IgH和IgL引物联合检测对提高石蜡组织淋巴瘤基因重排检出率的价值

背景与目的：通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增免疫球蛋白重链（immunoglobulin heavy chain,IgH）基因对其克隆性的检测,可以辅助诊断淋巴瘤。缺点是假阴性率较高,在石蜡包埋组织中尤为明显。本研究拟采用手工显微切割、免疫球蛋白重链和轻链（immunoglohulin light chain,IgL）联合测定等方式,探讨该方法在石蜡包埋组织中非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin’s lymphoma,NHL）诊断中的价值。方法：选用1对IgH引物、1对T细胞受体γ（Tcell receptor γ,TCRγ）、TCRγ引物、2对新设计的轻链引物,通过PCR、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）及银染技术,检测经形态学及免疫组织化学确诊的58例石蜡包埋组织标本,包括39例B细胞淋巴瘤、16例T细胞淋巴瘤和3例淋巴结反应性增生组织。以DG75和Jurkat淋巴瘤细胞系DNA作为对照。结果：IgH引物P1在39例B细胞淋巴瘤检出阳性率79．5％（31／39）。假阳性率6．25％（1／16）,IgL引物在B细胞淋巴瘤检出阳性率71．8％（28／39）。假阳性率12．5％（2／16）,经统计学分析二者检出率无显著性差异（P〉0．05）。二者联合检测,B细胞淋巴瘤阳性检出率可以达到92．3％,假阳性率并无明显提高（12．5％）。以上重排引物在反应性增生淋巴结组织中均未检出。结论：IgH与IgL引物联合检测可明显提高石蜡包埋组织中B细胞淋巴瘤的检出率,并为B-NHL的诊断及鉴别诊断提供了有效的辅助手段。     

非霍奇金氏淋巴瘤骨髓微小病灶检测的临床意义

目的：探讨微小病灶非霍金氏淋巴瘤中的检测对病人疗效、预后的影响。方法：采有ＰＣＲ方法扩增Ｔ细胞受体γ链（ＴＣＲγ）和免疫球蛋白重链（ＩgＨ）基因重排，对１３例骨 髓形态学检查正常的Ｔ，细胞非霍奇金氏淋巴瘤（Ｔ－ＮＨＬ）和１７例Ｂ细胞非霍奇金氏淋巴瘤（Ｂ－ＮＨＬ）病人治疗前骨髓标本进行微小病灶（ＭＲＤ）检测。结果：其中７例Ｔ－ＮＨＬ病人发生ＴＣＲγ基因重排，检出率为５３．８％，１１例Ｂ－ＮＨＬ病人发生     

乳腺癌中bcl—2基因族研究现状

一、bcl－2癌基因族概述细胞凋亡（编程性细胞死亡，PCD）在生物体胚胎发育、内稳态的维持中是必需的，细胞凋亡调控异常与某些疾病发生有关，如获得性免疫缺陷综合症、癌症。某些癌基因与肿瘤抑制基因参与了细胞凋亡的调控。近来发现，原癌基因bCI－2是PCD的关键调节因子[1]。bcl－2癌基因族的成员及其功能：（一）bcl-2bcl－2是B一细胞淋巴瘤／白血病一2基因（B－celllymphoma/leukemia－2gene）的缩写[1]。1985年，Tsujimoto在许多非何杰金B细胞淋巴瘤中发现，正常情况下位于18号染色体的bcl－2基因与14号染色体上免疫球蛋白的重链…     

石蜡包埋B细胞性恶性淋巴瘤组织克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测研究

[目的]探讨克隆性免疫球蛋白重链(IgH)基因重排在B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)诊断中的价值.[方法]采用半巢式PCR方法,对81例B-NHL病例,36例反应性增生及12例非淋巴瘤组织样本进行克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测,以上病例均为经福尔马林固定的石蜡包埋组织.[结果]81例B-NHL中68例IgH阳性(阳性率为83.95%),36例反应性增生均为多克隆性,12例非淋巴瘤组织样本结果IgH均为阴性.[结论]克隆性免疫球蛋白重链基因重排检测可以作为诊断恶性B细胞性非霍奇金淋巴瘤的有效分子标志.     

弥漫大B细胞淋巴瘤异质性研究进展

弥漫大B细胞淋巴瘤是一种高度异质性疾病。根据细胞来源可将其分为类GC型、类ABC型和“其他”型；利用广泛聚类方法将其分为氧化磷酸型、B细胞受体（BCR）-增生型和宿主应答型；通过基因与染色体改变也可以建立判断弥漫大B细胞淋巴瘤异质性的模型。对异质性的研究可深化理解该病的发病机制，进一步判断预后并为个体化治疗提供理论基础。     

微小病灶检测在非霍奇金淋巴瘤的临床意义

在非霍奇金淋巴瘤中,骨髓细胞形态学检查阴性并不能代表骨髓不含肿瘤细胞。常规形态学检查不能够发现的那部分微量肿瘤细胞被称作微小病灶。以往有不少技术用于微小病灶检测,但由于存在敏感性和特异性低等方面的缺陷,限制了它们的临床应用。本文应用敏感性和特异性均高的PCR方法,扩增T细胞性非霍奇金淋巴瘤（T－NHL）患者T 细胞受体γ链（TCRγ）基因重排V9区序列和B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B－NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH〕基因CDR－Ⅲ区序列,对骨髓形态学检查正常的患者骨髓标本进行微小病灶检测,以研究其应用于协助估计…     

t（14；18）阴性滤泡性淋巴瘤的分子遗传学机制及研究进展

滤泡性淋巴瘤（FL）是生发中心起源的低级别B细胞非霍奇金淋巴瘤。最具特征性的遗传学改变是染色体14q32上的免疫球蛋白重链基因（IgH）和染色体18q21上的Bcl-2基因的平衡转位,形成t（14;18）（q32;q21）。此转位使Bcl-2蛋白过度表达。在功能上延长了细胞的生存时间并导致FL的形成。t（14;18）并不是出现于所有FL病例中,大约90%的FL存在t（14;18）,其余的FL未能检测到该转位。t（14;18）的存在与否与滤泡性淋巴瘤的发生和发展密切相关。      

非霍奇金淋巴瘤IgH基因重排分析及其意义

目的：探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排的检测在非霍奇坌淋巴瘤（NHL）中的诊断价值。方法：用半巢式和混合聚合酶链式反应方法，联合使用IgH FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）检测44例B-NHL患者、1例未分型淋巴瘤、15例T-NHL患者和5例淋巴结反应性增生患者IgH基因克隆性重排情况。结果：1）采用FR3A引物，44例B-NHL有37例出现IgH基因重排，检测率为84％：采用FR2A引物，有27例出现IgH基因重排．检测率为61％：采用FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3）与J区（JHb、JHc）引物，有34、33例出现IgH基因重排．检测率为77％、75％：结合FR3A、FR2A、FR1家族特异性引物Mixtures（VH1、VH2、VH3），总检测率为95％.2）15例T-NHL有4例出现IgH基因重排．而5例LRH未出现IgH基因重排。3）1例免疫纽化未分型的NHL经PCR检测后，明确分型为B细胞性淋巴瘤。结论：联合采用多对引物可提高检测阳性率；IgH基因重排检测对鉴别B细胞淋巴瘤和淋巴结反应性增生以及T细胞淋巴瘤有重要意义。     

非何杰金氏淋巴瘤的T细胞受体和免疫球蛋白重链基因重排的初步研究

T细胞受体及免疫球蛋白的基因重排研究对鉴定T.B细胞的单克隆增生,协助诊断淋巴瘤有重要意义。本研究用~(32)P标记的Tβ,Tγ,JH探针对26例淋巴瘤及2例急性淋巴细胞白血病标本的DNA进行Southern印迹杂交,发现在11例B细胞淋巴瘤均出现JH基因重排,13例T细胞淋巴瘤中11例出现Tβ链,4例出现Tγ链基因重排,4例出现JH基因重排。2例免疫组化不能确定细胞来源的淋巴瘤、1例有Tγ,另1例有JH重排。2例急性淋巴细胞白血病分别出现Tβ及Tγ重排。该初步结果说明基因重排研究是确定淋巴瘤细胞克隆性增生的有力手段。     

非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化及去甲基化的研究

目的探讨p73基因异常甲基化在非霍奇金淋巴瘤（non—Hodgkin’s lymphomas,NHL）中的分布,去甲基化p73基因的再表达。方法采用甲基化特异性PCR（Methylation specific polymerase chain reaction,MSP）方法检测22例非霍奇金淋巴瘤p73基因CpG岛甲基化状态。使用反转录PCR（Reverse transoription polymerase chain reaction,RT-PCR）方法检测CdR药物作用前后P73基因mRNA的表达情况。结果非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化的发生率为27.3％（6／22）,高度恶性比低度恶性更易发生甲基化,其发生率分别为42．8％和0％,5-杂氮-2’．脱氧胞嘧啶（5-aza-2’-deoxycytidine,CdR）在4．0～8．0μmol/L时可诱导非霍奇金淋巴瘤细胞p73去甲基化。结论p73基因甲基化可能是非霍奇金淋巴瘤发病的原因之一,去甲基化治疗是可行的。     

T细胞淋巴瘤中Notch1基因突变及其蛋白表达的研究

 目的　探讨Notch1蛋白表达及基因突变在T细胞淋巴瘤发病中的作用。方法　采用免疫组织化学和基因测序法检测30例T细胞淋巴瘤组织中Notch1蛋白的表达及Notch1基因26、27号外显子（HD）和34号外显子（PEST）突变情况。另取l0例淋巴结反应增生标本作为对照。结果　30例T细胞淋巴瘤中,21例（70.0 %）Notch1蛋白表达阳性。17例（56.7 %）Notch1基因发生突变,其中,8例突变发生在Notch1基因的HD结构域,6例发生在Notch1基因的PEST结构域,3例在HD和PEST结构域均发生突变。突变方式有插入、片段缺失、无义突变和错义突变。对照组有1例（10.0 %）Notch1蛋白表达阳性,Notch1基因无突变。结论　Notch1蛋白表达可能与Notch1基因突变有关,Notch1蛋白表达和基因突变可能与T细胞淋巴瘤的发生有关。     

毛细胞白血病和毛细胞白血病变异型患者免疫球蛋白重链可变区基因分子特征分析

  目的  本研究归纳毛细胞白血病（hairy cell leukemia,HCL）和毛细胞白血病变异型（hairy cell leukemia-variant,HCL-v）患者免疫球蛋白重链可变区（immunoglobulin heavy chain variable region,IGHV）基因分子特征,并探讨其与临床特征及预后的相关性。  方法  回顾性分析2004年12月至2020年1月在中国医学科学院血液病医院完善IGHV检测的29例HCL患者和15例HCL-v患者临床和生存资料。  结果   44例患者共检测出23种重排片段,VH4和VH4-34分别是两种疾病最常见的V区基因家族和重排片段。HCL和HCL-v患者中IGHV为突变状态的比例分别为72.4%和66.7%,发生VH4-34重排（VH4-34 rearrangement,VH4-34+）的患者IGHV突变率更低（P<0.001）。在HCL中,使用VH1基因家族患者脾大发生率更低（P=0.041）;而VH4-34+或IGHV未突变状态（IGHV-unmutated,IGHV-UM）的患者具有更高的乳酸脱氢酶（VH4-34+ P=0.049,IGHV-UM P=0.022）和β2微球蛋白（VH4-34+ P=0.039,IGHV-UM P=0.036）水平,且VH4-34+患者BRAF V600E突变率更低（20% vs. 85%,P=0.012）。单因素预后分析显示,VH4-34+是HCL患者无进展生存（progression-free survival,PFS）（P=0.001）和总生存（P=0.004）的不良预后因素,IGHV-UM则为HCL-v患者PFS（P=0.038）的危险因素。  结论  HCL和HCL-v患者对VH4基因家族及VH4-34存在偏向性使用,VH4-34+和IGHV-UM间存在明显共现性。在HCL中,VH4-34+与高肿瘤负荷及更差生存相关,而IGHV-UM是HCL-v患者PFS的危险因素。      

B细胞淋巴瘤中促凋亡基因MAPK10异常甲基化的研究

 目的　探讨促凋亡基因MAPK10启动子区CpG岛异常甲基化引起的表达沉默在B细胞淋巴瘤中的意义。方法　提取7个B细胞淋巴瘤细胞株的总RNA和基因组DNA。分别用半定量反转录PCR（RT-PCR）和甲基化特异性PCR（MSP）检测细胞株中MAPK10基因的mRNA表达水平和启动子甲基化状态。用MSP检测了24例弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）、15例滤泡性淋巴瘤（FL）和12例淋巴结反应性增生（LRH）中MAPK10甲基化状态。并进一步用亚硫酸氢盐-基因组测序法（BGS）验证了部分细胞株和组织标本中MAPK10的甲基化状态。结果　MAPK10在大部分B细胞淋巴瘤细胞株中存在表达沉默现象,并与其启动子区高甲基化密切相关。MAPK10基因高甲基化在DLBCL和FL中的频率分别为71 %（17／24）及100 %（15／15）,而未在LRH标本中检出（0／12）。BGS检测结果证实了上述结果。结论　MAPK10基因在B细胞淋巴瘤中存在高频甲基化,由其所致的基因沉默可能在B细胞淋巴瘤发生发展中起重要作用。MAPK10基因的肿瘤特异性甲基化可作为一个良好的肿瘤分子诊断标志物。     

PCR技术检测IgH基因重排及其在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

收集２４例ＰＧＬ石蜡标本，利用ＰＣＲ技术扩增ＣＤＲ－Ⅲ区，检测其免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排，同时收集结内非霍奇金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）、反应性增生淋巴结组织等标本作为对照。结果显示，８３％（２０／２４）Ｂ细胞性ＰＧＬ获得阳性克隆性条带７５％（２４／３２）结内Ｂ－ＮＨＬ获得阳性条带。研究表明应用ＩｇＨ基因引物进行ＰＣＲ扩增可用于ＮＨＬ的诊断和分型，证明Ｂ细胞性ＰＧＬ与Ｂ－ＮＨＬ的ＩｇＨ基因重排一致     

B细胞性非霍奇金淋巴瘤中BCL-6、CD10和BCL-2的蛋白表达及其临床病理意义

背景与目的：BCL-6、CD10均为淋巴结生发中心B淋巴细胞（GC—B细胞）的标志，它们在结内外弥漫性大B细胞淋巴瘤（DLBCL）及其它类型淋巴瘤中的表达特征及意义值得研究。本研究分析了B细胞性非霍奇金淋巴瘤（B—NHL）中BCL-6、CD10和BCL-2的蛋白表达及其临床病理意义。方法：免疫组化EnVision两步法分析135例B—NHL常见类型[包括DLBCL 22例，滤泡性淋巴瘤（FL）18例，B小淋巴细胞性淋巴瘤（B—SLL）18例，套细胞淋巴瘤（MCL）15例，淋巴浆细胞性淋巴瘤（LPL）7例，Burkitt’s淋巴瘤（BL）5例，B淋巴母细胞性淋巴瘤（LBL）3例；结外DLBCL 29例，胃粘膜相关淋巴样组织结外边缘区B细胞淋巴瘤（MALT-L）18例]和对照组5例T—NHL、5例结节型淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤（NLPHL）以及10例淋巴结反应性增生（RLH）石蜡包埋组织中BCL-6、CD10以及BCL-2蛋白的表达。结果：①BCL-6和CD10阳性表达均只见于RLH（100％和100％）、结内DLBCL（72．7％和40．9％）、结外DLBCL（75．9％和41.4％）、FL（88．9％和72．2％）以及BL（100％和100％），其余B—NHL如B-SLL、MCL、MALT—L、LPL、LBL以及T-NHL和NLPHL中均未见BCL-6和CD10蛋白的表达。BCL-2蛋白表达可见于结内、结外DLBCL、FL、B—SLL、MCL、MALT—L以及LBL，阳性率分别为：36．4％、27．6％、83．3％、88．9％、86．7％、72．7％和33．3％；而LPL、BL、T—NHL以及NLPHL未见BCL-2蛋白表达；②DLBCL中BCL-6的表达形式可以分为四种类型：GC／FL型、中间型、散在型和阴性型；③40．9％的结内DLBCL、41．4％的结外DLBCL、72．2％的FL以及100％的BL为BCL-6＋／CD10＋表达，其中BCL-6蛋白表达均为GC／FL型；④在临床特征上，BCL-6＋／CD10＋的结内DLBCL与非BCL-6＋／CD10＋的结内DLBCL相比，前者的临床分期低于后者（P〈0．05）。结论：BCL-6、CD10和BCL-2蛋白的联合检测，可以用于部分B—NHL的诊断和鉴别诊断；BCL-6＋／CD10＋的结内淋巴瘤可能具有更好的临床预后。     

BCL-6与弥漫性大B细胞淋巴瘤的相关性

弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是非霍奇金淋巴瘤中发病最多的一型，与BCL-6基因高度相关。BCL-6主要分布于生发中心及生发中心起源的淋巴瘤中，在DLBCL中易发生易位、突变、缺失从而导致表达失调，作用于与细胞活化、分化、周期、凋亡相关的基因，使细胞处于快速增殖、幼稚状态。BCL-6对DLBCL预后的意义尚有争议，不同的统计数据得出了不同结论。     

PCR技术检测IgH基因重排及其在原发性胃肠道淋巴瘤诊断中的应用

收集２４例ＰＧＬ石蜡标本，利用ＰＣＲ技术扩增ＣＤＲ－Ⅲ区，检测其免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排，同时收集结内非霍奇金氏淋巴瘤（ＮＨＬ）、反应性增生淋巴结组织等标本作为对照。结果显示，８３％（２０／２４）Ｂ细胞性ＰＧＬ获得阳性克隆性条带７５％（２４／３２）结内Ｂ－ＮＨＬ获得阳性条带。研究表明应用ＩｇＨ基固引物进行ＰＣＲ扩增可用于ＮＨＬ的诊断和分型，证明Ｂ细胞ＰＧＬ与Ｂ－ＮＨＬ的ＩｇＨ基因重排一致。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在淋巴细胞来源肿瘤中检测的临床意义

目的 探讨克隆性免疫球蛋白重链（IgH)和T细胞受体γ（TCRγ) 排在淋巴细胞来源的肿瘤的检测意义。方法 用多聚酶链反应（PCR）方法检测15例急性淋巴细胞性白血病（ALL）、25例非霍奇金淋巴瘤（NHL）、10例多发性骨髓瘤（MM）、4例慢性B细胞性淋巴细胞性白血病（B－CLL）和20例正常人骨髓、周围血和（或）淋巴结中单个核细胞（MNCs)IgH、TCRγ基因重排。结果 IgH和（或）TCRγ基因重排在淋巴细胞来源的恶性肿瘤检出阳性率为92．6％（50／54）,在NHL为84．0％（21／25）,在ALL为100％（15／15）。IgH重排在T－NHL和B－NHL中阳性率分别为20．2％（2／10）和86．7％（13／15）,TCRγ是排在T－NHL和B－NHL中分别为80．0％（8／10）和53．3％（8／15）。22例NHL患者骨髓形态学检查阳性率50．0％（11／22）,基因检测阳性率81．8％（18／22）,两者差异有显著性（P＜0．05）。10例MM和4例B－CLL均检出IgH重排。20例正常人未检测出克隆性IgH、TCRγ基因重排。结论 IhG、TCRγ基因重排检测可用于NHL、ALL、MM和CLL等淋巴细胞来源的肿瘤的诊断和鉴别诊断,并判断NHL的早期骨髓浸润和临床预后。TCRγ、IgH基因重排在T、B淋巴细胞来源的肿瘤之间有交叉性。     

聚合酶链反应检测IgH和TCRγ基因重排在Lennert淋巴瘤诊断中的应用

目的 对免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）及Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）进行基因重排分析，并对其在Ｌｅｎｎｅｒｔ淋巴瘤诊断中的应用初步探讨，方法 新鲜的淋巴结标本用常规方法提取ＤＮＡ，经聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增后进行ＩｇＨ及ＴＣＲγ基因重排分析。对ＩｇＨ基因扩增，选用嵌套式ＰＣＲ法，对ＴＣＲγ基因扩增，采用多对混合引物Ｍｉｘ１，Ｍｉｘ３和Ｍｉｘ２，Ｍｉｘ３分两组间同时进行，结果 经ＰＣＲ基因重排分析表明ＴＣＲ     

非霍奇金淋巴瘤骨髓受累的免疫表型探讨

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）骨髓受累的免疫表型特点方法：应用流式细胞术对NHL患者的骨髓标本进行检测，收集受累者的CD分子表达数据。结果：1）在46例受检者中，31例阳性，阳性率67.39％，（95％可信区间53．84％，80．94％）经骨髓形态学检查确证为骨髓受累。2）31例阳性者中，B细胞NHL23例，T细胞NHL7例．NK细胞NHL1例B细胞NHL标记抗原出现频率最高的为CD19，CD20；T细胞NHL标记抗原出现频率最高的为CD7。6例B细胞淋巴瘤同时表达T细胞抗原，1例B细胞淋巴瘤还表达髓系抗原标志。结论：1）NHL骨髓受累免疫表型特点为B细胞来源：CD19、CD20；T细胞来源：CD7。2）T、B细胞抗原同时表达不少见．3）可同时表达髓系抗原．