正常女性子宫内膜LIF基因表达研究

本文采用RT－PCR技术对32例正常女性分泌期子宫内膜LIF基因表达进地了研究,结果在32例女性这一时期子宫内膜组织中均检测到有强烈的LIF基因表达。这提示在人类非妊娠分泌期子宫内膜组织中存在LIF基因表达LIF在胚泡着床中可能起着十分重要的作用。     

白血病抑制因子在小鼠子宫内膜不同部位的表达研究

目的探讨白血病抑制因子(LIF)在着床窗口期小鼠子宫内膜不同部位的表达。方法运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术,分别从mRNA水平和蛋白质水平检测LIF在孕4d小鼠子宫内膜着床位点及着床旁组织表达量及位置的分布。结果LIFmRNA及蛋白在胚泡着床位点较着床旁组织表达明显增高(P<0.05)。免疫组化检测结果显示LIF蛋白表达于子宫内膜间质细胞及腺上皮细胞胞桨。结论在着床窗口期,LIF作用的发挥主要是通过在着床位点高表达而促进胚泡着床、胚胎发育。     

白血病抑制因子及其受体与子宫内膜容受性的关系

白血病抑制因子(LIF)是一种分泌性糖蛋白,通过与LIF受体(LIFR)结合而发挥生物学活性,其表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮细胞,并在黄体中晚期出现显著的时空表达特性。目前LIF被认为是介导哺乳动物胚泡着床的最关键细胞因子之一,LIF表达减弱或缺失可导致不孕或妊娠失败,其机理可能是引起子宫内膜腺体和血管网发育不良,从而影响胚胎着床。     

妊娠早期小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分布

目的　了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶 (inducible ni-tric oxide synthase,i NOS)的分布。　方法　免疫细胞化学 L SAB法。　结果　妊娠 2～ 5 d小鼠的卵巢内 ,黄体细胞上有 i NOS的阳性表达 ;输卵管粘膜上有 i NOS的分布 ,肌层则为阴性 ;妊娠 2、3d的小鼠子宫内 ,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的子宫腺上皮 ,内膜基质细胞为阴性 ;妊娠 4d的子宫内 ,子宫腺及蜕膜部分均有 i-NOS的分布 ,妊娠 5 d时 ,在小鼠胚泡的表面也检测到了 i NOS的存在。　结论　小鼠胚泡着床前后 ,在其卵巢、输卵管及子宫内均有 i NOS的存在 ,提示 i NOS在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用。     

T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1在小鼠子宫内膜基质细胞-胚泡共培养体系中对胚泡黏附的影响

目的:检测不同浓度T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1 (Tiaml)抗体下,小鼠着床窗子宫内膜基质细胞内的Tiaml蛋白表达及其对基质细胞-胚泡共培养体系中胚泡黏附的影响,探讨Tiaml对小鼠胚胎着床的影响.方法:提取着床窗小鼠子宫内膜基质细胞并构建基质细胞-胚泡共培养体系;分别用免疫细胞化学和免疫印迹法检测不同浓度抗Tiaml抗体时着床窗基质细胞Tiaml蛋白的表达及其对胚泡黏附的影响.结果:抗体干预后着床窗基质细胞内的Tiaml蛋白表达水平降低;在不同抗体浓度下胚泡黏附率有差异.结论:随Tiaml抗体浓度增加,着床窗小鼠子宫内膜基质细胞Tiaml蛋白表达量及胚泡黏附率降低.表明Tiarnl可能在胚泡植入过程起重要的作用.     

复发性流产和不明原因不孕患者子宫内膜白血病抑制因子表达研究

目的探讨白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)在复发性流产和不明原因不孕患者黄体中期子宫内膜的表达情况.方法采用实时荧光定量PCR技术,对31例不明原因不孕和30例复发性流产患者黄体中期子宫内膜LIF表达量的测定,对照组34例为继发性不孕患者(输卵管阻塞的)黄体中期子宫内膜.结果不明原因不孕组妇女子宫内膜中LIF表达量(M)为(169.00ng/l),与对照组(M) 为(240.00ng/l)相比,差异有显著性(P<0.01);习惯性流产组LIF表达量(M) 为(90.25ng/l),与对照组相比,差异有显著性(P<0.01),复发性流产组与不明原因不孕组相比差异无显著性(P>0.05).结论 LIF基因可能在启动胚泡着床和维持妊娠方面有重要作用, 黄体中期子宫内膜LIF基因表达量的减少可能是导致不明原因不孕和复发性流产的原因.     

体外研究整合素α5对小鼠胚泡着床的作用

目的　在人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养过程中 ,研究整合素α5(integrinα5)在小鼠胚泡着床中的作用 ,分析其作用机制。　方法　利用人蜕膜细胞与小鼠胚泡共培养模型 ,模拟胚泡在体内的着床过程 ,加入integrinα5抗体及其配体纤粘连蛋白 (FN)抗体 ,对胚泡的粘附、外延生长、着床率进行形态学观察和统计学分析。　结果　人子宫蜕膜经分离纯化后 ,检测活细胞比例 >92 % ,贴壁的蜕膜细胞比例 >95 % ,小鼠胚泡可在蜕膜上粘附、生长 ;integrinα5抗体及配体FN的抗体均能抑制小鼠胚泡的侵入、外延生长 ,但不抑制胚泡的孵出和粘附。　结论　建立了小鼠体外着床模型 :integrinα5在着床中促进小鼠胚泡的侵入与铺展 ,但对胚泡孵出、子宫内膜的识别与粘附不产生影响。     

HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用

目的探讨HOXa-10基因在小鼠胚胎着床过程中的作用。方法应用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)分别检测未孕及早孕小鼠第1、2、3、4、57、d HOXa-10基因表达量的变化规律;同时用可以持续表达HOXa-10的DNA/脂质体复合物质粒和HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸分别转染到受孕2d小鼠子宫角内,观察胚泡着床数。结果FQ-PCR结果显示,随着小鼠妊娠天数的增加,HOXa-10基因表达量也逐渐增高,在孕4d达到峰值,孕5d开始下降,孕7d时表达量已接近未孕状态;在用HOXa-10 DNA质粒/脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显增加;用HOXa-10反义寡脱氧核糖核酸/脂质体转染孕2d小鼠子宫角后,小鼠的胚泡着床数明显减少(P<0.05)。结论在胚泡植入窗口期,子宫内膜HOXa-10基因表达上调,其可能参与了胚泡着床过程。     

Effect of estrogen and progestogen on the expression of interleukin-8 in mouse endometrium and blastocyst during preimplantation

目的:研究雌、孕激素对着床前小鼠子宫内膜及胚泡白细胞介素8(IL-8)表达的影响.方法:利用经典小鼠胚泡延迟着床模型,应用免疫组织化学显色、免疫印迹及图像分析技术,对着床前小鼠子宫内膜及胚泡IL-8的蛋白表达进行定位及半定量分析.结果:IL-8主要表达于妊娠小鼠子宫内膜腔上皮细胞及胚泡内细胞群和滋养层细胞的细胞质内.在子宫内膜组织中,切除双侧卵巢后单独给予孕酮组(P4组),IL-8表达低于联合应用雌二醇和孕酮组(E2+P4组)和对照组;E2+P4组IL-8表达上调,但低于对照组.在各组胚泡中,单独给予孕酮获得的静止胚泡、IL-8蛋白含量低于正常胚泡;联合应用雌二醇、孕酮获得的激活胚泡、IL-8的蛋白表达高于静止胚泡.结论:切除卵巢后,联合应用雌、孕激素可上调着床前小鼠子宫内膜及胚泡IL-8蛋白的表达.     

妊娠早期小鼠卵巢,输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶的分析

目的 了解胚泡着床前后妊娠昆明系小鼠卵巢、输卵管及子宫内诱导型一氧化氮合酶（ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ ｎｉｔｒｉｃ ｏｘｉｄｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ,ｉＮＯＳ）的分布。方法 免疫细胞化学ＬＳＡＢ法。结果 妊娠２～５ｄ小鼠的卵巢内,黄体细胞上有ｉＮＯＳ的阳性表达;输卵管粘膜上有ｉＮＯＳ的分布,肌层则为阴性;妊娠２、３ｄ的小鼠子宫内,阳性标记主要出现在子宫内膜上皮以及子宫内膜中的了宫腺上皮,内膜基质细胞为阴性;妊娠４ｄ的子宫内,子宫腺及蜕膜部分均有ｉＮＯＳ的分布,妊娠５ｄ时,在小鼠胚泡的表面也检测到了ｉＮＯＳ的存在。结论 小鼠胚泡着床前后,在其卵巢、输卵管及子宫内均有ｉＮＯＳ的存在,提示ｉＮＯＳ在小鼠胚胎早期发育及着床过程中起作用。     

妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白定位、定量及对胚泡植入的作用

目的　研究妊娠早期小鼠子宫内膜层粘连蛋白（ｌａｍ ｉｎｉｎ,ＬＮ）定位和定量变化及其对胚泡着床的作用。方法　应用间接免疫荧光法、免疫组织化学ＡＢＣ技术及图像分析法进行ＬＮ定位和定量测定;利用子宫内注射ＬＮ抗体的方法探讨ＬＮ对小鼠胚泡植入的作用。　结果　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜内源性ＬＮ 在上皮和腺基膜及血管内皮基膜均有表达,并随着植入的发生基膜的ＬＮ 表达减弱,而内膜上皮中ＬＮ免疫染色逐渐增强;外源性ＬＮ 对小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜不产生明显影响,层粘连蛋白抗体明显抑制小鼠胚泡着床。　结论　动情期及妊娠早期小鼠子宫内膜的层粘连蛋白主要存在于基膜,胚泡植入期间内膜上皮细胞内ＬＮ 的含量增加;ＬＮ在促进小鼠胚泡粘附与植入子宫内膜过程中起重要作用。     

细胞因子与着床过程中小鼠子宫内膜细胞凋亡的相关性研究

目的 探讨着床过程中小鼠子宫内膜细胞凋亡的调控机制，以及细胞因子在子宫内膜细胞凋亡发生中的生物学作用。方法 用TUNEL法原位检测着床过程中子宫内膜细胞凋亡状况，用原位杂交和免疫组织化学的方法，检测凋亡相关基因(bcl-2、bax)和细胞因子(EGF、bFGF和TGFβ1)在着床期小鼠子宫内膜中的表达，分析凋亡相关基因、细胞因子与子宫内膜细胞凋亡之间的关系，并在体外培养的子宫内膜细胞中，直接检测了上述因子对bcl-2和bax转录的影响。结果 孕4～5d，凋亡细胞主要分布于子宫内膜表面上皮和腺上皮，与此相对应，上皮细胞TGFβ1和bax表达增加，而bFGF和bCl-2表达减少；孕7～8d，凋亡细胞主要分布于胚泡着床部位周围的蜕膜中，此时胚泡周围的蜕膜中，EGF、bFGF和bcl-2表达明显降低，TGEβ1和bax表达明显增加。体外实验显示，培养基中加入抗EGF或bFGF抗体后，bcl-2／bax比率下降，而加入抗TGFβ-1抗体后，bcl-2／bax比率增加。结论 细胞因子、凋亡相关基因与着床期子宫内膜细胞凋亡密切相关，细胞因子可通过调节bcl-2和bax的表达参与细胞凋亡的调控。     

小鼠胚泡植入早期FucT-Ⅶ和sLe(X)寡糖抗原表达

目的探讨妊娠第1～5天(d1～5)小鼠子宫内膜唾液酸化的路易斯寡糖[sLe(X)]合成关键酶α-1,3岩藻糖基转移酶基因(FucT-Ⅶ)的表达和其表面sLe(X)寡糖抗原表达对胚胎植入的影响。方法应用RT-PCR和免疫组化方法检测妊娠第1～5天小鼠子宫内膜FucT-Ⅶ及寡糖抗原的表达规律。用子宫角内注射sLe(X)单克隆抗体的方法检测小鼠胚胎着床数。结果妊娠第1～5天小鼠子宫组织均有FucT-Ⅶ的表达,且在妊娠d4表达更强(P<0.05)。妊娠第1～5天sLe(X)寡糖抗原表达在子宫内膜的腔上皮和腺上皮。单侧子宫角sLe(X)抗体注射后胚胎的着床数量明显较对侧(注射等体积生理盐水)减少。结论在小鼠胚胎着床过程中,FucT-Ⅶ及sLe(X)寡糖抗原可能参与了胚泡的定位、黏附及侵袭过程,在胚泡植入的早期发挥作用。     

子宫内膜容受性相关影响因素研究进展

正胚胎着床是处于活化状态的胚泡与容受态的子宫内膜相互作用并进入子宫内膜的复杂过程,随着辅助生殖技术的发展,如何提高胚胎着床率成为研究焦点。1973年Psychyos[1]提出子宫内膜容受性的概念,指子宫内膜在特定时间内允许胚囊定位、黏附并穿入内膜,诱导内膜基质发生改变的状态。子宫内膜容受性不足的患者胚泡着床率明显降低,发生流产的几率随之增加,本文将影响子宫内膜容受性相关影响因素综述如下。     

细胞粘附分子与胚胎着床

细胞粘附分子(cell adhesion molecules,cAMs)是指由细胞合成,可存在于细胞内、细胞膜或细胞外,能促进细胞粘附的一大类分子的总称.主要包括免疫球蛋白超家族、整合素家族、细胞外基质(整合素的配体)、钙调素家族、选择素家族和近年来新发现的几种细胞粘附分子:trophinin、tastin、bystin.cAMs介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质的相互作用,传递细胞间信息,参与胚胎发育,免疫应答,恶性肿瘤转移等一系列生理及病理过程.近几年研究发现,在女性子宫内膜,胚泡均有多种cAMs的表达,有的呈周期性变化,并与子宫内膜"着床窗"开放同步,与子宫内膜发育到"接受性"状态及胚泡的滋养层细胞发育到"浸润性"状态密切相关.本文着重对细胞粘附分子在子宫内膜及胚胎滋养层中的表达及其在胚胎着床过程中发挥的重要作用作一综述.     

多囊卵巢综合征患者着床窗口期子宫内膜容受性的改变

目的探讨正常妇女与PCOS妇女促排卵治疗后着床期子宫内膜容受性相关因子的改变,包括整合素αv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF的表达。方法12例正常妇女自然周期(对照组)和8例PCOS患者经过促排卵治疗后(P-COS组)均在着床期取子宫内膜进行integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF免疫组化染色,并进行统计学分析。结果PCOS组E2、P水平高于正常组,但E2/P比值变化幅度大,PCOS组着床期子宫内膜中integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF表达均弱于对照组。结论PCOS患者促排卵治疗后E2、P分泌不协调,导致着床期子宫内膜integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF表达减弱,进而影响着床过程中的多个环节,这可能是造成PCOS患者促排卵治疗后高排卵率、低妊娠率和高流产率的原因之一。     

白细胞介素-8在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及对胚泡着床的影响

目的：研究白细胞介素-8（IL-8）在妊娠早期小鼠子宫内膜的表达及其对小鼠胚泡着床的影响。方法：用免疫组化法及图像分析技术对IL-8在妊娠1～6d小鼠子宫内膜的表达进行定位和测定;子宫角注入IL-8抗体,探讨IL-8对胚泡着床的影响。结果：在子宫内膜腔上皮,IL-8主要定位于细胞的游离面,妊娠1d阳性反应最弱,4d表达最强,5d有所下降,6d又开始增强;在子宫内膜腺上皮,妊娠4d表达最弱,5d和6d最强;在子宫内膜的基质细胞,随妊娠天数增加,IL-8的表达逐渐增强。IL-8Ab明显抑制小鼠胚泡着床。结论：IL-8在妊娠早期小鼠子宫内膜持续表达,并参与胚泡的着床调控过程。     

围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达变化及作用

目的 探讨围着床期小鼠胚卵L-选择素的表达规律及其对胚胎着床的影响.方法 1.分别采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)和免疫荧光组织化学方法检测围着床期小鼠胚卵L-选择素mRNA和蛋白的表达,并用免疫荧光组织化学方法检测L-选择素在细胞的定位;2.用子宫角内抗体干预的方法观察并统计小鼠着床胚胎数.结果 1.随着胚卵分化成熟,L-选择素mRNA和蛋白表达均呈逐渐增加趋势,胚泡期表达最强(P<0.05).L-选择素在单细胞期和4细胞期有少量表达,桑椹胚周边区L-选择素表达显著增强,胚泡滋养层L-选择素表达最强.2.小鼠子宫角实验侧(经抗L-选择素单克隆抗体干预)胚胎着床数较对照侧(经等体积生理盐水干预)明显减少(P<0.05).结论 胚卵可能通过L-选择素信号转导途径及其与子宫内膜的糖蛋白受体结合参与胚胎着床.     

HOXA-11基因和妇性生殖调节

基因剔除的小鼠能够正常排卵和受精,但受精卵不能正常植入,而HOXA-11基因剔除小鼠的受精卵却能在野生型小鼠中着床发育[1]。研究发现HOXA-11基因在人类子宫不同期别内膜的表达是有差异的[2]。雌、孕激素均可使子宫内膜间质细胞中HOXA-11基因的表达增加2~3倍,其中孕激素的刺激作用强于雌激素及雌、孕激素联合应用,而且孕激素增加HOXA-11基因的表达呈剂量依赖性[2]。此结果反映了HOXA-11基因与胚胎着床及雌、孕激素的关系,提示HOXA-11基因可能是通过雌、孕激素受体(ER、PR)作用于子宫内膜的。本研究直接检测了子宫内膜组织中HOXA…     

小鼠子宫内膜中鸡冠珊瑚树凝集素和双花藕豆凝集素受体在胚泡植入过程中的表达

目的 探讨小鼠子宫内膜鸡冠珊瑚树凝集素(ECL)受体和双花藕豆凝集素(DBA)受体与胚泡植入的关系.方法 以生物素标记的ECL和DBA来检测怀孕侧和输卵管结扎未孕侧小鼠孕早期子宫内膜中两种凝集 素受体的分布状况和变化规律.结果怀孕侧,ECL主要表达于胚胎滋养层细胞及其基膜,蜕膜细胞及其周围的细胞外基质(ECM);未孕侧,主要表达于子宫内膜上皮和腺上皮.在怀孕侧,DBA受体主要表达于胚胎滋养层细胞和子宫内膜血管基膜;在未孕侧,主要表达于子宫内膜血管的基膜.结论 ECL和DBA受体与小鼠胚泡植入过程密切相关.