显影响，提示未经抗原激活的免疫细胞可能不表达ALR受体。