PTEN蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达和意义

目的：检测10号染色体缺失张力蛋白磷酸酶（phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome ten,PTEN）蛋白在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨其在中耳胆脂瘤上皮细胞存活机制中的作用。方法：应用免疫组织化学SP法检测30例中耳胆脂瘤组织标本与15例正常外耳道皮肤标本中PTEN蛋白的表达。结果：PTEN蛋白阳性表达主要定位于上皮细胞核。PTEN在中耳胆脂瘤上皮组织中阳性表达率为36.7%,明显低于正常外耳道皮肤组的93.3%（P<0.01）。结论：PTEN在中耳胆脂瘤上皮的异常表达可能在胆脂瘤的发生、发展过程中起着一定的作用。胆脂瘤上皮中PTEN蛋白的表达缺失可能参与了胆脂瘤上皮细胞过度增殖机制。     

基质金属蛋白酶2及其抑制因子2在子宫腺肌病中的表达及意义

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及其抑制因子2(TIMP-2)在子宫腺肌病(AM)在位内膜与异位内膜的表达及意义.方法 选取广州医学院附属广州市第一人民医院2006年2月至2007年9月因AM行全子宫切除术的42例病例(取其在位及异位内膜分为AM在位内膜组和AM异位内膜组)和同期因子宫肌瘤在该院行全子宫切除术的32例病例(取其内膜作为正常子宫内膜组),应用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AM在位内膜、异位内膜及正常子宫内膜中MMP-2、TIMP-2mRNA的表达.结果 (1)MMP-2 mRNA在AM异位内膜组中相对表达量(1.43±0.32)高于AM在位内膜组和正常子宫内膜组(1.22±0.35,0.97±0.37,P＜0.05).TIMP-2 mRNA在AM异位内膜组和AM在位内膜组中均低表达,其相对表达量分别低于正常子宫内膜组(0.96±0.31,1.13±0.30,1.29±0.19,P＜0.05).(2)MMP-2 mRNA、TIMP-2 mRNA在子宫腺肌病在位内膜组、正常子宫内膜组的表达有周期性,分泌期均高于增生期(P＜0.05);而在AM异位内膜组中,两者分泌期与增生期则差异无统计学意义.(3)MMP-2/TIMP-2的比值在AM异位内膜组、AM在位内膜组、正常子宫内膜组中依次递减,其中AM异位内膜组与后两组差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 AM异位和在位内膜组织中MMP-2高表达,TIMP-2低表达,使MMP-2/TIMP-2平衡失调,异位内膜组织侵袭降解细胞外基质的能力增强.     

前列腺间质细胞中雌二醇对MMP-2，MMP-9及其组织抑制因子表达的影响

目的： 研究雌二醇(E2)对前列腺间质细胞中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9）及其组织抑制因子1(TIMP-1)、TIMP-2和雌激素受体α、β（ERα、ERβ）的影响。方法： 实时定量PCR法检测E2在前列腺间质细胞中对MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA水平的影响；半定量RT-PCR法检测E2对ERα、ERβ mRNA水平的影响。酶谱电泳法检测MMP-2、MMP-9的活性。Western blotting检测E2在前列腺间质细胞中对ERα蛋白水平的影响。结果： 前列腺间质细胞中有MMP-2和ERα mRNA的表达，未检测到MMP-9 mRNA；培养液中检测到MMP-2前体（pro-MMP-2），未检测到其活性形式，也未检测到MMP-9前体及其活性形式。用E2处理间质细胞后MMP-2 mRNA水平降低，pro-MMP-2蛋白量减少，雌激素受体抑制剂ICI 182.780可抑制此作用。E2对TIMP-1,2 mRNA表达无显著影响。E2能够增加前列腺间质细胞中ERα mRNA及其蛋白表达的水平。结论： E2能够通过ERα下调前列腺间质细胞中MMP-2的表达。     

系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞RECK的表达及其与基质金属蛋白酶-9的关系

目的 探讨系统性红斑狼疮(SEE)患者PBMC RECK(reversion-inducing cysteine-richprotein with kazal motif)的表达及其与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的关系.方法 分别用Western blot及RT-PCR检测SLE患者及健康对照组PBMC上RECK的蛋白及mRNA水平,同时检测MMP-9mRNA的水平.加入植物血凝素(PHA)刺激后检测3者的表达变化及刺激后MMP-9的分泌情况并与空白对照组比较.结果 与健康对照组相比,患者组RECK蛋白及mRNA水平降低,MMP-9 mRNA水平增高,分泌MMP-9的能力高于健康对照组.与空白对照相比,PHA刺激后,患者组及对照组RECK蛋白及mRNA表达均降低,MMP-9 mRNA水平升高,MMP-9分泌均增多.RECK的表达与MMP-9的分泌呈负相关.结论 RECK可能通过抑制MMP-9的分泌在SEE发病过程中起重要作用,对其的调控可望为SLE治疗提供新的方向.     

TLR4介导高迁移率族蛋白致系统性红斑狼疮肾损害的作用研究

目的 探讨高迁移率族蛋白1(HMGB1)致红斑性狼疮肾损害的作用机制与Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)表达的相关性.方法 ELISA检测12例健康对照组、16例系统性红斑狼疮(systemic lupus eqrthematosus,SLE)无肾脏损害和18例狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)患者血清中HMGB1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)的表达情况;流式细胞术检测外周血CD3/TLR4和CD14/TLR4表达情况;分离外周血单个核细胞(PBMC),RT-PCR检测HMGB1 mRNA的表达变化.结果 HMGB1 mRNA相对表达量及血清中HMGB1蛋白在LN组明显高于SLE组和健康对照组;流式细胞术显示CD14+的单核细胞表面HMGB1受体TLR4在LN组表达最高(P＜0.05),且与尿蛋白呈正相关(P＜0.01);LN患者血清中MMP-2和TIMP-2蛋白的浓度明显低于SLE和健康对照组,同时MMP-2/TIMP-2比值下降.HMGB1 mRNA及CD14+/TLR4+与MMP-2/TIMP-2比值均呈显著负相关;LN组患者血清中HMGB1蛋白水平与蛋白尿呈正相关,与MMP-2/TIMP-2比值呈显著负相关.结论 HMGB1是狼疮性肾炎发病中的重要细胞因子;HMGB1可能部分通过TLR4激活PBMC,降低MMP-2/TIMP-2的活性,从而引起蛋白尿.     

MMP-2及TIMP-2在宫颈癌组织中的表达及其对侵袭和转移的影响

目的 通过检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶组织抑制物-2(TIMP-2)在宫颈癌中的表达,探讨其对宫颈癌侵袭转移的影响.方法 应用免疫组化SP法检测53例宫颈癌和14例正常宫颈组织中MMP-2和TIMP-2的表达情况,并进行*9字2检验.结果 免疫组化结果 显示MMP-2和TIMP-2在宫颈癌组织中...     

启动子区DNA去甲基化增强子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞MMP-9的表达

目的研究子宫内膜异位症中基质金属蛋白酶9(MMP-9)基因表达的DNA甲基化调控机制。方法采用甲基化特异性PCR检测在位与异位子宫内膜组织中MMP-9 mRNA的表达,采用免疫组织化学染色检测在位与异位子宫内膜组织中MMP-9蛋白的表达。原代培养子宫内膜异位基质细胞,细胞经5-杂氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理后,分析MMP-9基因的表达及其启动子甲基化状态。结果异位子宫内膜组织中MMP-9 mRNA和蛋白的表达高于在位子宫内膜组织。异位子宫内膜组织中MMP-9基因启动子区DNA甲基化水平低于在位子宫内膜组织。5-Aza-dC处理异位子宫内膜细胞后,MMP-9的表达水平升高,MMP-9基因启动子区出现明显的去甲基化。结论 MMP-9基因启动子区DNA去甲基化增强子宫内膜异位症患者异位内膜基质细胞中MMP-9的表达。     

基质金属蛋白酶-2、3及其组织抑制剂TIMP-1在子宫内膜异位症中的表达

目的探讨基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-3)及其抑制剂(TIMP-1)在子宫内膜异位症发生及发展中的作用.方法采用免疫组化SP法分别测定MMP-2、MMP-3 、TIMP-1在卵巢子宫内膜异位症异位内膜60例(A组),子宫腺肌症异位内膜40例(B组),子宫肌瘤子宫内膜30例(对照组C)的表达强度.结果 A、B组中MMP-2、MMP-3的表达强度明显高于对照组(P<0.05)而TIMP-1的表达明显低于对照组(P<0.05);A、B组间MMP-2、MMP-3 、TIMP-1 的表达无明显差异(P>0.05).结论在子宫内膜异位症中MMP-2、MMP-3的过度表达及TIMP-1的低表达可能与内异症的发生与发展有关.     

HL-60细胞ATRA诱导后MMP-9/TIMP-1表达的变化

为了检测HL-60细胞经过全反式维甲酸(ATRA)诱导后基质金属蛋白酶(MMP-9、MMP-2)及金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP-1)表达变化,并探讨其变化的意义。采用瑞氏染色观察细胞形态,WST1实验测定细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,RT-PCR方法检测MMP-9、MMP-2、TIMP-1、VEGF的mRNA的表达。结果显示,HL-60细胞经ATRA作用24h后,随着细胞增殖降低与分化的发生,MMP-9mRNA表达增加,TIMP-1mRNA和VEGF表达降低,MMP-2mRNA未见明显表达。ATRA诱导HL-60细胞分化后MMP-9表达增加,而TIMP-1表达降低,MMP-9不促进HL-60细胞表达VEGF。     

基质金属蛋白酶-9及其组织抑制物-1在人胎盘的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases,MMP-9)及其组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP-1)在不同孕期胎盘中的表达及与滋养层细胞侵蚀、子宫-胎儿血管系统建立的关系.方法应用原位杂交法检测56例胎盘(早孕16 例、中孕20 例、晚孕20例)中MMP-9及TIMP-1mRNA的表达.结果 MMP-9及TIMP-1mRNA主要表达于滋养细胞、绒毛间质血管壁及蜕膜组织中;MMP-9mRNA的表达早、中孕组明显强于晚孕组,TIMP-1mRNA的表达晚孕组明显强于早、中孕组,差异均有极显著性(P<0.01).结论 MMP-9及TIMP-1协同表达可能在滋养层细胞侵蚀、孕卵着床、血管重建过程中发挥一定的作用.     

急性心肌梗死患者PCI术前后血清基质金属蛋白酶-2与基质金属蛋白酶-9的相关性

目的: 探讨急性心肌梗死(AMI)患者在急诊经皮冠状动脉介入(PCI)术治疗前后血清基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)变化的相关性.方法: 应用酶图(SDS-PAGE zymograph)和Western blot的方法检测56例行PCI术治疗的AMI患者及20例冠状动脉造影正常者术前及术后第1~7 天血清中MMP-2和MMP-9的酶活性及蛋白表达水平,并分析MMP-2和MMP-9变化的相关性.结果: AMI患者PCI术前及术后血清MMP-2和MMP-9的酶活性及蛋白表达水平较对照组明显升高(P<0.01),PCI术患者在术后第1天血清MMP-2和MMP-9的酶活性及蛋白表达水平显著升高,并在术后第3天达高峰(P<0.01),第5天开始明显下降(P<0.05).经Spearman相关性分析表明,各组血清MMP-2的酶活性与MMP-9的酶活性呈正相关(P<0.01);各组血清MMP-2的表达水平与MMP-9的表达水平亦呈正相关(P<0.01).结论: 血清MMP-2和MMP-9酶活性及蛋白表达水平的增加可能是AMI患者心肌缺血再灌注损伤的机制之一.MMP-2和MMP-9是AMI病程进展中同样重要的炎性标志物.     

TWEAK诱导成纤维样滑膜细胞合成MMP-9的研究

目的 通过探讨p38MAPK(mitogen-activated protein kinases)信号通路在肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂(TWEAK)诱导风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)合成基质金属蛋白酶9(MMP-9)过程中的作用,寻求RA治疗的新靶点.方法 将rhTWEAK与FLS共培养,Western blot法检测FLS中p-p38MAPK和p65的表达;对经或未经SB203580预处理的FLS,应用ELISA法检测细胞培养液中MMP-9水平,RT-PCR法检测FLS中MMP-9 mRNA的表达水平.结果 100 ng/ml的TWEAK作用于RA FLS,能够使p38MAPK磷酸化,并使细胞核内p65蛋白表达增加;SB203580能够部分抑制TWEAK诱导RA FLS合成的MMP-9及MMP-9 mRNA的表达.结论 TWEAK诱导RA FLS合成IVlbtP-9过程中,p38MAPK信号通路处于激活状态,可诱导NF-κB表达.     

MMP-2、MMP-14及VEGF-C在结肠癌组织中的表达及其临床意义

分析基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-14(MMP-14)及血管内皮生长因子-C(VEGF-C)在结肠癌中的表达及其与肿瘤临床特征的关系,探讨三者在结肠癌发生发展中的作用及临床意义。采用免疫组织化学方法检测30例结肠癌患者的癌组织及对应癌旁正常结肠组织中MMP-2、MMP-14及VEGF-C的表达情况,分析三者的表达水平与患者性别、年龄、组织学分级、Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移等临床病理参数之间的相关性。结果显示:1 30例结肠癌组织中MMP-2、MMP-14及VEGF-C的阳性表达率分别为73.3%、80%和66.7%,而在癌旁正常结肠组织中的阳性表达率分别为10%、13.3%和16.7%,两组比较差异均有统计学意义(P0.05)。2 MMP-2、MMP-14及VEGF-C的表达水平与肿瘤大小、Dukes分期和淋巴结转移有关(P0.05),而与患者性别、年龄及组织学分级无明显相关性(P0.05)。3MMP-2、MMP-14及VEGF-C三者两两间表达均相关(P0.05)。4 30例结肠患者的癌组织中有16例共同高表达MMP-2、MMP-14及VEGF-C,与Dukes分期、病理分级和淋巴结转移有关(P0.05)。     

低氧抑制猪肺动脉平滑肌细胞MMP-2和MMP-9的表达

目的探讨低氧对猪肺动脉平滑肌细胞（PASMC）分泌基质金属蛋白酶（MMPs）的影响。方法采用酶谱法测定PASMC培养基中MMP-2和MMP-9的酶活性，免疫印迹法检测培养基中MMP-2和MMP-9的蛋白表达，免疫组化法测定细胞原位MMP-2和MMP-9的蛋白表达，RT-PCR法检测mRNA的表达。结果低氧后PASMC分泌的MMP-2酶活性、细胞内外蛋白表达量、mRNA表达量均下降；MMP-9酶活性、细胞外蛋白表达量下降，而细胞内蛋白表达无变化。结论低氧可抑制PASMC分泌MMP-2和MMP-9的酶活性，其机制可能是低氧影响PASMC中MMP-2基因的转录、影响MMP-9蛋白表达后的分泌与活化，导致MMP-2和MMP-9酶活性的改变。     

银杏内酯B对新生大鼠缺血性损伤海马MMP-2及MMP-9表达的影响

目的:观察银杏内酯B(GB)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠海马内基质金属蛋白酶MMP-2及MMP-9的影响,探讨GB的脑保护作用机制。方法:192只新生7天SD大鼠随机分为正常组(N组)、假手术组(S组)、HIBD模型生理盐水组(H组)和银杏内酯B治疗组(G组)。选择模型成功后24 h、4 d、10 d三个时间点,应用免疫组化、RT-PCR法检测各组大鼠海马CA1区MMP-2、MMP-9蛋白及mRNA的表达变化。结果:HIBD后海马MMP-2蛋白表达明显升高,4 d达高峰,10 d后开始下降;同时MMP-9蛋白表达也明显升高,但表达高峰在HIBD后24 h,4 d后开始下降。mRNA的表达趋势与蛋白表达相一致。N组可见极少量阳性表达细胞,S组中可见少量阳性表达细胞,G组的大鼠海马CA1区MMP-2、MMP-9的表达也明显升高,但是小于H组,G组的MMP-2、MMP-9的表达与H组相比差异有显著性(P<0.05)。结论:HIBD可引起MMP-2、MMP-9表达异常,并且呈动态变化;GB对脑保护作用机制之一可能与其抑制MMP-2、MMP-9高表达有关。     

丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1和血脑屏障的影响

目的:探讨丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)和血脑屏障的影响.方法:90只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,NBP预处理低剂量组、中剂量组、高剂量组.采用线栓法制作大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血2h再灌注24 h后以干湿重法测定脑组织含水量,伊文思蓝(EB)评估血脑屏障的破坏程度,实时PCR检测MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达水平.结果:脑缺血再灌注后,脑组织含水量及EB含量明显增加,MMP-9和TIMP-1表达均增强,与假手术组比较差异有统计学意义.丁苯酞预处理各组脑组织含水量及EB含量较模型组明显下降,MMP-9表达显著减少,TIMP-1表达明显增加,丁苯酞预处理中、高剂量组差异无统计学意义.结论:丁苯酞预处理对脑缺血再灌注损伤大鼠可通过调节MMP-9/TIMP-1的表达,降低血脑屏障通透性,减轻脑水肿,发挥预防性保护作用.     

丹参单体IH764-3促进H2O2刺激的鼠肝星状细胞胶原降解

目的观察丹参单体IH764-3对鼠肝星状细胞株(HSCs)基质金属蛋白酶-13(MMP-13)及其组织抑制因子(TIMP-1)表达的影响。方法应用体外细胞培养技术,用RT-PCR检测HSCsMMP-13mRNA水平;原位杂交和Westernblotting技术分别检测上述细胞TIMP-1mRNA和蛋白水平。结果IH764-3干预2h组MMP-13mRNA的表达强度明显上调,同时TIMP-1mRNA表达受抑制;IH764-3干预24h组TIMP-1蛋白表达受抑制。结论丹参单体IH764-3诱导HSCsMMP-13表达,抑制其TIMP-1表达是其抗肝纤维化的作用机制之一。     

机械牵张对兔角膜成纤维细胞细胞外基质基因表达的影响

目的 研究机械牵张与白介素-1β（IL-1β）联合作用对兔角膜成纤维细胞细胞外基质相关基因表达的影响。方法 对原代提取的兔角膜成纤维细胞进行牵张幅度15%、频率0.1 Hz的周期性牵张12、24、36 h,同时给予IL-1β处理,采用实时荧光定量PCR检测细胞基质金属蛋白酶（MMPs）、基质金属蛋白酶的组织抑制剂（TIMP-1）和I型胶原α1（Collagen Iα1）mRNA表达变化水平。结果 IL-1β单独作用可以诱导角膜成纤维细胞MMP-1、MMP-3和MMP-9 mRNA表达;MMP-1和MMP-3 mRNA表达随时间而降低,MMP-9、TIMP-1、Collagen Iα1 mRNA则随时间而增加;IL-1β与机械牵张联合作用使MMP-1、MMP-3、MMP-9 mRNA表达水平上调,TIMP-1和Collagen Iα1 mRNA表达下调,且具有时间依赖。单独机械牵张使Collagen Iα1 mRNA表达下降,IL-1β与机械牵张联合作用使其表达进一步下调,且具有时间依赖性。结论 机械牵张与炎性因子联合作用可加剧角膜组织破坏,促进角膜膨隆的发生发展。     

紫外线诱导人皮肤成纤维细胞形态改变及对基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究紫外线(UVB)诱导人皮肤成纤维细胞中端粒长度及基质金属蛋白酶(MMPs)的变化,及其在UVB诱导光老化中的作用。方法原代培养人成纤维细胞,用第5代细胞进行UVB照射处理。观察细胞形态,实时定量PCR检测COL1a1和h TERT的mRNA表达细胞端粒长度,Western blot检测MMP-3和MMP-1蛋白。结果 30 m J/cm2UVB照射人成纤维细胞24 h后,细胞逐渐变圆、皱缩和排列紊乱;COL1a1和TERT的mRNA水平表达显著升高,基质金属蛋白酶MMP-3和MMP-1蛋白水平也显著升高,端粒长度显著缩短。结论 UVB可能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,及MMP-3和MMP-1的表达明显升高,启动了光老化的早期进程。     

中耳胆脂瘤上皮细胞的抗凋亡机制

近年来,有关中耳胆脂瘤的发生与细胞凋亡状态的研究受到广泛关注。最新研究表明胆脂瘤上皮细胞凋亡受到抑制在中耳胆脂瘤的发生和发展中起着重要作用。本文对相关抗凋亡因子在中耳胆脂瘤中的表达进行了综述,并着重介绍了PI3K-Akt/PKB和MAPK两个抗凋亡信号转导通路及其在胆脂瘤上皮细胞抗凋亡机制中的作用。