肝癌患者组织中凝血及纤溶因子的基因表达检测与分析

目的:检测组织因子（TF）、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）及其受体（uPAR ）mRNA在肝细胞癌组织中的表达并探讨其临床意义。 方法:利用RT-PCR法分别检测27例肝细胞癌、癌旁及27例正常肝组织中TF、uPA、uPA mRNA表达阳性率及相对表达强度，并结合临床病理资料进行分析。 结果:TF、uPA、uPAR在肝细胞癌组织中阳性率及相对表达强度分别为62.96%（17/27）、70.37%（19/27）、77.78%（21/27）；0.567±0.268、0.964±0.458、0.784±0.322,均显著高于癌旁组织及正常组织，差异显著(P<0.05)。3者在肝癌组织中相对表达强度与肿瘤大小及部分侵袭转移指标有关，其中TF mRNA表达强度在肝内及肝外转移及门脉癌栓组高于无肝内及肝外转移及无门脉癌栓组(P<0.05) ，uPA mRNA在有包膜侵润、肝内转移及门脉癌栓组高于无包膜侵润、无肝内转移及门脉癌栓组(P<0.05)；uPAR mRNA在有肝内转移及门脉癌栓组高于无肝内转移及门脉癌栓组(P<0.05)。经Pearson检验肝细胞癌患者TF、uPA和uPAR mRNA表达呈正相关［TF-uPA：r=0.373(P<0.01)，TF-uPAR：r=0.534(P<0.01)，uPA-uPAR：r=0.365 (P<0.01)］。 结论:肝细胞癌组织中TF、uPA及uPAR的mRNA显著升高并与部分侵袭转移指标有关，提示3者可能在肝细胞癌的发生及侵袭转移起协同作用。     

TLR2和TLR4在原发性肝癌中的表达

目的：本研究通过检测原发性肝癌Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达，分析其与临床病理生理因素的关系，探讨TLR2，TLR4在原发性肝癌疾病过程中的可能作用。方法：采用免疫组化法和实时荧光定量PCR分别在蛋白水平及mRNA水平检测原发性肝癌组织和配对癌旁组织TLR2、TLR4的表达。结果：原发性肝癌组织在蛋白水平和mRNA水平TLR2和TLR4的表达均明显低于癌旁组织（P<0.01）。但免疫组化结果显示不论是肝癌组织还是癌旁组织，TLR2和TLR4的表达均明显高于正常肝组织（P<0.01，P<0.05），有门静脉分支癌栓的患者癌组织TLR4的表达强度低于无门静脉分支癌栓的患者（P<0.05）。结论：肝癌组织TLR2和TLR4的表达与癌旁组织相比受到相对抑制，但高于正常肝组织，TLR2和TLR4信号途径可能参与了原发性肝癌的病理过程。     

Ⅰ型细胞间粘附分子在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨肝癌细胞产生的Ⅰ型细胞间粘附分子１（ＩＣＡＭ－１）在肝细胞癌侵袭和转移过程中的作用。方法用原位分子杂交技术检测了３４例原发性肝癌及癌旁组织中ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达。结果２１例侵袭性生长的肝癌中１９例ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ表达阳性,明显高于癌旁;１１例伴门静脉癌栓或肝内转移灶形成的肝癌,其癌组织均表达强阳性,癌栓及转移灶表达阳性;而１３例包膜完整的肝癌仅有４例表达阳性。结论肝癌细胞ＩＣＡＭ－１ｍＲＮＡ的表达与肝癌细胞的侵袭及转移相关。     

TIMP-3在肝癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭转移的关系

目的: 检测金属蛋白酶-3组织抑制剂(TIMP-3)在肝细胞癌患者血浆和肿瘤及正常肝组织中的表达并探讨其临床意义。方法: 收集56例肝细胞癌患者和30例对照组的血浆,从肿瘤大小、分化程度、肝外转移、门脉转移及淋巴转移几个因素比较TIMP-3蛋白表达水平;取手术标本包括30例原位癌组织标本、30例门脉癌栓组织标本、30例淋巴转移组织标本以及30例肝正常组织标本,采用RT-PCR和Western blotting法检测各个样本的TIMP-3mRNA及蛋白表达,结合临床病理资料分析其意义。结果: (1)有肝外转移患者的血浆TIMP-3蛋白表达水平明显低于无肝外转移者(P<0.05)。(2)TIMP-3 mRNA在原位肝癌组织中表达水平为0.52±0.09,在门脉癌栓组织中的表达水平为0.42±0.07,在淋巴转移灶的表达水平为0.40±0.08,在正常肝组织中表达水平为0.78±0.09;3组肿瘤组织与正常肝组织相比,TIMP-3 mRNA表达均降低,显著差异(P＜0.01)。(3)TIMP-3蛋白在原位肝癌组织中表达水平为77.04±8.83,在门脉癌栓组织中的表达水平为64.43±3.80,在淋巴转移灶的表达水平为62.80±3.73,在正常肝组织中表达水平为115.08±8.60;3组肿瘤组织与正常肝组织相比TIMP-3蛋白表达均降低,显著差异(P＜0.01)。结论: 肝癌患者血浆和组织中TIMP-3的表达水平明显下降,在转移灶中的表达下降更显著,提示TIMP-3的低表达与肿瘤细胞的侵袭转移能力有关。     

原位杂交检测基质溶解素mRNA在肝细胞癌中的表达

为探讨基质溶解素ｍＲＮＡ在肝细胞癌的侵袭和转移过程中的意义，应用原位杂交技术检测１９例肝细胞癌及癌旁组织中基质溶解素ｍＲＮＡ的表达。９例肝细胞癌组织表达阳性，癌旁组织均为阴性。在出现门静脉癌栓的癌组织及病理学分级Ⅲ－Ⅳ级的肝细胞癌组织中的表达水平高于未出现门静脉癌栓及病理学分级Ⅰ～Ⅱ级的肝细胞癌组织。门静脉癌栓形成是肝细胞癌肝内及肝外转移的标志之一。提示金属蛋白酶类在肝癌侵袭转移过程中起着重要的作用     

肝细胞癌中Ezrin、Moesin表达的临床病理学意义

目的探讨肝细胞癌中Ezrin、Moesin的表达及其与肝细胞癌分化程度、恶性程度及侵袭的关系。方法根据Edmondson分级对肝细胞癌组织分级，采用免疫组化的方法检测了23例肝细胞癌组织、癌旁组织和正常肝组织中Ezrin、Moesin的表达。结果（1）Ezrin、Moesin在肝细胞癌组织、癌旁组织和正常肝组织中均有表达。（1）Ezrin在肝细胞癌组织中表达显著高于癌旁组织和正常肝组织（P〈0．001），肝细胞癌组织中高侵袭组表达显著高于低侵袭组（P=0．023），并与Edmondson分级（P=0．004）显著相关。（3）Moesin在肝细胞癌组织中的表达显著高于正常肝组织（P=0．003），肝细胞癌组织中高侵袭组与低侵袭组的表达差异无显著性（P=0．448），而与Edmondson分级（P=0．008）显著相关。结论Ezrin在肝细胞癌组织中表达增加与Edmondson分级和侵袭性相关；Moesin在肝细胞癌组织中表达增加与Edmondson分级相关，而与侵袭性无关。     

MKK-4、MMP-9基因的表达与原发性肝癌肿瘤侵袭转移的关系

目的:检测m itogen activated prote in k inase k inase 4(MKK-4)、MMP-9基因在原发性肝癌中的表达,探讨原发性肝癌MKK-4与MMP-9 mRNA表达水平间的相互关系,及两者对原发性肝癌侵袭转移的影响。方法:应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例原发性肝癌癌组织和相应癌旁组织及12例正常肝组织中MKK-4 mRNA、MMP-9 mRNA的表达。结果:癌旁与正常肝组织的MMP-9 mRNA表达差异无显著统计学意义(P>0.05),癌中的MMP-9 mRNA表达增高,且转移癌与未转移癌组间有差异(P<0.05),转移癌组、未转移癌组分别与正常组及癌旁组织比较有差异(P<0.01);MKK-4 mRNA在正常及癌旁组织中表达无差异(P>0.05),转移癌组、未转移癌组分别与正常组及癌旁组比较有差异(P<0.01),转移癌中较未转移癌中的表达低(P<0.05);MKK-4或MMP-9的mRNA表达均与肿瘤的大小、分化无关(P>0.05);MKK-4 mRNA与MMP-9 mRNA的表达有一定的相关性(r=-0.925,P<0.01)。结论:提示MKK-4 mRNA与MMP-9 mRNA的表达改变与原发性肝癌侵袭转移的发生发展有一定的关系。     

血小板反应蛋白-1及受体CD36在肝细胞性肝癌中的表达及意义

目的：研究肝细胞性肝癌(HCC)中血小板反应蛋白-1及受体CD36的表达及其与侵袭转移和血管生成的关系。 方法： 应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学（SP法）法检测43例肝癌和癌旁组织中血小板反应蛋白-1、CD36的表达、CD34标记微血管密度，并分析其与肝癌临床病理特征及相互之间的关系。 结果： 肝癌中血小板反应蛋白-1的阳性率低于癌旁组织, 与有癌栓、包膜不完整、侵袭转移能力强呈负相关；CD36的表达与有癌栓、侵袭转移能力强呈负相关，两者呈正相关，并且两者阳性组的微血管密度均显著低于阴性组。 结论： 血小板反应蛋白-1可抑制肝癌的生长、延缓侵袭转移、抑制血管生成，受体CD36可能是血小板反应蛋白-1的作用途径之一。     

Cdc25a在跨种属肝癌组织中的表达及其意义*

 目的：研究细胞周期通路中的细胞分裂周期蛋白25a (Cdc25a)在人、大鼠和树鼩不同种属的肝癌、癌旁及正常肝组织中的表达和意义,进一步验证跨种属筛选肝癌关键基因研究策略的可行性。方法：采用实时荧光定量PCR和Western blotting技术检测人、大鼠和树鼩的肝癌及其相应癌旁组织以及正常肝组织中Cdc25a mRNA和蛋白表达水平。结果：Cdc25a mRNA表达水平在人、大鼠和树鼩的肝癌组织中均高于正常肝组织（均P<0.05）;在人和大鼠肝癌组织中的表达高于其对应的癌旁组织（P<0.05）;其余各组织间mRNA表达水平的差别无统计学意义（均P>0.05）。Cdc25a mRNA在人肝癌组织中的表达水平与病人的临床分期、门脉癌栓及肝外转移明显相关,而与术后复发、肿瘤直径、肿瘤个数、血清甲胎蛋白水平和肿瘤分化无明显关系。Western blotting检测结果显示Cdc25a在人、大鼠和树鼩肝癌组织中的蛋白表达水平均较癌旁和正常肝组织显著上调。结论：Cdc25a有可能是影响肝癌发生和发展的重要分子之一,跨种属筛选肿瘤关键基因策略可能有助于发现肝癌关键基因。     

nm23-H1基因表达及突变与肝癌转移的关系

[摘要] 目的　研究nm23-H1基因的表达及突变和原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma ,HCC）发展和转移的关系。方法 应用逆转录 PCR（RT-PCR）和逆转录PCR-单链构象多态法（RT-PCR SSCP）对30例肝癌组织、30例癌旁组织和4例正常肝组织中nm23-H1基因 mRNA表达和基因突变情况进行检测。 结果 nm23-H1基因在肝癌组织、癌旁组织、正常组织中的表达水平分别为1.62±0.41、1.30±0.30和1.23±0.39。肝癌组织中nm23-H1基因的表达水平明显高于癌旁组织（P<0.05）和正常组织（P<0.01）； 低分化肝癌组织中nm23-H1基因表达水平低于高、中分化肝癌组织中nm23-H1基因表达水平（P<0.05）；有卫星转移灶和无卫星灶的肝癌组织中nm23-H1基因表达水平无显著差异（P>0.05）；30例肝癌组织及相应的癌旁组织中未发现nm23-H1 cDNA基因突变。 结论 nm23-H1基因表达水平增高与肝癌的转移有密切关系，nm23-H1基因的异常表达是HCC转移中的频发事件而与基因突变无关。     

E-cadherin的表达与肝细胞癌侵袭和转移的关系

目的研究上皮性钙黏蛋白（E-cadherin）在人肝细胞癌（HCC）中的表达情况,探讨其与肝癌的相关性。方法选择56例有完整随访资料的肝细胞癌及相应癌旁组织标本、20例正常肝组织标本,用RT-PCR方法检测E-cadherinmRNA的表达;用免疫组织化学方法检测E-cadherin的表达。结果①E-cadherin在肝细胞癌组织中的表达显著低于癌旁组织和正常组织（P〈0．05）,而在癌旁组织和正常组织中的表达无差异;②E-cadherin在肝癌组织中的表达与术后复发时间呈正相关（P〈0．05）,与病理分期呈负相关（P〈0．05）;③癌组织中E-cadherin表达与肝外转移呈负相关（P〈0．05）;④癌旁组织中E-cadherin表达与术后复发时间呈正相关（P〈0．05）。结论E-cadherin表达缺失或下调与肝癌的分化程度、侵袭转移能力和复发倾向相关,对肝癌临床转归的评估有一定指导意义。     

CD138和乙酰化肝素酶在肝细胞癌中表达的组织芯片研究

目的探讨人肝细胞癌中CD138和乙酰化肝素酶的表达水平及其与肝细胞癌发生、发展、转移和复发的关系。方法运用组织芯片技术,通过免疫组织化学EnVision法研究197例肝细胞癌、癌旁肝组织及其中66例转移病灶中CD138和乙酰化肝素酶的表达水平。48例获得4～72个月随访。结果（1）CD138的表达率在肝细胞癌和癌旁肝组织中分别为48．7％（96／197）和65．0％（128／197。P〈0．05）,在早期和中晚期肝细胞癌中分别为61．7％（29／47）和44．7％（67／150,P〈0．05）,在有和无转移的中晚期肝细胞癌组中分别为33．3％（22／66）和53．6％（45／84,P〈0．05）,在1年之内和1年之上复发组中分别为23．3％（7／30）和61．1％（11／18,P〈0．05）;（2）乙酰化肝素酶的阳性表达率在肝细胞癌和癌旁肝组织中分别为35．5％（70／197）和12．7％（25／197,P〈0．05）,在早期和中晚期肝细胞癌中分别为29．8％（14／47）和37．3％（56／150,P〉0．05）,在伴随和不伴转移的肝细胞癌组织中48．5％（32／66）和28．6％（24／84,P〈0．05）,在1年之内和1年之上复发组中分别为50．0％（15／30）和44．4％（8／18,P〉0．05）;（3）66例伴随转移的肝细胞癌组织中,CD138在乙酰化肝素酶阴性组中的高表达率高于阳性组（P〈0．05）。结论（1）CD138在肝细胞癌组织中的低表达与其发生、发展、转移和复发密切相关,与分级、HBV感染及血清甲胎球蛋白值无关;（2）CD138蛋白低表达与乙酰化肝素酶高表达参与肝细胞癌的转移过程。     

Expression of apolipoprotein M in human hepatocellular carcinoma tissues

The present study examined mRNA levels and protein mass of apolipoprotein M (apoM) in human hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and in the adjacent tissues. Plasma apoM levels in these HCC patients were also determined and compared to the normal subjects. The mean level of plasma apoM in the HCC patients was 0.61±0.30 OD mm⁻², which was significantly higher than that in the normal subjects 0.37±0.07 OD mm⁻² (P<0.01). However, both apoM mRNA levels and apoM protein mass in the HCC tissues were significantly lower than in the adjacent tissues (P<0.05). It is concluded that human hepatocellular carcinoma tissues had a reduced capacity to produce apoM than the adjacent non-tumor tissues. However, the plasma apoM levels were higher in the HCC patients than in normal subjects, which suggested that tissues adjacent to the tumors or extra-hepatic apoM production in the HCC patients may contribute to the higher plasma apoM levels in these patients. The clinical significance of apoM in relation to HCC still needs further investigation.     

着丝粒蛋白A在原发性肝癌中的表达

目的研究乙肝病毒X蛋白（HBx）上调的基因着丝粒蛋白A（centromere protein A,CENP-A）在原发性肝细胞癌（HCC）及癌旁组织的表达差异,并初步探讨其意义。方法应用RT-PCR和即时定量PCR（real-time quantitative PCR）方法,检测20例HCC及配对癌旁肝组织中CENP-A基因mRNA的表达水平,应用免疫组织化学方法检测80例HCC和癌旁肝组织中CENP-A蛋白、p53蛋白的表达情况。结果CENP-A mRNA在癌及癌旁组织中的相对表达水平分别为（0．64±0．18）和（0．09±0．09）,二者差异有统计学意义（t=12．78,P〈0．01）。免疫组织化学结果显示：CENP-A在HCC组织中的总阳性率为71．25％（57／80）,高于配对癌旁组织的总阳性率43．75％（35／80）（x^2=12．38,P〈0．01）。p53在癌组织中的总阳性率为75％（60／80）,高于配对癌旁组织中的总阳性率16．25％（13／80）（x^2=55．65,P〈0．01）,p53与CENP-A在癌组织中的表达一致性达88．75％（71／80）,呈正相关（r=0．57,P〈0．01）。结论CENP-A在肝癌组织中的过表达与细胞恶性增殖相关,且这种过表达是由转录水平引起的,其机制可能与p53基因的转录调节有关。     

结缔组织生长因子在慢性肝病诊断中的应用研究

探讨结缔组织生长因子(CTGF)在慢性肝病诊断中的应用价值。运用ELISA方法检测198例研究对象,观察血清CTGF水平的变化,分析CTGF水平与临床特征及实验室指标的相关性;运用实时荧光定量RT-PCR方法检测组织中CT-GF mRNA的表达量,比较各组间表达量的变化。乙肝后重度肝纤维化组、肝硬化组、原发性肝细胞癌(HCC)组的血清CTGF水平均显著高于正常对照组,且具有统计学意义(P<0.05);血清CTGF水平与部分临床实验室特征存在相关性,在区分早晚期肝纤维化上具有诊断提示作用;癌旁组织的CTGF mRNA相对表达量显著高于正常对照和癌组织的表达量且具有统计学差异(P<0.05)。血清CTGF水平与肝纤维化、肝硬化及肝癌的发生发展关系密切,有望成为一个新的无创性肝纤维化检测诊断指标,为临床诊断提供依据。     

肝癌肝移植患者外周血中AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达及其与预后的关系

目的： 探讨甲胎蛋白（ɑ-fetoprotein,AFP）mRNA和米托蒽醌抗性基因（Mitoxantrone-resistant 7，MXR7）mRNA作为游离癌细胞（isolated tumor cells,ITC）的标志物在肝癌肝移植患者外周血中的表达情况及其与术后肿瘤复发和转移的关系。方法: 以2002年4月至2003年12月期间的53例肝癌肝移植患者为对象，通过建立稳定可靠的实时荧光定量RT-PCR检测方法来定量检测肝癌患者外周血全细胞中AFP mRNA和MXR7 mRNA在整个肝移植术围手术期的表达和动态变化情况，并与术后肝癌复发和转移进行相关分析。 结果: 将研究对象分为肝癌移植组（53例）、晚期肝癌组（8例）、良性肝病组（26例）、正常对照组（10例），检测发现在肝移植术前，晚期肝癌组的AFP mRNA和MXR7 mRNA其表达率均达到100％,在肝癌移植组中表达率分别为57.7%和53.6%。2者均明显高于在良性肝病组（表达率为19.2%和0）和正常对照组（表达率均为0）（P<0.05）。同时在2者的阳性结果表达水平上，晚期肝癌组和肝癌组要明显高于良性肝病组和正常对照组(P<0.05)，前2者阳性结果定量水平达到1×10¹²copies/g RNA，是后2者定量水平的100－200倍。围手术期AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达无论是表达率还是阳性结果表达水平，均以在术中的检测标本为最高，而术后1周为次之。术后出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达往往提示肝癌的复发和转移，较之移植术后没表达或一过性升高的病例，其差异有统计学意义（P<0.05），而术前和术中单次的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达与否则对术后肝癌复发和转移无明显影响（P>0.05）。结论: AFP mRNA和MXR7 mRNA可以作为肝癌ITC细胞的标志物，具有较好的特异性。术后血全细胞检测出现2次以上的持续性的AFP mRNA和MXR7 mRNA的表达可以有效预测肝癌肝移植术后肿瘤复发和转移。