载神经生长因子纳米粒诱导神经干细胞分化为神经元及PI3K/Akt通路的影响

背景：课题组前期研究证实NGF-PEG-PLGA-NPs在体外有良好的缓释效能及生物活性,可以诱导PC12细胞向神经元样细胞分化。 目的：探讨NGF-PEG-PLGA-NPs诱导胎鼠大脑隔区来源神经干细胞分化为神经元的可行性及其对PI3K/Akt信号通路的影响。 方法：采用优化处方,复乳化溶剂扩散法制备NGF-PEG-PLGA-NPs。设对照组、NGF组、NGF-PEG-PLGA-NPs组、LY294002组、LY294002+NGF组、LY294002+NGF-PEG-PLGA-NPs组,诱导神经干细胞分化为神经元,细胞免疫荧光染色对神经元进行鉴定,Werstern-blotting检测PI3K/Akt信号通路Akt磷酸化水平。 结果与结论：对照组、NGF组、NGF-PEG-PLGA-NPs组、LY294002组、LY294002+NGF组、LY294002+NGF-PEG-PLGA-NPs组β-Tubulin Ⅲ阳性神经元分化率分别为(22.80±2.58)%,(35.80±3.98)%,(35.40±5.77)%,(26.60±3.87)%,(21.20±2.59)%,(25.80±7.22)%。NGF组与NGF-PEG-PLGA-NPs组神经元分化率差异无显著性意义(P > 0.05),但两组神经元分化率均高于其他各组(P < 0.05)。Western blotting检测结果显示：NGF组及NGF-PEG-PLGA-NPs组Akt磷酸化水平差异无显著性意义(P > 0.05),但均高于其他各组(P < 0.05);LY294002+NGF组及LY294002+NGF-PEG-PLGA-NPs组Akt磷酸化水平与对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05),但均高于LY294002组(P < 0.05)。结果表明NGF-PEG-PLGA-NPs可促进神经干细胞分化为神经元,其可能机制与促进PI3K/Akt信号通路Akt的磷酸化有关。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

Gas6经PI3K/Akt通路对缺氧复氧诱导 H9c2细胞凋亡的影响

目的: 观察外源性重组人生长停滞特异性蛋白6(Gas6)对缺氧复氧诱导的H9c2心肌细胞系凋亡的影响,并初步探讨其与磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路的关系。方法: 对体外培养的H9c2细胞进行缺氧复氧(3 h/3 h),模拟大鼠心肌缺血再灌注模型,将细胞随机分为4组:正常对照组(control组)、缺氧/复氧组(A/R组)、缺氧/复氧+ Gas6预处理组(A/R+Gas6组)及缺氧/复氧+ Gas6预处理+PI3K/Akt特异性阻断剂LY294002干预组(A/R+Gas6+LY294002组)。分别采用MTT法检测心肌细胞活力,生化法检测细胞中caspase-3活性水平,Annexin V/PI 双染法及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western免疫印迹法检测胞内磷酸化Akt(p-Akt)蛋白含量表达情况。结果: A/R组较control组细胞活力下降,caspase-3活性、凋亡率及p-Akt水平均较control组增加(P<0.05)。但经Gas6预处理后,细胞活力及p-Akt表达水平较A/R组显著增加,caspase-3活性、凋亡率均减少(P<0.05),而Gas6的这些作用能被PI3K/Akt阻断剂抑制。结论: Gas6能减少缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡,此作用机制可能是通过提高Akt磷酸化水平而激活PI3K/Akt通路实现的。     

米诺环素通过调控PI3K/Akt通路抑制硝普钠诱导的PC12细胞凋亡

 目的： 探讨PI3K/Akt信号通路在米诺环素（minocycline,MC）抑制硝普钠(sodium nitoprusside,SNP)诱导的PC12细胞凋亡中的作用。方法：将体外培养的PC12细胞分为4组：空白对照组、SNP组、MC+SNP组和PI3K抑制剂LY294002+ MC+SNP组。用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测不同时点（0.5、1、2、3 h）各处理组PI3K/Akt通路蛋白p-Akt和Akt的表达。结果：SNP处理PC12细胞24 h能抑制细胞生长,加入10 μmol/L MC预处理30 min可明显提高细胞活力,降低细胞凋亡率（P<0.05）,抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。MC组的p-Akt表达高于其它组,而加入LY294002后可阻断MC的上述效应。结论：MC可通过调控PI3K/Akt通路抑制SNP诱导的PC12细胞凋亡。     

胰岛素样生长因子2通过磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B信号通路调控人卵巢颗粒细胞增殖的机制

目的 检测胰岛素样生长因子2（IGF2）对人卵巢颗粒细胞（KGN细胞）增殖的调控作用及作用机制。 方法 将体外培养的KGN细胞,分不同浓度IGF2处理组（对照组和25 μg/L、50 μg/L、100 μg/L IGF2组)和磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路干预组（以LY294002干预处理将细胞分对照组、100μg/L IGF2组、LY294002组和IGF2+LY294002组）。采用MTS和5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EdU)法检测IGF2对KGN细胞增殖的影响,ELISA法检测细胞培养液上清中雌激素、孕激素的含量,Western blotting法检测各组胰岛素样生长因子受体1（IGF1R）、蛋白激酶B（Akt）、磷酸化的蛋白激酶B（p-Akt）及CYP19A1蛋白表达。 结果 随着IGF2的浓度梯度增高,KGN细胞的增殖率及雌激素、孕激素的分泌量逐渐升高,以 100 μg/L IGF2处理组的细胞增殖率和激素水平最高 (P<0.01),而抑制PI3K/Akt信号通路,细胞增殖率和激素的分泌量均明显降低(P<0.01);Western blotting结果显示,IGF1R、p-Akt及CYP19A1 蛋白表达水平随着IGF2的浓度梯度逐渐升高(P<0.05),而干预PI3K/Akt信号通路可影响上述蛋白的表达,与对照组相比,IGF2组和IGF2+ LY294002组IGF1R及p-Akt蛋白表达均明显升高（P<0.01）,CYP19A1在IGF2组明显升高（P<0.01）,LY294002组p-Akt及 CYP19A1蛋白明显降低（P<0.05）,IGF1R的表达差异无统计学意义。与IGF2组相比,IGF2+LY294002组p-Akt及CYP19A1蛋白表达降低（P<0.01）,IGF1R的表达差异无统计学意义,LY294002组p-Akt 及CYP19A1蛋白表达量均显著降低（P<0.01）。 结论 IGF2 可能由IGF1R介导通过PI3K/Akt 信号通路促进人卵巢颗粒细胞的增殖及分泌功能。     

常氧和低氧条件下介导大鼠神经干细胞分化的信号通路分析

目的:观察常氧和低氧环境下大鼠大脑皮层神经干细胞(NSCS)体外分化情况,并比较PI3K/Akt、JNK和Notch三条信号通路在不同氧环境下神经干细胞分化时所发挥作用的异同。方法:将体外悬浮培养48 h的神经干细胞转移至4%低氧和常氧中贴壁培养。更换培养基诱导分化,同时加入LY294002(PI3-K/Akt抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和DAPT(Notch抑制剂),48 h后行β-微管蛋白Ⅲ(β-TubulinIII)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫细胞荧光染色。对神经元和星形胶质细胞进行计数并分别计算各占的比例。结果:(1)低氧对照组神经元所占比例高于常氧对照组,星形胶质细胞低于常氧对照组,均具有统计学差异(P<0.01)。(2)在常氧环境下,LY294002组神经元所占比例显著低于常氧DMSO对照组(P<0.01),星形胶质细胞所占比例显著高于常氧DMSO对照组(P<0.01);和常氧DMSO组相比,SP600125组和DAPT组神经元和星形胶质细胞所占比例均无显著差异。(3)在低氧环境下,和低氧DMSO组比较,LY294002组和SP600125组神经元和星形胶质细胞所占比例均无显著性差异;DAPT组神经元所占比例显著高于常氧DMSO对照组(P<0.01),星形胶质细胞所占比例低于常氧DMSO对照组,无显著性差异。结论:PI3K/Akt介导了常氧条件下神经干细胞向神经元方向的分化;低氧可能通过抑制Notch信号通路促进神经干细胞向神经元方向分化。     

APS通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖

目的观察APS是否通过PI3K/AKT信号通路促进神经干细胞增殖。方法将神经干细胞,随机分为对照组、APS(5%)组、APS(5%)+LY294002组和LY294002组,用间接免疫荧光法检测Nestin和Brdu;CCK-8检测细胞增殖;Elisa检测VEGF、FLK-1含量;Western blot法检测FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达。结果 APS可以提高LY294002干预后神经干细胞增殖(P0.05),提高VEGF、FLK-1含量(P0.05),提高FLK-1、PI3K、P-Akt蛋白表达(P0.05)。结论 APS可能通过促进Akt磷酸化,活化PI3K/AKT信号通路,调节PI3K/AKT信号通路下游靶基因,促进神经干细胞增殖。     

人甲壳质酶蛋白40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞的凋亡

文题释义：膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)：常发生在中老年人群，其病理过程涉及软骨基质退行性病变、软骨细胞性状显著性改变和数量明显减少。在外力及内部环境改变等因素影响下，软骨细胞外基质、软骨细胞及软骨下骨的合成和降解动态平衡出现紊乱，软骨细胞大量凋亡使得软骨修复、重塑等稳定状态出现异常，上述情况均可诱导膝骨关节炎的发生。人甲壳质酶蛋白40(YKL-40)：是一种广泛存在于关节滑膜细胞、软骨细胞中的软骨糖蛋白，具有多种生物学功能作用：①促进软骨细胞、成骨细胞的增殖生长及分化；②促进新生血管组织的形成；③调控细胞外基质的重构过程；④协助细胞适应生长环境的显著性改变及缺氧等病理损伤，此外在软骨细胞凋亡方面也发挥一定作用。背景：由于PI3K/Akt信号通路与骨组织生理代谢之间存在着密切的联系，而人甲壳质酶蛋白40(YKL-40)对乳腺癌发病机制中的PI3K/Akt信号通路具有一定调控作用，由此推测YKL-40可能通过PI3K/Akt信号通路对膝骨性关节炎软骨细胞凋亡进行调控。 目的：研究YKL-40通过PI3K/Akt信号通路调控膝骨性关节炎兔软骨细胞凋亡的作用机制。方法：①将新西兰大白兔随机分为2组，膝骨性关节炎模型组采用前交叉韧带离断术制作右后膝骨性关节炎动物模型，正常对照组仅切开右后膝关节囊，造模后第6周取材并分离软骨细胞，予以软骨组织苏木精-伊红染色及Mankin组织学评分，同时免疫组化染色检测软骨细胞Ⅱ型胶原表达；②正常对照组兔第2代软骨细胞为正常对照组；将膝骨性关节炎模型组兔第2代软骨细胞分为4组，模型组仅予以含体积分数10%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养，模型+YKL组培养基中加入100 μg/L YKL-40干预，模型+LY组培养基中加入50 µmol/L PI3K通路抑制剂LY294002干预，模型+YKL+LY组：培养基中加入100 μg/L YKL-40和50 µmol/L LY294002干预，采用免疫印迹法检测各组软骨细胞Ⅱ型胶原、基质金属蛋白酶13、Akt、p-Akt、P53、Bcl-2蛋白表达水平。结果与结论：①经软骨组织苏木精-伊红染色、Mankin组织学评分及软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色证实，膝骨性关节炎动物模型构建和软骨细胞培养均获得成功；②模型组Ⅱ型胶原、Bcl-2、p-Akt蛋白表达明显低于正常对照组(P < 0.05)，基质金属蛋白酶13、P53蛋白表达明显高于正常对照组(P < 0.05)；与模型组比较，模型+YKL组上述指标得到明显改善(P < 0.05)，而模型+LY组上述指标则进一步恶化(P < 0.05)，模型+YKL+LY组上述指标与模型组比较无显著性差异(P > 0.05)，但与模型+YKL组和模型+LY组比较有显著性差异(P < 0.05)；各组Akt蛋白表达水平比较无显著性差异(P > 0.05)。提示：YKL-40可通过激活活化PI3K/Akt信号通路，起到抑制兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡，加快软骨损伤修复和延缓软骨退行性改变的作用，可作为临床治疗膝骨性关节炎的新作用靶点。ORCID: 0000-0002-7889-445X(田胜兰) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

羟基红花黄色素A减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤

目的观察羟基红花黄色素A(HSYA)对乳鼠原代心肌细胞缺氧复氧(A/R)损伤的保护作用及其与磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶3β(PI3K/Akt/GSK3β)信号通路的关系。方法分离大鼠的乳鼠心肌细胞,孵育48 h,待细胞贴壁后,分为:对照组(Con组)、缺氧复氧组(A/R组)、HSYA处理组(A/R+H组)、PI3K抑制剂(LY294002)处理组(A/R+L组)和HSYA+LY294002处理组(A/R+H+L)。测培养基上清液LDH;流式细胞仪检测凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Bax、Akt、p-Akt(Ser473)、GSK3β和p-GSK3β(Ser9)的蛋白表达水平。结果与对照组比较,A/R后LDH释放量和凋亡率增加(P0.001),促凋亡蛋白Bax表达增加(P0.001),而抗凋亡蛋白Bcl-2、p-Akt(Ser473)、p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P0.001);HSYA处理后LDH释放量和凋亡率降低(P0.001),Bax表达减少(P0.001),而Bcl-2、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达增加(P0.001);与A/R+H组比较,A/R+H+L组Bax表达增加(P0.001),而Bcl-2、p-Akt(Ser473)和p-GSK3β(Ser9)蛋白表达减少(P0.001)。结论 HSYA可以通过调控PI3K/Akt/GSK3β信号通路保护大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤。     

姜黄素联合LY294002对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的抑制作用

目的探讨姜黄素与PI3K抑制剂LY294002及两者联合用药对鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3的增殖抑制作用及其作用机制。方法体外培养鼠卵巢癌转基因细胞系T1、T2、T3,0～80μmol/L姜黄素与相同浓度LY294002单独及联合用药分别作用12、24、48 h,MTT方法检测T1、T2、T3细胞的增殖活性;Western blot法检测细胞内Akt、p-Akt蛋白表达水平。结果姜黄素能显著抑制T1、T2、T3细胞增殖,呈时间与剂量依赖性,其中对T2、T3抑制作用更明显;姜黄素明显降低T2、T3细胞内p-Akt蛋白的表达,对Akt蛋白表达改变不明显;姜黄素与LY294002联合用药明显加强姜黄素对T2、T3细胞增殖抑制作用。结论姜黄素能显著抑制Akt转基因型细胞系T2和T3的生长;小剂量PI3K抑制剂LY294002即能明显增强其对Akt转基因型细胞系T2、T3的增殖抑制作用,其作用机制可能是通过PI3K/Akt通路下调p-Akt表达来实现的。     

奥氮平对骨髓间充质干细胞成脂分化的作用及机制

目的探讨第2代抗精神病药物(SGA)奥氮平(olanzapine)对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体外脂肪分化的影响及其作用机制。方法培养小鼠BMSCs,MTT法检测不同浓度奥氮平对BMSCs增殖的影响;通过油红O染色观察细胞形态,Western blotting检测脂肪分化标志基因蛋白αP2和C/EBPβ的表达,Real-time PCR检测成脂相关基因Leptin、C/EBPα和TNF-α的mRNA表达情况;同时Western blotting检测Akt信号通路上下游相关分子的表达水平及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt特异性阻断剂对小鼠BMSCs脂肪分化的影响。结果 MTT法结果显示,20μmol/L奥氮平对BMSCs的毒性最小;油红O染色可见加入奥氮平的细胞内脂肪滴明显多于对照组;Western blotting结果显示,αP2和C/EBPβ的表达水平较对照组上升了36%(P0.01)和25%(P0.05);Realtime PCR结果显示,Leptin、C/EBPα和TNF-α的表达水平较对照组分别上升68%(P0.001)、79%(P0.01)和60%(P0.01),均具有统计学意义;Western blotting检测结果显示,p-Akt的含量明显高于对照组,磷酸化糖原合成激酶3β(p-GSK-3β)的表达随着p-Akt表达的增加逐渐减少;加入PI3K/Akt特异性阻断剂(LY294002)后αP2和C/EBPβ的表达受到抑制,细胞中的脂肪滴也明显减少。结论奥氮平可能通过促使PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化水平升高来促进小鼠BMSCs的脂肪分化。     

低氧预处理通过激活AKT通路提高老年hBM-MSCs对氧化应激损伤的耐受能力

 目的:探讨低氧预处理对老年人骨髓间充质干细胞(hBM-MSCs)的保护作用,为提高老年自体干细胞移植治疗效果提供实验支持。方法:老年hBM-MSCs于低氧培养箱中培养24 h进行低氧预处理,实验分为年轻hBM-MSCs组(young组),老年hBM-MSCs组(old组)及低氧预处理老年hBM-MSCs组(old+hypoxia组)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min建立细胞氧化应激模型,50 μmol/L LY294002作用2 h阻断PI3K/AKT信号通路,BrdU掺入实验检测细胞增殖能力; CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达水平和AKT磷酸化水平。结果:BrdU掺入实验显示低氧预处理的老年hBM-MSCs细胞阳性率为39.85%±3.45%,与old组相比增殖能力显著提高(P<0.05)。300 μmol/L H₂O₂作用30 min诱导细胞氧化应激后,old+hypoxia组与old组比较,细胞活力显著提高(P<0.05),凋亡相关蛋白Bax表达量显著降低(P<0.05),抑制凋亡的Bcl-2蛋白表达量显著增高(P<0.05),且AKT磷酸化水平显著增高,差异有统计学显著性(P<0.05);应用LY294002抑制PI3K/AKT信号通路后,细胞活力下降(P<0.05)。结论:低氧预处理可以通过激活AKT信号通路提高老年人骨髓间充质干细胞活力及增殖能力。     

Ghrelin对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡的影响及机制

 目的 探讨ghrelin能否抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡及其与PI3K/Akt通路的关系。 方法 大鼠主动脉内皮细胞在分别在含或不含0.3mM棕榈酸的DMEM培养基中孵育,培养基中加或不加ghrelin及PI3K/Akt的阻断剂LY294002,流式细胞仪Annexin Ⅴ/PI法检测凋亡,分光光度计检测caspase-3活性,Western blot检测总Akt及磷酸化Akt。 结果0.3mM棕榈酸作用24小时增加大鼠主动脉内皮细胞凋亡,Ghrelin抑制棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡。棕榈酸干预内皮细胞24小时能显著抑制Akt的磷酸化,加入ghrelin可引起Akt的活化。Ghrelin引起的Akt的活化能够显著地被PI3K/Akt阻断剂LY294002所阻断,而且LY294002能够阻断ghrelin对棕榈酸诱导的内皮细胞凋亡的保护作用。 结论 Ghrelin能够抑制棕榈酸诱导的大鼠主动脉内皮细胞凋亡,ghrelin的抗凋亡作用至少是部分通过PI3K/Akt通路起作用的。     

S100A6通过PI3K/Akt信号通路促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移

 目的：研究PI3K/Akt信号通路在S100A6介导的人骨肉瘤细胞143B的增殖和迁移中的作用。方法：首先制备重组的人S100A6蛋白（recombinant human S100A6, rhS100A6）;rhS100A6与PI3K抑制剂（LY294002和wortmannin）单独或同时处理143B细胞,其中rhS100A6的终浓度为30 mg/L,LY294002和wortmannin的终浓度分别为10 μmol/L和05 μmol/L;采用Western blotting分析143B细胞中PI3K/Akt信号通路相关分子总Akt（total Akt, t-Akt）及磷酸化Akt（phosphorylation of Akt, p-Akt）蛋白的表达变化,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移。 结果：（1）成功制备rhS100A6蛋白,rhS100A6显著增强143B细胞的增殖和迁移能力（P<005）;（2）rhS100A6上调143B细胞中Akt的磷酸化;（3）与rhS100A6组相比,rhS100A6与LY294002或wortmannin联合处理组143B细胞的p-Akt减少（P<005）,细胞的增殖和迁移能力降低,在不同时点细胞的增殖率下降103%～697%,细胞迁移率下降379%～416%,差异均有统计学意义（P<005）。 结论：S100A6促进人骨肉瘤细胞143B增殖和迁移的作用至少部分是通过激活PI3K/Akt信号通路实现的。     

磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（PI3 K／Akt）通路在缺氧血管内皮细胞凋亡中的作用。方法（1）常规培养人血管内皮细胞株EA．hy926细胞,取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为两组：正常对照组：置于气体成分体积分数5％二氧化碳培养箱中常规培养;缺氧组：置于气体成分体积分数1％氧气、5％二氧化碳和94％氮气的三气培养箱中进行缺氧培养。采用蛋白质印迹法检测正常对照组内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞中Akt活化状态（以pAkt／Akt值表示）,流式细胞仪检测细胞凋亡率。（2）另取部分人血管内皮细胞株EA．hy926按照随机数字表法分为4组：正常对照组,缺氧组：培养方法同前,正常对照＋阻断剂组：用含50μmol／L的LY294002（PI3 K／Akt阻断剂）的培养液常规培养内皮细胞;缺氧＋阻断剂组：用含50μmol／L 的LY294002的培养液缺氧处理内皮细胞。均于培养3 h后收集内皮细胞,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率。对Akt活化状态与细胞凋亡率行单因素方差分析和LSD-t检验。结果（1）正常对照组细胞和缺氧处理3、6、24 h的内皮细胞pAkt／Akt值分别为0．67、0．79、0．34和0．35;正常内皮细胞和缺氧处理3、6、24 h 的内皮细胞凋亡率分别为（3．11±0．21）％、（4．57±0．85）％、（6．93±0．58）％、（9．96±2．62）％,组间比较差异有统计学意义（F＝8．96,P＝0．030）。与正常对照组细胞比较,缺氧处理3、6 h的内皮细胞凋亡率升高,差异无统计学意义（t＝1．03、2．70,P＝0．360、0．054）;缺氧处理24 h的内皮细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（t＝4．99,P＝0．008）。（2）正常对照组、正常对照＋阻断剂组、缺氧组、缺氧＋阻断剂组培养3 h后细胞凋亡率为（2．39±0．50）％、（5．77±1．21）％、（3．76±1．05）％     

PI3K/Akt在线粒体ATP敏感性钾通道开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞FKN表达中的作用 

目的 观察PI3K/Akt信号在线粒体ATP敏感性钾通道（mito-KATP）开放抑制缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞（MMECs）fractalkine(FKN)表达中的作用。方法 培养SD大鼠离体MMECs,建立缺氧复氧损伤模型24皿,随机分为4组( EM>n /EM>=6)：正常对照组（N组）、缺氧/复氧组（H/R组）、二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（DZ组）、LY294002+二氮嗪预处理+缺氧/复氧组（LY294002+DZ组）。DZ组加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,LY294002+DZ组在加入 100μmol/L LY294002预处理2h后再加入100μmol/L二氮嗪预处理2h,然后和缺氧复氧组同样进行缺氧2h、复氧2h。Hoechst染色观察凋亡细胞显微结构,四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定细胞活力,RT-PCR检测Akt和FKNmRNA水平, Western blotting检测Akt蛋白水平。结果 与N 组比较,H/R组细胞增殖率显著降低（EM>P /EM><0.01）、凋亡率显著升高（EM>P/EM> <0.01）, FKN mRNA和FKN蛋白表达显著增加（P <0.01）、Akt mRNA和Akt蛋白升高（ EM>P/EM> <0.05）。与H/R组比较,DZ组细胞增殖率显著升高（EM>P/EM> <0.01）、凋亡率显著降     

黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞PI3K/Akt/eNOS信号通路的影响

背景：前期研究证实黄芪通过P38MAPK通路促进内皮祖细胞增殖,其影响是否通过PI3K/Akt/eNOS途径实现？ 目的：观察黄芪多糖对2型糖尿病患者外周血内皮祖细胞蛋白激酶B、内皮型一氧化氮合酶表达的影响。 方法：采用密度梯度离心法获取糖尿病患者外周血单个核细胞,培养7 d后鉴定内皮祖细胞。观察0,50,200,800,3 200,6 400 mg/L黄芪多糖分别干预6,12,24,48 h对内皮祖细胞影响的量效和时效关系;用黄芪多糖及黄芪多糖与PI3K抑制剂LY294002联合干预糖尿病患者内皮祖细胞,Western blot检测磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达水平。以未进行任何处理健康人内皮祖细胞作为对照组。 结果与结论：糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力较对照组明显下降(P  < 0.05)。黄芪多糖显著增加糖尿病患者内皮祖细胞的增殖能力,当黄芪多糖在200~800 mg/L质量浓度范围,干预6~24 h可呈时间及剂量依赖性增强内皮祖细胞的增殖能力(P < 0.01),并呈剂量依赖性升高内皮祖细胞磷酸化Akt及磷酸化内皮型一氧化氮合酶的表达(P < 0.05);PI3K抑制剂LY294002能阻断黄芪多糖诱导的Akt、内皮型一氧化氮合酶的磷酸化(P < 0.05)。说明黄芪多糖通过激活PI3K/Akt/eNOS信号通路促进内皮祖细胞增殖和向内皮细胞的分化。     

南蛇藤醇抑制宫颈癌细胞生物学行为的机制研究

目的　探讨南蛇藤醇抑制宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。 方法　将正常培养HeLa细胞分为对照组、南蛇藤醇低、中、高剂量组（终浓度分别为4 μmol/L、8 μmol/L和12 μmol/L）、阳性对照组（顺铂,终浓度为10 μmol/L）、LY294002组（LY294002,终浓度为20 μmol/L）和（南蛇藤醇+LY294002）组（南蛇藤醇和LY294002,终浓度分别为12 μmol/L和20 μmol/L）。MTT法检测各组细胞存活情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;Transwell检测细胞的侵袭;蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/NF-κB信号通路的表达;采用皮下注射HeLa细胞建立裸鼠模型,观察南蛇藤醇（120 mg/kg）对裸鼠移植瘤体积和重量的影响。 结果　与对照组相比,南蛇藤醇组、阳性对照组和LY294002组HeLa细胞的相对增殖率、侵袭细胞数均明显下降（P<0.001）,细胞凋亡率明显升高（P<0.001）,p-PI3K、p-AKT、NF-κB p65蛋白表达明显下调（P<0.001）,且随着南蛇藤醇浓度升高,其作用增强;与LY294002组相比,（南蛇藤醇+LY294002）组HeLa细胞的相对增殖率和侵袭细胞数明显下降（q=10.182,q=10.217,P均<0.001）,细胞凋亡率明显升高（q=23.636,P<0.001）;与对照组相比,南蛇藤醇组裸鼠体重、移植瘤的体积和重量明显下降（q=4.100,P<0.020;q=13.501,P<0.001;q=5.078,P=0.005）。 结论　南蛇藤醇可能通过抑制HeLa细胞的PI3K/Akt/NF-κB信号通路,抑制其恶性生物学行为。     

Insulin rescues ES cell-derived neural progenitor cells from apoptosis by differential regulation of Akt and ERK pathways

Transplantation of embryonic stem (ES) cell-derived neural progenitor cells (ES-NPCs) is one promising technology for the treatment of spinal cord injury. Promoting ES-NPC survival at the lesion site is critical for the successful treatment. We tested the role of insulin in promoting mouse ES-NPC survival. Cultured ES-NPCs survived when maintained in normoxia but underwent apoptosis when exposed to hypoxia. Insulin rescued ES-NPCs from hypoxia-induced cell death. This effect could be blocked by the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/Akt pathway inhibitor LY294002. In contrast, mitogen-activated protein kinase (MAP)/extracellular-signal-regulated kinase (ERK) pathway inhibitor U0126 potentiated insulin-mediated survival. Immunoblots revealed that insulin upregulated activation of Akt and inhibited ERK activation through the PI3K pathway. In addition, we showed that insulin reduced the activation of caspase-3, the key executor of apoptosis. In summary, our data suggest that insulin prevent apoptosis in ES-NPCs by activating Akt and inhibiting ERK through the PI3K pathway.