复合酶Ⅱ抗高脂血清致血管内皮细胞损伤的保护效应

目的和方法:以高脂血清作用于培养的血管内皮细胞,通过检测内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达及培养液中NO₂^-的含量,研究复合酶Ⅱ抗高脂血清所致细胞损伤的保护效应。结果:高脂血清可使培养的血管内皮细胞表面粘附分子ICAM-1的表达显著增加(由0.228±0.025增加到0.328±0.030,P＜0.01),细胞合成和释放NO^- ₂ 的含量明显减少(由0.433±0.144减少到0.149±0.034,P＜0.01);而复合酶Ⅱ则能显著降低ICAM-1的表达(0.229±0.065),增加内皮细胞NO₂^-的合成与释放(0.386±0.036),与高脂血清损伤组相比,差异有高度显著性(P＜0.01)。结论:复合酶Ⅱ同时具有SOD和CAT活性结构和作用特性,能更有效地清除氧自由基,对高脂血清造成的血管内皮细胞损伤具有明显的抗损伤效应。     

一氧化氮在失血性休克再灌注损伤中的作用及牛磺酸的影响

目的:探讨一氧化氮(NO)在失血性休克再灌注损伤中的作用及牛磺酸的影响。方法:新西兰种兔24只随机分为3组(n=8):对照组、休克组、牛磺酸治疗组。采用失血性休克-再灌注损伤模型。连续观察休克前、休克1.5h、再灌注1h、2h、3h时血浆一氧化氮合酶(NOS)活性、一氧化氮代谢产物(NO^-₂／NO^-₃)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性的动态变化。结果:①休克组再灌注各时限血浆NOS活性、NO^-₂／NO^-₃含量、MDA含量、LDH活性显著高于休克前及休克1.5h;SOD活性显著低于休克前及休克1.5h。②休克组再灌注3h时心、肺组织NOS活性、NO^-₂／NO^-₃含量、MDA含量显著高于对照组;SOD活性显著低于对照组。③牛磺酸(40mg·kg^-1, iv)可减轻再灌注各时限上述指标的变化。④血浆、心肺组织中NO^-₂／NO^-₃含量与MDA含量均呈正相关。结论:NO介导了休克再灌注损伤, 大量释放的NO参与休克再灌注损伤的脂质过氧化反应, 牛磺酸的拮抗作用可能与减少NO的生成、抗脂质过氧化有关。     

L-精氨酸对急性心肌梗死大鼠选择素mRNA表达的影响

目的：探讨左旋精氨酸（L-Arg）对急性心肌梗死（AMI）大鼠L、E-选择素mRNA表达的影响及其对心肌的保护作用机制。方法：SD大鼠40只，采用垂体后叶素（Pit）复制急性心肌梗死。设正常组、Pit组、L-Arg治疗组及一氧化氮合酶抑制剂L-NAME组，使用原位杂交检测白细胞L-选择素及心肌微血管内皮细胞E-选择素mRNA的表达，并测定血清TnT、NO₂^-/NO₃^-、CK的浓度以及心肌组织PMNs浸润数。结果：阳性组和L-NAME组，L、E-选择素mRNA表达明显上调（P<0.01或P<0.05），血清NO₂^-/NO₃^-水平显著降低（P<0.01），心肌PMNs浸润数、血清TnT、CK浓度显著增高（P<0.01或P<0.05）。L-Arg组较阳性组，L、E-选择素mRNA表达下调，血清NO₂^-/NO₃^-水平增高（P<0.05），心肌PMNs浸润数、血清TnT、CK浓度降低。结论：外源性L-Arg对AMI大鼠心肌具有保护作用，其作用机制与增加NO合成、抑制选择素mRNA表达有关。     

肺血管内皮细胞在大鼠急性肺损伤发生中的作用

目的:观察肺血管内皮细胞受损在大鼠急性肺损伤发病中的作用及地塞米松的影响。方法:给Wistar大鼠静脉注射脂多糖(LPS5mg/kgBW)复制急性肺损伤模型。采用ELISA、放射免疫、原位杂交等多种方法测定肺组织ICAM-1mRNA表达、iNOS活性、血中TNF-α、NO₂^-/NO₃^-、ACE含量及肺血管通透性、肺泡灌洗液中细胞数、蛋白含量等的变化。结果:注射LPS后,肺血管ICAM-1mRNA表达增加,从1h开始至24h达高峰。肺组织匀浆iNOS活性升高、肺血管通透性升高、肺泡灌洗液中中性粒细胞数量增加,巨噬细胞数量减少、蛋白含量增加,血中TNF-α、NO₂^-/NO₃^-含量升高而ACE含量下降等变化多在注LPS后2h明显。预先给予地塞米松对上述多种指标的变化有明显缓解作用。结论:提示LPS通过损伤肺血管内皮细胞导致急性肺损伤,地塞米松对其有一定保护作用。     

吸烟大鼠一氧化氮合酶和一氧化氮的变化

目的:观察吸烟对大鼠肺组织iNOS、eNOSmRNA和蛋白表达以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中NO的影响, 探讨不同类型的NOS在吸烟所致慢性气道炎症中的作用。方法:选用Wistar大鼠80只随机分为对照组, 被动吸烟组, iNOS抑制剂L-NIL干预组及NOS抑制剂L-NAME干预组。用免疫组化法检测iNOS及eNOS的蛋白表达, 用RT-PCR检测iNOS及eNOSmRNA的表达, 用Griess法测定BALF中的NO^-₂/NO^-₃含量。结果:吸烟大鼠肺组织中iNOSmRNA及其蛋白表达增加, eNOSmRNA及蛋白表达下降, BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃显著增加(P＜0.05)。在体实验发现, L-NIL使BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃下降(P＜0.05);L-NAME对BALF中细胞总数及NO^-₂/NO^-₃无显著影响(P＞0.05)。结论:吸烟大鼠肺组织iNOSmRNA和蛋白表达增加, eNOSmRNA和蛋白表达减少。活化的iNOS产生大量NO促进炎症发展。     

阿司匹林对炎症条件下人血管内皮细胞一氧化氮的产生及诱导型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的:探讨炎症时阿司匹林(AS)对内皮细胞一氧化氮(NO)的产生及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的抑制作用。方法:Griess法测上清液NO^-₂/NO^-₃水平、黄递酶法测NOS活性、常规生化法测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)浓度,染料排除法测细胞活力,RT-PCR技术分析iNOSmRNA水平。结果:白介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α、γ-干扰素(INF)联用脂多糖(LPS)诱导后上清液中NO^-₂/NO^-₃由(4.27±0.75)μmol/L增加到(9.35±1.25)μmol/L,对内皮细胞造成明显的损伤。但3mmol/LAS组NO生成及NOS活性明显降低,LDH释放率及MDA浓度下降,细胞存活率上升,与NO诱导组相比差异显著。并随AS剂量的增加对NO的抑制及对细胞的保护作用更加明显,但AS对生理水平的NO没有抑制作用。同时发现10mmol/L浓度以下AS对iNOSmRNA表达水平没有影响;但10-20mmol/L的AS则可在转录水平上抑制iNOSmRNA的表达。并观察到水杨酸钠及消炎痛不具有抑制NO产生的作用。结论:AS具有明显抑制IL-1β、TNF-α、γ-INF及LPS诱导NO生成的作用,从而保护血管内皮细胞避免炎症时高浓度NO的损伤。     

氨基胍等对严重烧伤大鼠一氧化氮表达及烧伤休克的影响

目的:研究一氧化氮合酶(NOS)抑制剂与严重烧伤大鼠体内NO产量、NOS表达以及平均动脉压(MAP)变化的关系。方法:复制大鼠重症烧伤模型,检测应用非选择性NOS抑制剂L-NAME和选择性诱生型NOS(iNOS)抑制剂氨基胍(AG)后大鼠血液中NO代谢产物(NO₂^-／NO₃^-)以及肺和十二指肠组织中神经型NOS(nNOS)mRNA的表达水平,同时测定各组大鼠的MAP。结果:烧伤后大鼠血液中NO₂^-／NO₃^-含量显著增高,L-NAME和AG都能抑制NO₂^-／NO₃^-的升高,P<0.01;烧伤后nNOS的mRNA表达在肺和十二指肠中均有不同程度升高,AG和L-NAME使nNOS表达增加,L-NAME作用更为显著,P<0.01;烧伤后大鼠MAP略有上升,然后进行性下降,L-NAME组大鼠MAP显著升高,但于3h后急剧下降,AG组大鼠MAP下降速度明显低于对照组。结论:结构型NOS(cNOS)与iNOS在烧伤休克病理生理过程中的作用明显不同,iNOS活性过度增高与烧伤休克发病关系密切。     

一氧化氮与脑血管痉挛性神经元损伤和L-精氨酸的作用

目的:探讨一氧化氮(NO)与蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛(CVS)所致神经元损伤的关系及L-精氨酸(L-Arg)的保护作用。方法: 应用血管内穿刺法建立大鼠SAH模型,将动物随机分为假手术组(SO组)、SAH组和SAH+L-Arg组。动态检测24 h内大脑顶叶皮层局部脑血流量(rCBF),测量基底动脉(BA)管径变化,测定不同时点血清NO(NO^-₂/NO^-₃)水平和血浆ET-1含量,并行海马神经元形态学观察。 结果: 假手术对各项指标无显著影响。SAH组术后rCBF迅速降低,1 h达最低值,并持续24 h;SAH后BA管径明显缩小;血清NO^-₂／NO^-₃含量明显减少,血浆ET-1含量逐渐增加,海马神经元显著损伤。与SAH组比较,SAH+L-Arg组rCBF下降的速度减慢、程度减轻;BA管径缩小的程度减轻;血清NO^-₂／NO^-₃水平降低和血浆ET-1含量增高的变化减轻;海马神经元损伤的程度减轻。结论: 血清NO浓度的降低参与了CVS性神经元损伤,L-Arg对之具有一定减轻作用。     

L-精氨酸治疗不匀称型胎儿生长受限的临床观察

目的：观察L-精氨酸联合常规治疗对不匀称型胎儿生长受限的临床疗效，探讨一氧化氮在治疗不匀称型胎儿生长受限中的作用机制。方法：将66例不匀称型胎儿生长受限的孕妇分为常规治疗组（A组，36例）和L-精氨酸联合常规治疗组（B组，30例）；另30例正常孕妇为对照组（C组）；分别检测3组孕妇母血及脐血亚硝酸盐/硝酸盐（NO₂^-/NO₃^-）浓度、脐动脉血流波形、血液流变学指标及妊娠结局。结果：①治疗前A、B两组孕妇血NO₂^-/NO₃^- 浓度显著低于C组；②治疗后A、B两组孕妇血NO₂^-/NO₃^- 水平均明显增高，且B组高于A组（P<0.01）；治疗后B组脐动脉搏动指数、阻力指数及孕妇血粘度低切值明显低于治疗后A组（P<0.05）。③B组新生儿平均出生体重显著高于A组（P<0.01）；B组脐血NO₂^-/NO₃^- 水平显著高于A组。结论：一氧化氮不足与不匀称型胎儿生长受限的发生密切相关，L-精氨酸联合常规药物治疗不匀称型胎儿生长受限疗效明显优于常规治疗组。     

含硒藻蓝蛋白抗小鼠实验性肝损伤的作用

目的:观察含硒藻蓝蛋白(Se-SPC)对四氯化碳(CCl₄)致小鼠急性肝损伤的拮抗作用。方法:以2%CCl₄油灌胃复制小鼠急性肝损伤模型,各组分别腹腔注射Se-SPC、藻蓝蛋白(SPC)、无机硒(Se)7d,测定血及肝组织中Se、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷丙转氨酶(ALT)、一氧化氮(NO)水平,分析Se-SPC、SPC、无机Se对上述指标的影响。结果:Se-SPC组比CCl₄组血和肝中Se、GPx、SOD水平显著增高(P<0.05),血ALT、血和肝中MDA及NO₂^-/NO₃^-水平显著降低(P＜0.05),高剂量Se-SPC组对Se含量、GPx、MDA、NO₂^-/NO₃^-等指标的影响更为显著(P＜0.01),在相同蛋白或硒剂量下,Se-SPC组比SPC组和无机Se组对上述指标作用更大。相关分析发现小鼠血Se水平与GPx活性呈显著正相关(r=0.705),血GPx活性与MDA、NO₂^-/NO₃^-、ALT水平呈明显负相关(r=－0.629,r=－0.336,r=－0.457),血ALT活性与MDA及NO₂^-/NO₃^-呈显著正相关(r=0.519,r=0.641)。结论:Se-SP可能结合增高硒酶活性及抗炎双重功效,对CCl₄致小鼠肝脏的氧化损伤具有拮抗作用。     

四逆汤对同型半胱氨酸损伤的EAhy926细胞caveolin-1和eNOS表达的影响

 目的：探讨四逆汤（Sini decoction,SND）防治内皮细胞损伤的机制及陷窝蛋白1（caveolin-1）和一氧化氮（NO）系统在其中的作用。方法：建立同型半胱氨酸(Hcy)损伤的人脐静脉内皮融合细胞（EAhy926细胞）模型,观察四逆汤的保护作用及其对NO系统和caveolin-1的影响。结果：Hcy加入后细胞生长缓慢,贴壁细胞数明显减少,NO浓度明显减低（P<0.05）,caveolin-1 mRNA和蛋白表达明显增强（P<0.05）,内皮型NO合酶(eNOS) mRNA和蛋白表达明显减弱（P<0.05）;四逆汤处理组贴壁细胞及细胞形态明显改善,NO浓度较Hcy模型组明显升高（P<0.05）,caveolin-1 mRNA和蛋白表达较Hcy模型组明显减弱（P<0.05）,eNOS mRNA和蛋白表达较Hcy模型组明显增强（P<0.05）,其中以四逆汤1.0 kg/L +Hcy 4.0 μmol/L组最明显。结论：Hcy可能通过增加caveolin-1表达和抑制eNOS表达而损伤人脐静脉内皮细胞,而四逆汤通过抑制caveolin-1表达和增加eNOS的表达拮抗Hcy对细胞的损伤。     

小凹蛋白与内皮型一氧化氮合成酶在人肝硬化组织中的表达及意义

目的 检测人肝硬化组织中小凹蛋白(caveolin-1)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的细胞定位及蛋白表达水平的变化,探讨caveolin-1的表达对eNOS的影响.方法 免疫组织化学染色检测30例肝硬化患者活检后肝组织和30例肝外伤、肝血管瘤患者正常肝组织中caveolin-1和eNOS的细胞定位.Western印迹检测caveolin-1和eNOS的蛋白表达水平变化.结果 caveolin-1和eNOS均主要分布于肝窦内皮细胞中,caveolin-1在肝硬化组和对照组表达阳性率有差异,分别为87%和40%(P＜0.05).eNOS在肝硬化组和对照组表达阳性率有差异,分别为33%和66%(P＜0.05).caveolin-1在肝硬化组织中表达较正常肝组织中明显增强.eNOS在肝硬化组织中呈低水平表达,较正常肝组织中表达明显减少.结论 肝硬化肝窦内皮细胞的损伤降低了eNOS的表达.caveolin-1的过表达促进eNOS-caveolin-1复合物的形成,加剧了门静脉高压症的发生.     

HMG-CoA Reductase Inhibitor Improves Endothelial Dysfunction in Spontaneous Hypertensive Rats Via Down-regulation of Caveolin-1 and Activation of Endothelial Nitric Oxide Synthase

Hypertension is associated with endothelial dysfunction and increased cardiovascular risk. Caveolin-1 regulates nitric oxide (NO) signaling by modulating endothelial nitric oxide synthase (eNOS). The purpose of this study was to examine whether HMG-CoA reductase inhibitor improves impaired endothelial function of the aorta in spontaneous hypertensive rat (SHR) and to determine the underlying mechanisms involved. Eight-week-old male SHR were assigned to either a control group (CON, n=11) or a rosuvastatin group (ROS, n=12), rosuvastatin (10 mg/kg/day) administered for eight weeks. Abdominal aortic rings were prepared and responses to acetylcholine (10^-9-10^-4 M) were determined in vitro. To evaluate the potential role of NO and caveolin-1, we examined the plasma activity of NOx, eNOS, phosphorylated-eNOS and expression of caveolin-1. The relaxation in response to acetylcholine was significantly enhanced in ROS compared to CON. Expression of eNOS RNA was unchanged, whereas NOx level and phosphorylated-eNOS at serine-1177 was increased accompanied with depressed level of caveolin-1 in ROS. We conclude that 3-Hydroxy-3-methylglutaryl Coenzyme-A (HMG-CoA) reductase inhibitor can improve impaired endothelial dysfunction in SHR, and its underlying mechanisms are associated with increased NO production. Furthermore, HMG-CoA reductase inhibitor can activate the eNOS by phosphorylation related to decreased caveolin-1 abundance. These results imply the therapeutic strategies for the high blood pressure-associated endothelial dysfunction through modifying caveolin status.     

枸杞多糖减轻过氧化氢诱导的人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤

目的:研究枸杞多糖(LBP)对过氧化氢(H_2O_2)诱导人内皮样细胞EA.hy926氧化损伤的作用及机制。方法:用H_2O_2建立EA.hy926细胞氧化损伤模型,细胞共分为5个组:正常对照(control)组、模型(damage)组(H_2O_2,50 mmol/L)、LBP(100 mg/L)组、抗损伤(anti-damage)组(50 mg/L、100 mg/L和200 mg/L LBP+50 mmol/L H_2O_2)和LY294002(20μmol/L)组。采用CCK-8法检测细胞的活力;用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测不同处理后EA.hy926细胞的凋亡;吖啶橙(AO)/溴乙啶(EB)染色法观察细胞凋亡的形态特征;划痕法测定细胞的迁移能力;一氧化氮(NO)试剂盒检测细胞培养上清中NO的水平;用ELISA法测定血管内皮生长因子(VEGF)的水平;Western blot检测cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2、内皮型NO合酶(eNOS)、p-eNOS和p-Akt的蛋白水平。结果:量效结果显示浓度为100 mg/L的LBP预处理EA.hy926细胞1 h,然后加入H_2O_2(50 mmol/L)处理24 h对减轻H_2O_2诱导的EA.hy926细胞损伤的作用最显著。与damage组比较,LBP预处理可提高EA.hy926细胞的活力(P0.05),减少细胞凋亡(P0.05),并促进细胞迁移;上清液中VEGF和NO水平升高;Bcl-2/Bax比率明显升高,下调cleaved caspase-3蛋白水平,并上调eNOS和p-eNOS蛋白水平。此外,加入PI3K抑制剂LY294002后,LBP对H_2O_2损伤的EA.hy926细胞的保护作用减弱,表现为NO水平和p-Akt蛋白水平降低。结论:LBP能减轻H_2O_2对EA.hy926细胞的损伤作用,缓解H_2O_2诱导的凋亡,其机制与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路密切相关。     

柚皮苷对高糖诱导的血管内皮细胞损伤及PI3K/AKT/eNOS信号通路的影响

目的:研究柚皮苷(naringin,Nar)对高糖(high glucose,HG)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)损伤的作用及对PI3K/AKT/e NOS信号通路的影响。方法:利用HG(33 mmol/L glucose)培养基孵育HUVECs不同时间(6、12、24、48、72 h)后,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,建立内皮细胞损伤模型,分别测定各组上清液中NO水平、细胞中e NOS和磷酸化e NOS(p-e NOS)的水平。对损伤的HUVECs用不同浓度的Nar(5、10、25、50、100 mg/L)孵育不同时间(6、12、24、48和72 h),用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15min,检测细胞上清中的NO水平,观察Nar对HG诱导HUVECs损伤的作用。对损伤细胞先分别用PI3K抑制剂LY294002(10μmol/L)和AKT抑制剂AKT inhibitorⅣ(0.5μmol/L)预处理24 h,再用50 mg/L的Nar处理24 h,用胰岛素(5 m IU/L)刺激细胞15 min,检测细胞上清中NO的水平,以及e NOS、p-e NOS、PI3K、AKT及p-AKT的蛋白水平,探讨Nar减轻HG对HUVECs损伤作用的机制。结果:Nar的量效和时效结果显示,50 mg/L Nar预处理HUVECs 24 h后,其减轻HG对HUVECs损伤的作用最为显著,表现为NO和p-e NOS的水平升高(P0.05)。加入PI3K和AKT抑制剂后,Nar减轻HG致内皮细胞的损伤及上调p-e NOS和NO水平的作用完全取消(P0.05)。结论:Nar能减轻HG诱导的血管内皮细胞损伤,其作用机制可能是通过PI3K/AKT/e NOS信号通路介导的。     

小凹蛋白与内皮型一氧化氮合成酶在人肝硬化组织中的表达及意义

目的检测人肝硬化组织中小凹蛋白(caveolin-1)、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)的细胞定位及蛋白表达水平的变化,探讨caveolin-1的表达对eNOS的影响。方法免疫组织化学染色检测30例肝硬化患者活检后肝组织和30例肝外伤、肝血管瘤患者正常肝组织中caveolin-1和eNOS的细胞定位。Western印迹检测caveolin-1和eNOS的蛋白表达水平变化。结果caveolin-1和eNOS均主要分布于肝窦内皮细胞中,caveolin-1在肝硬化组和对照组表达阳性率有差异,分别为87%和40%(P<0.05)。eNOS在肝硬化组和对照组表达阳性率有差异,分别为33%和66%(P<0.05)。caveolin-1在肝硬化组织中表达较正常肝组织中明显增强。eNOS在肝硬化组织中呈低水平表达,较正常肝组织中表达明显减少。结论肝硬化肝窦内皮细胞的损伤降低了eNOS的表达。caveolin-1的过表达促进eNOS-caveolin-1复合物的形成,加剧了门静脉高压症的发生。     

Altered angiogenesis in caveolin-1 gene-deficient mice is restored by ablation of endothelial nitric oxide synthase

Caveolin-1 is an essential structural protein of caveolae, specialized plasma membrane organelles highly abundant in endothelial cells, where they regulate multiple functions including angiogenesis. Caveolin-1 exerts a tonic inhibition of endothelial nitric oxide synthase (eNOS) activity. Accordingly, caveolin-1 gene-disrupted mice have enhanced eNOS activity as well as increased systemic nitric oxide (NO) levels. We hypothesized that excess eNOS activity, secondary to caveolin deficiency, would mediate the decreased angiogenesis observed in caveolin-1 gene-disrupted mice. We tested tumor angiogenesis in mice lacking either one or both proteins, using in vitro, ex vivo, and in vivo assays. We show that endothelial cell migration, tube formation, cell sprouting from aortic rings, tumor growth, and angiogenesis are all significantly impaired in both caveolin-1-null and eNOS-null mice. We further show that these parameters were either partially or fully restored in double knockout mice that lack both caveolin-1 and eNOS. Furthermore, the effects of genetic ablation of eNOS are mimicked by the administration of the NOS inhibitor N-nitro-L-arginine methyl ester hydrochloride (L-NAME), including the reversal of the caveolin-1-null mouse angiogenic phenotype. This study is the first to demonstrate the detrimental effects of unregulated eNOS activity on angiogenesis, and shows that impaired tumor angiogenesis in caveolin-1-null mice is, at least in part, the result of enhanced eNOS activity.     

1-磷酸鞘氨醇在高糖诱导血管内皮细胞功能损伤中的作用

 目的: 探讨1-磷酸鞘氨醇(S1P)在高糖诱导血管内皮细胞功能损伤中的作用及其机制。方法: 在高糖培养的人主动脉内皮细胞模型中,分别或同时给予S1P、鞘氨醇激酶1抑制剂和Akt抑制剂处理后,观察一氧化氮(NO)、粒细胞-内皮细胞黏附率、细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达、内皮细胞迁移以及Akt/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号途径的改变。结果: S1P明显降低高糖诱导的内皮细胞培养上清液中NO含量,促进粒细胞与内皮细胞黏附,显著增加内皮细胞ICAM-1蛋白表达,抑制内皮细胞迁移和Akt/eNOS信号通路激活。鞘氨醇激酶1抑制剂减少S1P生成后上述内皮细胞功能指标得以明显改善,Akt/eNOS信号通路恢复激活。结论: S1P促进高糖培养的内皮细胞功能障碍的形成,可能与其抑制Akt/eNOS信号通路激活有关。抑制S1P生成有望成为减轻内皮细胞功能损伤的治疗策略之一。     

SIRT1/eNOS/NO通路在人参皂苷Rb1抗内皮细胞复制性衰老中的作用

目的:观察人参皂苷Rb1延缓人脐静脉内皮细胞(HUVECs)复制性衰老的作用,并探讨SIRT1/e NOS/NO通路在其中的作用机制。方法:建立原代HUVECs复制性衰老模型,根据细胞形态的变化、衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色阳性率和纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)的表达水平评估HUVECs衰老情况;采用real-time PCR方法和Western blot法检测沉默SIRT1前后衰老细胞中e NOS和PAI-1的mRNA和蛋白表达,并检测细胞上清NO的含量。结果:累积细胞群体倍增水平(CPDL)为16的HUVECs可作为复制性衰老模型; 80μmol/L人参皂苷Rb1处理后衰老细胞内SIRT1和eNOS的mRNA及蛋白表达水平增加,NO含量增加(P 0. 05),而PAI-1的mRNA和蛋白表达水平下降(P 0. 05);沉默SIRT1后,衰老细胞内e NOS的mRNA及蛋白表达减少,PAI-1的mRNA及蛋白表达增加,NO含量减少(P 0. 05);与SIRT1沉默组比较,在沉默SIRT1基础上加用人参皂苷Rb1后,e NOS和PAI-1表达水平及NO的含量未见明显变化。结论:人参皂苷Rb1可通过调控SIRT1/e NOS/NO通路延缓HUVECs复制性衰老。     

预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其机制

目的:研究预热应激对缺氧血管内皮细胞的保护作用及其发生机制,探索新的防治措施。方法:将血管内皮细胞分为:(1)缺氧组;(2)热应激组;(3)预热应激+缺氧组;(4)对照组。用全自动生化分析仪测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,以台盼兰染色法测定细胞死亡率,用Griess化学法测定细胞培养液中NO₂^-含量,以观察细胞NO生成量。结果:缺氧血管内皮细胞LDH的释放量和细胞死亡率显著大于对照组,39℃预热应激可使其分别降低29.47%和33.67%,41℃预热应激对缺氧细胞无明显保护作用。缺氧使血管内皮细胞NO生成量显著降低。39℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著高于缺氧组,41℃预热应激的缺氧血管内皮细胞NO生成量显著低于对照及相应的缺氧组;血管内皮细胞NO生成量与细胞LDH释放量及细胞死亡率呈显著负相关。结论:一定强度的预热应激可以对缺氧血管内皮细胞产生保护作用。细胞NO产生增多在这种保护作用机制中可能具有重要作用。