独活寄生汤含药血清对退变软骨细胞细胞色素C及pro-Caspase-9、3的影响

背景：前期研究表明细胞凋亡是关节软骨细胞的中心性特征,对软骨破坏起着支配性的作用,是关节软骨退行性改变的病理因素之一。目的：观察独活寄生汤含药血清对大鼠退变软骨细胞释放细胞色素C、proCaspase-9和proCaspase-3的影响,探讨独活寄生汤治疗骨性关节炎的可能分子生物学机制。方法：建立体外退变软骨细胞模型,分别给予独活寄生汤含药血清或空白血清干预24,48 h,收集软骨细胞,Western Blot法检测干预后退变软骨细胞细胞色素C、proCaspase-9和proCaspase-3蛋白表达。结果与结论：随着干预时间的延长,在胞浆中空白血清组和含药血清组细胞色素C蛋白释放均逐渐降低,含药血清组释放较空白血清组明显减少(P < 0.05);线粒体中空白血清组和含药血清组细胞色素C蛋白外漏均逐渐降低,含药血清组外漏较空白血清组明显减少(P < 0.05)。空白血清组和含药血清组proCaspase-9、proCaspase-3蛋白量均逐渐升高,含药血清组升高更显著,且24 h组与48 h组之间差异有显著性意义(P < 0.01)。结果提示独活寄生汤可以通过减少细胞色素C的释放,减少Caspase-9、Caspase-3的前体裂解,推测能有效抑制软骨细胞凋亡。中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

温针灸调控膝骨关节炎模型兔关节软骨中PI3K/Akt信号通路的变化北大核心

背景:温针灸临床治疗膝骨关节炎疗效显著,但基础治疗机制尚未明确。目的:观察温针灸对兔膝骨关节炎模型关节软骨中PI3K/Akt信号通路及其下游因子Bcl-2、Bax表达的影响。方法:取6月龄新西兰兔40只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、药物组、温针灸组,每组10只。模型组、药物组、温针灸组兔右后肢膝关节伸直位以石膏管型固定4周,制备膝骨关节炎模型。造模成功后,模型组每日置于兔架上固定15 min,药物组每天行硫酸氨基葡萄糖灌胃治疗(77 mg/kg,1次/d),温针灸组每天行温针灸治疗(15 min/次,1次/d)。连续治疗28 d后,利用苏木精-伊红染色观察软骨损伤程度,Tunel法检测软骨细胞凋亡,RT-PCR法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的mRNA表达,Western blot法检测软骨组织中PI3K、Akt、Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果与结论:(1)苏木精-伊红染色显示,模型组软骨细胞数量减少,细胞排列无序,层次紊乱,软骨面被破坏,Mankin评分显著升高;药物组与温针灸组软骨细胞数量明显增多,基质着色深,Mankin评分降低;(2)与正常组相比,模型组软骨细胞凋亡率增高(P<0.05);与模型组相比,药物组、温针灸组软骨细胞凋亡率降低(P<0.05);(3)RT-PCR与Western blot检测显示,与正常组相比,模型组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达降低(P<0.05),Bax的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,温针灸组与药物组PI3K、Akt、Bcl-2的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),Bax的mRNA与蛋白降低(P<0.05);(4)结果表明温针灸可通过调控PI3K/Akt信号通路引起下游因子Bcl-2表达升高、Bax表达降低,进而抑制软骨细胞过度凋亡,达到保护关节软骨的作用。     

独活寄生汤拆方通过Wnt/β-catenin信号通路抑制软骨细胞炎症反应

文题释义：Wnt/β-catenin信号通路：是一条在生物进化中极为保守的通路。在正常细胞中，β-catenin只是作为一种细胞骨架蛋白在胞膜处与E-cadherin形成复合体对维持同型细胞的黏附、防止细胞的移动发挥作用。只有当细胞外Wnt信号分子与细胞膜上特异性受体Frizzled蛋白结合激活胞内散乱的蛋白导致GSK-3β失活，进而使β-catenin磷酸化降解，当解离的β-catenin达到一定浓度时细胞功能发生异常，表现为病理状态。独活寄生汤拆方：由中药独活、桑槲寄生、防风、秦艽、细辛、肉桂心组成具有祛风湿、止痹痛的祛湿止痛方，处方比例为3︰2︰2︰2︰2︰2。背景：Wnt/β-catenin信号通路在骨关节炎的炎症反应病理过程中扮演着重要角色，而独活寄生汤拆方可有效抑制软骨细胞的炎症反应，但其具体作用机制尚不明确。有待进一步深入研究。 目的：探讨独活寄生汤拆方是否可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。方法：①取SD雄性大鼠，采用机械Ⅱ型胶原酶消化法获取膝关节软骨细胞，倒置相差显微镜观察软骨细胞的形态结构，Ⅱ型胶原免疫组化鉴定软骨细胞。②用不同质量浓度的独活寄生汤拆方(300，400，500 mg/L)干预由脂多糖(10 μg/L)诱导的软骨细胞炎症模型，干预8 h后，采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定各组软骨细胞培养液中白细胞介素1β、肿瘤坏子因子α水平，确定独活寄生汤拆方干预浓度。③将第2代软骨细胞分为4组：空白组含正常培养液；模型组培养液中含10 μg/L脂多糖；独活寄生汤拆方组培养液中含10 μg/L脂多糖和400 mg/L独活寄生汤拆方；抑制剂组培养液中含10 μg/L脂多糖和10 mg/L Dickkopf-1。干预8 h后，采用Western blot法检测β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、GSK-3β、CKI-ε的蛋白表达量。结果与结论：①软骨细胞鉴定：获取的软骨细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色胞浆呈棕黄色，具备软骨细胞典型特征；②ELISA结果显示：模型组培养液中白细胞介素1β和肿瘤坏子因子α水平均高于空白组，400 mg/L独活寄生汤拆方干预后两种炎症因子水平较模型组显著降低，所以确定独活寄生汤拆方干预浓度为     400 mg/L；③Western blot结果显示：模型组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε的蛋白表达量均高于空白组，而GSK-3β蛋白表达量低于空白组；独活寄生汤拆方组和抑制剂组β-catenin、Wnt-4、Frizzled-2、CKI-ε蛋白表达量低于模型组，而GSK-3β蛋白表达量高于模型组。④结果表明：独活寄生汤拆方可以通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制由脂多糖诱导的软骨细胞炎症反应。ORCID: 0000-0003-3530-5683(李慧)中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建；骨细胞；软骨细胞；细胞培养；成纤维细胞；血管内皮细胞；骨质疏松；组织工程     

揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Fas表达的影响

背景：现代研究证实细胞的过度凋亡加速软骨组织的退变,而手法的力学刺激对关节软骨影响的分子层面研究至今少有报道。 目的：观察揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas表达的作用。 方法：50只新西兰兔随机等分为正常组、假手术组、模型组、手法组和针剂组,后3组建立右下肢骨内高压型膝关节骨性关节炎模型。造模1周后,手法组使用揉髌手法隔天治疗1次,每次10 min,共治疗5周共17次;针剂组关节内注射玻璃酸钠液0.6 mL,每周1次,共5次。 结果与结论：造模后8周末取兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,苏木精-伊红染色提示模型组软骨组织退变明显,软骨细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),胫骨平台软骨组织中Bcl-2、Bax、Fas表达率明显升高(P < 0.01),而手法组和针剂组软骨组织退变轻微,软骨细胞凋亡率及Bax、Fas表达率较模型组降低(P < 0.01),但胫骨平台软骨组织中Bcl-2表达升高(P < 0.01)。说明揉髌手法与关节内注射玻璃酸钠一样可以明显降低兔膝关节软骨细胞的凋亡率,其作用机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Fas表达有关。     

氯吡格雷对兔髂腹动脉球囊损伤后新生内膜的影响

目的： 观察氯吡格雷对兔髂腹动脉球囊损伤后内膜增生的影响和作用机制。方法: 37只新西兰兔随机分为正常组、模型组、氯吡格雷组及阿托伐他汀组。高脂喂养加髂动脉内膜剥脱建立动脉粥样硬化模型。检测血脂和高敏C反应蛋白（hsCRP）。12周后观察动脉病理组织学改变并测量内膜、中膜厚度和面积，原位杂交检测血小板源性生长因子（PDGFmRNA）的表达，免疫组化测定凋亡基因Bcl-2和Bax的表达。结果： ①模型组血清hs-CRP、髂动脉内膜厚度和面积、PDGFmRNA、凋亡基因Bcl-2/Bax比值较正常组显著增加（P＜0.05,P＜0.01）；②氯吡格雷组血清hs-CRP、内膜厚度与面积、PDGFmRNA的表达、Bcl-2/Bax的比值小于模型组（P＜0.05,P＜0.01），血脂水平和模型组无明显差异；③氯吡格雷对上述指标的改变与阿托伐他汀无显著差异。结论： 氯吡格雷降低炎症反应、抑制PDGFmRNA表达、促进细胞凋亡，减轻高脂和球囊损伤后动脉内膜增殖。     

RNA 干扰抑制BAG-1 基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响研究

目的:探讨抑制BAG-1(Bcl-2-associated athanogene-1)基因表达对皮肤鳞状细胞癌增殖及凋亡的影响。方法:采用LipofectamineTM2000 将BAG-1 的siRNA 转染皮肤鳞状细胞癌A431,转染后48 h,RT-PCR 检测BAG-1 的mRNA 表达,Western blot 检测BAG-1 的蛋白表达;CCK8 和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡情况;Western blot 检测B 细胞淋巴瘤/ 白血病-2(Bcl-2)家族促凋亡蛋白Bcl-2 相关X 蛋白(Bax)及Wnt/β-catenin 信号通路β-连环蛋白(β-catenin)、Survivin 的蛋白表达;ELISA 试剂盒检测白介素6 (IL-6)、血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与空白组和阴性对照组比较,转染BAG-1 的siRNA 可明显抑制BAG-1 在转录和翻译水平上的表达;与空白组较,BAG-1-siRNA 组细胞增殖显著降低,细胞凋亡率显著增加,Bax 蛋白表达上调, β-catenin、Survivin 蛋白表达下调,IL-6、VEGF 含量均显著降低(P<0.05)。结论:BAG-1 表达沉默可降低皮肤鳞状细胞癌增殖,促进细胞凋亡,上调Bax 及下调Wnt/ β-catenin 信号通路表达,降低IL-6、VEGF 因子的分泌。     

下调SLP-2基因表达抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导凋亡的机制研究

目的：探讨下调人Stomatin like protein 2(SLP-2)基因表达对脑胶质瘤细胞增殖凋亡的影响。方法：SLP-2的靶向siRNA序列转染人脑胶质瘤U251细胞（SLP-2敲低组）,另设空白组（细胞未做任何处理）和阴性对照组（细胞转染无义siRNA序列）,转染48 h后Western blot检测各组细胞中SLP-2、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Notch1、Hes1的蛋白表达;CCK8检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果：阴性对照组SLP-2的蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组SLP-2的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;阴性对照组细胞存活率、细胞凋亡率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Bax、Notch1、Hes1蛋白表达与空白组差异无统计学意义（P>0.05）,而SLP-2敲低组细胞存活率、IL-6和TNF-α的mRNA表达及Bcl-2、Notch1、Hes1的蛋白表达显著低于空白组,细胞凋亡率及Bax蛋白表达显著高于空白组（P>0.05）。结论：下调SLP-2基因表达可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖及诱导细胞的凋亡,下调炎症细胞因子IL-6和TNF-α的表达,其机制与抑制Notch1信号通路有关。     

RNA干扰沉默Bax基因对线粒体途径软骨细胞凋亡的影响

 【摘要】 目的 利用体外培养的鼠软骨细胞,研究RNA干扰沉默Bax基因表达对经线粒体途径细胞凋亡的影响。方法 体外分离培养SD大鼠软骨细胞;Bax siRNA干扰沉默Bax基因表达。RT-PCR和Western blot检测mRNA及蛋白表达水平;MTT法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测Bcl-2、Cytochrome C蛋白的表达。结果 Bax siRNA干扰24h后,Bax的mRNA和蛋白的表达水平均明显降低。细胞凋亡受到明显抑制,细胞存活率增高。并且,在Bax基因沉默的细胞中,Cytochrome C蛋白表达水平降低,同时Bcl-2蛋白表达水平升高。结论 RNA干扰沉默Bax基因可抑制鼠软骨细胞凋亡并且促进其存活,其机制可能与线粒体途径相关。     

“双固一通”温针灸实验性膝骨性关节炎模型兔Bcl-2及Bax蛋白的表达

背景：软骨细胞凋亡在骨性关节炎的发生发展中起到关键作用。 目的：观察“双固一通”温针灸预防兔膝骨性关节炎过程中对兔膝关节软骨Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法：采用结扎股静脉法建立兔膝骨性关节炎模型,造模后采用“双固一通”温针灸法进行干预,针灸穴位包括关元(CV 4)、足三里(ST 36)、内膝眼(EX-LE4)、犊鼻(ST 35)和阳陵泉(GB 34),1次/d,留针20 min,连续8周。 结果与结论：膝骨性关节炎后,兔的软骨细胞凋亡指数明显升高(P < 0.01),“双固一通”温针灸可降低软骨细胞凋亡指数(P < 0.01)。免疫组织化学染色显示：“双固一通”温针灸兔和模型兔关节软骨Bcl-2表达明显增高(P < 0.05),而“双固一通”温针灸兔和正常兔关节软骨Bax的表达明显低于模型兔(P < 0.05),“双固一通”温针灸兔Bcl-2/Bax高于模型兔和正常兔(P < 0.05)。说明“双固一通”温针灸可上调Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达抑制软骨细胞过度凋亡,对兔膝骨性关节炎起防治作用。     

重组大鼠肝再生增强因子抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

目的： 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR）在体外对庆大霉素（GM）诱导的大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK-52E细胞）凋亡的影响及其作用机制。方法: 将NRK-52E细胞分为正常对照组、庆大霉素处理组（GM 1.6 g/L）和rrALR干预组（分别加入GM 和不同浓度的rrALR）,培养细胞24 h、48 h。吖啶橙/溴乙啶（AO/EB）染色、DNA琼脂糖凝胶电泳及Annexin V/PI双染流式细胞术检测各组细胞的凋亡状态。Western blotting和RT-PCR检测各组细胞不同时点Bcl-2和Bax蛋白、mRNA的表达。结果: (1)rrALR对庆大霉素诱导的NRK-52E细胞凋亡具有抑制作用（P＜0．05）。 (2)rrALR能够呈剂量依赖方式增加细胞Bcl-2蛋白及核酸的表达（P＜0．05）、降低细胞Bax蛋白及核酸的表达(P＜0．05),使Bcl-2/Bax比值升高（P＜0．05）。结论: rrALR可以通过调节Bcl-2家族Bax和Bcl-2蛋白及核酸的表达水平,抑制庆大霉素诱导的肾小管上皮细胞凋亡,减轻肾毒性药物对小管上皮细胞的损伤。     

罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax和Bcl-2蛋白表达的影响*

目的： 探讨罗布麻颗粒对化疗型卵巢早衰大鼠Bax 和Bcl-2 蛋白表达的影响。方法：性成熟SD雌鼠随机分 为对照组、造模组,腹腔注射（ 顺铂1.5 mg/kg）制备卵巢早衰模型,随机分为卵巢早衰模型组和罗布麻颗粒高、 中、低剂量治疗组。H-E 染色观察卵巢形态;ELISA 检测各组大鼠血清Bax、Bcl-2 和雌二醇、促黄体生成素（LH）、 促卵泡激素（FSH））的含量,免疫组织化学法检测卵巢Bax 与Bcl-2 蛋白表达。结果：卵巢早衰模型组大鼠中初 级卵泡减少,闭锁卵泡增多,罗布麻颗粒高剂量治疗组大鼠可见初级卵泡,闭锁卵泡较卵巢早衰模型组减少;卵 巢早衰模型组大鼠血清中雌二醇及Bcl-2 含量降低,FSH、LH、Bax 的含量升高; 各药物治疗组雌二醇、Bcl-2 含 量升高,FSH、LH、Bax 的含量降低;Bax 蛋白主要表达在颗粒层细胞及卵泡液中,卵巢早衰模型组大鼠较对照 组表达显著升高, 各药物治疗组在不同程度上能够降低其表达;Bcl-2 蛋白在各组主要表达在颗粒层细胞中,卵 巢早衰模型组大鼠较对照组表达显著下降, 各药物治疗组在不同程度上能够升高其表达。结论：顺铂能够导致雌 性大鼠血清中性激素水平的紊乱及卵巢组织形态的改变,可能与细胞凋亡因子Bax 与Bcl-2 在血清及卵巢组织中 表达水平的高低有关;罗布麻颗粒可能通过下调Bax 蛋白、上调Bcl-2 蛋白从而改善顺铂致卵巢早衰大鼠的卵巢 功能。     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

越桔原花青素调控脑胶质瘤细胞生长的机制研究*

 目的： 探讨越桔原花青素对脑胶质瘤细胞生长的影响。方法: 培养脑胶质瘤C6细胞,将其分为对照组以及10、20和40 μg/L越桔原花青素组,MTT法检测药物对C6细胞生长的影响,倒置显微镜观察细胞生长的变化,Annexin V/PI染色检测细胞凋亡率的变化,免疫细胞化学法检测Bcl-2与Bax蛋白表达,Western blotting检测Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白表达。结果: 在24、48和72 h时,10、20和40 μg/L越桔原花青素均抑制C6细胞的生长,24和48 h时40 μg/L越桔原花青素组、72 h时20和40 μg/L越桔原花青素组细胞生长明显受抑制 (均P＜0. 01);倒置显微镜观察发现,各药物组细胞密度随药物浓度升高而减少;Annexin V/PI分析显示,细胞的凋亡率亦随着药物浓度的增加而明显增加;细胞免疫组化结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,C6细胞表达Bcl-2蛋白减少,表达Bax蛋白增加,但均无明显差异;Bax/Bcl-2的比值随着药物浓度升高而增加（P＜0.05或P＜0.01）; Western blotting结果显示,10、20和40 μg/L越桔原花青素组中,随着药物浓度升高,细胞表达Bcl-2蛋白减少（P＜0.01）而Bax和caspase-3蛋白表达均增加,Bax/Bcl-2的比值也明显增加（P＜0.01）。结论: 越桔原花青素抑制脑胶质瘤C6细胞的生长,其作用机制与调控Bax蛋白增加和Bcl-2蛋白减少,使Bax/Bcl-2比值增加,从而激活caspase-3,诱导凋亡发生有关。     

培补肝肾方药对帕金森模型小鼠黑质内Bax和Bcl-2表达的影响

目的：观察培补肝肾方药对帕金森模型小鼠黑质内Bax和Bcl-2表达的影响，探讨此方药预防帕金森病的机制。方法：成年C57-BL雄性小鼠分为对照组、模型组和中药治疗组。应用免疫组织化学染色技术，观察各组小鼠黑质内Bax和Bcl-2表达的变化情况。结果：Bax和Bcl-2阳性神经元主要位于黑质致密部，其中Bax和Bcl-2阳性神经元的数量在对照组和中药治疗组均较少且组间无显著差异；MPTP造模后，Bax阳性神经元的数量随时间明显递增，Bcl-2阳性神经元的数量亦呈逐渐递增的趋势。结论：培补肝肾方药可能通过抑制黑质神经元内Bax基因表达的途径抑制黑质神经元的凋亡，从而对帕金森病发挥预防和治疗作用。     

苦参碱对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及相关蛋白表达的影响*

 目的：  探讨苦参碱在体外对人髓母细胞瘤D341细胞凋亡及Bax、Bcl-2、丝氨酸/苏氨酸激酶Akt和磷酸化Akt（p-Akt）表达的影响。方法: 体外培养的D341细胞分为实验组（加不同浓度的苦参碱）和对照组（不加苦参碱）,用CCK-8法检测苦参碱对D341细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blotting检测苦参碱对D341细胞Bax、Bcl-2、Akt和p-Akt蛋白表达的影响。结果: 苦参碱在体外能明显地抑制D341细胞的生长,作用呈量效与时效关系;随着作用药物浓度的增高和作用时间的延长,其凋亡率逐渐升高,在透射电镜下观察,细胞可见染色质趋边固缩,胞浆中空泡增多、变大,并且出现凋亡小体;Western blotting结果表明,随着药物浓度的增加,药物能使瘤细胞Bax蛋白的表达水平增强,却使Bcl-2和p-Akt蛋白的表达水平下降。结论: 苦参碱可诱导D341细胞的凋亡而发挥体外抗肿瘤作用,其诱导瘤细胞的凋亡与上调Bax蛋白、下调Bcl-2及PI3K /Akt 信号通路中p-Akt蛋白的表达水平有关。     

法洛四联征右室流出道肥厚心肌细胞凋亡、Bax及Bcl-2蛋白表达情况

目的研究法洛四联征右室流出道肥厚心肌细胞凋亡、Bax及Bcl-2蛋白表达情况，并探讨其对手术时机的选择的意义。方法36例法洛四联征按年龄分成三个组。A组：≤2岁组；B组：〉2岁，且≤10岁；C组：〉10岁。用末端标记原位细胞凋亡法和免疫组化法检测其右室流出道肥厚心肌细胞凋亡指数，Bax及Bcl-2蛋白表达水平。结果心肌细胞凋亡指数，A组与B组和C组相比较（P〈0．05），A组最小。随年龄增长，Bax表达明显增多（P〈0．05），Bcl-2表达先增后减，但是Bcl-2／Bax比值随年龄增长而逐渐减少（P〈0．05）。结论不同年龄阶段法洛四联征右室流出道肥厚心肌细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2蛋白表达存在明显差异。2岁内进行根治手术，预后较好。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法： 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注60 min的方法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分假手术组、缺血再灌注组（IR）、EGCG不同剂量治疗组和丹参（SM）组。用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞，用链酶亲和素-生物素-酶复合物（SABC）免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达。 结果： 在假手术组未发现凋亡细胞，IR组细胞凋亡明显，Bcl-2和Bax蛋白表达增加，但以Bax更明显，Bcl-2/Bax值显著低于假手术组（P<0.01）；EGCG组凋亡细胞明显少于IR组，Bcl-2表达显著大于而Bax表达显著少于IR组，Bcl-2/Bax值显著高于IR组（P<0.01）。 结论： EGCG能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2/Bax值有一定关系。     

胱抑素C对氧化型低密度脂蛋白诱导的人血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的： 研究胱抑素C（cystatin C）对氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的人血管平滑肌细胞（VSMC）的作用，以探讨cystatin C在心血管疾病中的生物学特性。方法：利用ox-LDL诱导人VSMC，MTT法检测ox-LDL诱导时间及浓度对细胞存活率的影响，确定ox-LDL最佳诱导浓度和时间，将对数生长期的人VSMC随机分成正常细胞组、pCDNA3.1-cystatin C转染组、ox-LDL诱导组以及ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组，检测各组细胞乳酸脱氢酶（LDH）、活性氧（ROS）、三磷酸腺苷（ATP）生成量以及caspase-3活性变化，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和Western blotting法测定各组凋亡相关基因bax、bcl-2和Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果：ox-LDL+ pCDNA3.1-cystatin C转染组与ox-LDL诱导组比较，LDH、ROS生成量和caspase-3表达量明显降低，差异有统计学意义（P<0.01）；ATP生成量显著升高，差异有统计学意义（P<0.01）。RT-PCR和Western blotting法测定显示ox-LDL诱导组促凋亡基因bax及Bax蛋白表达增加、抗凋亡基因bcl-2和Bcl-2蛋白表达减少，ox-LDL＋pCDNA3.1-cystatin C转染组Bcl-2表达增加、Bax表达减少，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：Cystatin C抑制ox-LDL诱导的VSMC凋亡，其机制可能与其上调Bcl-2及下调Bax表达有关。     

哮喘豚鼠嗜酸细胞Bcl-2和Bax mRNA表达及意义

目的:观察Bcl-2及Bax mRNA表达与嗜酸粒细胞（Eos）凋亡的关系,探讨其在哮喘发病中的作用。方法:健康豚鼠随机分为正常组、哮喘组,卵蛋白致敏激发制作哮喘模型,检测支气管灌洗液（BALF）中低密度EoS（HEos）及正常密度Eos（NEos）细胞凋亡,原位杂交及RT-PCR法检测Bcl-2及Bax mRNA表达。结果:哮喘组EoS显著高于正常组,以HEos为著（P<0.01）;Eos凋亡率明显低于正常组（P<0.01）。哮喘组不同密度Eos表达Bcl-2 mRNA明显增加,而Eos表达Bax mRNA明显减少。结论:哮喘时Eos存在凋亡抑制,这是哮喘时Eos增多的原因之一,哮喘豚鼠BALF Eos表达Bcl-2增加,表达Bax减少,表明Bcl-2及Bax可通过调节Eos凋亡参与哮喘发病。     

独活寄生汤结合骨髓基质干细胞复合体修复兔膝关节软骨缺损

背景:实验表明,骨髓基质干细胞复合脱细胞真皮基质能修复家兔膝关节软骨缺损,中药独活寄生汤能促进软骨的修复,且提高修复质量。目的:进一步验证独活寄生汤对骨髓基质干细胞复合体修复兔关节软骨缺损的影响,评价修复效果。方法:取兔骨髓基质干细胞进行体外增殖后,复合于改建后的脱细胞真皮基质载体上,植入到兔膝关节软骨缺损,并以中药独活寄生汤灌胃为独活寄生汤+干细胞组,并设立独活寄生汤组、单纯复合体组、空白组为对照组。于4,8,12周后分别对修复组织进行形态学观察及组织学检查。结果与结论:术后12周,独活寄生汤+干细胞组的缺损由透明软骨样组织充填,软骨及软骨下骨组织基本修复,修复的软骨组织在组织形态学上优于其他各组。结果证实,骨髓基质干细胞复合体能修复家兔膝关节软骨缺损,中药独活寄生汤能促进软骨的修复,且提高修复质量。