新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

目的：构建IL-24真核表达质粒，并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法：采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞，再经激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）观察其表达，用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力，用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果：pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后，LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制．G2-M期细胞比例增高，细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比．IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制（P〈0.05）。结论：IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长，具有明显的抗肿瘤作用。     

小鼠B7-H3对T细胞的体外正性协同刺激作用

小鼠B7-H3作为协同刺激分子的生物学功能至今尚未明确.本文拟通过构建小鼠B7-H3基因的真核表达载体,获取稳定表达小鼠B7-H3基因的细胞株,并进一步通过体外实验研究其对T淋巴细胞体外活化及功能的调节作用.作者运用RT-PCR技术从小鼠肝脏组织中获得全长小鼠B7-H3基因,并构建真核表达载体pIRES2-B7-H3,...     

B7-H3Ig重组蛋白的真核表达及其对T细胞的作用

目的 真核表达人B7-H3Ig重组蛋白,探讨B7-H3信号在T细胞中的作用.方法 重叠PCR方法构建B7-H3Ig重组基因,进而获得重组逆转录病毒载体pGEZ-Term/B7-H3Ig,转染L929细胞建立L929/B7-H3Ig基因转染细胞株,纯化获得B7-H3Ig重组蛋白.体外激发型CD3单克隆抗体(mAb)刺激活化T细胞过程中加入B7-H3Ig,观察其对T细胞增殖以及IL-10与IFN-γ分泌的作用.结果 B7-H3Ig经Protein G柱纯化后纯度＞90％,浓度达0.559 mg/mL.重组蛋白结合实验表明CD3 mAb刺激48 h后T细胞表面B7-H3受体表达达到高峰.B7-H3Ig以剂量依赖方式促进CD3 mAb诱导的T细胞体外增殖与IL-10和IFN-γ分泌.结论 成功建立真核表达人B7-H3Ig基因转染细胞株,B7-H3Ig协同刺激T细胞增殖与IL-10和IFN-γ分泌.     

小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的表达及其生物学活性的研究

目的:制备B7-H3-Fc融合蛋白,研究其对T细胞的共刺激作用。方法:首先采用PCR技术分别从pMD19-T/小鼠B7-H3和pMD19-T/hIgG1(Fc)重组载体中扩增出小鼠B7-H3胞外段基因和人IgG1重链Fc恒定区基因。通过重叠PCR技术将2段基因连接成B7-H3-Fc,经EcoR I和BglII双酶切后插入真核表达载体pIRES2-EGFP构建成pIRES2-EG-FP/B7-H3-Fc重组载体。脂质体法转染CHO细胞,经G418加压筛选能稳定分泌表达小鼠B7-H3-Fc融合蛋白的基因转染细胞,并经Western blot鉴定。该转基因细胞无血清培养后,收集细胞上清、超滤浓缩后行经Protein G柱纯化,获得纯品B7-H3-Fc融合蛋白。通过CCK-8以及ELISA方法检测小鼠B7-H3-Fc融合蛋白对T细胞体外增殖及细胞因子分泌的影响。结果:成功地构建了能稳定表达B7-H3-Fc融合蛋白基因的CHO转基因细胞株,该融合蛋白能够剂量依赖性地促进T细胞体外增殖及IL-2和IFN-γ等细胞因子分泌。结论:本研究提示B7-H3作为重要的共刺激分子,在调节T细胞免疫应答中发挥了正性共刺激作用。     

通过体内传代和流式分选建立稳定转染MUC1 VNTR的B16细胞株

目的 获得具有较好致瘤性、在动物体内保留表达外源基因MUC1 VNT R(mucin 1,variable number tandem repeats)能力的稳定转染细胞株B16-GFP-MUC1,供MUC1靶向药物研究中体内抑瘤实验所用到的肿瘤模型.方法 用脂质体转染的方法和有限稀释法获得单克隆细胞株;将该细胞株进行体内传代后,流式分选GFP阳性细胞群,并对分选后细胞用有限稀释法进行单克隆化.用流式细胞仪和共聚焦荧光显微镜观察各时期细胞克隆的GFP表达情况 .结果 脂质体转染方法得到的在G418压力选择下存在的细胞B16-1,其G FP阳性细胞比率最高为80%左右;致瘤性较差,75 d内仅87.5%小鼠出瘤;体外的稳定性观察中,在无抗生素的培养液中观察5周,其阳性率降至20%左右;经过体内接种后仅有10%左右的肿瘤细胞保留了外源基因的表达.而经过体内传代和流式分选后得到的单克隆细胞群B16-39,其GFP阳性细胞比率＞90%;致瘤性为20 d内100%小鼠出瘤;体外培养8周,GFP阳性的细胞比率＞90%; 体内剥离后的肿瘤细胞的GFP阳性细胞比率均＞90%.结论 对于用于体内动物模型的稳定转染细胞,通过体内传代,流式分选并单克隆化,是获得致瘤性好,体内体外较为稳定的稳定转染细胞株的一个可行方案.     

靶向上皮性卵巢癌SKOV3细胞ZEB1-shRNA重组体构建及功能研究

目的:利用RNA干扰技术,降低人上皮性卵巢癌SKOV3细胞中锌指增强子结合蛋白1(ZEB1)基因的表达,观察ZEB1低表达对SKOV3细胞的生长影响。方法:用pSUPER-EGFP1载体构建针对人ZEB1基因的干扰质粒shZEB1,脂质体转染SKOV3细胞,G418筛选稳定转染细胞株,通过RT-PCR和Western blot检测ZEB1在SKOV3细胞中表达。用克隆形成、划痕试验、RT-PCR和致瘤试验分别检测转染细胞克隆能力、迁移力、miR-200c表达水平和在裸鼠的致瘤性。结果:成功构建shZEB1,稳定转染细胞株shZEB1-SKOV3内ZEB1表达下降,导致shZEB1-SKOV3细胞miR-200c表达增高,克隆能力、迁移力及致瘤性下降。结论:用RNA干扰技术可靶向降低卵巢癌细胞株SKOV3内ZEB1的表达,使其致瘤性降低,提示ZEB1可作为分子靶点用于上皮性卵巢癌靶向治疗。     

小鼠B7-H4基因克隆及真核表达载体的构建

目的:克隆小鼠B7-H4(mB7-H4)基因cDNA全长,构建表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-GFP和表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白的真核表达载体pmB7-H4-Fc。方法:采用RT-PCR技术从小鼠脾细胞总RNA中逆转录mB7-H4cDNA,将其全长cDNA去掉中止密码克隆入真核表达载体pEGFP-N1中,并转染293T细胞使其表达跨膜型mB7-H4-GFP融合蛋白;将其胞外功能区cDNA克隆入pcDNA3·1-hFc真核表达载体中,并转染COS-7细胞使其表达可溶性mB7-H4-Fc融合蛋白。结果:序列测定证实克隆的mB7-H4全长cDNA阅读框正确完整,酶切和序列测定证实mB7-H4分别正确插入pEGFP-N1和pcDNA3·1-hFc载体中,两种表达载体分别转染293T细胞和COS-7细胞后可分别表达跨膜型mB7-H4-GFP和可溶性mB7-H4-Fc。结论:成功地克隆mB7-H4基因并构建了两个真核表达载体,它们可分别表达跨膜型和可溶性融合蛋白。     

B7—1基因修饰的肿瘤细胞疫苗抗肿瘤的实验研究

目的：研究B7-1基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法：通过逆转录病毒载体。将小鼠B7-1基因导入EL-4淋巴瘤细胞中,研究EL-4/B7-1在同系C57BL/6小鼠中的成瘤性及其诱导抗肿瘤免疫的效果。结果：转B7-1基因诱导了CD80的高表达,EL-4/B7-1细胞在小鼠中的成瘤性下降,在肿瘤生长的早期对实验性荷瘤小鼠进行治疗。基因修饰的瘤苗作用明显增强,EL-4/B7-1细胞能有效地保护野生型肿瘤细胞的攻击,射线灭活的EL-4/B7-1瘤苗作用减弱。结论：B7-1基因修饰的肿瘤疫苗可诱导体内的抗肿瘤免疫反应,导致肿瘤的部分根除,为基因修饰的肿瘤疫苗的临床应用提供了实验依据。     

mB7-1转染大鼠卵巢癌细胞诱导细胞免疫应答及体内致瘤性研究

为探讨转染mB7 1基因大鼠卵巢癌细胞系后体外诱导细胞免疫应答及其致瘤性 ,我们以逆转录病毒为载体将mB7 1基因转染入大鼠低分化卵巢上皮癌细胞株NuTu 19中 ,流式细胞仪检测mB7 1的表达。用同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养实验 (MTLCs)测定淋巴细胞增殖指数 ,MTT法检测细胞毒淋巴细胞的增殖及其杀瘤活性。将NuTu 19/Neu、NuTu 19/mB7 1细胞分别接种于同源大鼠Fischer344皮下 ,观察mB7 1修饰的肿瘤细胞在动物体内的致瘤性。结果显示 ,mB7 1基因成功地转染入大鼠低分化卵巢上皮癌细胞株NuTu 19,流式细胞仪测定mB7 1基因呈阳性表达。NuTu 19/mB7 1体外刺激脾淋巴细胞增殖能力明显高于对照组细胞 (P <0 0 5 )。NuTu 19/mB7 1体外诱导的CTL较对照组对NuTu 19细胞的杀伤率显著增高 (P<0 0 1)。两种细胞体外增殖能力无明显改变 ,NuTu 19/mB7 1组在Fischer344大鼠体内成瘤时间明显晚于对照组 (P <0 0 5 )。由此可见 ,mB7 1基因修饰的鼠卵巢癌细胞可体外诱导细胞免疫应答 ,接种动物后 ,实验瘤苗的致瘤性下降     

逆转录病毒介导的小鼠IL-23基因在小鼠结肠癌细胞中的表达及其抗肿瘤活性

目的：获得表达小鼠IL-23(mIL-23)基因的小鼠结肠癌细胞株。方法：应用逆转录病毒载体，将mIL-23基因导入小鼠结肠癌细胞株Colon26，经G418筛选后获得表达mIL-23的阳性细胞克隆(Colon26／IL-23)。用PCR和RT—PCR检测目的基因的表达，用ELISA法检测mIL-23的产生及mIL-23诱导的小鼠脾细胞IFN-γ的产生，用MTT比色法检测Colon26／IL-23细胞和Colon26细胞的体外增殖，将Colon26／IL-23细胞接种于BALB／c小鼠的右侧背部皮下，观察其致瘤性结果：建立了可表达mIL-23基因的小鼠结肠癌细胞株。分泌至培养上清中的IL-23，可诱导小鼠脾细胞产生IFN-γ在体外Colon26／IL-23细胞的生长与Colon26细胞无明显不同，但其在体内的致瘤性下降，具有抗瘤作用。结论：Colon6／IL-23细胞可分泌IL-23并证明其具有抗瘤活性。     

过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1 基因对卵巢癌增殖侵袭的机制研究

目的:探讨过表达或抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)B7-H1 基因对卵巢癌增殖侵袭的影响及机制。方法:在体外刺激人单核THP-1 细胞成为巨噬细胞,并诱导为TAM,通过腺病毒载体系统过表达(Ad-B7-H1)或抑制(Ad-siB7-H1)TAM中的B7-H1 基因,通过Western blot 检测转染后的TAM 中的B7-H1 表达;单独培养(Alone 组)与过表达(siB7-H1-TAM 组)或抑制(B7-H1-TAM 组)B7-H1 基因的TAM 共培养后, CCK8 法检测CAOV3 细胞的活力。Transwell 小室检测细胞的迁移能力;Western blot 检测Ki67、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、磷酸化的蛋白酪氨酸激酶2(p-JAK2)、磷酸化的信号转导与转录因子3(p-STAT3)。结果:Ad-siB7-H1 组B7-H1 的表达显著低于对照组,Ad-B7-H1 组B7-H1 的表达显著高于对照组(P<0.05);与单独培养组比较,TAM 组细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著升高(P<0.05),与RFP-TAM 组比较,siB7-H1-TAM 组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著降低,B7-H1-TAM 组的细胞活力、细胞侵袭能力及Ki67、MMP-2、MMP-9、p-JAK2 和p-STAT3 的蛋白表达均显著升高(P<0.05)。结论:抑制肿瘤相关巨噬细胞B7-H1 基因可抑制卵巢癌细胞活力及侵袭能力,下调JAK2/ STAT3 信号通路,过表达B7-H1 基因反之。     

p53基因与顺铂联合作用对人卵巢癌细胞的杀伤效果

目的 :探讨外源性p5 3基因转染对人卵巢癌细胞系SKOV 3的生物学行为影响及与顺铂联合作用后对人卵巢癌细胞的杀伤效果。方法 :用脂质体介导的转染技术 ,将p5 3基因的真核细胞表达载体 (PcDNA p5 3)导入不表达p5 3的人卵巢癌SKOV 3细胞中 ,经G4 18筛选 ,Northernblot及Westernblot鉴定后 ,观察其对细胞生物学行为的影响及与顺铂联合作用后对细胞集落形成的影响。结果 :转染后获得稳定表达p5 3的转染克隆。外源性p5 3基因的表达明显抑制了卵巢癌细胞的生长及集落形成能力 ,使细胞阻滞于G1 期 ,并增加了卵巢癌细胞对顺铂的敏感性。结论 :外源性野生型p5 3基因能抑制卵巢癌细胞的生长 ,与顺铂联合作用后增强了对人卵巢癌细胞的杀伤效果。     

miR-132 靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡的实验研究

目的:探讨微小核糖核酸分子(miRNA)-132 在卵巢癌中生物学作用和作用靶点。方法:收集22 例卵巢癌及癌旁非肿瘤组织标本,RT-PCR 检测miR-132 表达量;RT-PCR 检测人正常卵巢上皮细胞和卵巢癌细胞系中miR-132 表达量;选择miR-132 表达量最高或最低的卵巢癌细胞株,分别转染阴性对照质粒(NC)和miR-132 mimic 质粒,RT-PCR 检测转染后miR-132 表达量;CCK-8 法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot 检测Ezrin 蛋白表达。结果:卵巢癌组织中miR-132 表达量显著低于癌旁非肿瘤组织,而卵巢癌细胞系中miR-132 表达量显著低于正常卵巢上皮细胞,差异均有统计学意义(P<0.05);选择卵巢癌细胞株中miR-132 表达量最低卵巢癌SKOV3 细胞株进行基因转染,与转染阴性对照质粒相比,转染miR-132 mimic 质粒后miR-132 表达量显著上升,细胞增殖显著降低,细胞凋亡显著增加,差异均有统计学意义(P<0.05);Western blot 结果显示,上调miR-132 表达后,卵巢癌SKOV3 细胞株中Ezrin 蛋白表达显著上升(P<0.05)。结论:在卵巢癌中,miR-132 可能作为一种抑癌基因通过靶向调控Ezrin 抑制卵巢癌细胞增殖、促进凋亡。     

GPI-B7-1分子膜表面修饰瘤苗抗肿瘤作用的研究

目的：研制抗肿瘤免疫治疗的新疫苗。方法: 用含目的基因的质粒pcDNA3.1(+)/GPI-B7-1转染QK10341细胞，提取膜蛋白GPI-B7-1, 经Western blotting鉴定后，用蛋白转化法锚定在肿瘤细胞SKOV3膜上，取正常健康人外周血中非贴壁的淋巴细胞， 进行淋巴细胞扩增和CTL功能检测，并检测细胞培养液中IL-2、TNF-α和IFN-γ水平，FCM检测CTL的Fas表达水平。结果:与野生型SKOV3细胞比较，用GPI-B7-1修饰的SKOV3细胞能够更有效地刺激淋巴细胞增殖、诱导特异CTL杀伤活性(P<0.01)，还可诱导 CTL表达的Fas水平升高等活性增强以及分泌的IL-2、IFN-γ和TNF-α等细胞因子水平均显著上升(P<0.05)。结论: B7-1基因在肿瘤细胞中表达可增强其免疫原性，在体外有效诱导T细胞活化， 显著增强T细胞杀伤肿瘤细胞的活性；对防治肿瘤侵袭具有一定作用。     

高表达IL-12卵巢癌细胞的建立

目的 建立高表达IL-12的卵巢癌细胞,为后续IL-12治疗卵巢癌奠定基础。方法 将人卵巢癌细胞株SKOV3分为SKOV3组、SKOV3/GFP组和SKOV3/IL-12组三个实验组,SKOV3组不做任何处理,SKOV3/GFP组给予空载病毒感染SKOV3细胞,SKOV3/IL-12组给予IL-12基因腺病毒感染SKOV3细胞。腺病毒感染SKOV3细胞48 h后,使用荧光显微镜检测三个实验组的感染效率,RT-PCR检测各组SKOV3细胞IL-12 p35、p40 mRNA水平的表达量,ELISA方法检测感染72 h后各组细胞培养液中IL-12的含量。结果 SKOV3/GFP和SKOV3/IL-12组中的SKOV3细胞均可以在荧光显微镜下观察到绿色荧光,而SKOV3组没有观察到绿色荧光,SKOV3/GFP和SKOV3/IL-12组的感染效率分别是（97±1）%和（95±1）%,差异具有统计学意义（P＜0.05）;RT-PCR结果表明,与SKOV3和SKOV3/GFP组相比较,SKOV3/IL-12组可以成功扩增出IL-12 p35、p40亚基,差异具有统计学意义（P＜0.05）;ELISA结果表明,与SKOV3和SKOV3/GFP组比较,SKOV3/IL-12组能够高表达IL-12P70蛋白,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 成功建立了高表达IL-12的卵巢癌SKOV3细胞,为进一步采用IL-12进行卵巢癌的免疫治疗打下了基础。     

NFATc1对裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤脉管生成的影响

 目的: 探讨胞浆活化T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells, cytplasmic 1, NFATc1)对人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长和肿瘤脉管生成的影响及其可能机制。方法: NFATc1 siRNA转染人上皮性卵巢癌细胞株SKOV3,免疫荧光及RT-PCR测量转染效率和基因抑制率,选取效率最高的序列建立裸鼠皮下移植瘤模型, 测量各组裸鼠肿瘤体积,观察NFATc1 siRNA的体内抗肿瘤作用。免疫组织化学检测各组肿瘤组织NFATc1的表达情况,并使用细胞角蛋白染色标记上皮性来源,CD34标记微血管,podoplanin标记微淋巴管。分别计算各组微血管及微淋巴管密度并进行统计学分析。应用RT-PCR及Western blot检测各组移植瘤组织NFATc1、CXC趋化因子受体2(CXCR2)、成纤维细胞生长因子2(FGF-2)及血小板源性生长因子BB(PDGF-BB)的mRNA及蛋白表达水平。结果: 3条特异性序列均可显著降低NFATc1的表达水平,以siRNA-1169最佳。NFATc1在空白组及阴性对照组瘤组织高表达。干扰组抑瘤率为57.08%,且重量和体积均低于2个对照组。空白组和阴性对照组的微血管密度和微淋巴管密度明显高于干扰组。对照组比较,NFATc1 siRNA可以在mRNA水平上明显抑制NFATC1、CXCR2、FGF-2和PDGF-BB的转录。Western blot各组细胞在相应位置出现NFATc1、CXCR2、FGF-2和 PDGF-BB条带,空白组与阴性对照组的吸光度最强,与干扰组比较具有显著差异。结论: NFATc1 siRNA明显抑制人卵巢癌SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤生长和肿瘤脉管生成,下调CXCR2、FGF-2及PDGF-BB的表达可能为其途径之一。     

碱性成纤维细胞生长因子与卵巢癌的关系

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子 (basic fibroblast growth factor,b FGF)对卵巢癌细胞增殖、浸润和肿瘤血管生成的影响 ,及 b FGF单克隆抗体 (b FGF monoclonal antibody,b FGF- MAb)的治疗作用。　方法　将人卵巢癌细胞株 SKOV3接种于 2 4孔板 ,加入不同浓度的 b FGF,每日行结晶紫染色后测定光密度 (D4 90 )值 ,绘制细胞生长曲线 ;将 SKOV3细胞团接种于铺设有细胞外基质凝胶的 4孔板 ,每日测定癌细胞在凝胶中的浸润距离 ;建立 SKOV3细胞裸鼠皮下移植瘤模型 ,每周两次分别将 b FGF、b FGF-MAb和生理盐水注射于移植瘤周围 ,8周后测量肿瘤体积 ;对移植瘤组织切片行 因子的免疫组化染色、测定肿瘤内微血管密度 (microvessel density,MVD)。　结果　 b FGF能促进 SKOV3细胞增殖并呈浓度依赖 ,实验第 5天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞 D4 90 值是对照组的 1.0 9倍和 1.2 1倍 ;b FGF能促进 SKOV3细胞浸润并呈浓度依赖 (P<0 .0 5 ) ,第 7天 ,5 ng/ml、10 ng/ml组细胞浸润距离分别是对照组的 1.5 3倍和2 .4 5倍 ;b FGF组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 1.80倍和 1.4 6倍 (P<0 .0 5 ) ,b FGF- MAb组移植瘤体积和 MVD分别是对照组的 6 3.7%和 6 2 .8% (P<0 .0 5 )。　结论　b FGF能明显促进卵巢癌细胞的增殖、     

野生型PTEN基因对卵巢癌细胞株的影响

目的： 观察转入野生型PTEN基因的卵巢癌细胞生物学行为变化，探索该基因对卵巢癌细胞周期的影响和抑制肿瘤侵袭的机制。 方法： 将野生型PTEN基因的pcDNA3.1Hygro(-)真核质粒载体转染SKOV3细胞系，潮霉素筛选稳定表达细胞株并扩增培养；采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期变化；用MTT法检测细胞抑制率。分别用RT-PCR检测转染前后PTEN mRNA表达水平变化；采用重组基底膜侵袭模型，观察转染前后细胞侵袭力的变化。 结果： 成功转染SKOV3并稳定表达PTEN，转染PTEN可以明显改变SKOV3细胞周期，使其阻滞于S期；明显抑制肿瘤细胞的侵袭力。 结论： 提示转染外源野生型PTEN基因可使SKOV3细胞周期阻滞于S期，并且通过抑制肿瘤细胞侵袭与生长，而具有明显的抑癌作用。     

WT1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞的抑制作用

目的观察WT1反义寡核苷酸对人卵巢癌细胞株SKOV3的抑制作用。方法以人卵巢癌细胞株SKOV3为研究对象,应用ASODN技术,将WT1-ASODN转染到SKOV3细胞中,利用MTT法检测WT1寡核苷酸的最适作用浓度和作用时间及WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞的杀伤活性,流式细胞仪检测分析WT1反义寡核苷酸对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的影响。结果脂质体介导的WT1反义寡核苷酸在体外能够明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡。结论 WT1反义寡核苷酸能诱导卵巢癌细胞凋亡,从而抑制卵巢癌细胞的增殖,可望成为一种卵巢癌临床有效的治疗方法。     

卵巢上皮-间质肿瘤中B7-H3、B7-H4的表达及临床病理意义

目的探讨B7-H3、B7-H4在卵巢上皮-间质肿瘤中的表达及其临床病理意义。方法用RT-PCR技术及免疫组化PV9000两步法研究86例卵巢恶性上皮-间质肿瘤(恶性组),40例卵巢交界性上皮-间质肿瘤(交界组)和40例卵巢良性上皮-间质肿瘤(良性组)B7-H3与B7-H4mRNA及蛋白表达情况,并结合临床病理参数进行分析。结果 B7-H3、B7-H4mRNA在3组卵巢肿瘤组织中均有表达,且各自的3组卵巢肿瘤组织的mRNA光密度值差异均有统计学意义(P<0.05);B7-H3与B7-H4蛋白在恶性组中均呈细胞质和(或)细胞膜表达,其中B7-H3阳性率为81.4%(70/86),明显高于交界组22.5%(9/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05);B7-H4阳性率为77.9%(67/86),明显高于交界组35.0%(14/40)和良性组5.0%(2/40)的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。恶性组的卵巢癌组织中B7-H3蛋白在非黏液性卵巢癌中较黏液性卵巢癌高表达,差异有显著性(P<0.01),与临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。B7-H4蛋白表达与组织病理学类型、临床分期、病理分级、患者年龄、腹水细胞学和淋巴结转移差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 B7-H3与B7-H4在卵巢恶性上皮-间质肿瘤表达提示其可能与肿瘤的发生、发展有关,可为卵巢恶性肿瘤的诊断及治疗提供新的依据。