小分子化合物E-039抑制胃癌细胞迁移侵袭及其分子机制

目的研究小分子化合物E-039对人胃癌细胞增殖、迁移侵袭的影响及其分子机制。方法用MTT检测不同浓度小分子化合物E-039对胃癌细胞BGC823和MKN-45增殖能力的影响。分别用0、20、40、60μmol/L浓度的E-039处理BGC823和MKN-45两种胃癌细胞,应用Transwell小室检测其对上述细胞迁移侵袭能力的抑制作用,Western Blot检测化合物对金属基质蛋白酶2(MMP2)表达及丝切蛋白(Cofilin)磷酸化水平的影响。结果化合物E-039对于BGC823和MKN-45两种胃癌细胞的增殖能力无明显影响,却能够以剂量依赖的方式抑制BGC823及MKN-45细胞的迁移和侵袭。Western Blot结果显示E-039下调胃癌细胞BGC823中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平。结论化合物E-039能够通过下调胃癌细胞中MMP2的表达及Cofilin的磷酸化水平,抑制胃癌细胞BGC823、MKN-45的迁移和侵袭。     

核转运蛋白α2(KPNA2)通过激活Snail 1信号通路促进胃癌细胞增殖和侵袭及迁移

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)在胃癌细胞中的表达、生物学作用及机制。方法采用基因表达谱相互作用分析(GEPIA)数据库分析胃癌患者肿瘤组织中KPNA2蛋白相对表达量。将KPNA2短发夹RNA转入至高表达KPNA2的MKN45胃癌细胞,将KPNA2质粒转入至MKN45胃癌细胞,在敲低和过表达KPNA2细胞中,采用CCK-8法检测细胞增殖, Transwell~(TM)小室实验、创伤愈合实验检测细胞侵袭和迁移;实时定量PCR检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)、 CD133、 CD44、性别决定区Y框蛋白2(SOX2)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、 MMP9的mRNA水平, Western blot法检测KPNA2、 cyclinD1、 PCNA、 CD133、 CD44、 SOX2及Snail 1蛋白水平。结果 KPNA2在胃癌组织高表达,过表达KPNA2能够促进MKN45胃癌细胞增殖、侵袭和迁移。同时促进胃癌细胞的cyclin D1、 PCNA、 CD133、 CD44、 SOX2、 E-cadherin、 N-cadherin、 vimentin、 MMP2、 MMP9以及Snail 1的表达。结论KPNA2通过刺激上皮间质转化促进胃癌细胞的侵袭和迁移。     

KISS-1及MMP-9基因在胃癌侵袭转移中的作用及相关性

目的探讨肿瘤转移抑制基因KISS-1在胃癌侵袭、转移中的作用及其与MMP-9表达的关系。方法采用Lipofectamine脂质体介导将pcDNA3.1-KISS-1真核表达质粒转染胃癌BGC-823细胞,经G418筛选,建立稳定高表达KISS-1蛋白的细胞系,通过RT-PCR和Western blotting法证实转染成功,并检测细胞中MMP-9蛋白及mRNA的表达情况;采用Transwell体外侵袭实验,探讨KISS-1对胃癌细胞株侵袭能力的影响。结果 Western blotting和RT-PCR结果显示:转基因组BGC-823细胞中KISS-1蛋白及mRNA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显增加(P均<0.05);转基因组BGC-823细胞中MMP-9蛋白及mR-NA的表达与转空质粒组和对照组相比均明显降低(P均<0.05);Transwell检测结果显示:转基因组BGC-823细胞的穿膜数与转空质粒和对照组相比均明显降低(P<0.05),侵袭力抑制率达到25%。结论 pcDNA3.1-KISS-1的有效转染可降低MMP-9的表达并对胃癌细胞BGC-823的侵袭能力具有抑制作用。KISS-1基因对胃癌侵袭转移的抑制作用可能是通过下调MMP-9的功能实现的。     

弗林蛋白酶抑制剂对乳腺癌细胞MCF-7迁移的影响

 目的：探讨乳腺癌转移的机制,为深入研究乳腺癌发生、发展机制提供理论基础。方法：不同浓度的弗林蛋白酶(furin)抑制剂处理人乳腺癌细胞MCF-7 48 h。细胞划痕实验（wound healing assay）和细胞趋化实验（Transwell assay）检测MCF-7细胞迁移和侵袭能力。Western blotting 检测细胞迁移相关蛋白膜型基质金属蛋白酶1（MT1-MMP）、血管内皮生长因子（VEGF）-C和VEGF-D水平。酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养液中基质金属蛋白酶(MMP)2和9水平。结果：与对照组相比,200 nmol/L的furin抑制剂α1-PDX即对细胞迁移及侵袭起显著抑制作用（均P<0.05）;细胞迁移相关的MT1-MMP、VEGF-C和VEGF-D表达水平均显著降低（P<0.05）;MCF-7细胞上清液中MMP2 和 MMP9的表达均显著降低（P<0.05）。结论：Furin抑制剂通过下调乳腺癌细胞MCF-7的MMPs及VEGFs表达抑制其迁移。     

胃泌素促进胃癌细胞的迁移和侵袭

 目的：研究胃泌素在胃癌细胞迁移和侵袭中的作用。方法：用细胞划痕实验、Transwell小室迁移和侵袭实验检测10 nmol/L和100 nmol/L胃泌素处理后胃癌细胞AGS和SGC-7901迁移和侵袭能力的变化, MTT法检测细胞增殖能力, ELISA法检测细胞上清液中基质金属蛋白酶2（MMP-2）的含量。结果：10 nmol/L和100 nmol/L胃泌素处理胃癌细胞后,细胞迁移和侵袭能力增强。对照组、10 nmol/L和100 nmol/L胃泌素组AGS细胞平均迁移数分别为56.0、88.1和106.4 /view,SGC-7901细胞平均迁移数分别为52.8、91.0和113.3 /view, AGS细胞平均侵袭数分别为78.4、118.7和141.6 /view,SGC-7901细胞平均侵袭数分别为87.3、124.6和147.4/view（均P<0.01）;100 nmol/L胃泌素组细胞迁移和侵袭能力均高于10 nmol/L组（P<0.05）;胃泌素处理后细胞的增殖率及MMP-2的分泌量也显著增加（P<0.05）。结论：胃泌素通过促进MMP-2的分泌以剂量依赖的方式增强胃癌细胞的迁移和侵袭能力,可能是体内胃癌细胞增殖、侵袭和转移的重要机制之一。     

基因沉默PRDX1 表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭迁移的影响

目的:探讨RNA 干扰过氧化还原酶1(Peroxiredoxin 1,PRDX1)表达对人结直肠癌SW480 细胞侵袭转移能力的影响。方法:筛选RNA 干扰PRDX1 的慢病毒质粒,与阴性对照慢病毒质粒分组转染结直肠癌SW480 细胞,转染后的SW480 细胞可分为PRDX1 基因沉默组(si-PRDX1)和阴性对照组(Vector)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和免疫印迹法(Western blot)分别检测两组细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白表达;采用Transwell 侵袭和迁移实验检测基因沉默PRDX1 表达对结直肠癌细胞侵袭及迁移能力的影响;通过Western blot 检测两组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)家族部分蛋白表达水平。结果:基因沉默PRDX1 表达可有效抑制结直肠癌SW480 细胞中PRDX1 mRNA 和蛋白水平的表达,与阴性对照组相比(Vector),差异均具有统计学意义(P<0.01),说明基因沉默PRDX1 的SW480 细胞系构建成功;Transwell 侵袭和迁移实验显示si-PRDX1组细胞的侵袭及迁移能力较对照组均明显降低(P<0.01);Western blot 结果显示,与Vector 组相比,si-PRDX1 组细胞中组织基质金属蛋白酶抑制剂2(TIMP-2)的表达明显增加,而MMP-2 及MMP-9 的表达显著下降,且差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论:基因沉默人结直肠癌SW480 细胞的PRDX1 表达可有效抑制细胞的侵袭、迁移及转移能力,其机制可能会通过调控TIMP-2、MMP-2 及MMP-9 的表达介导。     

SM22α对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响

目的:探究平滑肌22α蛋白(SM22α)对结直肠癌细胞侵袭和迁移能力的影响,并探讨其分子机制。方法:通过慢病毒转染人结直肠癌细胞HCTL16构建SM22α过表达细胞,应用细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力的变化;使用RT-qPCR检测细胞SM22αmRNA表达的改变;通过Western blot法检测细胞外信号调节激酶(ERK)、p-ERK、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和SM22α蛋白水平。结果:成功构建HCT116过表达SM22α细胞;SM22α过表达细胞的侵袭和迁移能力减弱(P0.05);SM22α过表达抑制p-ERK和MMP-9的蛋白水平(P0.05)。结论:SM22α通过抑制ERK/MMP-9信号通路调节结直肠癌细胞侵袭和迁移能力。     

不同组织微环境中人胃癌异种移植瘤侵袭性及基质金属蛋白酶谱表达的差异

目的 探讨组织微环境对癌细胞侵袭性影响机制中基质金属蛋白酶表达的意义。方法 取人胃腺癌组织移植于裸小鼠皮下,成瘤后进行皮下和腹腔内传代接种,形态学观察2处异种移植瘤侵袭性的不同并用免疫组织化学链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-7、MMP-9、MMP-13、TM1-MMP、TM2-MMP、TM3-MMP 7种MMPs在瘤组织中的表达。结果 人胃癌裸小鼠皮下异种移植瘤呈膨胀性生长,侵袭性不明显;除MMP-7外,其他6种MMPs在皮下移植瘤细胞及间质中均无表达。腹腔内移植瘤呈侵袭性生长、纤维间质增多,多种MMPs均在侵袭前沿的肿瘤细胞及间质中表达。同一瘤株来源的人胃癌细胞在裸小鼠不同组织环境中所呈现的侵袭性及MMPs表达差异均有显著性。结论 (1)肿瘤细胞与相邻的间质细胞之间存在相互诱导作用,组织环境对肿瘤侵袭表型可有决定性的影响。(2)MMPs的表达与肿瘤细胞生长方式及侵袭性有密切联系;肿瘤侵袭前沿的间质细胞产生的MMPs也可能参与肿瘤细胞的侵袭过程。     

丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响

目的:观察丙泊酚对人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力的影响。方法:用不同浓度(1、3、5和7 mg/L)的丙泊酚培养SGC-7901细胞24 h。MTT实验检测细胞活力,细胞侵袭实验和划痕愈合实验分别检测细胞侵袭和迁移能力;免疫细胞化学法和Western blot实验检测富半胱氨酸血管生成诱导因子61(CYR61)、CD44v6和基质金属蛋白酶7(MMP-7)3种蛋白的表达。结果:与对照组相比,5 mg/L丙泊酚对SGC-7901细胞的活力无明显影响,但显著抑制细胞的侵袭和迁移能力(P0.05),并抑制CD44v6和MMP-7的表达(P0.05)。结论:丙泊酚可抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭和迁移能力,抑制作用与CD44v6和MMP-7的表达降低相关。     

环氧合酶2抑制剂的抗胰腺癌作用及相关机制

目的探讨环氧合酶2(COX-2)抑制剂对胰腺癌细胞增殖、侵袭、迁移能力和对COX-2、基质金属蛋白酶(MMP)-14蛋白表达的影响以及可能的抗胰腺癌机制。方法不同浓度的COX-2抑制剂塞来昔布(20、60、100μmol/L)处理胰腺癌细胞后,用MTT比色法检测细胞的增殖能力;用Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞的侵袭能力和迁移能力;ELISA检测MMP-14和COX-2的蛋白表达情况。结果 MTT增殖实验、Transwell侵袭实验、划痕实验分别提示,COX-2抑制剂作用后胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力均以浓度梯度形式下降(P0.05);ELISA结果显示,胰腺癌细胞中COX-2和MMP-14的蛋白表达水平相应降低(P0.05),两者表达具有显著正相关性(r=0.873,P0.05)。结论 COX-2抑制剂可能通过抑制COX-2表达下调MMP-14表达,进而以浓度梯度形式减弱胰腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力,起到抗胰腺癌作用。     

不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞侵袭和转移能力的影响

目的: 探讨不同缺氧状态对人肝癌HepG2细胞黏附、侵袭和转移能力的影响及其可能机制。方法: 不同浓度的低氧处理对数生长期的人肝癌HepG2细胞,采用MTT法、Transwell膜侵袭系统、免疫细胞化学方法、明胶酶谱分析和反转录PCR检测变异型白细胞分化抗原CD44v6、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9、低氧诱导因子(HIF-1α)和血管内皮生长因子(VEGF)的表达差异。结果: HepG2细胞经低氧处理后,细胞的基质黏附率、穿透基底膜与游走迁移的细胞数均增高,以3%氧浓度最为显著(P<0.05);3%和5%氧处理还可显著促进CD44v6的表达,增加MMP-2和MMP-9的表达,并可上调HIF-1α和VEGF。结论: 适度缺氧能增强人肝癌细胞的黏附、侵袭和转移能力,其机制可能与CD44v6、基质金属蛋白酶、HIF-1α和VEGF的表达改变有关。     

PRSS2 regulates EMT and metastasis via MMP-9 in gastric cancer

Serine protease 2 (PRSS2) is upregulated in gastric cancer tissues, correlates with poor prognosis and promotes migration and invasion of gastric cancer cells. However, the exact mechanism by which PRSS2 promotes metastasis in gastric cancer is unclear. We examined serum PRSS2 levels in healthy controls and gastric cancer patients by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and analyzed the correlation between PRSS2 serum level with the clinicopathological characteristics of gastric cancer patients and matrix metalloproteinase-9 (MMP-9) expression. A lentiviral MMP-9 overexpression vector was constructed and used to transfect gastric cancer cells with stable silencing of PRSS2, and migration, invasion and epithelial-mesenchymal transition (EMT) of gastric cancer cells were examined. High serum PRSS2 levels were detected in gastric cancer patients and associated with lymphatic metastasis and TNM stage. Serum PRSS2 was positively correlated with serum MMP-9 level. PRSS2 silencing inhibited EMT, and knock-down of PRSS2 partially abrogated cell metastasis and EMT caused by overexpression of MMP-9. These results suggest that PRSS2 promotes the migration and invasion of gastric cancer cells through EMT induction by MMP-9. Our findings suggest that PRSS2 may be a potential early diagnostic marker and therapeutic target of gastric cancer.     

FEN1 siRNA对胃癌细胞生物学特性的影响及机制研究

目的 探讨瓣状核酸内切酶1(FEN1)小干扰RNA(FEN1 siRNA)对胃癌细胞生物学特性的影响及机制。方法 培养胃癌细胞SGC7901,转染FEN1 siRNA和阴性对照序列(siRNA control)分别命名为干扰组和NC组,同时以不做处理的胃癌细胞SGC7901作为对照组。采用实时荧光定量PCR和Western blot检测FEN1 siRNA的转染效果,细胞划痕实验检测胃癌细胞SGC7901迁移能力,Transwell小室检测胃癌细胞的侵袭能力,Western blot检测胃癌细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、β-连环蛋白(β-catenin)的蛋白相对表达水平。结果 干扰组细胞中FEN1 mRNA和蛋白水平明显低于对照组及NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01),而NC组细胞中FEN1 mRNA和蛋白水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。干扰组细胞迁移能力、侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白相对表达水平均明显低于对照组及NC组,差异均有统计学意义(P值均＜0.01);而NC组细胞迁移能力、侵袭能力及MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白相对表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P值均＞0.05)。结论 转染FEN1 siRNA能够抑制胃癌细胞中FEN1的表达,可抑制胃癌细胞的迁移能力、侵袭能力,其作用机制可能与抑制MMP-2、MMP-9、β-catenin蛋白的表达水平有关。     

氟伐他汀单用及与安体舒通联用对兔相关炎症因子及基质金属蛋白酶-9的影响

目的探讨他汀类药物单用及联用醛固酮拮抗剂安体舒通对兔颈动脉组织ICAM-1、VCAM-1及MMP-9表达的影响。方法高脂饲养兔建立动物模型。96只新西兰兔分为对照组、高脂饮食组、氟伐他汀处理组（氟伐他汀组）以及氟伐他汀与安体舒通联合处理组（联合处理组）,每组24只。用免疫组织化学法检测ICAM-1、VCAM-1、MMP-9表达量。结果氟伐他汀组和联合处理组ICAM-1、VCAM-1及MMP-9的表达随时间的增加而逐渐降低（P〈0.05）,且在治疗8周和12周时降低较为显著（P〈0.05）。结论随着高脂饲养时间的延长,动脉组织中ICAM-1、VCAM-1及MMP-9表达量增加;他汀类药物可降低ICAM-1、VCAM-1及MMP-9表达量,延缓动脉粥样硬化形成及易损组织产生,联合醛固酮拮抗剂时此作用增强。     

Secretory leukocyte protease inhibitor is associated with MMP-2 and MMP-9 to promote migration and invasion in SNU638 gastric cancer cells

Secretory leukocyte protease inhibitor (SLPI) protects tissue from proteases, and promotes cell proliferation and healing during inflammatory response. SLPI is also overexpressed in gastric, lung and ovarian cancers, which accelerates the metastasis of cancer cells. Matrix metalloproteinases-2, -9 (MMP-2 and MMP-9) are overexpressed in high metastatic cancers, and promote the migration of cancer cells through collagen degradation. SLPI and MMP-2, -9 are critical factors in stimulating the metastatic processes but there are no reports of a direct correlation between these molecules. Therefore, this study examined the role of SLPI related to MMP-2 and MMP-9 using two gastric cancer cell lines, such as characterized non-metastatic SNU484 and highly metastatic SNU638 cells. SLPI, MMP-2 and MMP-9 mRNA and protein expression were higher in SNU638 cells than in SNU484 cells. In addition, the rate of cell migration and invasion was higher in the SNU638 cells than in SNU484 cells. Interestingly, after treatment with SLPI, the rate of migration and invasion was higher in the SNU484 cells than in the positive control (PC) SNU484 cells. The rate of migration was also higher in the SNU638 cells after SLPI treatment than in the SNU638 cells (PC) but the invasion rate was not changed. The expression and secretion of MMP-2 and MMP-9 as well the rate of cell migration and invasion were significantly lower in SLPI-siRNA transfected SNU638 cells (si-SLPI/SNU638) but higher in SLPI-treated SNU484 cells (SNU484 + SLPI). Strong Elk-1 phosphorylation was detected in SNU484 + SLPI and SNU638 cells but was barely detectable in SNU484 and si-SLPI/SNU638 cells. These results show that SLPI promotes the metastasis of SNU638 gastric cancer cells by increasing MMP-2 and MMP-9 expression through Elk-1 signaling, indicating its role as a signaling molecule not a protease inhibitor.     

Prognostic significance of matrix metalloproteinase-2, cathepsin D, and tenascin-C expression in colorectal carcinoma

Matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) and cathepsin D (CD) play a significant role in degrading the components of basement membrane and extracellular matrix (ECM), whereas tenascin-C (TN-C) is a glycoprotein of the ECM related to cell adhesion and detachment. These proteins have been implicated in tumor invasion and metastasis. Therefore, we aimed at investigating the prognostic significance of MMP-2, CD, and TN-C expressions in primary colorectal cancer. Overall, 112 colorectal adenocarcinomas were included in the present study. MMP-2, CD, and TN-C expressions were evaluated by immunohistochemistry and correlated with clinicopathologic prognostic parameters and survival. Diffuse stromal TN-C immunostaining was found to be significantly correlated with advanced stage and shorter survival time (p = 0.002 and 0.02, respectively). MMP-2 expression was found to correlate with lymph vessel invasion (p = 0.006) and stage (p = 0.03). CD expression was related to depth of invasion (p = 0.005). No significant relationship was found between survival and MMP-2 and CD expression (p > 0.05). In multivariate analysis, stage and vascular invasion were independent prognostic factors, whereas TN-C did not retain a clear independent relationship to survival (p > 0.05). Our findings suggest that TN-C expression may be a potential prognostic marker in colorectal carcinoma. However, MMP-2 and CD do not appear to be significant indicators of survival.     

Raptor对胶质瘤细胞侵袭能力的影响

 目的：研究Raptor对于胶质瘤细胞侵袭能力的影响。方法：采用RNA干扰技术,向胶质瘤U87细胞转染Raptor限定性siRNA干扰质粒, Western blotting检测转染后细胞Raptor的表达水平以鉴定转染效果。体外侵袭实验检测Raptor表达降低后,U87细胞侵袭能力的变化;Western blotting检测细胞中ARK5的磷酸化情况和MMP-2、MMP-9的表达水平。免疫组织化学法检测低级别及高级别胶质瘤中Raptor的表达水平。结果：转染Raptor siRNA质粒的U87细胞命名为siRaptor/U87,转染对照组质粒的细胞命名为Scr/U87,转染成功的实验组细胞Raptor的表达降低。体外侵袭实验中siRaptor/U87较对照组穿透基质膜的细胞数少(P＜0.01)。Western blotting显示实验组细胞中磷酸化ARK5、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平均较对照组低。胶质瘤组织中Raptor的表达与恶化程度存在相关性（P＜0.01）。结论：Raptor 表达降低可能通过磷酸化ARK5及增加MMP-2、MMP-9的表达促进胶质瘤细胞的侵袭力。