芳香烃受体在体外高糖环境诱导心肌肥大过程中的表达

目的:观察高糖环境诱导心肌细胞肥大过程中芳香烃受体(AhR)的表达情况,并探讨其可能的作用机制。方法:以体外培养的大鼠心肌细胞H9c2为研究对象,实验分为正常糖浓度组、高糖组、DMSO组和白藜芦醇(AhR拮抗剂)组。免疫荧光染色观察AhR的表达情况,罗丹明标记的鬼笔环肽染色细胞骨架并计算细胞表面积,DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)的生成水平,实时荧光定量PCR及Western blot法检测AhR、CYP1A1、心钠素(ANP)和脑钠素(BNP)的表达情况。结果:正常糖浓度环境下,AhR的表达主要定位于细胞质,高糖刺激时转入细胞核内。高糖刺激可促使心肌细胞肥大、心肌细胞内ROS生成增加,白藜芦醇阻滞AhR后,心肌肥大得到明显改善,同时ROS生成水平明显减少。与正常糖浓度组及白藜芦醇组相比,高糖组的AhR、CYP1A1、ANP和BNP mRNA及蛋白表达水平明显升高,上述指标高糖组与DMSO组相比差异无统计学显著性,而白藜芦醇组明显低于DMSO组。结论:在高糖诱导的心肌肥大过程,心肌细胞的AhR表达增加可能参与维持正常糖代谢过程;高糖环境可激活AhR转入细胞核内,上调CYP1A1的表达,并促进ROS的生成,这可能是高糖诱导心肌肥大的重要机制之一。     

HMGA2基因调控Notch信号通路对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:探讨下调HMGA2基因表达对高糖(HG)诱导的肾小管上皮细胞凋亡及Notch信号的影响。方法:分别用5、10、20和30 mmol/L的D-葡萄糖刺激人肾小管上皮HK-2细胞2 h及30 mmol/L的D-葡萄糖刺激HK-2细胞10 min、60 min和120 min,通过Western blot检测HMGA2蛋白的表达。将HK-2细胞分为4个处理组,即正常葡萄糖(NG)组、HG组、HG+si-HMGA2组和HG+NC组,其中siRNA转染参照Lipofectamine~(TM) 2000说明。处理细胞48 h,流式细胞术检测细胞凋亡率;活性氧簇(ROS)检测试剂盒测定细胞ROS含量;Western blot检测Notch1、Hes1、Bcl-2和Bax的蛋白表达。使用Notch信号通路抑制剂DAPT处理HK-2细胞,将细胞分为HG组、HG+DAPT组和HG+si-HMGA2+DAPT组,通过流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:不同浓度D-葡萄糖处理HK-2细胞及D-葡萄糖处理HK-2细胞不同时间均可明显上调HMGA2蛋白的表达,与5 mmol/L D-葡萄糖或0 min比较差异均具有统计学意义(P0.05)。与NG组比较,HG组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白的表达明显升高,Bcl-2/Bax表达明显降低,细胞凋亡率明显升高,ROS含量明显升高(P0.05);和HG组比较,HG+si-HMGA2组HMGA2、Notch1和Hes1蛋白表达明显降低,Bcl-2/Bax表达明显升高,细胞凋亡率降低,ROS含量明显降低(P0.05)。HG+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG组,而HG+si-HMGA2+DAPT组的细胞凋亡率明显低于HG+DAPT组(P0.05)。结论:下调HMGA2基因表达可通过调控Notch信号通路、降低细胞内ROS产生而抑制肾小管上皮细胞凋亡。     

miR-520a-5p靶向TGR5调控H9c2细胞中高糖引起的心肌肥大

目的 探讨高糖引起H9c2细胞心肌肥大的潜在机制.方法 通过高糖处理H9c2细胞后,检测其表面积大小以及心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平.通过高通量测序检测高糖处理H9c2细胞表达的差异miRNA.过表达差异miRNA后检测心脏肥大标志物ANP的表达水平.通过miRDB在线分析miRNA的潜在底物.结果 高糖可使心肌细胞H9c2的大小增加(P＜0.05)、表面积增加(P＜0.05).高糖处理后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P＜0.05).敲低miR-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P＜0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P＜0.05).过表达miR-520a-5p后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P＜0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P＜0.05).miR-520a-5p靶向TGR5的3端非编码区(P＜0.05).过表达miR-520a-5p后,TGR5表达水平下降.敲低TGR5后,TGR5表达水平上升.敲低TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均上升(P＜0.05)、心肌细胞H9c2表面积增加(P＜0.05).过表达TGR5后,心脏肥大标志物ANP,BNP,β-MHC的表达水平均下降(P＜0.05)、心肌细胞H9c2表面积减少(P＜0.05).结论 高糖处理后,miR-520a-5p的表达水平上升,miR-520a-5p通过靶向TGR5 mRNA的3端非编码区后降解了TGR5 mRNA,降低了TGR5的蛋白水平,随后引起了H9c2细胞的心肌肥大.     

白藜芦醇减轻异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞肥大

目的探讨白藜芦醇(RES)对异丙肾上腺素(ISO)诱导的大鼠心肌细胞肥大的保护作用及对心肌肥大时内质网应激相关因子GRP78和GRP94表达的影响。方法建立ISO诱导大鼠心肌细胞肥大模型,将乳鼠心肌细胞分为正常对照组、异丙肾上腺素组(加入ISO 0.3μg/m L作用48 h)、白藜芦醇干预组(RES 11.4μg/m L作用48 h)和白藜芦醇对照组。采用Leica 2Q500图像分析系统检测心肌细胞表面积和心肌肥大标志基因心房钠尿肽(ANP)表达,评价心肌细胞肥大程度;检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性和丙二醛(MDA)含量;实时定量PCR,检测ANP mRNA基因表达和Western blot分析GRP78和GRP94的蛋白表达。结果异丙肾上腺素注射液组与正常对照组比较,ISO作用心肌细胞48 h诱导心肌细胞肥大后,内质网应激相关因子GRP78和GRP94蛋白表达均增高(P0.01,P0.05);白藜芦醇干预组与异丙肾上腺素组比较,RES干预可以有效抑制ISO诱导的心肌细胞肥大(P0.05);同时降低GRP78和GRP94的蛋白表达(P0.05,P0.01),减少细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)的释放(P0.05)。结论 RES通过抑制心肌细胞内质网GRP78和GRP94表达,发挥对心肌肥大的保护作用。     

DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆的影响以及Notch信号通路的调节作用

目的探讨DAPT对脑缺血再灌注损伤小鼠学习记忆能力的影响,以及Notch信号通路的调控作用。方法 140只健康雄性小鼠随机分为假手术组(sham组)、模型组(I/R组)和DAPT组,每组再分为3d、7d、14d 3个亚组。取材前1 d Y型迷宫检测小鼠学习记忆能力;然后TTC染色测定脑梗死面积;比色法测定脑组织超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)含量;光学显微镜下观察海马CA3区形态结构变化;免疫荧光检测Hes1阳性细胞;Western blotting检测Hes5蛋白表达变化并进行定量分析。结果与sham组相比,I/R组和DAPT组小鼠学习记忆能力均下降,脑梗死面积增加,SOD活性降低,MDA含量升高(P<0.05)。与I/R组相比,DAPT组小鼠学习记忆能力提高,脑梗死面积减小,SOD活性升高,MDA含量降低(P<0.05)。光学显微镜下,sham组小鼠海马CA3区神经元结构未见异常;I/R组细胞水肿,染色较深,排列疏松,大量神经元缺失,出现核固缩现象;DAPT组细胞数量增加,染色变浅。与sham组相比,I/R组与DAPT组Hes1阳性细胞明显增多,Hes5蛋白表达增加;而DAPT各亚组较I/R各亚组Hes1阳性细胞减少,Hes5蛋白表达降低(P<0.05)。结论 DAPT对小鼠缺血再灌注损伤有改善作用,其作用机制可能与阻断Notch信号通路有关。     

白藜芦醇调控内质网应激对肥大心肌细胞的保护作用研究

<正>目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)诱导的大鼠肥大心肌细胞的保护作用及机制。方法:ISO建立乳鼠心肌肥大细胞模型,分为control组、ISO组、Res干预组和Res对照组。检测心肌细胞表面积和ANP基因表达;流式细胞仪检测细胞凋亡率;电镜观察心肌细胞超微结构;检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)含量;RT-     

Drp1在高糖诱导的大鼠心肌细胞肥大中的作用研究

目的:探讨发动蛋白相关蛋白1(Drp1)在高糖诱导的心肌细胞肥大模型中的表达及其作用机制。方法:原代乳大鼠心肌细胞培养,用高糖诱导建立心肌细胞损伤模型,将细胞分为对照组、高渗透压组、DMSO组、高糖组和高糖+线粒体分裂抑制剂1(Mdivi-1)组。用麦胚凝集素荧光染色检测单个心肌细胞表面积;用线粒体膜电位(MMP)检测试剂盒(JC-1)检测心肌细胞MMP水平;Western blot检测心肌细胞肥大标志物心房钠尿肽(ANP)及Drp1和Drp1在Ser616/Ser637位点的磷酸化蛋白[p-Drp1(Ser616/Ser637)]的蛋白水平。结果:与对照组相比,高渗透压组各检测结果均无显著差异(P>0.05)。与对照组和高渗透压组相比,高糖组心肌细胞的表面积均显著增大(P<0.01),MMP显著降低(P<0.01),而Drp1总蛋白表达无显著变化(P>0.05);心肌细胞ANP表达显著增加(P<0.01),p-Drp1(Ser616)水平显著升高(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)水平显著降低(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+Mdivi-1组ANP和p-Drp1(Ser616)蛋白水平显著降低(P<0.05),而p-Drp1(Ser637)的水平显著升高(P<0.05)。结论:高糖诱导心肌细胞肥大的机制,与Drp1在Ser616位点磷酸化水平升高、Ser637位点磷酸化水平降低导致的线粒体分裂增加有关。     

ECE1过表达通过eNOS/NO通路促进Ang Ⅱ诱导的体外培养大鼠心肌细胞肥大和凋亡

目的:探讨过表达内皮素转换酶1(ECE1)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的体外培养大鼠H9C2心肌细胞肥大和凋亡的影响。方法:采用AngⅡ作用于体外培养的H9C2心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型。将细胞分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ+质粒空载体(AngⅡ+NC)组和AngⅡ+ECE1过表达组。CCK-8法检测细胞活力;RT-qPCR检测ECE-1及心脏肥大因子心房钠尿肽(ANP)和脑钠肽(BNP)的mRNA表达水平;流式细胞术检测心肌细胞凋亡;Western blot检测ECE1、Bcl-2、Bax、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和p-eNOS的蛋白水平;硝酸还原酶法检测细胞中一氧化氮(NO)含量。结果:与空白对照组相比,AngⅡ组中ECE1表达、ANP和BNP mRNA表达、Bax蛋白表达及细胞凋亡显著增加(P<0.05),而细胞活力、NO含量及Bcl-2和p-eNOS蛋白水平显著下降(P<0.05);与AngⅡ组相比,AngⅡ+ECE-1过表达组中ECE1表达、ANP和BNP的mRNA表达、Bax蛋白表达及细胞凋亡进一步增加(P<0.05),而细胞活力、NO含量及Bcl-2和p-eNOS蛋白水平进一步下降(P<0.05)。结论:ECE1过表达可能通过调控eNOS/NO通路而促进AngⅡ诱导的体外培养大鼠H9C2心肌细胞发生肥大和凋亡。     

Notch信号通路对脑缺血大鼠神经干细胞移植后神经再生的影响

目的 探讨抑制Notch信号通路促进脑缺血大鼠神经干细胞（NSCs）移植后神经再生的机制。方法 采用大脑中动脉阻塞MCAO）方法构建局灶性脑缺血模型,体外培养NSCs,移植入纹状体缺血区。将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、移植组（移植神经干细胞）、氮-［氮-(3,5-二氟苯乙酰)-L-丙氨酰］-S-苯基甘氨酸丁酯］（DAPT）+移植组。采用HE染色观察各组大鼠神经元损伤程度,利用免疫组织化学、Western blotting检测各组大鼠脑组织中Notch1、Hes1及Hes5的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组神经元损伤严重,出现核固缩和核溶解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞表达明显增多,Notch1、Hes1及Hes5蛋白表达显著上调（P＜0.05）。与模型组相比,移植组和DAPT+移植组神经元损伤均不同程度缓解,Notch1、Hes1及Hes5阳性细胞均有部分表达,各项蛋白表达均有所降低（P＜0.05）;DAPT+移植组神经元损伤明显恢复,较移植组各项蛋白阳性细胞和蛋白表达进一步降低(P＜0.05)。结论 抑制Notch信号通路可促进脑缺血大鼠神经干细胞移植后的神经再生,其机制主要与下调Notch1、Hes1及Hes5的表达有关。     

Notch1/Hes1信号调控C/EBPα表达对AECII细胞增殖与分化的影响

目的:探讨Notch1/Hes1信号通路能否通过调控CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)的表达从而影响肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的增殖与分化功能。方法:体外培养人AECⅡ,将细胞随机分为对照组、激活剂组(加入Notch通路激活剂Jagged1蛋白500μg/L)和抑制剂组(加入Notch通路抑制剂DAPT 10μmol/L),于干预后24 h收获各组细胞。采用RT-qPCR和Western blot法分别检测Notch1、Hes1及C/EBPα的mRNA与蛋白表达水平;CCK-8法检测细胞活力;细胞计数检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期及分化。结果:与对照组相比,激活剂组Notch1、Hes1和C/EBPα的mRNA和蛋白表达显著增加(P0.05),促进AECⅡ从S期进入G_2/M期,增殖增加而分化减少(P0.05);抑制剂组Notch1、Hes1和C/EBPαmRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),AECⅡ被阻滞于G_0/G_1期,增殖减少而分化增加(P0.05)。结论:Notch1/Hes1信号可调控C/EBPα表达并能影响AECⅡ增殖与分化。     

白藜芦醇对抗D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老及其机制

 目的：探讨白藜芦醇对D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老的影响及其可能机制。方法：用不同浓度D-半乳糖（0、0.1、1、10和100 g/L）作用不同时间（0、12、24、48和72 h）诱导原代心肌细胞衰老,通过β-半乳糖苷酶染色法鉴定细胞衰老,MTT法检测细胞活力,FDG法半定量检测β-半乳糖苷酶含量,构建体外心肌细胞衰老模型。根据FDG的结果来评估不同浓度白藜芦醇（2、10、50和250 μmol/L）处理对衰老心肌细胞的影响,通过检测超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量及微管相关蛋白1轻链3（LC3）的变化来探讨白藜芦醇处理效应产生的可能机制。结果：与对照组相比,衰老组（10 g/L D-半乳糖处理48 h）β-半乳糖苷酶染色阳性率明显增加,β-半乳糖苷酶含量明显增加;SOD活性下降,MDA含量增加;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平下调;细胞活力无明显变化。与衰老组相比,白藜芦醇处理组（10 μmol/L及 50 μmol/L）β-半乳糖苷酶含量明显降低;SOD活性升高,MDA含量明显降低;LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平上调。结论：D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老伴随着氧化应激的增强及自噬水平的下调;白藜芦醇能减轻D-半乳糖诱导的心肌细胞衰老的程度,其保护效应产生的机制可能与白藜芦醇抗氧化应激效应及上调自噬水平相关。     

白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤后体外小胶质细胞极化的影响

目的 探讨白藜芦醇对氧糖剥夺/再复氧损伤（OGD/R）后小胶质细胞极化的影响。方法 对体外培养的N9小胶质细胞进行氧糖剥夺150 min，复氧培养24 h。实验分为正常组、对照组和白藜芦醇预处理24 h组。细胞计数盒-8(CCK-8)法检测细胞活力，硫代巴比妥酸（TBA）和水溶性四唑盐（WST-1）法分别检测细胞上清液中丙二醛（MDA）含量和总超氧化物歧化酶（SOD）活性，免疫荧光法检测核因子-E2-相关因子2（Nrf2）的核移位，Western blotting和Real-time PCR法检测CD206、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、Nrf2、血红素加氧酶1（HO-1）和苯醌还原酶（NQO1）蛋白和mRNA表达水平。 结果 OGD/R损伤后，白藜芦醇组细胞活力、SOD活力、CD206、Nrf2、HO-1、NQO1蛋白或mRNA表达均显著高于对照组（P<0.05,n=3），而MDA含量和iNOS蛋白或mRNA表达均显著低于对照组（P<0.05,n=3），白藜芦醇组Nrf2 蛋白较对照组明显移位到细胞核。 结论 白藜芦醇预处理可能通过增强Nrf2的激活，调控M1/M2型小胶质细胞极化，从而减轻OGD/R后小胶质细胞的氧化应激损伤。     

京尼平抑制高糖诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化应激及凋亡损伤

目的:探讨京尼平(genipin,GEN)对高糖损伤的大鼠心肌H9c2细胞的抗氧化作用和抑制细胞凋亡的机制。方法:体外培养大鼠心肌H9c2细胞,高浓度(50 mmol/L)葡萄糖处理H9c2细胞建立细胞损伤模型,分为正常糖对照组(NC组,葡萄糖浓度为5.6 mmol/L)、高糖损伤组(HG组,葡萄糖浓度为50 mmol/L)、正常糖+京尼平组(NC+GEN组)和高糖+京尼平组(HG+GEN组,京尼平浓度为10μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力;酶标法和WST-1法分别测定细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;微板法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;荧光探针DCF检测细胞内活性氧簇(ROS)水平;ELISA法检测核小体片段的聚集值;线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)检测细胞内线粒体膜电位变化;利用Western blot法检测线粒体内抗氧化酶锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD),以及早期凋亡蛋白细胞色素C(Cyt C)、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:与HG组比较,HG+GEN组细胞活力显著升高(P 0.05),细胞内MDA的含量及细胞上清液中LDH的活性明显降低(P 0.05),细胞内SOD活性升高(P 0.05),细胞内线粒体膜电位明显升高(P 0.05),ROS水平降低(P 0.05),核小体片段聚集程度显著降低(P 0.05)。HG组线粒体内抗氧化酶Mn-SOD比NC组降低(P 0.05),但线粒体内凋亡蛋白Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平比NC组显著升高(P 0.05),而HG+GEN组与HG组相比,Mn-SOD升高(P 0.05),Cyt C、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平显著降低(P 0.05)。结论:京尼平对高糖损伤的心肌H9c2细胞具有抗氧化保护作用和抑制细胞凋亡的作用。     

Notch1/Hes1信号通路在调控低分化胃腺癌细胞钙离子和侵袭能力中的作用

目的探讨Notch1/Hes1信号通路对胃癌细胞钙离子水平的影响及其与侵袭的关系。方法采用免疫组化法检测32例原发性低分化胃腺癌组织及32例癌旁正常组织中Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达。将MGC-803细胞分为对照组、Lipofectamine 2000组、Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组,采用Transwell法对比分析Notch1和Hes1基因沉默MGC-803细胞侵袭能力。应用Flou-4实验检测细胞钙离子水平。运用Western blot法检测Notch1、Hes1、Calpain-1和E-cadherin蛋白的表达。结果 32例低分化胃腺癌组织中Notch1、Hes1、Calpain-1表达(93.75%、96.88%、96.88%)明显高于癌旁正常组织(21.88%、18.75%、25.0%)(P<0.05),E-cadherin表达(25.0%)明显低于癌旁正常组织(93.75%,P<0.05)。MGC-803细胞Transwell和Flou-4实验可见,Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组癌细胞的迁移量明显低于对照组(P<0.05),癌细胞钙离子水平也明显低于对照组(P<0.05)。Western blot检测显示,Notch1 siRNA组和Hes1 siRNA组癌细胞Calpain-1和vimentin的相对含量低于对照组(P<0.05),而E-cadherin相对含量高于对照组(P<0.05)。结论低分化胃腺癌细胞侵袭能力与Notch1/Hes1蛋白及细胞钙离子有关,Notch1/Hes1信号通路参与Calpain-1相关的细胞钙离子调控。     

阿司匹林与尼莫地平预处理可改善脑缺血再灌注损伤

目的 探讨阿司匹林与尼莫地平预处理对脑缺血再灌注预后的影响。方法 80只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、阿司匹林预处理组以及阿司匹林+尼莫地平预处理组,每组20只。以线栓法建立大鼠脑缺血再灌注模型,各组大鼠均于模型制作前5 d开始灌胃给药,连续用药5 d。假手术组和模型组给予生理盐水;阿司匹林预处理组灌胃给予阿司匹林50 mg/kg;阿司匹林+尼莫地平预处理组灌胃给予阿司匹林50 mg/kg+尼莫地平10 mg/kg。缺血2 h及再灌注24 h后比较各组神经功能缺失评分,用TTC染色测定脑梗死体积,用ELISA法测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、血栓素B2和6-酮-前列腺素1α的含量,并通过Real-time PCR检测大鼠Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA表达以及通过Western blotting 检测Notch信号通路中Notch1、Jagged1及下游物质Hes1的表达水平。结果 与模型组相比,阿司匹林+尼莫地平预处理组神经功能缺损评分显著降低（P<0.05）,脑梗死体积显著缩小;阿司匹林预处理组和阿司匹林+尼莫地平预处理组脑组织SOD及6-酮-前列腺素1α显著高于模型组,MDA、血栓素B2及血栓素B2/6-酮-前列腺素1表达均低于模型组,且阿司匹林+尼莫地平预处理组变化更明显(P<0.05);阿司匹林预处理组和阿司匹林+尼莫地平预处理组的Notch1、Jagged1和Hes1 mRNA及蛋白表达水平显著低于模型组（P<0.05）,且阿司匹林+尼莫地平预处理组表达量低于阿司匹林预处理组（P<0.05）。结论 阿司匹林与尼莫地平两药合用时明显优于阿司匹林单独给药,可显著改善大鼠脑缺血再灌注损伤,这可能是通过影响Notch信号通路达到脑组织保护的作用。     

成纤维细胞生长因子19改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤

目的:研究成纤维细胞生长因子19(FGF19)对缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤的改善作用。方法:将心肌细胞H9c2分为Control组(常规方法培养)、H/R组(细胞经缺氧/复氧处理)、NC+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1后再经缺氧/复氧处理)和FGF19+H/R组(细胞转染pcDNA 3.1-FGF19后再经缺氧/复氧处理)。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白印迹(Western blot)检测各组FGF19 mRNA和蛋白表达水平,ELISA检测各组细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)含量和细胞中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、LDH、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Western blot检测各组细胞中活化的半胱天冬酶-3(C-Caspase-3)、活化的半胱天冬酶-9(C-Caspase-9)蛋白表达和胞浆中细胞色素C(Cyt C)蛋白水平,JC-1法检测各组细胞线粒体膜电位变化。结果:与H/R组和NC+H/R组比较,FGF19+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平均显著升高(P均<0.01)。H/R组与NC+H/R组心肌细胞中FGF19 mRNA和蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与Control组比较,H/R组细胞培养液中LDH水平升高(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平升高(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力降低(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平升高(P<0.01),线粒体膜电位降低(P<0.01)。与NC+H/R组比较,FGF19+H/R组细胞培养液中LDH水平降低(P<0.01),细胞中MDA和ROS水平降低(P<0.01),SOD、CAT和GSH-Px活力升高(P<0.01),细胞凋亡率、C-Caspase-3、C-Caspase-9和Cyt C蛋白水平降低(P<0.01),线粒体膜电位升高(P<0.01)。结论:FGF19可能通过减少细胞凋亡和氧化损伤改善缺氧/复氧心肌细胞H9c2损伤。