人参皂甙Rg1、肉桂酸与丹参酮IIA组合对体外人成骨肉瘤MG 63细胞形态结构和终末分化指标的影响

目的 研究中药有效成分人参皂甙Rg1、肉桂酸和丹参酮IIA 组合（RCT）对人成骨肉瘤MG-63细胞的形态与超微结构改变和终末分化的影响,鉴定其对人成骨肉瘤细胞终末分化的诱导作用。 方法 以中药有效成分组合（33mg/L 人参皂甙Rg1+2mmol/L 肉桂酸＋0.3mg/L 丹参酮IIA）处理MG-63细胞7d,对照组与处理组样本各3次重复,免疫细胞化学检测及光镜与电镜观察系统研究RCT组合对MG-63细胞的细胞生物学效应。环六亚甲基双乙酰胺（HMBA）处理MG-63细胞作为分化诱导效果的阳性对照。 结果 免疫细胞化学检测显示,成骨肉瘤细胞终末分化指标Ⅰ型胶原、骨黏素、骨钙蛋白的表达呈强阳性,并观察到钙化糖原颗粒增多与典型骨结节的形成;光镜与电镜观察结果显示,处理后的MG-63细胞产生了细胞形态规则,大小一致,细胞铺展体积增大,核质比例减小,核内核仁数目减少,细胞器丰富发达等趋向正常细胞特征的显著改变。 结论 RCT 组合能显著改变 MG-63细胞形态与超微结构恶性特征,并促进终末分化标志物的表达,从而对人成骨肉瘤MG-63细胞的终末分化具有显著诱导作用。     

人参皂甙Rg1组合对人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中核基质构型与蛋白质组成的影响

目的 研究中药有效成分人参皂甙Rgl、肉桂酸CINN及丹参酮TanⅡ A的组合(简称RCT),诱导人成骨肉瘤MG-63细胞分化过程中,细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.方法 应用流式细胞仪检测细胞周期变化,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法绘制细胞生长曲线,以选择性抽提整装光镜与电镜技术及蛋白质组学技术分析观察处理前后MG-63细胞核基质构型与蛋白质组成的变化.结果 生长曲线显示,RCT处理后MG-63细胞的增殖受到明显抑制,增殖抑制率在第7天达到72.37%,细胞周期出现明显的G0/G1期阻滞.MG-63细胞核基质为典型的肿瘤细胞恶性表型,在RCT处理后发生了向正常细胞转变的恢复性变化.RCT处理后的细胞中多种核基质功能蛋白的表达发生了变化.结论 RCT能显著抑制体外培养MG-63细胞的增殖活动,将细胞周期阻滞于G0/G1期,诱导核基质构型发生了显著的恢复性变化,并改变核基质蛋白的组成,对MG-63细胞具有显著的分化诱导作用.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导caspase-8依赖的骨肉瘤细胞凋亡机制研究

目的：探讨蛋白酶体抑制剂Z-LLL-CHO(MG132)对人骨肉瘤细胞MG-63的作用以及可能作用机制。方法:将不同浓度的MG132作用于骨肉瘤细胞MG-63，采用显微镜观察形态改变、电镜观察细胞超微结构、MTT检测细胞增殖活力、琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡、流式细胞仪分析细胞凋亡率以及细胞周期改变、RT-PCR检测基因转录、Western blotting检测蛋白表达水平。 结果:MG132能有效诱导人骨肉瘤细胞系MG-63细胞周期在G₂-M期的停滞，并引起MG-63的凋亡，出现凋亡的典型形态学改变，同时出现p27kip1蛋白的积累，caspase-8活化蛋白表达增加，Bax∶Bcl-2蛋白含量比例的增高，而对正常的人二倍体成纤维细胞，MG132并未表现诱导其凋亡的活性。结论:MG132引起的人骨肉瘤细胞MG-63的凋亡也许是与caspase-8、p27kip1和Bcl-2蛋白相关的。     

反义c-myc对增强顺铂引起骨肉瘤细胞凋亡作用的实验研究

目的：通过反义基因治疗降低人骨肉瘤MG-63细胞c-myc的表达，并探讨顺铂对c-myc低表达的人骨肉瘤MG-63细胞凋亡作用的影响。 方法： 以腺病毒为载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），并在体外转染骨肉瘤MG-63细胞，降低MG-63细胞c-myc的表达，与不同浓度的顺铂作用后，采用MTT、蛋白免疫印迹（Western blot）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测顺铂对骨肉瘤MG-63细胞体外增殖抑制、凋亡相关基因的表达和凋亡作用。 结果： 构建的Ad-Asc-myc体外转染MG-63细胞48 h后，可明显降低c-Myc蛋白表达，并与浓度为2.0 mg/L的顺铂作用2 h后 ，对MG-63细胞的体外增殖抑制率可达38.0%；转染的细胞Bcl-2表达降低，Bax表达增加，而E2F-1的表达无变化；FCM、电镜等显示Ad-Asc-myc转染后可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂对骨肉瘤细胞的凋亡作用。 结论： 降低c-myc表达能诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡并增加顺铂对MG-63细胞的促凋亡作用。     

反义c-myc寡核苷酸诱导骨肉瘤细胞MG-63凋亡的实验研究

目的： 研究反义c-myc寡核苷酸诱导人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的作用。方法： 设计反义c-myc寡核苷酸片段,转染入人骨肉瘤MG-63细胞，通过MTT法、流式细胞仪、HE染色及透射电镜方法，观察和分析其对人骨肉瘤MG-63细胞作用的效果。结果： MTT法示反义c-myc寡核苷酸可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖，10.0 μmol/L、作用48 h效果最明显；流式细胞仪检测证实反义c-myc寡核苷酸（终浓度10.0 μmol/L）诱导瘤细胞的凋亡率达37.92%，出现明显的凋亡峰，并可抑制c-myc基因蛋白的表达；细胞呈典型凋亡特征。结论： 反义c-myc寡核苷酸能有效诱导人骨肉瘤MG-63细胞的凋亡。     

人参皂甙Rg3在体外对白血病K562细胞增殖和诱导分化的影响**

背景：文献报道人参皂甙Rg3具有抗肿瘤作用,但对白血病作用研究很少。 目的：观察人参皂甙Rg3对白血病K562细胞的作用,并探讨其相关机制。 方法：以白血病K562细胞为靶细胞,实验分为对照组和人参皂甙Rg3组,人参皂甙Rg3组分别添加10,20,40,80,       100 mg/L Rg3。 结果与结论：MTT检测结果显示,不同浓度人参皂甙Rg3组K562细胞生长抑制率均显著高于对照组(P < 0.05~0.01)。NBT结果显示,人参皂甙Rg3组培养1,2,3 d K562细胞还原率均高于对照组(P < 0.01);人参皂甙Rg3组部分K562细胞体积变小,核仁消失,同时阳性细胞增多,细胞向成熟分化;流式细胞仪检测显示人参皂甙Rg3组培养2 d细胞周期G2期增高了3.84倍。提示人参皂甙Rg3在体外可抑制K562细胞增殖活性,其机制可能与人参皂甙Rg3将K562细胞周期阻滞在G2期,使细胞不能进行正常的有丝分裂,从而抑制细胞增殖有关。      

中国鲎素和正丁酸钠对人胃腺癌BGC-823细胞形态与超微结构的影响

目的以正丁酸钠为平行对照,比较观察鲎素和癌细胞诱导分化物对人胃癌细胞形态与超微结构变化的影响.方法采用光镜、扫描电镜与透射电镜,观察经2.0 mg/L鲎素、2.0 mmol/L正丁酸钠和1.0 mg/L鲎素＋1.0 mmoL/L正丁酸钠组合处理的人胃腺癌BGC-823细胞.结果光镜观察显示,鲎素和正丁酸钠以及鲎素＋正丁酸钠处理的BGC-823细胞形态均较为一致,细胞体积增大、趋于扁平铺展状态,细胞核质比例减小,细胞核形状较圆整,核仁数量减少.扫描与透射电镜观察可见经鲎素、正丁酸钠及其组合处理的BGC-823细胞均出现细胞表面微绒毛稀少,细胞边缘丝状伪足减少,片状伪足增多;细胞核形态较规则,核内异染色质减少,常染色质增多：细胞质内线粒体增多,结构较为一致,高尔基复合体呈较为典型发达状态,并出现粗面内质网增多和多聚核糖体减少等变化.结论鲎素具有与正丁酸钠等诱导分化物相似的改变人胃癌细胞形态与超微结构恶性表型特征的作用,和与诱导分化物协同加成的诱导分化效果.     

左旋含羞草碱诱导骨肉瘤细胞凋亡作用及机制的体外实验研究

目的体外实验研究左旋含羞草碱诱导骨肉瘤细胞的凋亡作用,并初步探讨其中的分子机制。方法体外培养骨肉瘤细胞系MG-63及U2-OS,给予0 M,100 M,200 M和400 M的左旋含羞草碱处理,同时在400 M的左旋含羞草碱中加入100 mg/m L柠檬酸铁胺(FAC)处理。CCK-8法检测骨肉瘤细胞系增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Hoechst染色法检测细胞核固缩比例,蛋白印迹检测左旋含羞草碱及FAC处理后骨肉瘤细胞DNA损伤修复相关蛋白表达。结果 CCK-8法检测细胞增殖,当左旋含羞草碱浓度为400 M时,MG-63及U2-OS的细胞抑制率可分别达到81.1%±1.6%和76.7%±2.1%;流式细胞术检测发现左旋含羞草碱处理48 h后,MG-63及U2-OS的细胞凋亡率分别为54.1%±12.6%和46.2%±14.7%;Hoechst染色法显示,MG-63及U2-OS的细胞核固缩比例分别为53.8%±10.6%和49.2%±8.3%,而加入FAC后,则可以减弱左旋含羞草碱对骨肉瘤细胞的增殖抑制及诱导凋亡的作用;同时,蛋白印迹检测表明DNA损伤修复的关键蛋白表达水平在左旋含羞草碱及FAC处理后均发生显著改变。结论左旋含羞草碱可以有效抑制骨肉瘤细胞增殖并诱导骨肉瘤细胞凋亡,其分子机制与左旋含羞草碱的铁螯合作用有关。     

PI3K抑制剂TGX-221对人骨肉瘤细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探究PI3K抑制剂TGX-221对人骨肉瘤细胞增殖、周期及凋亡的影响。方法培养人骨肉瘤U2OS和MG-63细胞株,分为对照组和实验组,实验组加入10μmol/L的TGX-221,对照组加入相同剂量的DMSO。处理48 h后,CCK8法检测TGX-221对人骨肉瘤细胞活力及增殖的影响;流式细胞术检测TGX-221对人骨肉瘤U2OS和MG-63细胞的细胞周期及凋亡的作用。结果CCK8检测结果显示,TGX-221对人骨肉瘤细胞有显著的增殖抑制作用,且具有时间和浓度依赖性;流式细胞术结果显示,TGX-221将U2OS和MG-63细胞周期阻滞在G1期,并诱导人骨肉瘤细胞凋亡,具有显著的抗肿瘤作用。结论PI3K抑制剂TGX-221能够抑制人骨肉瘤细胞的增殖、阻滞细胞周期并诱导细胞凋亡,可能成为一种潜在的抗肿瘤药物。     

Prohibitin在姜黄素诱导人成骨肉瘤MG-63细胞凋亡过程中的调控机制

目的 探讨姜黄素（curcumin）诱导成骨肉瘤细胞凋亡前后,Prohibitin（PHB）蛋白的定位与表达变化,及PHB与凋亡相关基因产物的共定位关系。
方法 选择性抽提经姜黄素诱导处理前后的人成骨肉瘤MG-63细胞核基质蛋白,以蛋白质组学、免疫印迹法和激光扫描共焦显微技术对PHB在核基质中存在、分布及其与凋亡相关基因产物在MG-63细胞中的共定位关系进行了研究。结果 双向凝胶电泳、质谱鉴定和免疫印迹法结果显示,PHB存在于MG-63细胞核基质蛋白组分中,细胞凋亡后在细胞核基质蛋白中表达下调。免疫荧光显微镜观察显示,PHB定位于MG-63细胞核基质纤维上,经姜黄素处理后出现分布位置与表达水平的变化。激光扫描共焦显微镜观察结果显示,PHB在MG-63细胞凋亡过程中与Bax、Bcl-2、Fas、P53、c-Myc和Rb等基因产物具有共定位关系,且共定位区域发生了变化。 结论 PHB是一种核基质结合蛋白;PHB在MG-63细胞凋亡过程中的表达与分布变化,及其与细胞凋亡相关基因的共定位关系,对MG-63细胞凋亡具有重要影响。     

白藜芦醇通过促进Apaf-1/caspase-9复合物的形成增强5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133~+细胞亚群凋亡的诱导

目的:探讨白藜芦醇联合化疗药物5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133~+细胞亚群的协同杀伤效应及机制。方法:将人骨肉瘤细胞系MG-63 CD133~+细胞亚群及相应CD133~-细胞亚群用5-氟尿嘧啶及白藜芦醇进行体外处理。MG-63细胞的相对细胞活力用MTT法进行检测;细胞凋亡率用流式细胞术进行检测;用Western blot实验检测caspase-9和caspase-3的活化、Apaf-1的表达水平及细胞色素C的释放;用免疫共沉淀法检测Apaf-1与caspase-9前体的相互作用。结果:5-氟尿嘧啶对MG-63 CD133~+细胞亚群的杀伤活性和凋亡诱导活性均显著低于MG-63 CD133~-细胞亚群。但联用白藜芦醇能显著提高5-氟尿嘧啶对MG-63 CD133~+细胞亚群的细胞活力抑制率。白藜芦醇处理能显著上调MG-63 CD133~+细胞亚群中Apaf-1的表达水平,在MG-63 CD133~+细胞亚群中转染Apaf-1siRNA后,5-氟尿嘧啶联用白藜芦醇的协同效应受到显著抑制。另外,免疫共沉淀实验结果表明白藜芦醇联合5-氟尿嘧啶能显著诱导MG-63 CD133~+细胞亚群中Apaf-1/caspase-9复合物的形成,从而诱导caspase-9发生活化。结论:白藜芦醇通过促进Apaf-1/caspase-9复合物的形成,增强5-氟尿嘧啶对骨肉瘤CD133~+细胞亚群凋亡的诱导。     

腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究

目的： 构建重组反义c-myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。方法: 应用基因重组技术，将约750 bp的人c-myc cDNA反向克隆到腺病毒载体，构建表达反义c-myc的重组腺病毒（Ad-Asc-myc），与咖啡因、顺铂单独或联合体外作用于人骨肉瘤MG-63细胞，采用蛋白免疫印迹（Western blotting）、MTT、流式细胞仪（FCM）、透射电镜等检测c-Myc蛋白、bcl-2、bax、E₂F-1等基因表达、瘤细胞体外增殖抑制、凋亡及细胞周期，分析Ad-Asc-Myc、咖啡因对人骨肉瘤MG-63细胞顺铂化疗的影响。结果: 成功构建Ad-Asc-myc，滴度可达2×10¹²pfu/L，体外转染MG-63细胞48 h后，可降低c-Myc蛋白表达，并抑制其体外增殖；Ad-Asc-myc、2.0 mol/L咖啡因分别与浓度为2.0、5.0 mg/L顺铂共同作用后 ，可增加顺铂对MG-63细胞的体外增殖抑制率；Ad-Asc-myc联合2.0 mol/L咖啡因能明显加强顺铂的体外抗肿瘤作用，凋亡相关基因bcl-2基因表达下降，bax表达上升，而E2F-1表达无明显变化；FCM检测显示Ad-Asc-myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋亡，并增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；单独咖啡因不能诱导瘤细胞凋亡，但能增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；Ad-Asc-myc联合2.0 mol/L咖啡因能明显加强顺铂诱导瘤细胞凋亡作用。细胞周期分析显示顺铂作用后瘤细胞出现S期阻滞，而咖啡因则能逆转这种阻滞；Ad-Asc-myc转染的骨肉瘤细胞出现G₂/M期阻滞。结论: 腺病毒介导反义c-myc联合咖啡因能明显增强顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞的诱导凋亡及化疗作用。     

HIF-3α在骨肉瘤组织中的表达及低氧状态对MG-63细胞侵袭能力的影响

目的 探讨HIF-3α在骨肉瘤侵袭转移中的作用,观察低氧对骨肉瘤MG-63细胞侵袭能力的影响。方法 收集15例骨肉瘤组织和15例骨软骨瘤组织,用免疫组织化学染色方法检测骨肉瘤组织和骨软骨瘤组织中HIF-3α的表达情况;MG-63细胞低氧刺激,用定量RT-PCR和Western Blot方法检测MG-63细胞中HIF-3α的表达情况;用细胞黏附实验、细胞迁移实验及细胞侵袭实验检测MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。在MG-63细胞中,敲降HIF-3α或过表达HIF-3α后,检测低氧对细胞的黏附、迁移及侵袭能力的影响。结果 免疫组化结果显示骨肉瘤组织中HIF-3α高表达而骨软骨瘤组织中HIF-3α低表达。与常氧条件相比,低氧促进MG-63细胞中HIF-3α mRNA和HIF-3α蛋白的表达,低氧增强MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。MG-63细胞中HIF-3α的敲降减弱了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力而HIF-3α的过表达增强了MG-63细胞的黏附、迁移及侵袭能力。结论 低氧促进了MG-63细胞中的HIF-3α的表达,增强了MG-63细胞的侵袭转移能力,HIF-3α在低氧诱导的MG-63细胞侵袭转移中具有重要作用。     

成人关节软骨细胞增殖与人参皂甙Rg1的促进作用

背景：人参总皂甙的主要有效成分为人参皂甙Rg1,有促进细胞增殖、抗衰老、抗细胞凋亡、抗炎及抗自由基等作用,但以往实验对象多为鼠、兔等动物的关节软骨细胞。 目的：体外培养成人软骨细胞,观察人参皂甙Rg1对体外培养的成人关节软骨细胞增殖的促进作用。 方法：实验分2组,Rg1组使用含质量浓度为40 mg/L人参皂甙Rg1的DMEM培养液培养,对照组使用未加人参皂甙的DMEM培养液培养,每日应用倒置相差显微镜观察细胞生长情况至第7天,并进行细胞计数。同时培养至第6天检测软骨细胞中Ⅱ型胶原的表达。 结果与结论：对照组自培养第2天起细胞进入对数增殖期,到第7天细胞数约为接种时的8倍。Rg1组自培养第2天起细胞增殖能力较对照组增强(P < 0.05),到第7天细胞数约为接种时的18倍(P < 0.05)。免疫组织化学SABC法检测结果显示,Rg1组与对照组细胞胞浆均可见Ⅱ型胶原表达,两组差异无显著性意义(P > 0.05)。说明人参皂甙Rg1可促进成人软骨细胞的增殖。     

白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响

目的探讨白杨素对人骨肉瘤细胞MG-63增殖与凋亡的影响及可能机制。方法采用不同浓度白杨素(0,2.5,5,10,20,40 mg/L)作用于MG-63细胞后,MTT法和流式细胞仪分别检测白杨素对细胞增殖与凋亡的影响。蛋白免疫印迹检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin蛋白表达的影响。Real-time PCR方法检测白杨素(20 mg/L)对骨肉瘤细胞Bax mRNA、Bcl-2 mRNA、Caspase-3 mRNA、Survivin mRNA表达水平的影响。结果白杨素抑制MG-63细胞增殖、促进MG-63细胞凋亡,并呈浓度依赖性。经20 mg/L白杨素处理后,MG-63细胞Bax与Caspase-3蛋白与mRNA表达水平显著升高,而Bcl-2与Survivin蛋白与mRNA表达水平显著降低。结论白杨素在体外抑制MG-63细胞增殖,促进MG-63细胞凋亡,与调控凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3、Survivin的表达相关。     

人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞生成的影响

目的探讨人参皂甙Rg3[20(R)-Ginsenoside Rg3]对淋巴管内皮细胞迁移、增殖能力及凋亡的影响。方法用含不同浓度人参皂苷Rg3的培养液培养Hela细胞,收集培养上清并制备条件培养液(CM);取健康猪的胸导管内皮细胞进行分离、培养;Ⅷ因子、VEGFR-3抗体联合对淋巴管内皮细胞进行鉴定;通过划线刮除法和MTT法观察人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞的迁移和增殖能力的影响;Hoechst33258荧光染色检测淋巴管内皮细胞凋亡。结果第Ⅷ因子和VEGFR-3抗体对培养的淋巴管细胞进行联合鉴定,为典型淋巴管内皮细胞;应用划线刮除法和MTT法对对照组与实验组进行比较显示:不同浓度的人参皂甙Rg3能够明显抑制淋巴管内皮细胞的增殖和游走,差异有统计学意义(P<0.01);Hoechst33258证实,经人参皂甙Rg3条件培养液处理后淋巴管内皮细胞,可观察到其核周围有凋亡小体。结论人参皂甙Rg3对淋巴管内皮细胞的迁移和增殖能力有明显的抑制作用,并且有剂量依赖性;人参皂甙Rg3能够诱导淋巴管细胞凋亡。     

蝎毒多肽对人骨肉瘤细胞株MG-63活性的影响

目的探讨蝎毒多肽对人骨肉瘤MG-63细胞增殖凋亡的影响。方法利用0、4、8、12μg/mL浓度蝎毒多肽处理MG-63细胞12、24、48 h,CCK-8法检测细胞活性、镜下观察细胞形态变化、吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡,8μg/mL蝎毒多肽处理MG-63细胞24、48 h,Hoechst-33258荧光染色观察细胞核染色质形态。结果 4、8、12μg/mL的蝎毒多肽可抑制MG-63细胞活性,抑制其增殖,呈剂量-时间依赖性。8μg/mL处理24 h细胞存活率为0.5506±0.0502,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.01)。吖啶橙荧光染色,细胞染色质浓缩,细胞核碎裂成点状,被染成大小不一、致密浓染的绿色颗粒,随着浓度增大、时间延长,坏死细胞逐渐增多。呈现凋亡核碎裂典型变化,随剂量增加更趋明显。呈剂量依赖性抑制其增殖能力。Hoechst-33258染色观察可见凋亡细胞染色质呈固缩或碎裂状染色质,染色质着色不均,核形态各异。随作用时间增加而更趋明显。结论蝎毒多肽可以抑制骨肉瘤细胞活性,抑制其体外增殖,诱导其发生凋亡,该作用呈剂量依赖和时间依赖。     

辣椒素诱导人骨肉瘤细胞MG-63发生免疫原性细胞死亡

目的探讨辣椒素与顺铂能否抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖并诱导其免疫原性死亡(ICD)。方法 MTT检测细胞的增殖;线粒体膜电位分析细胞凋亡;流式细胞计量术检测细胞膜上钙网蛋白(CRT)表达量;荧光素酶法检测细胞外ATP的释放;ELISA检测细胞上清中高迁移率族蛋白1(HMGB1)的分泌。结果辣椒素及顺铂作用均能抑制细胞MG-63增殖(P0.01),且呈剂量依赖性;辣椒素和顺铂均可诱导MG-63细胞凋亡(P0.01),但只有辣椒素能诱导MG-63细胞内质网中CRT转移到细胞膜表面,且促进ATP及HMGB1的释放(P0.01)。结论辣椒素可诱导人骨肉瘤细胞凋亡及免疫原性死亡。     

腺病毒载体介导的ING4基因对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用

目的:用人源化改造的鼠肿瘤生长抑制因子(mING4)基因构建的腺病毒表达载体(Ad-ING4)研究对MG-63人骨肉瘤细胞的抑制作用.方法:以pcDNA3.0-mING-4重组质粒为模板,通过基因定点突变技术对mING4基因进行人源化改造,采用腺病毒载体的基因重组和体外包装技术获得表达与人ING-4氨基酸序列相同的重组腺病毒子(Ad-ING4),感染MG-63细胞,用荧光显微镜、RT-PCR法检测ING4在MG-63细胞中的转录和表达;MTT法和流式细胞技术检测ING4基因表达对MG-63细胞的生长抑制和凋亡效应;荧光共聚焦显微镜观察MG-63细胞凋亡的形态学变化;半定量RT-PCR法检测ING4基因表达对MG-63细胞巾的Bax、Bcl-2基闪表达的影响.结果:基因测序和PCR分析结果显示,人源化改造的小鼠ING4分子氨基酸序列与人ING4分子完全相同,成功构建了Ad-ING4腺病毒表达载体,在MG-63细胞中ING4基因的表达对MG-63细胞增殖有明显抑制作用,并可诱导细胞凋亡,出现典型细胞凋亡形态学变化,ING4基因表达可通过上调细胞中Bax和下调Bcl-2基因表达诱导细胞凋亡.结论:转染ING4基因可明显抑制MG-63人骨肉瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡,该现象可能是通过改变Bax,Bcl-2表达水平来发挥抗肿瘤作用的.     

大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构变化

背景：目前对骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构观察的报道甚少。 目的：采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导并染色鉴定,利用电镜观察诱导前后细胞超微结构变化特点。 方法：全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标记物,成骨染色鉴定向成骨方向诱导分化,扫描电镜及透射电镜观察成骨诱导前后细胞超微结构变化。 结果与结论：培养的第3代骨髓间充质干细胞纯度高、活力强,成骨诱导后的碱性磷酸酶活性染色、钙化结节染色均呈阳性。扫描电镜及透射电镜观察显示,经向成骨细胞诱导分化后,细胞形态铺展,不规则,其线粒体、粗面内质网、空泡明显增多,表明细胞功能活跃。