从小量样品中同时提取高分子量DNA和RNA

基本原理 目前,提取DNA和RNA的方法有多种,但多为分别提取而不能由同一样品同时提取。常使需要同时研究同一样品中DNA和RNA的工作既浪费样品,又增加了操作步骤,耗物耗时,还易使所得之DNA和RNA产生一定程度的相互污染。特别在样品的来源有限或样品量少的情况下,用分别提取的方法来获得高分子量的DNA和RNA常顾此失彼,不能同时得到足够     

纳米磁珠法与试剂盒法分析载脂蛋白E基因的多态性

背景：相对于血液标本,口腔拭子标本更利于大规模载脂蛋白E基因多态性分析的研究,但目前对口腔拭子标本基因组DNA的提取尚无统一方法。 目的：探索合适的口腔拭子标本基因组提取方法以分析载脂蛋白E基因的多态性。 方法：收集50例散发性阿尔茨海默病患者口腔拭子标本,每份标本分别应用纳米磁珠法与PicoDNA微量核酸提取试剂盒法提取基因组DNA,对比分析两种方法获得的基因组DNA纯度和浓度,后续进行PCR反应,应用DNA电泳确认有无成功扩增出目的条带,通过DNA测序方法分析载脂蛋白E基因的多态性。 结果与结论：两种方法提取的基因组DNA纯度均较好,纳米磁珠法提取的基因组DNA浓度要高于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法所得浓度(P < 0.05)。两组获取的基因组DNA均可成功进行PCR扩增,但电泳结果示纳米磁珠法扩增的目的条带更清楚。两组PCR产物DNA测序结果一致,载脂蛋白E基因ε2、ε3、ε4基因型的比例分别是6%,71%,23%。表明纳米磁珠法相对于PcioDNA微量核酸提取试剂盒法提取口腔拭子标本基因组DNA更适合用于大样本载脂蛋白E基因多态性的研究。     

全自动核酸提取仪与手动提取组织DNA的效率比较

正近年,随着众多与疾病诊断、预后及治疗相关的分子标志物的出现,以石蜡组织DNA为材料进行分子水平的基因检测及筛查已成为临床诊断及相关研究的常规手段。对于各种基因分析而言,重要的是能够获得足够纯度和数量的DNA~([1])。DNA提取是分子生物学研究的一项基础技术,其提取的质量好坏及数量的多少直接影响到分子生物学实验的开展~([2])。目前病理科所使用的DNA大部分为人工提取,     

一种碘化钾提取外周血基因组DNA的方法

目的　建立外周血基因组DNA 的快速提取方法。方法　用碘化钾直接从外周血中提取基因组DNA。结果　用该方法提取的DNA 为大分子量DNA;A260/A280为1.85,A260/A230为2.2;提取效率大于90% ;DNA 体外扩增结果良好。结论　该方法简便、快速、经济,可用于大量临床标本的研究。     

石蜡包埋软骨组织中DNA提取方法的改良

<正>随着基因遗传学的发展,DNA检测技术也日臻完善,而对某些特定疾病的基因分析能为探究疾病的发病机制以及遗传概况提供可靠的方法学依据。各大医院的病理科均存留着大量的组织蜡块,从这些石蜡标本中提取DNA可以在短时间内获得足够的目标疾病DNA。目前已有多位学者对从石蜡     

漱口法在遗传性眼病DNA标本收集中的应用

目的通过对来自漱口法和外周静脉血提取的人类基因组DNA的比较,确定漱口法和外周静脉血提取的基因组DNA是相同的,漱口法可应用于遗传性眼病DNA标本的收集.方法用常规的酚/氯仿方法分别提取来自2例视网膜色素变性患者的外周静脉血和漱口法获取的样本的DNA,紫外分光光度测定,琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增以及非变性聚丙烯胺凝胶电泳(SSCP)分析鉴定提取的基因组DNA,DNA测序进一步分析鉴定.结果与结论来自同一个体,采用漱口法和外周静脉血提取的人类基因组DNA是相同的,两者可互相代替.由此可见,漱口法可应用于遗传性眼病DNA标本的收集.     

卵巢癌中P53基因等位基因缺失率及突变频谱

作者研究目的是寻找确定卵巢癌中涉及P53基因特殊密码子和突变类型的突变频谱。同时也检测了P53基因突变肿瘤中,P53等位基因缺失率。 组织标本取自经组织学检查,确定样本肿瘤细胞含量超过75％的63例手术切除的卵巢癌。分别从癌标本及配对的非癌组织区域或白细胞中提取总RNA。提纯RNA经逆转录产生P53基因4-10外显子的cDNA拷贝。实验及对照组提取物分别经PCR反应以产生足够的模版供DNA序列分析。每扩增DNA模板至少有两个独立产物存在双脱氧序列为     

石蜡包埋组织分子病理学研究进展

近年来,随着分子生物学技术的发展,人们越来越多地应用手术切除标本分析DNA改变,进而为某些疾病的诊断、预后评估以及防治研究等方面提供了分子水平的证据,也为病理学科的发展开辟了又一新的方向。 基因分忻依赖于高质量的DNA。过去主要限于从新鲜或冰冻组织和细胞中提取,而     

病毒感染的DNA诊断

病毒感染的检查方法一般有三种,①直接分离鉴定病毒;②检查病毒微粒和病毒抗原,③检查血清中病毒抗原的特异抗体。近年来由于重组DNA技术的发展,能够直接检查感染病毒的基因和基因组,作为病毒感染新的检查方法正在被确立。病毒基因组的检查原理是分子杂交法,DNA和RNA在碱基排列上如果存在同源性就能发生特异的杂交反应,利用这种反应研究检查标本中是否存在病毒核酸,这就是病毒感染的基因诊断。作为标本的DNA和RNA可从组织、细胞、血清中提取,如果必要可用限制酶酶解,     

IdentifierTM系统在产前基因诊断中的应用

目的评估IdentifierTM系统在产前基因诊段中的作用。方法采用IdentifierTM试剂盒对100例羊水标本和20例绒毛及其孕妇进行检测,排除母体组织污染后行相应基因检测,对于有母源性DNA污染标本进行羊水细胞培养。结果 100例羊水标本和20例绒毛中,9例羊水标本有母源性DNA污染和4例绒毛标本为母亲组织;羊水标本经培养后,再检测均无污染。2例21-三体、1例18-三体和1例13-三体。结论 IdentifierTM系统不但可对标本的采样、运送、DNA提取等过程进行了监控,还可检测胎儿性别,同时可快速诊断胎儿是否21、18和13-三体;另外对污染的羊水标本进行羊水细胞培养,达到去除污染的目的,这样可避免受检者重新取材。