K562/AS2细胞株对三氧化二砷耐药机制的初步研究

目的：研究K562/AS2细胞株对三氧化二砷（ATO）耐药的机制。方法:采用MTT法检测细胞毒性。细胞表面P－糖蛋白（P-gp）、细胞内柔红霉素（DNR）浓度采用流式细胞术检测。DNA聚合酶、拓扑异构酶Ⅱ(Topo Ⅱ)、多药耐药基因1(〖STBX〗mdr1〖STBZ〗)、多药耐药相关蛋白1（〖STBX〗MRP1〖STBZ〗）以及肺耐药相关蛋白基因(lrp)表达水平的检测采用RT－PCR法。结果:K562和K562/AS2细胞表面P-gp任意荧光强度、K562/AS2细胞内DNR浓度均无显著差异（P>0.05）。K562/AS2细胞株〖STBX〗MRP1〖STBZ〗和Topo Ⅱ表达明显高于K562细胞（P<0.05），DNA 多聚酶，〖STBX〗mdr1〖STBZ〗和lrp表达与敏感细胞株K562细胞相同（P>0.05）。结论:ATO耐药细胞K562/AS2高表达〖STBX〗MRP1〖STBZ〗，并产生低倍数的多药耐药。K562/AS2细胞TopoⅡ基因表达增高，其意义有待进一步阐明。     

三氧化二砷耐药白血病细胞株K562/AS2的建立及其与多药耐药的关系

目的:建立三氧化二砷(As₂O₃)耐药白血病细胞株,用于研究其耐药机制。初步探讨该细胞系与多药耐药的关系。方法:As₂O₃耐药白血病细胞株的建立通过逐步增加药物浓度方法。细胞毒实验采用MTT法,细胞周期测定采用碘化丙啶荧光染色法,细胞表面P-糖蛋白(P-gp)、细胞内柔红霉素(DNR)浓度、以及细胞免疫表型测定采用流式细胞术测定。结果:As₂O₃耐药白血病细胞株K562/AS2的细胞倍增时间和细胞周期与敏感细胞株K562相似。K562/AS2对As₂O₃、DNR、足叶乙甙(VP16)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数分别为(7.4、2.9、3.8和1.1倍)。多药耐药细胞K562/A02对As₂O₃、DNR、VP16和Ara-C的耐药倍数分别为(0.8、94、2.5和0.9倍)。K562细胞与K562/AS2细胞之间的表面P-gp和细胞内DNR荧光强度无明显差异。结论:建立一株对临床可获得药物浓度(2μmol/L)的As₂O₃产生耐药的白血病细胞K562/AS2。K562/AS2对As₂O₃的耐药倍数是敏感株K562的7.4倍。K562/AS2对DNR和VP16部分耐药,其机制与多药耐药基因1(mdr1)表达产物P-gp作用无关。     

姜黄素对K562/A02细胞上P-gp的表达及其功能的影响

目的: 观察姜黄素(curcumin, Cur)对人红白血病多药耐药(mμLtidrugresistance, MDR)细胞系K562 /A02细胞上P gp蛋白表达及功能的影响。方法: 用MTT比色法测定Cu作用后K562 /A02细胞对多种化疗药物敏感性的变化; 用流式细胞仪测定Cur对K562 /A02细胞内柔红霉素 (DNR)潴留的影响; 用RT PCR法检测Cur作用后K562 /A02细胞中mdr 1mRNA的表达。结果: Cur能增强多种化疗药物对K562 /A02细胞的毒性作用。明显提高K562 /A02细胞内DNR的浓度(P<0. 01)。不同浓度的Cur作用后, K562 /A02细胞中mdr -1mRNA的表达逐渐降低, 其中 2. 5mg/LCur处理组与未处理组相比较差异显著(P<0. 01)。结论: Cur能部分逆转K562 /A02细胞的耐药性, 且呈浓度依赖性。Cur的作用机制主要与下调mdr- 1mRNA的表达, 导致细胞膜P gp的表达减少有关。     

β-榄香烯对K562/阿霉素细胞多药耐药性的逆转及其对P-糖蛋白表达的影响

目的探讨β-榄香烯（β-elemene）对多药耐药细胞株K562／阿霉素（ADM）的耐药逆转及其对该细胞P-糖蛋白（P-gp）表达的影响。方法采用MTT法检测细胞的药敏性及耐药逆转，免疫组织化学及免疫电镜观察P-gp的表达，流式细胞术进行定量分析，应用SPSS（10．0 production pacility）软件包对实验结果进行统计学处理。结果1．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）可显著降低ADM对K562／ADM细胞的IC50（P〈0．01），逆转倍数为2．18倍；2．P-gp在耐药细胞株K562／ADM中呈高表达，而在敏感细胞株K562中表达很低，进一步定位研究结果表明，P-gp主要分布于细胞膜上；3．非细胞毒性浓度的β-elemene（4．0mg／L）能够显著降低耐药细胞P-gp的表达。结论β-elemene能够明显逆转K562／ADM细胞对ADM的耐药性，降低该细胞P-gp的表达是其主要逆转机制之一。     

人质膜型唾液酸酶与人红白血病细胞多药耐药相关

目的探讨人质膜型唾液酸酶(Neu3)与人红白血病细胞多药耐药的关系。方法分别或联合柔红霉素(DNR)与唾液酸酶特异性抑制剂(NeuAC2en)处理K562和K562/ADM细胞,MTT法检测细胞生存率;RT-PCR检测多药耐药基因(MDR)、多药耐药相关蛋白(MRP)、06-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、BCL-xl、BAX和BCL-2mRNA表达;Western blot法检测MDR基因蛋白产物P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达;TBA法检测唾液酸酶活性。结果与K562细胞相比,K562/ADM细胞对DNR具有一定的抵抗性,NeuAC2en与DNR有协同作用(P<0.01);应用NeuAC2en或DNR后K562和K562/ADM细胞Neu3活性均明显下降,两种药物联合应用Neu3活性下降最明显(P<0.01);相同处理条件下,与K562细胞相比,K562/ADM细胞中Neu3、MDR1、BCL-xl和BCL-2表达增加,BAX无明显变化;应用DNR后,MDR1、Neu3、BCL-xl、BCL-2表达均下降,而DNR与NeuAC2en联合应用,以上基因表达水平下调最明显。...     

西达本胺增加慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素的敏感性

目的 观察西达本胺（CDM）能否影响人慢性髓系白血病耐药株K562/ADM细胞对柔红霉素（DNR）的敏感性,并探讨其可能的分子机制。方法 体外常规培养K562细胞和K562/ADM细胞,给予不同剂量CDM和（或）DNR处理48 h后,采用细胞计数试剂盒8（CCK-8）法检测CDM与DNR对K562和K562/ADM细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价,采用流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期和凋亡,采用Western blotting方法检测组蛋白2AX（H2AX）、γH2AX（Ser139）、共济失调毛细血管扩张征突变基因（ATM）、p-ATM（Ser1981）、乳腺癌易感蛋白l（BRCA1）和p-BRCA1（Ser1524）的蛋白表达水平。 结果 DNR可剂量依赖性地抑制K562/ADM细胞活力（P<0.05）,半数抑制浓度（IC50）为11.76 μmol/L,耐药倍数为18.09;CDM可协同增强DNR对K562/ADM细胞的抑制作用置信区间（CI）（CI<1）,反转倍数为8.11;与对照组相比,DNR组细胞增殖率显著降低（P<0.05）,G2/M期细胞比例和凋亡率明显升高（P<0.05）,而无毒剂量的CDM可协同增强DNR引起的细胞增殖抑制、G2/M期阻滞和细胞凋亡（P<0.05）;耐药株K562/ADM细胞中ATM和BRCA1蛋白表达水平显著高于其亲代K562细胞（P<0.05）;DNR可上调K562/ADM细胞中H2AX、ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平（P<0.05）;CDM与DNR联用可使γH2AX蛋白水平进一步升高,但p-ATM和p BRCA1蛋白水平的变化则相反（P<0.05）。 结论 CMD可反转K562/ADM细胞对DNR的耐药性,这可能与上调H2AX蛋白的磷酸化水平以及下调ATM和BRCA1蛋白的磷酸化水平有关。     

小分子干扰RNA逆转胃癌SGC7901/VCR细胞mdr1介导的多药耐药

目的研究小分子干扰RNA（siRNA）逆转胃癌多药耐药细胞亚系SGC7901／VCR mdr1介导的多药耐药效应。方法根据mdr1cDNA已知序列，设计并体外转录2条含21个核苷酸的siRNA（mdr1si2631和mdr1si3071），转染SGC7901／VCR细胞，用RT-PCR检测mdr1基因mRNA的表达，免疫组织化学检测P-gp的表达，流式细胞仪检测阿霉素在细胞内的蓄积，MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果siRNA转染SGC7901／VCR细胞48h后，mdr1基因mRNA和P-gp的表达水平下降，细胞内阿霉素积累量增加，对阿霉素敏感性的相对逆转率各达79．59％及59．98％。结论siRNA可逆转SGC7901／VCR细胞mdr1介导的多药耐药。     

高三尖杉酯碱白血病多药耐药细胞系K562/HHT的诱导及米非司酮逆转耐药的研究

目的: 研究高三尖杉酯碱（HHT）诱导的白血病多药耐药细胞株耐药机制以及米非司酮(RU486)逆转其耐药效应。方法：采用反复短期暴露并逐渐增加HHT浓度的方法建立白血病多药耐药细胞系K562/HHT，MTT法检测K562/HHT细胞对化疗药物的敏感性及RU486对该细胞的细胞毒效应，RT-PCR法检测细胞MDR1基因、葡萄糖神经酰胺合成酶（GCS）基因的表达，流式细胞术检测细胞P-糖蛋白的表达和柔红霉素积累量，免疫组化法检测细胞Bcl-2、Bax、caspase-3的表达状况。结果： 成功诱导出多药耐药细胞系K562/HHT，K562/HHT较其亲代细胞K562对HHT、阿霉素、长春新碱、依托泊苷的耐药性分别提高462.6、2.8、1 183.4、2.6倍，K562/HHT细胞MDR1基因、GCS基因、P-糖蛋白和Bcl-2/Bax比值明显高于K562细胞（P<0.05），caspase-3表达、柔红霉素积累量明显低于K562细胞（P<0.05）。10 μmol/L的RU486对K562/HHT细胞无明显杀伤（存活率94.67%±2.48%），该浓度RU486可不同程度地逆转K562/HHT细胞对上述化疗药物的耐药性，RU486作用后K562/HHT细胞caspase-3表达、柔红霉素积累量明显高于作用前（P<0.05），Bcl-2/Bax比值明显低于作用前（P<0.05）。结论： 白血病细胞系K562在HHT的作用下可形成多药耐药细胞系K562/HHT，其耐药性的形成与P-糖蛋白、GCS、Bcl-2/Bax比值及caspase-3等机制有关，RU486可通过提高细胞内药物积累、调节Bcl-2/Bax比值和caspase-3的表达逆转此细胞的耐药性。     

细胞因子诱导的杀伤细胞对卵巢癌耐药细胞SKOV3/CDDP的作用机制

目的：探讨卵巢癌耐药细胞在癌变过程中免疫逃逸的分子机制以及细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）对其耐药性及免疫原性的影响。方法：采用电镜、流式细胞术（FCM）、MTT等检测方法，观察CIK细胞作用人卵巢癌耐药细胞系SKOV3／CDDP细胞超微结构、细胞周期、凋亡率、耐药相关基因MDR1和Topo—Ⅱβ以及hB7-1、hB7-2、MHCⅠb、HLA—DR抗原表达的变化；应用放射免疫（RIA）ELISA等方法检测CIK细胞作用于和荷人卵巢癌SKOV3／CDDP耐药细胞SCID小鼠腹腔移植模型后血清IL-2、TNF—α、IFN-γ、GM—CSF等细胞因子含量的改变。结果：电镜显示：CIK组可见较多的凋亡细胞，表现为细胞体积萎缩，膜发泡，细胞密度增加，线粒体浓缩染色质固缩于核膜周边；与生理盐水组相比，CIK组的G0／G1期细胞比例下降，S＋G2／M期细胞比例升高，细胞周期阻滞于S＋G2／M期，有统计学意义（P〈0．05）；在抑制细胞增殖的同时，尚诱导细胞凋亡，其细胞凋亡率为9．07％，二者比较，有统计学意义（P〈0．05）；与NS组相比，CIK组细胞MDR-1和Topo—Ⅱβ表达明显下降（P〈0．05），提示CIK细胞可逆转人卵巢癌耐药细胞SKOV3／CDDP细胞耐药相关基因MDRI和Topo—Ⅱβ的表达；与NS组相比，CIK组细胞MHCⅠb、HLA—DR、hB7—1和hB7-2抗原的表达均明显升高（P〈0．01）。提示CIK细胞可提高人卵巢癌耐药细胞株SKOV3／CDDP的免疫原性；与NS组相比，CIK组小鼠血清中IL-2、TNF-α、INF-γ、GM—CSF含量均明显增加（P〈0．01）。结论：CIK细胞在将卵巢癌耐药细胞的细胞周期阻滞于S＋G2／M期的同时，尚能诱导其凋亡，降低耐药基因的表达，提高耐药细胞的免疫原性，分泌IL-2、TNF-α、INF-γ、GM-CSF等具有抗肿瘤活性的细胞因子发挥抗肿瘤作用。     

细胞因子对K562／ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用

目的 探讨细胞因子和抗Pgp单抗（mAb）对K562／ADM耐药细胞株耐药性的逆转作用。方法 利用K562细胞的耐阿霉素细胞株K562／ADM，采用免疫细胞化学染色法和流式细胞术，分别检测mAbMRK－16及rhGM－CSF、rhM－CSF或TNF－α对其Pgp表达的影响。结果 将TNF－α（100kU／L）、rhGM－CSF（10μg/L)或rhM－CSF（10g/L)分别单独与K562／ADM细胞孵育48h，Pgp表达细胞的阳性率分别为72．19％、80．04％和70．30％，与未经任何作用的K562／ADM细胞Pgp表达的阳性率（77．02％）相比较，无明显差异（P＞0．05）。mAbMRK－16（10mg/L）以及mAbMRK－16分别与TNF－α或rhGM－CSF共同作用于K562／ADM细胞后，Pgp表达的阳性率分别为67．49％、67．14％和70．56％，与K562／ADM细胞的表达率（77．02％）相比较，Pgp的表达率虽有率，但差异不明显（P＞0．05）；只有rhM－CSF与mAbMRK－16共同作用（Pgp表达的阳性率为64．29％），可明显抑制K562／ADM细胞上Pgp的表达（P＜0．05）。结论 rhM－CSF加mAbMRK－16联合应用，具有逆转K562／ADM细胞MDR的作用。     

钾离子通道蛋白Kir2.1/KCNJ2及多药耐药蛋白MRP1/ABCC1在小细胞肺癌中的表达及相关性

 目的：探讨内向整流钾通道2.1（Kir2.1/KCNJ2）及多药耐药相关蛋白1（MRP1/ABCC1）在小细胞肺癌(SCLC) 中的表达情况及两者的相关性。方法：采用实时定量PCR和蛋白印迹法检测小细胞肺癌多药耐药细胞株H69AR及敏感株H69细胞中Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA和蛋白的表达水平,采用免疫组化EnVision两步法检测44 例SCLC组织中Kir2.1/KCNJ2和MRP1蛋白的表达水平;采用蛋白免疫共沉淀实验检测Kir2.1/KCNJ2与MRP1/ABCC1之间的相互作用。
结果：H69AR细胞株中Kir2.1/KCNJ2及MRP1/ABCC1 mRNA和蛋白的表达均显著高于H69细胞株,二者均有显著差异（P<005）;免疫组化结果表明SCLC组织中Kir2.1/KCNJ2和MRP1/ABCC1阳性表达率分别为47.7%(21/44) 和52.3%(23/44),两者表达在SCLC 中呈正相关(r=0853,P<0.01); Kir2.1/KCNJ2与MRP/ABCC1在H69AR细胞内可形成复合物。结论：Kir2.1/KCNJ2与小细胞癌多药耐药有关。Kir2.1/KCNJ2和MRP1/ABCC1之间可能存在共同作用通路。Kir2.1/KCNJ2可能通过调控MRP1/ABCC1的表达促进SCLC多药耐药的发生。     

反义寡聚脱氧核苷酸抑制卵巢癌细胞株SKOV3／mdr1中MDR1基因的表达

多药耐药基因（MDR1）编码的P－糖蛋白(Pgp,P-170)是导致卵巢癌化疗失败的重要因素之一。本研究将针对MDR1基因的硫代反义寡聚脱氧核苷酸导入卵巢癌耐药细胞株SKOV3/mdr1,观察其对该细胞株P170表达的影响。反义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－AS）通过阳离子脂质体介导或单纯转染的方式导入SKOV3／mdr1 细胞,将正义寡聚脱氧核苷酸（MDR1－S)同样导入细胞为对照。经以脂质体介导的1．6μmol/L MDR1-AS转染后,Pgp阳性的细胞百分数从100％降至48．7％,经过16和10μmol／L两个浓度的单纯MDR1－AS转染后,Pgp阳性细胞的百分数也从100％分别降至52．6％和86．7％。同时,利用RT－PCR检测了MDR1mRNA水平的变化,以β-actin作为内对照,发现MDR1mRNA水平在MDR1－AS转染后降至内对照的60％左右,而用MDR1－S转染的细胞与SKOV3／mdr1细胞比无明显变化。所以导入MDR1基因硫代反义寡聚脱氧核苷酸可以部分抑制SKOV3／mdr1细胞中MDR1基因的表达。     

与肿瘤耐药有关的P-gp、GST蛋白在K562／ADM和转MDR基因K562／MDR中的表达

化疗是血液系统恶性肿瘤和部分实体瘤的重要治疗手段之一，但耐药性的产生是癌症化疗失败的主要因素之一。本实验应用免疫细胞化学技术(SP-ICC)、分光光度法检测并比较慢性粒细胞白血病急性变细胞株K562、人工用阿霉素(ADM)诱导建成的肿瘤耐药细胞株K562／ADM和用逆转录病毒转染MDR基因建成的肿瘤耐药细胞株K562／MDR三种细胞株细胞表面的P-gp和细胞内GST的表达和GST比活力的改变，     

塞来昔布促进Jurkat细胞对表柔比星的化疗敏感性

目的研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株化疗敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测表柔比星联合塞来昔布对Jurkat细胞增殖活性的影响,并计算IC_(50)值;流式细胞术检测表柔比星联合塞来昔布对Jurkat细胞凋亡水平的影响;Western blot检测塞来昔布对Jurkat细胞株表达P-gp、MRP1、LRP及TopoⅡ蛋白水平的影响;构建Jurkat细胞株裸鼠移植瘤模型,分为模型对照组、单独塞来昔布组、单独表柔比星组及塞来昔布表柔比星组,治疗后引颈处死裸鼠,剥离瘤组织,检测其质量、体积、瘤组织细胞凋亡率,同时检测瘤组织表达MDR1、MRP1、LRP及TopoⅡ的水平。结果表柔比星联合塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat增殖活性具有明显抑制作用,同时表柔比星的IC_(50)值明显减低(P0.05),Jurkat细胞的凋亡水平也较对照组明显增加(P0.01);与塞来昔布共培养的Jurkat细胞表达TopoⅡ蛋白的水平明显增加,而表达MDR1、MRP1、LRP蛋白的水平均明显下降(P0.05);联合塞来昔布可明显增强表柔比星对Jurkat瘤组织的抑制作用,并可明显下调瘤组织MDR1、MRP1、LRP的表达水平,上调TopoⅡ的表达水平。结论塞来昔布可通过调控耐药相关基因的表达而增强Jurkat细胞化疗敏感性,因此提示该药在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有广泛前景。     

Bcl-2反义核酸增强HL-60、K562细胞对柔红霉素敏感性的研究

目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用后,白血病细胞株HL60、K562细胞对柔红霉素(DNR)敏感性的影响。方法:MTT法测HL60、K562细胞中DNR的半数抑制率(IC50);免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用Hoechest33258和碘化丙锭双染色法及流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:靶向bcl-2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸(AS-ODN1)和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸(AS-ODN2)分别与DNR联合作用于HL60细胞后DNR的IC50值分别为0.124±0.011、0.149±0.012,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.173±0.021)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.180±0.023)相比有显著差异,P＜0.05。AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR联合作用于K562细胞后DNR的IC50值分别为0.078±0.007、0.079±0.008,分别与不加寡核苷酸组DNR的IC50值(0.106±0.011)或无义寡核苷酸联用DNR的IC50值(0.107±0.012)相比有显著差异,P＜0.05。AS-ODN1和AS-ODN2分别与DNR同时作用于HL60或K562细胞后抑制Bcl-2蛋白表达及诱导细胞凋亡率分别与单用DNR或无义寡核苷酸联用DNR相比有显著差异,P＜0.05。与AS-ODN2比较,AS-ODN1提高HL60细胞对DNR的敏感性作用要强些(P＜0.05)。结论:靶向bcl-2mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸和靶向翻译起始区的反义寡核苷酸能增强HL60和K562细胞对DNR的敏感性。     

丙戊酸钠诱导K562细胞周期阻滞和凋亡并上调P^21WAF1基因mRNA的表达

目的：探讨丙戊酸钠（VPA）对慢性粒细胞白血病急变期细胞株（K562细胞）细胞周期和凋亡的影响及其可能机制。方法：利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞周期和细胞凋亡情况；利用RT—PCR方法检测P^21WAF1基因的mRNA的表达。结果：VPA引起K562细胞凋亡增加[（11．47&#177;0．25）％vs（4．77&#177;0．40）％，（P〈0．05）]和细胞周期阻滞在G0／G1期[（82．30&#177;9．41）％vs（40．13&#177;2．12）％，（P〈0．05）]。同时处理后的细胞中P^21WAF1基因mRNA的表达增加[（1．65&#177;0．91）vs（0．25&#177;0．04），P〈0．05]。结论：VPA可能通过上调P^21WAF1基因，导致K562细胞周期阻滞并引起细胞凋亡。     

K562细胞株侧群细胞分离及耐药蛋白和细胞周期的表达

背景：血液肿瘤细胞中的侧群细胞能够逃避细胞周期化疗药物的作用,可能与白血病复发有关。 目的：鉴定人慢性粒细胞白血病细胞株K562中是否存在侧群细胞,并观察侧群细胞亚群与非侧群细胞亚群耐药蛋白、细胞周期表达的差异。 方法：采用流式细胞术检测K562细胞株中是否存在侧群细胞;并分析K562侧群细胞和非侧群细胞两亚群间耐药蛋白P-gp、ABCG2以及细胞周期的表达情况。 结果与结论：K562细胞株中均存在侧群细胞,这群细胞比例均少。侧群细胞亚群耐药蛋白ABCG2表达高于非侧群细胞亚群(P < 0.05),两亚群耐药蛋白P-gp中表达差异无显著性意义;侧群细胞亚群中G0/G1期细胞占80%,非侧群细胞亚群中G0/G1期细胞占43.7%。证实K562细胞株中确实存在较少比例的侧群细胞,其和主群细胞在耐药蛋白表达上有异质性,大部分处于静止期,可能富含和肿瘤耐药有关的白血病干细胞。     

索拉非尼联合柔红霉素对白血病K562细胞的抑制作用

目的:探讨小分子Raf激酶抑制剂索拉非尼(sorafenib)联合柔红霉素(DNR)对白血病细胞K562及U937的抑制作用及可能的分子机制。方法:MTT法测定索拉非尼和柔红霉素单独作用于K562和U937细胞的抑制率及DNR IC10联合不同浓度索拉非尼作用于K562及U937的联合抑制率;流式细胞AnnexinⅤ/PI法测定单药及联合用药后K562细胞的凋亡率以及Hoechst33258染色法观察单药及联合作用后细胞凋亡形态的改变;West-ern blotting法测定索拉非尼、DNR及U0126对K562及U937p-ERK1/2的影响;根据金氏方程证明2种药物联合抑制率及凋亡是否有协同作用。结果:MTT法测定索拉非尼联合DNR对K562及U937均有协同抑制作用(q1.15,P0.01);流式细胞AnnexinⅤ/PI和Hoechst33258染色法,均证明索拉非尼联合柔红霉素能联合诱导K562细胞凋亡(q1.15,P0.05),两者有明显的一致性;K562细胞的基础pERK1/2蛋白水平明显高于U937细胞(P0.01),索拉非尼和U0126都能够显著抑制K562细胞p-ERK1/2水平;U0126联合DNR存在协同抑制K562细胞的作用。结论:索拉非尼联合DNR作用于白血病细胞K562、U937存在协同抑制及凋亡诱导作用;DNR对U937的抑制作用明显高于K562;索拉非尼对K562的敏感性高于U937细胞;索拉非尼可能通过下调p-ERK1/2水平增加柔红霉素抗白血病细胞的效应。     

CD3AK、LAK对KB、KBV200细胞株耐药塑转前后的杀伤作用

目的 探讨免疫活性细胞对肿瘤细胞的杀伤活性与mdr1的关系。方法 利用特异性切割mdr1的ribozyme为工具,以表达mdr1的耐药细胞株KBV200为靶细胞,采用脂质体转染技术,将含ribozayme的质粒pHβApr-1meoi/5mR3及空载体pHβApr-1 neo导入KBV200及其亲本KB细胞内,运用North-ern blotting、免疫组化方法观察ribozyme对mdr1 mRNA及P－170的影响,采用MTT法检测了CD3AK、LAK对KB、KBV200细胞株药逆转前后杀伤活性的变化。结果 含ribozyme的质粒pHβApr-1 neo／5mR3及空载体pHβApr-1 neo可以在KB、KBV200细胞中稳定表达,ribozyme可以特异性地切割mdr1,导致KBV200／5mR3的mdr1 mRNA含量下降,P－170表达减低,LAK和CD3AK对KBV200的杀伤活性较对KB的强,MDR逆转后杀伤活性降至敏感株水平,LAK和CD3AK对KB／5mR3、KB/vec、KBV200／vec的杀伤活性也较KB及KBV200／5mR3强。结论 mdr1-ribozyme在细胞内具有一定的逆转肿瘤多药抗性的生物学效应,LAK和CD3AK对MDR肿瘤细胞的杀伤活性与P糖蛋白表达相关。     

姜黄素对耐药细胞株K562/ADM的耐药逆转作用研究

目的:研究姜黄素对慢性粒细胞白血病多药耐药细胞株K562/ADM中多药耐药基因mdrl表达的下调作用.方法:采用RT-PCR和Western blot方法检测各处理组K562/ADM细胞株中mdrl基因表达;利用MTT试验检测姜黄素处理后K562/ADM细胞株对阿霉素敏感性的改变.结果:姜黄素抑制了K562/ADM细胞株中多药耐药基因mdrl的表达,姜黄素明显增加K562/ADM细胞株对阿霉素的敏感性.结论:姜黄素通过抑制P-gP的药物外排作用有效逆转K562/ADM细胞株的多药耐药性.