促红细胞生成素对同型半胱氨酸导致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的观察促红细胞生成素（EPO）对同型半胱氨酸（Hcy）导致的血管内皮细胞损伤是否具有保护作用。方法采用不同浓度（1.25、2.5、5、10、20mmol/L）的Hcy处理人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,观察细胞的损伤情况,建立Hcy诱导的内皮细胞损伤模型,然后采用不同浓度（0.1、1、10、100U/ml）的EPO进行预处理,观察细胞的损伤情况。通过MTT法测定细胞存活率,ELISA法检测细胞上清IL-6含量,Hoechst33258染色检测细胞凋亡来评价细胞损伤情况。结果 Hcy对HUVEC有损伤作用,并且随浓度增加损伤作用更明显。EPO可增加细胞存活率,抑制Hcy诱导HUVECIL-6的产生,抑制细胞凋亡。结论 EPO对Hcy导致的内皮细胞损伤具有一定的保护作用。     

叶酸拮抗同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡的作用机制

目的： 明确同型半胱氨酸（Hcy）对内皮细胞凋亡的影响以及叶酸的拮抗作用，阐明Bax和Bcl-2在同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸拮抗中的作用。方法: 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后，应用末端转移标记技术（TUNEL）以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，免疫组化方法检测Bax、Bcl-2的表达。结果: Hcy能促进细胞凋亡，叶酸具有拮抗作用。Hcy能促进细胞Bax、Bcl-2的表达，上调Bax/Bcl-2比值，叶酸能减少细胞表达Bax及Bcl-2，下调Bax/Bcl-2比值。结论: Bax、Bcl-2参与了Hcy诱导内皮细胞凋亡以及叶酸拮抗作用的过程。     

同型半胱氨酸对人主动脉平滑肌细胞 HCY-2表达及细胞增殖的影响

目的体外研究同型半胱氨酸（HCY）及叶酸对人主动脉平滑肌细胞（hASMCs）中同型半胱氨酸诱导基因（HCY-2）蛋白表达的影响，以及HCY对hASMCs增殖的影响。方法以免疫组织化学ABC法对体外培养的hASMCs中的HCY-2表达进行形态学观察，并利用图像分析系统对结果进行定量分析；以细胞计数法观察不同浓度HCY对体外培养的hASMCs增殖的影响。结果HCY-2主要表达在hASMCs的胞浆中，其表达强度与培养液中HCY浓度呈正性剂量依赖关系；叶酸促使HCY-2表达增强；不同浓度HCY可影响hASMCs的增殖，细胞增殖数目随HCY浓度增长而增加，当HCY到达1．25mmol／L时，细胞数目达到最大值，随着HCY浓度的继续增加，细胞增殖呈下降趋势。结论HCY促使HCY-2表达增强；并影响hASMCs的增殖。叶酸对HCY有拮抗作用。     

共刺激分子4-1BBL高表达与肿瘤免疫逃逸关系的研究

目的:观察高表达4-1BBL的HL-60细胞培养上清液对人淋巴细胞活化、增殖、IL-2分泌及凋亡诱导作用的影响;分析阻断4-1BB/4-1BBL信号对肿瘤细胞增殖、细胞因子分泌的影响,揭示肿瘤的免疫逃逸机制.方法:将不同浓度的HL-60肿瘤细胞培养上清液与体外分离的人淋巴细胞共培养,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测免疫表型、细胞因子分泌及细胞凋亡;ELISA法检测IL-2分泌水平;用抗4-1BBL单抗作用后,观察对HL-60细胞增殖及细胞因子分泌的影响.结果:不同的肿瘤细胞株表面均有4-1BBL表达,但表达水平不同;HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞活化没有明显影响(P＞0.05),但能明显抑制淋巴细胞增殖(P＜0.01)和IL-2分泌(P＜0.05),诱导淋巴细胞凋亡(P＜0.05).抗4-1BBL单抗能抑制HL-60细胞增殖和TGF-β的分泌(P＜0.05).结论:HL-60细胞高表达4-1BBL具有反向调节作用,可通过促进肿瘤细胞增殖及TGF-β分泌等抑制淋巴细胞功能,从而使之逃避宿主的免疫监视.     

同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究

目的:本研究拟探讨同型半胱氨酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应,以揭示同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸24h后,观察细胞形态并测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果:(1)同型半胱氨酸不仅可诱导细胞凋亡而且在较高浓度时可致细胞坏死;(2)同型半胱氨酸有较强的促脂质过氧化的效应,并呈量效关系;(3)同型半胱氨酸的上述效应因加入LDL而增强,示同型半胱氨酸与LDL有协同作用。结论:同型半胱氨酸可能是通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死,凋亡等损伤的改变。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞增殖、贴壁和迁移的影响

目的：探讨同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy)对血管内皮细胞生长、增殖、贴壁和迁移的影响。方法:将人脐静脉内皮细胞（HUVEC，6-8代）采用含20%胎牛血清（FBS）、60 mg/ L 内皮细胞生长添加剂（endothelial cell growth supplement，ECGS)、0.005 U/ L 肝素的M199培养。在加入不同浓度的Hcy处理后，用胰酶消化细胞，白细胞计数板计数细胞；同时通过［3H］胸腺嘧啶核苷掺入实验观察Hcy对HUVEC细胞增殖的影响。此外，在加入不同浓度的Hcy处理后，用胰酶消化细胞，重新接种于纤连蛋白包被过的培养皿中，静置培养30 min，洗掉未贴壁细胞，对贴壁细胞进行固定、结晶紫染色、脱色、比色，观察Hcy对细胞贴壁的影响。并进一步通过划伤实验观察Hcy对内皮迁移的影响。结果:100 mmol/L 及以上浓度的Hcy能抑制HUVEC增殖、DNA合成和细胞迁移，200 mmol/L及以上浓度的Hcy能抑制HUVEC贴壁，并且随着剂量的加大，抑制作用都逐渐增强。结论:Hcy对HUVEC细胞增殖、DNA合成、细胞迁移及贴壁均有着不同程度的抑制作用。这可能是Hcy参与动脉粥样硬化发病的机制之一。     

叶酸降低高同型半胱氨酸血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白-1的表达

目的： 探讨补充叶酸对高蛋氨酸(Met)喂养所致的高同型半胱氨酸（Hcy）血症大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白（MCP-1）表达的影响。方法: SD大鼠30只随机分3组:即正常对照组(control)、高蛋氨酸组(Met)、蛋氨酸＋叶酸组(Met＋folate)，每组10只，分别给予普通饲料、普通饲料加1.7%蛋氨酸、普通饲料加1.7%蛋氨酸和0.006%的叶酸，饲养45 d，测定血浆总同型半胱氨酸浓度(thcy)，用免疫组织化学染色法及蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测大鼠的主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1表达。结果: 高Met组血浆总同型半胱氨酸浓度明显高于control组(P<0.01)，Met＋folate组血浆总同型半胱氨酸浓度明显低于Hhcy组(P<0.01)； 高Met组大鼠主动脉表达的MCP-1明显多于control组(46.41±4.23 vs 15.73±2.74； P<0.05)，而Met＋folate组能抑制高同型半胱氨酸血症所致的主动脉MCP-1的表达(23.12±4.40 vs 46.41±4.23; P<0.05)。结论: 大鼠喂以高Met饲料45 d，可充分诱导高Hcy血症。而叶酸补充治疗，在显著降低血浆tHcy水平的同时，也降低了高同型半胱氨酸大鼠主动脉单核细胞趋化蛋白MCP-1的表达。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞PAI-1活性及其mRNA水平的影响

探讨血浆同型半胱氨酸（Hcy）致血管病变的机制。培养人脐静脉内皮细胞株，用发色底物法测定细胞上清的纤溶酶原激活物抑制物－1（PAI－1）活性，细胞原位杂交及辉度扫描检测PAI－1 mRNA水平。结果表明H 驻作用血管内皮细胞后，PAI－1活性随Hcy浓度增加和Hcy作用时间延长而呈递增趋势，PAI－1 mRNA灰度面积积分值随Hyc浓度的增加而增加。提示Hcy抑制内皮细胞纤溶能力是Hcy致血栓形成和血管病变的一个机制。     

Caspase 9及其相关分子基因表达水平改变对同型半胱氨酸内皮凋亡的影响

目的 了解caspase 3信号传导通路中上游分子Bcl 2、细胞色素c（cytochrome-c）、caspase 9在同型半胱氨酸作用下的人脐静脉血管内皮细胞内的mRNA及蛋白表达水平的改变，揭示线粒体参与信号传导链在caspase 3所介导的内皮细胞凋亡过程中的作用。方法 培养人脐静脉内皮细胞，用不同浓度同型半胱氨酸作用于细胞后，用逆转录-聚合酶链反应及Western印迹分别检测各分子基因及蛋白表达水平的改变。结果 Bcl 2、cytochrome-c和caspase 9在同型半胱氨酸作用下mRNA及蛋白表达水平下降，并且随同型半胱氨酸浓度的升高而降低。结论 Bcl 2可能参与了同型半胱氨酸促进细胞凋亡的信号传导途径。Caspase 3没有通过上游分子apoptosome和caspase 9途径活化。这些研究结果提示，同型半胱氨酸诱导细胞凋亡并不是通过以线粒体凋亡通路为主的信号传导通路。     

重组人血管内皮抑素对人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226增殖和相关蛋白表达的影响

 目的： 研究重组人血管内皮抑素（恩度）在体外对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞周期及细胞相关蛋白表达的影响。方法： 用CCK-8检测恩度对RPMI 8226细胞增殖的影响;流式细胞术检测凋亡和细胞周期的改变;Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达变化;以实时定量PCR和Western blotting检测RPMI 8226细胞血管细胞粘附因子 1（VCAM-1）、白细胞介素 6（IL-6）和血管内皮生长因子（VEGF）mRNA以及蛋白表达变化;ELISA检测细胞上清液中细胞因子IL-6和VEGF水平。结果： 恩度对RPMI 8226细胞有增殖抑制作用,250 mg/L恩度对RPMI 8226细胞 72 h增殖抑制率为（59.5±5.6）%（P<0.05）,细胞G1期比例增加（P<0.05）,但对细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2和caspase-3表达无显著影响;经恩度作用后RPMI 8226细胞 VCAM-1表达下降（P<0.05）,IL-6和VEGF表达及分泌降低（均P<0.05）。结论： 恩度能通过改变细胞周期变化抑制RPMI 8226细胞增殖,并能减少VCAM-1表达及IL-6、VEGF分泌,对细胞凋亡无明显改变。     

Artificial rearing of rat pups using rat milk

The contribution of diet and surgery to the brain weight deficits observed in artificially reared rats was investigated. Four day old Long Evans rat pups were assigned to an artificially reared (AR) or mother reared (MR) group. AR pups were encannulated and fed either rat milk (AR-MOM) or replacement formula (AR-MES). MR pups received a sham encannulation (MR-SHAM) or no surgery (MR-CONT) before being returned to their dam for rearing. On day 7 all the animals were killed. Brain weights and visceral organ weights were obtained. There was no significant difference between the MR groups on any measure except stomach weights. AR-MOM pups had larger visceral organ weights than pups in the other groups. AR-MOM and AR-MES pups had similar whole brain weights, smaller than those of the MR pups. However, the cerebellar weights, and to a lesser extent, brainstem weights, showed improvements in the AR-MOM group, over the AR-MES group. Neither the effect of surgery nor of diet alone can account for the organ weight differences that have been described in AR rats. The possibility that normal growth may be primarily dependent on diet at one stage of development, with other factors gaining importance at later stages is discussed.     

Replication of rat coronavirus in a rat cell line,LBC

Summary Rat coronavirus readily propagated and induced marked cytopathic effect in a rat cell line, LBC cell culture, which provided a sensitive, practical assay system for viral infectivity and neutralizing antibody, and a satisfactory source of the virus.With 3 Figures     

Transplantation of postnatal rat enteric ganglia into denervated adult rat hippocampus

These experiments explore the possible value of the myenteric plexus as a source of donor cells for autografting into the central nervous system. Neurons and glia from 10-12-day postnatal rat myenteric plexus survive for at least one month after transplantation into cholinergically denervated syngeneic adult rat hippocampus. A population of donor cholinergic neurons has acetylcholinesterase-positive processes, but these appear not to innervate host tissue. Host gliosis in response to these implants seems to be less than that seen with other peripheral ganglia, and unlike Schwann cells, the enteric glia form end-feet on brain capillaries.     

Activation of rat complement by soluble and insoluble rat IgA immune complexes

The ability of rat monoclonal IgA, specific for 2,4-dinitrophenyl (DNA), to activate the complement (C) system of the rat was investigated using aggregated IgA or IgA immune complexes (IC). IgA was coated onto a solid phase, and tested for its capacity to bind C3 upon incubation at 37 degrees C in normal rat serum (NRS) in the presence of Mg-EGTA. Binding of C3 was observed dependent on the dose of dimeric (d-), polymeric (p-) and secretory IgA tested. In contrast, little C3 fixation was observed in this system with monomeric (m-) rat IgA or with mouse m- and d-IgA (MOPC315). Soluble and insoluble rat IgA IC were prepared using dinitrophenylated rat serum albumin (DNP8RSA) as antigen (Ag), and assessed for C activation. It was shown that insoluble IC (immune precipitates; IP) containing m-, d- or pIgA of rat origin activate the alternative pathway of rat C, as demonstrated by their capacity to induce C consumption in NRS in the presence of Mg-EGTA. When p- and m-IgA IP were compared for their capacity to activate C, it was found that p-IgA activated C four times as efficiently as m-IgA IP (at 2 mg/ml). Soluble rat IgA IC were prepared in an excess of DNP8RSA, fractionated by gel filtration on Sepharose 6B, and analyzed for C activation and antibody (Ab)/Ag ratio. In contrast to m-IgA IP, soluble m-IgA did not activate C. On the other hand soluble d-IgA IC activated C dependent on their concentration and size: at a concentration of 0.1 mg/ml high-molecular weight d-IgA IC with a high Ab/Ag ratio were four times as efficient as low-molecular weight IC with a low Ab/Ag ratio, and twice as efficient as IP prepared at equivalence. To demonstrate the induction by IgA of the assembly of the terminal membrane attack complex, trinitrophenyl (TNP)-conjugated rat red blood cells (TNP-RRBC) coated with d- or p-IgA were shown to be lysed in NRS in the presence of Mg-EGTA. No lysis of m-IgA-coated TNP-RRBC was observed. The results in this study demonstrate that both soluble and insoluble rat IgA IC activate the alternative pathway of homologous rat C. Alternative pathway activation by soluble rate IgA IC is dependent on the size of the IC. The degree of polymerization of the IgA Ab itself also influences C activation.     

青老年大鼠脑缺血模型的比较

背景：大鼠具有成本低,种系内纯合性好,脑血管解剖特性与人类相似等特点,是目前脑缺血研究最常用的实验动物。 目的：观察青老年大鼠大脑中动脉梗死后的行为学变化,分析年龄对脑缺血的影响。 方法：将青、老年SD大鼠随机分为青、老年假手术组,青、老年模型组(同侧颈总动脉永久结扎大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉梗死模型)4组。 结果与结论：老年假手术组体质量低于青年假手术组(P < 0.05),但高于老年模型组(P < 0.05),老年模型组体质量低于青年模型组(P < 0.05)。术后第1,3,5,7天老年模型组改良神经功能损害程度评分高于青年模型组(P < 0.05);与青年模型组及青、老年假手术组比较,术后第3,8,12周老年模型组逃避潜伏期明显延长,跨过平台所在位置的次数明显减少(P < 0.05)。表明在同等缺血打击下,老龄鼠脑缺血模型缺血损伤重、修复能力低,其神经功能恢复、学习和记忆能力明显逊于青年大鼠,提示增龄因素是研究脑缺血后神经损伤的重要影响因素之一。 关键词：大脑中动脉梗死;动物模型;改良神经损害程度评分;学习;记忆;组织构建实验造模  doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.11.024