鞘糖脂肿瘤抗原

鞘糖脂由三部分组成:糖链(单糖或寡聚糖)、鞘氨醇及脂肪酸。它存在于细胞表面膜,非极性的脂链嵌于膜中,而糖链面向细胞间液。它可以作为细菌及病毒等的受体,血型抗原,又被认为和细胞间的粘着、细胞的生长、分化等相关。     

鞘糖脂肿瘤相关抗原

鞘糖脂由三部份组成:糖链(单糖或寡聚糖)、鞘氨醇及脂肪酸.它存在于细胞表面膜,其非极性的脂链嵌于膜中,而糖链面向细胞间液.它可以作为细菌及病毒等的受体或血型抗原,又被认为和细胞间的粘着、细胞的生长、分化等相关.     

IgG糖基化修饰及其意义研究进展

蛋白糖基化修饰是特异糖链在细胞内质网中添加到蛋白质上形成寡糖链的过程,具有酶定向和位点特异性.根据与蛋白质部分连接方式的不同,蛋白质糖基化修饰分为O-连接和N-连接两种.其生物合成在内质网和高尔基体内进行,可大致分为三步[1]:(1)在内质网中形成含有3个葡萄糖、9个甘露糖和2个乙酰胺葡萄糖的寡聚糖-脂复合物,其中的脂质部分(多萜醇)起转运作用;(2) 寡糖部分转移至正在合成的多肽链,并同时移除3个葡萄糖和1个甘露糖;(3)未加工成熟的糖蛋白转移至高尔基体,加工形成(Man)5(GlcNAc)2糖链,然后再在特定糖基转移酶或糖苷酶(见表1)作用下继续加工[2-4].最终在各种不同酶的参与下形成多种长度、组成和结构各不相同的糖链.     

人sTNFR II-IgG Fc融合蛋白在毕赤酵母菌中的表达及其产物分析

目的:在毕赤酵母菌中表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白。检测融合蛋白是否形成二聚体,并对其N-糖链进行分析。方法:从人淋巴细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增目的基因sTNFRII与IgG Fc,然后利用重叠延伸PCR得到嵌合体基因sTNFRII-IgG Fc,并将其插入pPIC9载体中。以重组载体转化巴斯德毕赤酵母菌中进行克隆与表达。采用ELISA筛选高表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组毕赤酵母菌株,对融合蛋白通过还原和非还原SDS-PAGE分析其二聚体结构,采用L929细胞检测融合蛋白抗TNF-α的生物学活性,最后利用荧光辅助糖电泳(FACE)分析融合蛋白的N-糖链。结果:成功地建立了可分泌表达sTNFR II-IgG Fc融合蛋白的重组酵母菌株,摇瓶培养后融合蛋白的表达量为2mg/L。SDS-PAGE和Western blot表明,该融合蛋白能自然形成二聚体结构;可抑制TNF-α对L929细胞的杀伤作用,其中和5×104U/LTNF-α的EC50为170μg/L。FACE分析融合蛋白N-糖链的大小为11~13个糖残基。结论:在毕赤酵母菌中成功地表达了sTNFR II-IgG Fc融合蛋白,为在毕赤酵母菌中表达其他的Fc融合蛋白和抗体提供了参考。     

N-糖基化对蛋白质药物关键质量属性影响机制的研究进展

蛋白质糖基化是真核生物蛋白质翻译后修饰的主要方式。它分布于许多膜结合蛋白上,以N-或O-形式和蛋白质连接,其中N-连接是天冬酰胺(N)和聚糖连接,O-连接主要是苏氨酸(T)或丝氨酸(S)同聚糖连接。许多激素、酶以及抗体的N-糖基化位点一般含有保守序列N-X-S/T(其中X为非脯氨酸的氨基酸),糖基化蛋白一般分布于细胞外,内质网(endoplasmic reticulum,ER)、高尔基体和溶酶体内[1]。     

空肠弯曲菌蛋白糖基化系统及利用该系统在大肠杆菌中表达糖蛋白的研究进展

蛋白质糖基化是蛋白质翻译后的一种重要加工过程,其种类主要有N-糖基化和O-糖基化.N-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的天冬酰胺β-酰胺氮上,O-糖基化是指寡糖链连接在蛋白的丝氨酸、苏氨酸或酪氨酸的羟基的氧原子上.自从1976年在古细菌中发现S-层糖蛋白以来,已经在古细菌和细菌中发现70多种糖基化蛋白[1-2],并且大部分属于O-糖蛋白,是细菌鞭毛或纤毛的组成成分[3].人体内超过一半的蛋白质是糖基化蛋白质[4],糖基化蛋白质的糖链在机体的正常生理活动中具有重要功能和作用[5].蛋白质药物的糖基化可以增强蛋白质药物的生物活性、延长其半衰期、增加其溶解性、改善其免疫原性等,目前70%的治疗性蛋白质药物均是糖蛋白[6-7 ].生产糖蛋白的首选宿主是中国仓鼠卵巢细胞,生产效率低,成本高,部分蛋白糖链具有免疫原性;另外,毕赤酵母表达系统和昆虫细胞也可以用来生产糖蛋白,但这两种表达系统生产的糖蛋白的糖链为高甘露糖型或含有杂糖,具有较强的免疫原性.大肠杆菌表达系统是应用最广泛的经典表达系统,该系统缺乏真核细胞所特有的蛋白质翻译后的糖基化修饰过程,一直以来该系统只能表达非糖基化蛋白质.然而,近10年来发现空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)中存在糖蛋白,把空肠弯曲菌中存在的蛋白糖基化相关基因转化到大肠杆菌中则能够在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白.本文对空肠弯曲菌中存在的糖基化系统和利用该系统在大肠杆菌中表达带有糖链的目的蛋白的研究进展进行综述.     

N-糖基化修饰对突触细胞黏附分子SynCAM调节突触可塑性的影响

目的:观察N-糖基化对突触细胞黏附分子(SynCAM)调节突触形成作用的影响.方法:制备SynCAM N-糖链定点突变质粒和正常SynCAM表达质粒转染海马神经元细胞, 膜片钳试验观察突触中的转染质粒的海马神经元作为突触后部分其动作电位的潜伏期和频率.结果:突变SynCAM质粒组海马神经元动作电位潜伏期为(180.9±3.5)ms(n=14), 频率为(10.2±0.7)/s (n=14).正常SynCAM质粒组海马神经元动作电位潜伏期为(174.7±4.8) (n=14), 动作电位频率为(10.0±0.8)/s(n=14), 差异无统计学意义.结论:有无N-糖链缺失的SynCAM对突触功能的影响无明显差别, 下游信号蛋白可能影响SynCAM调节功能.     

MBL与人单核细胞系THP1/CD14细胞结合及其特性研究

采用Cell-ELISA和流式细胞术,发现人单核细胞系THP1/CD14在生理条件下可结合甘露聚糖结合凝集素(MBL),这种结合具有Ca2+依赖性,能被甘露糖、N-乙酰葡糖胺、D-葡萄糖、半乳糖、蔗糖、海藻糖等及重组人MBL-CRD蛋白和MBL-CLR蛋白所部分抑制,但C1q或抗人C1qR单克隆抗体对之无影响。还发现,炎性状态下的THP1/CD14细胞与MBL的结合增强。结果表明,THP1/CD14细胞表达Ca2+依赖的、糖敏感的MBL受体或结合蛋白,包括对CLR特异和CRD特异的两种受体,均与C1q受体无关;炎性刺激可上调THP1/CD14细胞MBL受体或结合蛋白的表达。     

肿瘤坏死因子和白细胞介素2是对N-连接的寡糖特异的凝集素

采用固相结合试验证实:(1)rTNF-α和 rIL-2能以高度亲和力与多种含 N-连接寡糖的糖蛋白结合,其结合活性依赖于糖蛋白的糖基组分;(2)rTNF-α能识别各种类型的 N-连接糖链,而 rIL-2只能与高甘露糖型的 N-连接糖链结合;(3)甘露三糖特导地抑制 rTNF-α和 rIL-2与糖蛋白的结合;(4)rTNF-α和 rIL-2不能识别 O-连接的寡糖,由此表明,TNF 和 IL-2均为对 N-连接寡糖特异的凝集素,它们特异性识别的碳水化合物部位可能是 N-连接寡糖的核心结构.鉴于 N-连接的寡糖广泛存在于人类的分泌蛋白和膜糖蛋白,故单核,淋巴因子的碳水化合物结合活性在人类免疫反应调节中的作用将是一个值得探索的新领域.     

腱糖蛋白-C与心血管疾病

<正>细胞外基质(Extracellular Matrix,ECM)是心脏和血管壁的主要成分,腱糖蛋白(Tenascin,TN)是ECM中一种具有六臂体结构的寡聚糖蛋白家族,TN-C是TN中发现最早,也是最重要的成员,具有多种生物学活性,如调节细胞增殖、迁移、分化、凋亡,以及在胚胎组织发育、血     

蛋白糖基化与免疫研究进展

糖基化是普遍的蛋白质翻译后修饰过程,修饰后产生数千种独特生物活性的糖蛋白,这些糖链能够影响蛋白质的空间结构和生物学功能。和大多数其他大分子一样聚糖的生物学作用如同全色光谱,包含着那些看起来不重要的到那些对发育、生长、功能或对生物的生存至关重要的各种功能。糖基化与体液免疫和细胞免疫息息相关,这些糖结构参与B细胞的活化、抗原的处理与递呈、影响免疫球蛋白的结构与功能和调节T细胞活化与凋亡。免疫系统中多数分子都是糖蛋白,如免疫球蛋白、细胞因子、补体、分化抗原、黏附分子和MHC分子,与免疫分子合成相关的转录因子也都是糖蛋白。这些糖蛋白在免疫过程中的抗原识别和清除、细胞黏附、淋巴细胞激活与凋亡、信号传递和内吞作用起重要作用。此外,一些人类疾病(如类风湿关节炎等)也是由于免疫分子的糖基化缺陷所引发的。随着对聚糖生物功能研究的日益深入,糖基化在免疫系统中的作用也越来越受到研究者的重视。本文就糖基化及凝集素这类糖结合蛋白在免疫系统中所起的一些作用进行了讨论。     

自体骨髓间充质干细胞外基质支架在软骨组织工程中的应用

<正>1研究背景1.1组织工程学的基本构成近年来,随着细胞生物学和生物材料科学的发展下红包,直接点就行组织工程学方法成为了修复软骨缺损的一种全新的治疗模式。1.2细胞外基质材料的应用快速发展主要成分功能性和结构性蛋白,如胶原纤维、蛋白多糖、糖氨聚糖,有机的结合成超微结构供组织构建;细胞外基质表面的三肽精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸,及富含硫酸软骨素、硫酸肝素的;蛋白聚糖和CD44,在细胞黏     

Tenascin研究进展

Ｔｅｎａｓｃｉｎ是细胞外基质中一个具有独特的六臂体结构的寡聚糖蛋白家族。它在胚胎发生过程中特定的时期和部位合成,在成人组织中存在于很局限的部位,而在多种肿瘤组织中都有突出的表达。其表达受到许多细胞因子及糖皮质激素的调节,还受机械压力的影响。它的作用目前尚不十分清楚,可能是一种粘附抑制因子,在肿瘤的发生中可能起着促进上皮细胞增生的作用     

肝素酶与肿瘤转移

肿瘤细胞实现扩散、转移 ,与免疫细胞趋向炎症反应区一样 ,必须首先穿越由细胞外基质和基底膜组成的屏障。该屏障主要由两种成分构成 :一是结构蛋白 ,包括胶原、层粘素、纤维结合素和玻璃体结合素等 ;二是糖氨聚糖 ,其主要成分是硫酸乙酰肝素蛋白多糖 (ｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅｐｒｏｔｏｇｌｙｃａｎ ,ＨＳＰＧ)。ＨＳＰＧ主要由一个蛋白核心和数个与之共价连接的线性硫酸乙酰肝素 (ｈｅｐａｒａｎｓｕｌｆａｔｅ ,ＨＳ)侧链组成[1] 。起初认为 ,结构蛋白的破坏是肿瘤细胞转移的决定性步骤 ,因此 ,在过去的 10多年中 ,研究兴趣大多集…     

血清p185蛋白与p185糖链测定方法的比较

c-erbB-2基因表达产物p185蛋白的细胞外区域可脱落进入细胞外基质，血清p185水平对于判断乳腺癌的发生发展、预后及复发具有重要意义。实验用BA-ELISA和凝集素ELISA分别检测血清p185蛋白和p185糖链，并对二者进行比较。     

蛋白聚糖与肿瘤

蛋白聚糖与肿瘤雷海新（中国预防医学科学院劳动卫生与职业病研究所１０００５０）蛋白聚糖（ＰＣ￣＊）是组成胞外基质的主要巨分子之一，它一般由蛋白核心和一条或多条以共价键相连的葡糖胺聚糖（ＧＡＧ）链构成，主要分布于结缔组织、胞外基质和多种细胞特别是上皮细胞...     

胶原凝集素结构与功能的研究

胶原凝集素家族是一组寡聚糖蛋白，包括ＭＢＰ，ＣＬ－４３，ＳＰ－Ａ，ＳＰ－Ｄ及牛胶固素。它们基因结构的相似性表明存在进化关联，并赋予这些蛋白分子独特的立体结构，从而对糖类具有特异识别作用，成为病原体与免疫细胞间的桥梁，在先天免疫中发挥重要作用。     

糖链结构在神经系统中的功能作用

糖链作为生物信息分子参与细胞生物几乎所有的生命和疾病过程，起特异性的识别、介导、调控等信号转导作用。神经系统发育、神经网络形成、神经再生连接和神经肌肉连接等方面都涉及糖链的参与。糖链在神经系统中发挥着不可取代的作用，而且糖链又因其结构的多样性、复杂性和微观不均一性引起其功能在神经系统中的多样性。     

胶原凝集素结构与功能的研究

胶原凝集素家族是一组寡聚糖蛋白，包括ＭＢＰ，ＣＬ－４３，ＳＰ－Ａ，ＳＰ－Ｄ及牛胶固素。它们基因结构的相似性表明存在进化关联，并赋予这些蛋白分子独特的立体结构，从而对糖类具有特异识别作用，成为病原体与免疫细胞间的桥梁，在先天免疫中发挥重要作用。     

微小RNA-193a调控Wilms瘤基因1促进小鼠糖尿病肾病足细胞凋亡

目的 探讨微小RNA（miR）-193a对糖尿病肾病（DN）足细胞凋亡的影响及作用机制。 方法 通过体外高糖培养足细胞和体内小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)复制DN模型,将细胞或60只小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、miR-193a抑制阴性对照组、miR-193a抑制组、miR-193a过表达阴性对照组和miR-193a过表达组。使用流式细胞术、免疫组织化学、免疫荧光、TUNEL、Real-time PCR和Western blotting检测DN小鼠和小鼠足细胞凋亡情况。 结果 DN小鼠和高糖诱导的小鼠足细胞中Nephrin、Podocin表达减弱,细胞凋亡率显著升高,miR-193a高表达,小鼠肾脏和足细胞中cleaved-Caspase-3和Bax蛋白水平显著升高,Bcl-2蛋白水平显著下降,而miR-193a 抑制剂(inhibitor)可改善这一过程。DN小鼠和高糖培养的小鼠足细胞中Wilms瘤基因1（WT1） mRNA和蛋白表达水平显著降低,miR-193a inhibitor干预后WT1蛋白表达显著升高。上调WT1可降低miR-193a对高糖诱导的小鼠足细胞凋亡的影响。双荧光素酶报告实验证实了miR-193a和WT1之间的靶向关系。 结论 MiR-193a下调WT1的表达,促进DN足细胞凋亡。