分娩活跃期子宫体部与子宫下段平滑肌差异基因表达谱的筛选

目的: 建立分娩活跃期子宫体部与子宫下段平滑肌差异基因表达谱，并探讨其意义。方法: 应用8 064条人类基因cDNA表达谱芯片，筛选20例足月妊娠，分娩活跃期产妇子宫体部与子宫下段平滑肌组织差异表达基因，用RT-PCR验证HSPA1B和CACNA1C的表达。结果: 分娩活跃期，子宫体部与子宫下段的显著性差异表达基因有483条，上调表达的279条基因中以HSP，ZNF145，NMBR，IL-2Rγ，PLC及ATPase等上调表达为主；下调表达的204条基因中以CSDA,MT2A,IL-6及SELE等下调表达为主。 HSPA1B和CACNA1C在子宫体部和子宫下段平滑肌组织的相对表达量分别为0.80±0.75,0.69±0.82和 0.40±0.39,0.38±0.42。子宫体部HSPA1B的相对表达量明显高于下段（P＜0.05），CACNA1C的表达则无显著性差异（P＞0.05）。HSPA1B和CACNA1C在子宫体部与子宫下段的差异表达比值，在cDNA表达谱和RT-PCR实验中分别为2.03，1.82和2.41，1.45,差异表达的趋势一致。结论: 子宫体部与子宫下段平滑肌在分娩发动中具有不同的基因表达谱，基因表达谱的差异为二者功能的协调奠定了分子基础。     

热休克蛋白在子宫内膜异位症中的表达及意义

目的 探讨热休克蛋白27（HSP27）和HSP70在子宫内膜异位症发病中的作用。方法 采用免疫组化链霉菌抗生素蛋白－过氧化物酶染色法（SP法），检测子宫内膜异位症中56例异位内膜与在位内膜（30例）中HSP27和HSP70的表达。采用原位杂交，检测HSP70mRNA的水平，并与正常子宫内膜相比较。结果 免疫组化结果显示，异位内膜组织中HSP27与HSP70均呈高表达，与正常内膜组的表达差异显著（P＜0．01），而且失去其在正常内膜组织中表达的周期性变化。卵巢子宫内膜异位症组（OEM）与子宫腺肌症组（AM）组中，HSP27和HSP70的表达无显著差异（P＞0．05）。原位杂交结果显示，HSP70 mRNA（分别为P＜0．01和P＜0．05）。HSP27与HSP70的表达水平，同OEM的严重性无关。结论 异位内膜组织中的HSP70基因被激活，转录增加。HSP27和HSP70呈高表达，可能在EM的发病中起重要作用。     

Calponin-1基因SiRNA重组腺病毒载体构建及转染子宫平滑肌细胞

我们曾采用高通量的基因芯片技术结合蛋白质组学技术,获得了人类自然临产与未临产子宫体部与子宫下段的关异基因表达谱和差异性蛋白表达谱,为子宫收缩相关药物靶点的选择提供了理论基础[1]     

细胞外HSP70/HSP70-PCs对人肝癌HepG2细胞上皮-间充质转化的影响及机制研究

 目的：探讨细胞外热休克蛋白70(HSP70)/HSP70肽复合物(HSP70-PCs)对肝癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响和可能机制。方法：将HepG2细胞分为3组：正常对照组、HSP70/HSP70-PCs组（终浓度2 mg/L）和LY294002+HSP70/HSP70-PCs组。应用real-time RT-PCR与Western blotting法检测上皮细胞表面标志E-cadherin和间质细胞表面标志α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达变化,以及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）和缺氧诱导因子1α(HIF1-α)的表达变化。结果：细胞外HSP70/HSP70-PCs可以促进HepG2细胞EMT的发生。HepG2细胞的EMT过程伴随HIF-1α和PI3K表达增加。应用LY294002阻断PI3K后,HepG2细胞没有发生EMT,同时细胞外HSP70/HSP70-PCs上调HIF-1α表达的作用消失。结论：细胞外HSP70/HSP70-PCs可以通过PI3K/HIF-1α促进肝癌细胞发生EMT。     

高脂血症大鼠主动脉HSP22、TNF-α和eNOS的表达及阿托伐他汀的影响

 目的:研究高脂血症大鼠主动脉热休克蛋白22（HSP22）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的表达,以及阿托伐他汀对其的影响。方法:复制高脂血症大鼠模型后,实验分为正常对照组、高脂对照组和高脂+阿托伐他汀干预组。免疫组化法检测大鼠主动脉HSP22及TNF-α表达,Western blotting检测eNOS蛋白表达。结果:正常对照组未见HSP22和TNF-α阳性表达;高脂对照组与他汀干预组可见HSP22和TNF-α阳性表达;他汀干预组HSP22和TNF-α平均吸光度值明显低于高脂对照组（0.211±0.014 vs0.345±0.042,0.218±0.090 vs0.377±0.094,均P<0.05）。高脂对照组和他汀干预组eNOS表达均较正常对照组明显降低(P<0.01),高脂对照组和他汀干预组差异无显著。结论: HSP22和TNF-α在高脂血症大鼠主动脉中的表达升高,而eNOS的表达降低,阿托伐他汀的干预可降低HSP22和TNF-α的表达,但未能改变eNOS的表达。     

阿魏酸钠对血管平滑肌细胞热休克蛋白27磷酸化的影响

目的： 研究阿魏酸钠对血管紧张素II（angiotensinⅡ,AngII）与血小板源性生长因子-BB（platelet derived growth factor-BB,PDGF-BB）诱导的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）中热休克蛋白27（heat shock protein 27,HSP27）磷酸化的影响。方法：采用体外培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞；用特异性的单克隆phospho-HSP27抗体的蛋白印迹法（Western blotting）检测HSP27的活性。结果：阿魏酸钠以剂量依赖性方式抑制AngII和PDGF-BB诱导的HSP27磷酸化，在10-4 mol/L〖JP2〗时抑制作用最明显，最大抑制率分别为39.0%（P<0.05）和56.8%（P<0.01）。结论：阿魏酸钠具有明显抑制由AngII和PDGF-BB诱导的VSMCs HSP27磷酸化的作用。     

热休克蛋白27在大鼠急性尿潴留膀胱中的表达及意义

目的研究热休克蛋白27（HSP27）在大鼠急性尿潴留（AUR）模型膀胱中的表达及其与逼尿肌收缩功能的关系。方法通过尿道口钳夹的方法建立大鼠急性尿潴留动物模型,利用充盈性膀胱测压的方法检测膀胱收缩功能,采用免疫荧光染色的方法分别检测急性尿潴留膀胱排空后不同时相点（0、2、4、6h）大鼠膀胱逼尿肌HSP27的表达情况,采用Western-blot的方法比较尿潴留后不同时相点HSP27含量的差异。结果 AUR后2、4、6h大鼠逼尿肌收缩力呈时间依赖性递减,均较0 h组显著下降（P〈0.05）;其膀胱组织中HSP27的含量亦显著低于0h组,各组的HSP27表达均高于对照组（P〈0.05）。结论 HSP27可能在急性尿潴留致逼尿肌收缩功能障碍发病过程中起到重要作用。     

急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsf1和HSP70改变的意义

目的探讨急性心肌梗死猝死者梗死区心肌细胞内热休克转录因子1（hsfl）和热休克蛋白70（HSP70）改变的临床意义。方法分别用RT-PCR和免疫组化法检测（IHC）18例急性心肌梗死猝死者（研究组）和15例心脏正常因车祸快速死亡者（对照组）心肌细胞中hsfl和HSP70基因的mRNA和蛋白表达量。结果急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70的mRNA表达量都显著高于正常对照组（P〈0.01），且hsfl和HSP70mRNA的表达量之间呈显著的正相关关系（P〈0．001）。急性心肌梗死猝死者心肌细胞hsfl和HSP70蛋白在细胞浆和细胞核表达较对照组显著增强（P〈0.001），其中hsfl蛋白主要在心肌细胞核内表达，HSP70蛋白主要在心肌细胞浆内表达。结论急性心肌梗死猝死者心肌细胞内hsfl和HSPT0可能共同参与了急性心肌梗死的病理生理过程．这一过程可能是热休克反应的另一调节途径。     

不同抗氧化剂对胎膜组织MMP-9表达的影响*

 目的：检测不同抗氧化剂α-硫辛酸（α-LA）和维生素C（Vit C）+维生素E(Vit E)对体外培养的胎膜早破(PROM)胎膜组织基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响。方法：选取发生胎膜早破的孕妇8例,未临产,剖宫产终止妊娠,其中未足月胎膜早破组（PPROM）和足月胎膜早破组（TPROM）各4例。每例胎膜组织分成3组,分别加入磷酸盐缓冲液（PBS,即对照组）、0.5 mmol/L α-LA和28.8 g/L Vit C+1.8 g/L Vit E后进行体外培养24 h,采用免疫组化染色方法和Western blotting技术检测胎膜组织中MMP-9蛋白表达。结果：（1）免疫组化结果显示：TPROM组织中MMP-9定位于绒毛膜细胞和中性粒细胞的胞浆,且3组间MMP-9平均积分吸光度值无显著差异（P>0.05）,而PPROM组织中MMP-9除在绒毛膜细胞和中性粒细胞的胞浆中表达外,在羊膜上皮细胞的胞浆中也强阳性表达,α-LA组及Vit C+Vit E组MMP-9积分吸光度值（0.0212±0.0057和0.0107±0.0009）低于对照组（0.0618±0.0098）,Vit C+Vit E组较α-LA组更低（P<0.01）。（2）Western blotting结果显示,TPROM组织中,3组中pro-MMP-9表达水平均无显著差异（P>0.05）,但α-LA组及Vit C+Vit E组active MMP-9蛋白相对表达水平（0.64±0.07和0.28±0.13）低于对照组（0.99±0.22）,Vit C+Vit E组较α-LA组更低（P<0.05）。在PPROM组织中,α-LA组和Vit C+Vit E组pro-MMP-9/active MMP-9蛋白相对表达水平（0.69±0.08/0.35±0.07和0.38±0.03/0.16±0.05）低于对照组（1.00±0.20/1.00±0.10）,Vit C+Vit E组较α-LA组更低（P<0.05）。结论：抗氧化剂可使胎膜早破胎膜组织的MMP-9表达水平下调,且28.8 g/L Vit C+1.8 g/L Vit E作用后的MMP-9表达水平较 0.5 mmol/L α-LA下调更明显,这为胎膜早破胎膜组织的防治提供理论依据。     

不同转移能力肺腺癌细胞系AGZY-83a和Anip973的蛋白质组学研究

目的 寻找高低转移能力肺癌细胞中潜在的蛋白标记和更好的解释肺腺癌转移机制。方法 用双向电泳的方法对高低转移能力肺腺癌细胞系AGZY-83a和Anip973进行了蛋白质组学分析。由此选取差异较大的候选差异表达蛋白送于基质辅助镭射解析/电离飞行时间质谱仪（MALDI-TOF-MS）进行分析并鉴定。结果 双向电泳胶图分析结果说明两细胞系的蛋白表达存在显著差异。MALDI-TOF-MS鉴定证实这3个蛋白分别为Stathmin 1蛋白、磷酸甘油酸变位酶1（PGAM 1）和热休克蛋白27（HSP27）。 结论 在高转移细胞系Anip973中，HSP表达显著升高，Stathmin 1和HSP27表达显著下降，这三种蛋白与肿瘤的发生和恶性程度密切相关。     

骨骼肌细胞αB-晶状体蛋白基因在大强度离心运动后的表达

背景：骨骼肌含有被称为“分子伴侣”的小热休克蛋白αB-晶状体蛋白,有可能在肌肉运动中具有重要的生理功能。 目的：观察离心运动后骨骼肌细胞αB-晶状体蛋白基因表达。 方法：将成年雄性Wistar大鼠随机分为安静对照组和运动后即刻组,运动后24 h组。安静对照组正常喂养,两个运动组进行一次性大负荷离心运动,分别取对照组腓肠肌和运动组运动后0和24 h的腓肠肌,使用冰冻切片原位杂交法检测αB-晶状体蛋白基因表达情况。 结果与结论：骨骼肌细胞αB-晶状体蛋白基因在对照组呈低水平表达,在运动后即刻和运动后24 h组均呈较高表达 (P < 0.05),αB-晶状体蛋白基因表达杂交信号主要位于肌细胞膜下。结果证实,大强度离心运动可诱导骨骼肌细胞αB-晶状体蛋白基因表达增高。     

骨骼肌小热休克蛋白在离心运动后的表达

背景：研究证明离心方式的训练可使骨骼肌产生保护作用,避免离心运动引起的损伤,但是机械负荷引起的小热休克蛋白的保护作用至今却少有报道。 目的：观察骨骼肌小热休克蛋白家族中αB-晶体蛋白在离心运动后的表达,以此探讨机械负荷诱导的小热休克蛋白对骨骼肌细胞的保护作用机制。 方法：将Wistar大鼠随机分为安静对照组和运动训练组。运动训练组使用动物跑台进行6周间歇性离心运动训练,每周训练5 d,安静对照组正常喂养。训练6周休息48 h后,安静对照组与运动训练组随机选出6只大鼠做1次性大负荷离心运动。观察两组血清肌酸激酶变化;蛋白免疫印迹法检测两组腓肠肌αB-晶体蛋白含量变化,用免疫荧光组织化学法分析两组腓肠肌αB-晶体蛋白亚细胞表达特征。 结果与结论：大负荷离心运动后,安静对照组血清肌酸激酶与运动前相比显著增高(P< 0.05),说明骨骼肌细胞出现严重的损伤,而运动训练组这种损伤不明显。蛋白免疫印迹结果表明,运动训练组做一次性大负荷离心运动后αB-晶体蛋白表达水平比安静对照组增加(P < 0.05)。从免疫荧光组化切片可见,αB-晶体蛋白在细胞内发生了移位变化,从胞浆移位于Z盘和细胞膜。提示αB-晶体蛋白在离心运动训练后表达增多,并通过移位于肌细胞Z-盘和细胞膜发挥对骨骼肌细胞的保护作用。     

缺血预处理模型大鼠心肌组织小分子热休克蛋白的表达

背景：小分子热休克蛋白,尤其是热休克蛋白27和α-B晶体蛋白高表达量对于心肌组织缺血再灌注的保护作用已比较明确。但是在老龄大鼠中小分子热休克蛋白是否仍具有这种保护作用迄今仍无报道。 目的：观察热休克蛋白27和α-B晶体蛋白在青年及老年大鼠心肌缺血预处理时表达的变化。 方法：24月龄老龄大鼠及两三月龄青年大鼠在体心脏经缺血5 min、再灌注5 min(反复3次)预处理后,于0,5,15,45,60 min取左心室缺血的前壁与非缺血的后壁心肌组织分别匀浆,分离上清及沉淀蛋白,用Western Blot检测热休克蛋白27和α-B晶体蛋白在预处理不同时间可溶性蛋白及不溶性蛋白含量的改变;采用RT-PCR方法观察缺血预处理对青年及老龄大鼠热休克蛋白27和α-B晶体蛋白mRNA在不同时间点表达的改变情况,采用免疫荧光观察缺血预处理后不同时间点热休克蛋白27和α-B晶体蛋白的移位情况。 结果与结论：老龄大鼠在缺血预处理后热休克蛋白27和α-B 晶体蛋白表达量增加,表明老龄大鼠仍具有正常的基因转录及蛋白合成的能力;与青年大鼠比较,老龄大鼠缺血预处理后小分子热休克蛋白移位能力降低,从而减弱了与各相应蛋白结合的能力,限制其保护作用的发挥。提示老年大鼠心肌组织中小分子热休克蛋白丧失移位能力,可能是老年大鼠缺血预处理保护作用减弱的重要原因之一。     

Alpha B-crystallin and 27-kd heat shock protein are regulated by stress conditions in the central nervous system and accumulate in Rosenthal fibers.

To understand the significance of the accumulation of alpha B-crystallin in Rosenthal fibers within astrocytes, the expression and metabolism of alpha B-crystallin in glioma cell lines were examined under the conditions of heat and oxidative stress. alpha B-crystallin mRNA was increased after both stresses, and alpha B-crystallin protein moved from a detergent-soluble to a detergent-insoluble form. In addition, Western blotting of Alexander's disease brain homogenates revealed that the 27-kd heat shock protein (HSP27), which is related to alpha B-crystallin, accumulates along with alpha B-crystallin. The presence of HSP27 in Rosenthal fibers was directly demonstrated by immunohistochemistry. Our results suggest that astrocytes in Alexander's disease may be involved in an as yet unknown kind of stress reaction that causes the accumulation of alpha B-crystallin and HSP27 and results in Rosenthal fiber formation.     

Strength training elevates HSP27, HSP70 and αB-crystallin levels in musculi vastus lateralis and trapezius

A single bout of high-force exercise has been shown to increase the muscle levels of heat shock proteins (HSPs). Here, changes in the levels of HSPs after 2 and 11 weeks of strength training with either one or three sets per exercise were examined. Fifteen young men (27 ± 6 years, 182 ± 8 cm and 82 ± 13 kg) were randomized to train either one set in lower-body exercises and three sets in upper-body exercises (1L-3UB), or three sets in lower-body exercises and one set in upper-body exercises (3L-1UB). Biopsies from vastus lateralis and trapezius were obtained before, during (2 weeks) and after 11 weeks of strength training (3 bouts per week). The biopsies were analysed for HSP27 (cytosolic and cytoskeletal fractions) and HSP70 and αB-crystallin (cytosolic fraction). No evidence for an effect of training volume (1 vs. 3 sets) on the HSP response was found. For all subjects combined, HSP27 [186 ± 69% (mean ± SD)], HSP70 (146 ± 51%) and αB-crystallin (184 ± 82%) increased in the cytosolic fraction of vastus lateralis after 11 weeks of training. In the trapezius, the only observed increase was for HSP27 in the cytosolic fraction after 2 weeks of training (149 ± 59%). However, the trapezius contained somewhat higher levels of HSP70 and αB-crystallin than vastus lateralis at baseline. The HSP27 levels in the cytoskeletal compartment did not increase significantly in either muscle. In conclusion, strength training resulted-independent of training volume-in elevated levels of HSP27, HSP70 and αB-crystallin in the cytosolic compartment of the vastus lateralis. In the trapezius, only the cytosolic HSP27 levels were increased with training.     

The heat shock protein response following eccentric exercise in human skeletal muscle is unaffected by local NSAID infusion

Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) are widely consumed in relation to pain and injuries in skeletal muscle, but may adversely affect muscle adaptation probably via inhibition of prostaglandin synthesis. Induction of heat shock proteins (HSP) represents an important adaptive response in muscle subjected to stress, and in several cell types including cardiac myocytes prostaglandins are important in induction of the HSP response. This study aimed to determine the influence of NSAIDs on the HSP response to eccentric exercise in human skeletal muscle. Healthy males performed 200 maximal eccentric contractions with each leg with intramuscular infusion of the NSAID indomethacin or placebo. Biopsies were obtained from m. vastus lateralis before and after (5, 28 hrs and 8 days) the exercise bout from both legs (NSAID vs unblocked leg) and analysed for expression of the HSPs HSP70, HSP27 and αB-crystallin (mRNA and protein). NSAID did not affect the mRNA expression of any of the HSPs. Compared to pre values, the mRNA expression of all HSPs was increased; αB-crystallin, 3.6- and 5.4-fold; HSP70, 26- and 3.4-fold; and HSP27: 4.8- and 6.5-fold at 5 and 28 hrs post-exercise, respectively (all p < 0.008). Immunohistochemical stainings for αB-crystallin and HSP70 revealed increased staining in some samples but with no differences between legs. Changes in force-generating capacity correlated with both αB-crystallin and HSP70 mRNA and immunohistochemisty data. Increased expression of HSPs was observed on mRNA and protein level following eccentric exercise; however, this response was unaffected by local intramuscular infusion of NSAIDs     

siRNA敲减缺氧诱导因子1α表达对口腔鳞癌细胞活力及癌胚抗原相关细胞黏附分子1表达的影响

目的:探究缺氧诱导因子1α(HIF-1α)与口腔鳞癌细胞活力和凋亡的关系以及作用机制。方法:采用RT-PCR和Western blot检测口腔鳞癌细胞系Tca8113和CAL27以及正常口腔上皮细胞NOK中HIF-1α和癌胚抗原相关细胞黏附分子1(CEACAM1)的mRNA和蛋白表达量; RNA干扰技术沉默口腔鳞癌CAL27细胞中HIF-1α的表达,实验分为空白对照组、无义对照组和siRNA-HIF1-α组,MTT实验检测敲减HIF-1α表达对细胞活力的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,Western blot检测HIF-1α、P21、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:HIF-1α和CEACAM1在口腔鳞癌细胞中的表达量显著高于正常口腔细胞(P 0. 05),且二者表达量呈正相关; HIF-1α和CEACAM1在CAL27细胞中的表达量显著高于Tca8113细胞(P 0. 05)。siRNA-HIF-1α组细胞中的HIF-1α蛋白表达量显著低于空白对照组(P 0. 05)。敲减HIF-1α表达显著抑制CAL27细胞的活力(P 0. 05),促进其凋亡(P 0. 05),显著增加P21和Bax的蛋白水平(P 0. 05),明显降低VEGF和Bcl-2的蛋白水平(P 0. 05)。结论:HIF-1α在口腔鳞癌中高表达,干扰HIF-1α的表达可显著抑制细胞的活力,促进其凋亡。这可能是通过调控HIF-1α下游靶基因的表达以及肿瘤血管的生成来发挥作用的。     

不同人结直肠肿瘤细胞系对常用抗肿瘤药物体外化疗敏感性的比较

 目的：观察5种常用抗肿瘤药物对这些人结直肠肿瘤细胞系的生长抑制作用,探讨5种常用抗肿瘤药物对11株人结直肠肿瘤细胞系的作用强度以及比较其体外敏感性,研究不同抗肿瘤药物对人结直肠癌细胞系HCT116和SW480热休克蛋白27（HSP27）和HSP70表达水平的影响。方法：采用CCK-8（Cell Counting Kit-8）法检测5种常用抗肿瘤药物分别对11株人结直肠肿瘤细胞系的生长抑制效应,计算50%抑制浓度（50% inhibitory concentration, IC50）及敏感指数,并比较不同人结直肠肿瘤细胞系对5种抗肿瘤药物的敏感性,Western blotting检测HSP27和HSP70蛋白表达水平。结果：11株人结直肠肿瘤细胞系对5-氟尿嘧啶(5-FU)和奥沙利铂(OHP)均比较敏感,没有明显耐药性;5株人结直肠肿瘤细胞系对丝裂霉素(MMC)敏感,6株中度敏感;除SW1116 外的10株人结直肠肿瘤细胞系都对多西紫杉醇(DXL)敏感,而SW1116细胞对DXL表现出明显耐药性;除LS174T和SW1116外的9株人结直肠肿瘤细胞系都对伊立替康(IFL)表现出中度敏感,LS174T细胞对IFL表现敏感,而SW1116细胞对IFL表现出明显耐药性。抗肿瘤药物作用于人结直肠癌细胞系HCT116和SW480使HSP27的表达上调,但HSP70的表达水平变化不明显。结论：LS174T是多药敏感细胞株,SW1116是多药耐药细胞株,5-FU和OHP为广谱抗结直肠肿瘤药物;化疗药物的敏感性及HSP27表达量检测对临床选择化疗药物具有一定的提示意义。