当归对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元的保护作用

目的探讨脑缺氧缺血对幼年大鼠海马齿状回神经元的影响及当归注射对其保护作用。方法取7日龄健康SD新生大鼠33只,随机分为对照组、缺氧组和当归组各11只。缺氧组和当归组新生大鼠在无菌环境下结扎左侧颈总动脉,术后护理2 h后置于三气培养箱持续缺氧2 h/d,连续7 d,制作新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型,对照组仅行假手术,不结扎左侧颈总动脉、不缺氧。术后第8 d开始,缺氧组和对照组大鼠经腹腔注射生理盐水（8 ml/Kg）,连续7 d;当归组用等量当归注射液（250 g/L）代替生理盐水。于生后第40 d取大鼠脑组织,常规石蜡包埋、经海马切片,行神经元特异性烯醇化酶（NSE）免疫组化染色,图像分析海马齿状回NSE阳性细胞的积分光密度（IOD）值。结果缺氧组大鼠海马齿状回NSE阳性细胞的IOD值较对照组降低,而当归组NSE阳性细胞的IOD值较缺氧组增高。结论脑缺氧缺血可降低幼年大鼠海马齿状回NSE的表达,而当归注射液对缺氧缺血性脑损伤幼年大鼠神经元可能具有保护作用。     

促红细胞生成素干预缺氧缺血性脑损伤新生鼠神经干细胞巢蛋白的表达(英文)

背景:巢蛋白是一种存在于神经干细胞的特异性抗原,在神经系统发生病变或损伤引起再生时广泛表达,因此巢蛋白表达常用作判定神经系统发生病变或损伤后能否促进神经再生的一种手段。目的:从神经再生和神经干细胞激活的角度,探讨外源性促红细胞生成素对新生鼠缺氧缺血性脑损伤后神经干细胞巢蛋白表达的影响。方法:结扎大鼠右侧颈总动脉和8%低氧暴露2h制备新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型。对照组仅游离右侧颈总动脉,不予结扎和缺氧处理。干预组大鼠缺氧缺血后立即腹腔注射重组人促红细胞生成素5000IU/kg,1次/d,连用3d。缺氧缺血性脑损伤组大鼠缺氧缺血后连续腹腔注射等量生理盐水溶液3d。每组随机取8只分别于术后4,7,14d处死。应用免疫组化方法和计算机图像分析技术检测不同时点海马齿状回巢蛋白标记阳性细胞的变化。结果与结论:各时点缺氧缺血性脑损伤组巢蛋白阳性细胞数较对照组增加(P0.05);各时点干预组巢蛋白阳性细胞较对照组和缺氧缺血性脑损伤组均增加(P0.05)。3组大鼠海马齿状回区巢蛋白阳性细胞数均于术后7d达高峰。结果提示早期给予重组人促红细胞生成素可促使新生鼠缺氧缺血性脑损伤后海马齿状回区巢蛋白表达增加,促进神经干细胞的增殖再生,在缺氧缺血性脑损伤后神经再生、修复中发挥一定的保护作用。     

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑干听觉诱发电位的动态变化

目的：探讨缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑干听觉诱发电位（BAEP）的动态变化。方法：30只出生13天的新生SD大鼠随机分为对照组和缺氧缺血组,每组15只。将出生后第13天新生大鼠结扎左侧颈总动脉后,置于含氧8％的低氧环境中3h建立缺氧缺血性脑损伤动物模型。出生后第14、20、27、37、47、57、67和77天检测大鼠的BAEP。结果：缺氧缺血组新生大鼠3h缺氧复氧1h后,表现为向左侧旋转,爬行时右侧后肢呈现拖步。出生后第14～47天缺氧缺血组大鼠BAEP波峰潜伏期（PL）和波峰间潜伏期（IPL）较对照组显著延长（P〈0．05或P〈0．01）,这些鼠的BAEP的PL及IPL均随年龄的增加而缩短,并且鼠可发育成熟。结论：缺氧缺血性脑损伤新生大鼠BAEP有显著的可逆性异常变化,其PL和IPL是动态监测与客观评价新生期缺氧缺血性脑损伤和听觉障碍的灵敏指标。     

成年大鼠脑损伤后海马新生神经元功能特点的研究

目的：观察弥漫性脑损伤后海马齿状回新生神经元GAD67和Fos蛋白的表达，探讨海马齿状回新生神经元的功能特点。方法：参考Marmarou方法制作大鼠弥漫性脑损伤模型，采用BrdU标记和免疫荧光组织化学方法并结合激光共聚焦显微镜技术观察海马齿状回中BrdU阳性细胞GAD67的表达和二次致伤后Fos蛋白的表达情况。结果：①成年大鼠弥漫性脑损伤后海马齿状回颗粒细胞层中的BrdU免疫阳性细胞可表达GAD67，而位于亚颗粒增生带的BrdU免疫阳性细胞未见GAD67表达；②在病理刺激下，成年大鼠弥漫性脑损伤后齿状回颗粒细胞层内的BrdU免疫阳性细胞可表达Fos蛋白。结论：弥漫性脑损伤后齿状回颗粒细胞层中的新生神经元不仅可以表达神经活性递质而且能够被病理刺激激活，具有与成熟神经元相似的功能特点。     

亚低温对细胞凋亡及凋亡相关基因表达影响的实验研究

目的　研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　7日龄大鼠行左侧颈总动脉结扎后吸入 8%氧气 2h,制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分成三组 :假手术组 (C组 ) ,缺氧缺血正常温度组 (HI组 ) ,缺氧缺血后 30min亚低温治疗组。应用原位缺口末端标记 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,用免疫组化SABC法检测表达bax基因阳性细胞数。结果　 30min后给予亚低温组凋亡细胞及表达bax基因细胞数明显少于HI组 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论　亚低温可以通过抑制细胞凋亡 ,抑制凋亡相关基因的表达等机制发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

新生鼠缺氧缺血脑损伤TGF-β1表达与神经细胞凋亡

目的 研究新生大鼠脑缺氧缺血（HI）后TGF－β1表达和神经细胞凋亡的变化规律，探讨新生儿缺氧缺血脑损伤的发病机制。方法 结扎新生7d龄SD大鼠左颈总动脉后，吸入8％浓度氧2h，建立HIBD模型。应用苏木素－伊红（HE）染色，原位缺口末端标记（TUNEL）及SP免疫组化方法检测新生大鼠HI后存活不同时间大脑皮质和民TGF－β1的表达及神经细胞凋亡的情况。结果 缺氧缺血后8h，大脑皮质和海马出现TGF－β1的表达，缺氧缺血后12h和48h ,TGF－β1出现两次表达高峰，神经细胞凋亡高峰为缺氧缺血后24h，晚期表达TGF－β1的免疫阳性细胞与凋亡细胞均出现在缺血半暗带内。结论 缺氧缺血引起了TGF－β1的表达增强，TGF－β1的表达可能通过对神经细胞凋亡的调控，参与缺氧缺血后神经细胞的修复。     

亚低温对缺氧缺血新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响

目的观察亚低温对新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响,以探讨亚低温对缺氧缺血脑损伤保护作用的机制。方法①体外实验：取3日龄大鼠海马脑片,培养至第4天用氧糖剥夺法制备标本,于33℃（亚低温组）和37℃培养48h（常温组）;对照组脑片不进行氧糖剥夺处理,37℃培养7d。采用免疫荧光染色方法观察培养脑片星形胶质细胞的活化和增殖。②体内实验：取7日龄大鼠,分手术组和假手术组。手术组永久性结扎左侧颈总动脉,然后置于含8%O2＋92%N2中缺氧2h,制备缺氧缺血模型,分为手术亚低温亚组和手术常温亚组。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不予缺氧处理,分为假手术常温亚组和假手术亚低温亚组。各组于术后3和7d处死取材,采用免疫荧光染色方法检测海马星形胶质细胞的活化、增殖和凋亡。结果①体外实验：氧糖剥夺后3d常温组较对照组胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞数量明显增多;亚低温组与常温组比较,GFAP阳性细胞数量明显减少。②体内实验：术后3和7d亚低温组GFAP阳性细胞数量较常温组显著降低,较常温对照组和亚低温对照组显著增高。GFAP与caspase-3免疫荧光双标记结果显示,术后3d常温组海马区84.5%GFAP阳性细胞表达caspase-3,亚低温组仅32.3%GFAP阳性细胞表达caspase-3,差异有统计学意义。结论亚低温能减轻新生大鼠缺氧缺血后海马星形胶质细胞的活化增殖和凋亡。     

天麻素对缺血缺氧脑损伤新生大鼠小胶质细胞Sirt3表达的影响

目的:研究天麻素对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠脑内激活的小胶质细胞Sirt3表达的影响。方法:选取39只3 d龄SD幼年大鼠随机分为对照组(control)、缺血缺氧脑损伤组(HIBD)、天麻素组(HIBD+gastrodin)。采用左侧颈总动脉结扎结合缺氧法建立新生大鼠缺血缺氧性脑损伤(HIBD)模型,使用免疫荧光染色观察HIBD模型后新生大鼠大脑胼胝体区小胶质细胞的分布情况;使用免疫荧光双标染色及Western Blot检测大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞Sirt3的表达变化。结果:免疫荧光染色结果显示HIBD后新生大鼠大脑左侧胼胝体区小胶质细胞出现明显激活,确定模型建立成功。免疫荧光双标染色及Western Blot结果均显示,与对照组相比,HIBD模型组Sirt3的表达水平明显升高(P<0.05);与HIBD模型组相比,天麻素组Sirt3的表达进一步增强(P<0.05)。结论:天麻素可能通过促进新生大鼠脑内小胶质细胞Sirt3的表达,发挥其神经保护作用。     

白细胞介素-10多克隆抗体对缺氧缺血新生大鼠大脑皮层c-fos表达的调节

目的：探讨白细胞介素-10（IL-10）多克隆抗体对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后大脑皮层c-fos表达的调控作用，以期阐明内源性IL-10对缺氧缺血新生动物神经保护作用的可能机制。方法：建立新生大鼠缺氧缺血性脑病标准化的动物模型，应用免疫组织化学和免疫印迹技术，分别对缺氧缺血、IL-10多克隆抗体预处理后予缺氧缺血、免疫对照组及正常对照组4组新生大鼠大脑皮层c-fos表达进行分析。结果：新生大鼠缺氧缺血后，缺血侧大脑皮层c-fos表达明显高于正常对照组（P<0.01），腹腔注射IL-10多克隆抗体可进一步提高大脑皮层c-fos含量（P<0.01）。结论：c-fos的表达可能在缺氧缺血后脑组织损伤演变过程中起着重要的病理作用；IL-10多克隆抗体可以增强脑内c-fos的表达，提示IL-10对缺氧缺血新生动物的神经保护作用可能与其抑制大脑皮层c-fos表达有关。     

脐血间充质干细胞移植修复缺氧缺血损伤新生大鼠的脑功能

背景：课题计划从神经细胞替代、促进内源性神经干细胞增殖和分化、保护神经元、促进突触重建以及减轻脑白质损伤等方面来探讨脐血间充质干细胞系统移植对新生大鼠缺氧缺血脑损伤后神经功能的修复作用及其机制。 目的：观察脐血间充质干细胞由静脉途径移植透过血脑屏障进入脑组织内,对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤后脑功能修复的影响。 方法：7 d龄SD新生鼠分为3组：假手术组仅分离出左侧颈总动脉而不结扎;缺氧缺血脑损伤组制备缺氧缺血脑损伤模型;细胞移植组在缺氧缺血性脑损伤后第8天尾静脉移植人脐血间充质干细胞,前两组尾静脉注射等量的生理盐水。 结果与结论：免疫荧光观察显示移植后5周脐血间充质干细胞迁移到海马,Nissl染色结果显示脐血间充质干细胞移植后,左侧海马DG区锥体细胞尼氏小体明显增加,提示间充质干细胞移植后可分化为神经元。行为学测试结果显示：与假手术组相比,缺氧缺血脑损伤组在T迷宫实验中,自发改变率下降,在放射形迷宫中觅水时间延长,错误次数及重复次数明显增加(P < 0.05);脐血间充质干细胞静脉移植5周后,上述行为学指标均显著改善(P < 0.05)。提示脐血间充质干细胞静脉移植治疗明显改善和提高了缺氧缺血脑损伤大鼠远期的学习记忆和空间辨别能力。     

阿尔茨海默病模型大鼠海马结构Akt磷酸化与caspase 3表达的相关性研究

目的探讨Aβ所致阿尔茨海默病（AD）模型大鼠Akt的磷酸化水平与caspase 3在海马结构神经元的表达及其分布。方法选用24只3月龄雄性Wistar大鼠随机分为对照组和模型组（侧脑室注射10μg Aβ25-35）。免疫组化方法观察caspase-3在海马结构神经元（海马CA1、CA3和齿状回）的表达;Western blot方法检测海马结构神经元Akt的磷酸化水平。结果模型组海马结构3个亚区神经元的caspase-3的平均光密度值均较对照组明显增高（P〈0.01）;模型组P-Akt的表达量较对照组明显下调（P〈0.05）。结论 Aβ25-35可能是通过下调Akt的磷酸化水平促进caspase-3的表达,进而导致海马结构神经元的凋亡。     

缺氧后幼鼠大脑内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达及其对幼鼠学习记忆能力的影响

目的:探讨缺氧对新生大鼠海马区巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达及幼年大鼠学习记忆能力的影响.方法:将48只7d龄SD大鼠随机分为缺氧组和对照组各24只,缺氧组通过低张性缺氧建立新生鼠缺氧模型.于缺氧24h后,两组各取16只幼鼠取其大脑组织进行巢蛋白、NSE免疫组织化学显色,两组剩余8只大鼠于生后30d Morris水迷宫测试后进行大脑NSE免疫组织化学显色.结果:缺氧组幼鼠海马巢蛋白阳性细胞的积分光密度(IOD)值明显高于对照组,而缺氧组NSE阳性细胞的IOD值明显低于对照组.Morris水迷宫检测中缺氧组幼鼠在目标象限内搜寻时间缩短.结论:缺氧引起新生鼠神经干细胞增殖,却导致神经元数量减少,幼鼠的学习记忆能力明显下降.     

被动吸烟对胎鼠海马神经元一氧化氮合酶表达的影响

目的观察孕鼠被动吸烟对胎鼠海马神经元一氧化氮合酶表达的影响,以期为探讨被动吸烟对子代危害的机制提供更多实验依据。方法将雌性大鼠随机分为对照组和实验组两组。实验组采用人工熏烟的方法建立被动吸烟模型,对照组不作处理。妊娠21日人工结束分娩,取胎鼠脑组织,进行一氧化氮合酶（NOS）免疫组化染色。高倍镜下对海马区观察并摄片,用图像分析软件Image-Pro Plus对两组切片进行光密度分析,观察其差别。结果 NOS在胎鼠海马区有表达,分布于海马神经元胞质内。计算机图像分析结果表明,与对照组比较,实验组海马NOS表达下降,统计结果有显著差异性（P〈0.05）。结论孕鼠被动吸烟使胎鼠海马NOS的表达下降,其可能为孕期被动吸烟导致子代学习记忆记忆功能下降的机制之一。     

宫内缺氧对幼年大鼠大脑皮质神经元的影响

目的探讨宫内缺氧对幼年大鼠大脑皮质神经元的影响。方法将孕14d的SD孕大鼠10只随机分为对照组和缺氧组，各5只。缺氧组大鼠置于三气培养箱内缺氧，制造宫内缺氧模型，对照组不进行缺氧处理；两组孕鼠的幼鼠在生后40d取脑、固定、常规石蜡切片（片厚4μm），行NSE免疫组化染色。结果缺氧组幼鼠大脑皮质NSE阳性细胞数和阳性细胞光密度均较对照组明显减少（P〈0．05）。结论一定时间、一定浓度的宫内缺氧可致胎鼠生后大脑皮质神经元减少。     

金雀异黄酮对去卵巢大鼠海马突触体素表达的影响

目的：研究金雀异黄酮对去卵巢大鼠海马突触体素的影响,以探讨金雀异黄酮对女性更年期后中枢神经系统退行性变的作用机制。方法：用免疫组化结合图像分析的方法,测量分析去卵巢后不同时间点以及给予金雀异黄酮替代治疗后海马CA1～3区辐射层和齿状回分子层突触体素免疫阳性产物的平均光密度变化。结果：去卵巢后大鼠CA1～3区辐射层和DG分子层突触体素免疫阳性产物的平均光密度值逐渐降低,4周后与假手术组和苯甲酸雌二醇组相比有显著差异;金雀异黄酮组治疗后海马突触体素免疫阳性产物平均光密度恢复。结论：金雀异黄酮能恢复去卵巢大鼠海马突触密度,延缓女性更年期后中枢神经系统的退行性变。     

地塞米松对海人酸致（癇）大鼠脑P-糖蛋白表达的影响

目的：探讨地塞米松对海人酸致痫大鼠脑P-糖蛋白（P-gp）表达的影响.方法：将SD大鼠随机分为假手术组（Sham组,n=8）、癫痫组（EP组,n=12）、地塞米松干预癫痫组（DEX组,n=12）.后两组采用海马注射海人酸方法制作癫痫模型,DEX组癫痫造模前30 min给予腹腔注射地塞米松0.4 mg/kg.分别记录各组大鼠达到Ⅲ级和Ⅴ级发作时所需的时间（潜伏期）,初次至第6次≥Ⅳ级发作的间隔时间作为评价癫痫发作严重程度的指标;大鼠术后24 h处死,使用HE染色和免疫组织化学方法,比较各组海马CA3区、齿状回、杏仁核复合体区P-gp表达及脑损伤情况.结果：①Sham 组未见癫痫发作;DEX组与EP组达到Ⅲ级发作的潜伏期分别为（87.92±45.80）min和（67.50±22.91）min,达到Ⅴ级发作的潜伏期分别为（103.33±51.27 ）min和（75.60±22.10）min,差异均无统计学意义（P〉0.05）;与EP组相比,DEX组样发作严重程度降低（P=0.004）;②与EP组相比,DEX组于所观察的脑区损伤均减轻,以海马CA3区和杏仁核复合体区较为显著;③与Sham组比较,EP组各观察脑区P-gp表达均明显升高（P〈0.01）;与EP组相比,DEX组海马CA3区和杏仁核复合体区P-gp表达显著减少（P〈0.05）,而在齿状回表达量差异无统计学意义（P=0.078）.结论：地塞米松可降低海人酸致痫大鼠发作严重程度和脑损伤,抑制P-gp表达上调,其中以海马CA3区和杏仁核区较为显著.     

当归芍药散对SAM—P8小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞的影响

目的观察当归芍药散（DSS）对快速老化小鼠海马CA1区、齿状回锥体细胞数量的影响。方法选用雌性SAM-P8鼠36只，分成4组：预防组（3月龄）、预防对照组（3月龄）、治疗组（6月龄）、治疗对照组（6月龄），治疗组以DSS（浓度为0．5g／mL）灌胃1个月，预防组自由饮用DSS（0．02％，v／v）4个月，对照组给予冷开水，给药结束后取脑、冰冻切片、尼氏染色，Leica图像分析系统分析海马CA1区、齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度。结果海马CA1区锥体细胞层尼氏染色的平均灰度各组间差异不明显（P〉0．05）。预防组齿状回锥体细胞层尼氏染色的平均灰度明显多于其余各组（P〈0．05）。结论低剂量长期服用DSS可增加老年性痴呆模型SAM-P8小鼠的齿状回锥体细胞数量。     

Alteration in the pattern of nerve terminal protein immunoreactivity in the perforant pathway in Alzheimer's disease and in rats after entorhinal lesions.

Neurons in layer II of the entorhinal cortex consistently develop neurofibrillary tangles in Alzheimer's disease (AD). Experimental neuroanatomical studies have shown that these neurons give rise to the perforant pathway, a major excitatory projection to the hippocampal formation, which terminates in a discrete pattern in the outer portion of the molecular layer of the dentate gyrus. The distribution of two nerve terminal associated proteins, synaptophysin and NT75, was studied in the molecular layer of the dentate gyrus in AD and control cases to determine whether Alzheimer neuronal pathology is associated with loss of synaptic markers. In parallel studies, the effect of ablation of the entorhinal cortex in rats was evaluated. In AD as compared to controls, a decrease in synaptophysin immunostaining was evident in the terminal zone of the perforant pathway. NT75 nerve terminal immunostaining was too weak to interpret in the human hippocampal formation. Both synaptophysin and NT75 immunoreactivity were found in association with some neuritic plaques. In rats, entorhinal lesions resulted in diminished immunoreactivity for both synaptophysin and NT75 in the perforant pathway terminal zone. These results suggest that nerve terminal protein loss is a concomitant feature of neuronal pathology in AD.     

p-p38 MAPK在A2AR敲除新生小鼠缺氧缺血脑区的表达及意义

 目的：探讨p-p38 MAPK在腺苷A2A受体敲除(A2AR-/-)新生小鼠缺氧缺血脑区的表达及意义。方法：采用改良Rice法建立新生小鼠缺氧缺血性脑损伤（HIBD）模型。A2AR-/-(KO)及同期野生型(A2AR+/+,WT)C57/BL6新生小鼠（7日龄）分别按照完全随机分组方法分成假手术组及模型组,模型组按HIBD后取标本时间不同又分为造模后1 d组、3 d组和7 d组,共8个实验动物组,每组取小鼠8只,共64只。采用TUNEL结合尼氏染色检测神经细胞凋亡,采用免疫组织化学法检测活化caspase-3及p-p38 MAPK表达。同时,KO及同期WT小鼠分别取假手术组（SKO和SWT, n=10)及模型组(MKO和MWT,n=30)于HIBD后1 d同时进行新生鼠短期神经行为学评定。结果：（1）缺氧缺血后皮层及海马CA1区神经细胞凋亡、活化caspase-3及p-p38 MAPK表达均增加,造模后1 d为高峰;（2）A2AR敲除导致神经细胞凋亡及活化caspase-3表达增加,与同一时点的WT小鼠相比均有显著差异（P<0.01）;p-p38 MAPK表达增加,其中,1 d及3 d后2种基因型小鼠间均有显著差异（P<0.01）;（3）Peason相关分析显示,活化caspase-3表达与p-p38 MAPK表达呈显著正相关(皮层：r=0.957, P<0.01;海马CA1区：r= 0.939, P<0.01)。结论：p-p38 MAPK可能参与了A2AR敲除增加新生小鼠脑缺氧缺血后神经细胞凋亡、加重脑损害的过程。