利用聚合酶链反应检测122例结核病患者标本中结核菌的研究

对１２２例门诊及住院结核病人的痰、脓汁等标本进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）和直接涂片荧光镜检，培养检查结核菌，结果表示：ＰＣＲ阳性率为５６．９％（５８／１０２），培养阳性率为１４．７％（１５／１０２），直接涂片荧光镜检为２３．５％（２４／１０２）。说明ＰＣＲ特异性好，敏感性强，与临床符合率较高。ＰＣＲ比培养法大大节省时间，为结核病的诊断和鉴别赢得了时间，是一种可以推广的好方法。     

聚合酶链式反应与DNA探针检测临床标本中结核分支杆菌的评价

本文应用ＰＣＲ联合ＤＮＡ探针快速检测临床标本中结核杆菌ＤＮＡ。对临床３０７例标本同时进行ＰＣＲ和Ｓｏｕｅｈｅｒｎ杂交。其中临床确诊为结核病的１０９例，二者的阳性率分别为４９．６％、６０．６％。未确诊结核病的１９８例，二者均为阳性２例、单纯ＰＣＨ阳性３例。结果表明ＤＮＡ探针检测的灵敏性和特异性高于ＰＣＲ。二者联合使用，有助于对疑难电泳图谱的分析和判断，降低假阴性和假阳性率。     

聚合酶链反应检测间日疟原虫的现场应用研究

为探讨聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测间日疟原虫（Ｐ．ｖ．）的现场应用价值。根据Ｐ．ｖ．红内期ＳＳｕｒＲＮＡ基因序列合成１对寡核苷酸引物建立检测Ｐ．ｖ．的ＰＣＲ技术，扩增产物片段为３４１ｂｐ，同时采用ＰＣＲ法和镜检法对７８份临床疑为Ｐ．ｖ．感染患者的血液标本进行检测。用ＰＣＲ法检测阳性者６９份，镜检法检测阳性者５９份，ＰＣＲ检出率（８８．５％）明显高于镜检法检出率（７５．６％），两者符合率为８７．２％。结果表明ＰＣＲ检测Ｐ．ｖ．具有简便、快速、特异性强、敏感性高等优点，可作为Ｐ．ｖ．诊断和流行病学调查的重要手段     

PCR检测动物鼠疫方法的应用研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检查感染鼠疫的动物脏器标本并与细菌分离培养进行比较。在３１份肝组织标本中ＰＣＲ阳性１１份（３５．５％），细菌培养阳性９份（２９．０％）３１份脾组织标本中ＰＣＲ阳性２５份（８０．７％），细菌培养阳性２１份（６７．７％），对照组中以假结核菌感染的小白鼠和未经感染的小白鼠脏器标本ＰＣＲ全部阴性，结果表明，ＰＣＲ法优于传统的细菌分离培养，具有快速，特异性强，敏感性高和不受杂菌污染     

PCR法诊断幽门螺杆菌感染的评价

目的系统评估聚合酶链反应扩增尿素酶Ａ基因（ＰＣＲ法）对幽门螺杆菌（Ｈｐ）感染的诊断价值．方法采用金标准及ＰＣＲ法检测６９例患者（慢性胃炎５２例、消化性溃疡１２例、胃癌５例）胃粘膜内Ｈｐ．结果金标准诊断有Ｈｐ感染３４例，ＰＣＲ法诊断３５例Ｈｐ阳性；金标准诊断３５例无Ｈｐ感染，ＰＣＲ法诊断３４例Ｈｐ阴性．故ＰＣＲ法敏感度为１００％，特异度为９７１％，粗一致性为９８５％，调整一致性为９８６％，误诊率（假阳性率）为２９％，漏诊率（假阴性率）为０，正确诊断指数（ｒ）为１０，阳性预测值（＋ＰＶ）为９７１％，阴性预测值（ＰＶ）为１００％，阳性似然比（ＬＲ＋）为３５，阴性似然比（ＬＲ）为０．结论ＰＣＲ法对胃粘膜Ｈｐ感染的诊断价值高于细菌培养、组织病理学，尿素酶试验各单项方法．     

AmpliSensor-聚合酶链反应技术检测结核分支杆菌及临床应用

目的探讨Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ－聚合酶链反应（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）在结核病诊断中的价值。方法采用ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ对７８４例结核病患者及１６０例肺癌患者的标本进行检测，并与ＰＣＲ（凝胶电泳后，经溴化乙锭染色）、涂片、培养等法比较。结果ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ的敏感性显著高于涂片及培养（Ｐ＜０．０１）。特异性较ＰＣＲ法高。结论ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ可以通过标准曲线划定检出下限，并可换算出标本中原始的靶ＤＮＡ值，同时具有较高的特异性和敏感性，对肺结核尤其是肺外结核的诊断有一定的临床意义。     

套式PCR法检测间日疟原虫的研究

以滤纸采集间日疟原虫患者血样，煮沸法萃取ＤＮＡ模板，用间日疟原虫ＳＳＵｒＤＮＡ特异序列为内外引物，进行双温度点套式ＰＣＲ扩增，其检测原虫率水平为０．８４×１０＾－６，特异性强。检测云南疟区发热患者血样１６６份，检出率为６３．９％，显著高于镜检法的４８．２％。以镜检法为参照，本法的敏感性为９７％，特异性为６１％，阳性预期值和阴性预期值分别为６５％和９７％，表明是检测间日疟原虫感染的一个良好手段，可作     

不同结核杆菌抗原在结核病体免疫诊断中价值的研究

目的 研究不同结核杆菌单体蛋白抗原在结核病体液免疫诊断中的价值。方法以快速免疫色谱法检测结核杆菌５种单体蛋白的抗原性，观察其在结核病诊断中的敏感性和特异性。并与ＰＰＤ皮试及脂阿拉糖甘露聚糖相比较。结果 ＩＣＴＴＢ卡诊断结核病的特异性为８７．６％，ＬＡＭ诊断结核病的特异性６２．９％，ＰＰＤ皮试诊断结核病的特异性为６８．９％，前者与后二者间差异分别有非常显著意义；如果去除抗原４，５，那么诊断结核病的特     

聚合酶链反应试剂对检测痰结核分支杆菌的影响

目的观察聚合酶链反应（ＰＣＲ）的试剂对检测痰结核分支杆菌的敏感性和特异性的影响。方法对结核病组２０５例和非结核病组１０５例的痰标本同时进行三个厂家生产的ＰＣＲ试剂检测、普通细菌培养和抗酸染色法涂片检测。再对ＰＣＲ假阳性的痰普通细菌培养结果进行分析，试找出ＰＣＲ假阳性的其它因素。结果三种不同引物序列和扩增产物片段长度的ＰＣＲ试剂对结核性痰标本的阳性率分别为８２．４％、７１．７％和６１．０％，组间差异有非常显著意义（Ｐ＜０．００５）。结论ＰＣＲ试剂的引物序列和扩增产物长度对检测痰结核分支杆菌的阳性率和假阳性率有很大的影响     

血清抗结核分支杆菌抗体对结核病的诊断价值

目的研究血清抗结核分支杆菌抗体在活动性结核病诊断和病情变化的意义。方法观察血清抗结核分支杆菌抗体在各类结核患者中的敏感性和特异性，与痰涂片及ＰＰＤ皮试的一致性，以及与疾病转归的关系。结果血清抗结核分支杆菌抗体诊断结核病的敏感性为７１．９％，特异性为９１．９％，与痰涂片阳性和ＰＰＤ皮肤试验阳性的一致率分别为８０．２％和６１．６％。抗结核分支杆菌抗体水平与病情变化有一定的相关性。结论血清抗结核分支杆菌抗体可用来诊断活动性结核病及评估结核病的转归。     

rRNA扩增方法对结核分枝杆菌临床诊断作用的评估

目的 评价rRNA扩增方法 在临床应用的效果。 方法 选取到北京胸科医院、山东省胸科医院、河南疾控中心结核病防治所3个机构就诊的肺结核可疑症状者及健康志愿者的痰标本为研究对象,共纳入551例痰标本,对每例痰标本均进行涂片显微镜检查、罗氏培养、rRNA扩增试验以及实时荧光定量PCR。与罗氏培养方法 比较分析rRNA扩增方法 的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值以及与实时荧光定量PCR扩增方法 的一致性。 结果rRNA扩增方法 的敏感性为98.5%,特异性为95.0%,阳性预测值为95.0%,阴性预测值为98.5%,rRNA扩增方法 在涂阳标本和涂阴标本间的敏感度和特异度差异均有统计学意义（χ²=9.60,P=0.002;χ²=79.80,P<0.01）。与PCR检测结果的一致性为93.8%,涂阳和涂阴标本中2种方法 的一致性差异有统计学意义（χ²=4.45,P=0.035）。 结论 rRNA扩增方法 的敏感度和特异度均较好,且能明显缩短诊断时间,该方法 是一种较有前景的结核病实验室诊断方法 。     

结核分枝杆菌IS6110序列在石蜡组织中的检测、克隆与测序

目的：探讨套式-聚合酶链反应（Nested-PCR)检测石蜡组织中结核分枝杆菌的特异性和敏感性。方法：采用套式-PCR检测石蜡包埋组织中结核菌复合体特异插入序列IS6110，并对部分标本的PCR产物进行克隆和测序。结果：31例结核标本石蜡组织检出结核菌DNA共28例，套式-PCR的敏感度为90.3%,特异度为100%。阳性预测值为100%。随机选取两例PCR产物没是序结果与结核菌标准株H37Rv同源性分别为97%和95.3%。结论：套式-PCR检测常规石蜡包埋组织中结核菌IS6110序列具有特异性强和敏感性高的特点，可应用于临床诊断，尤其是对那些常规苏木精-伊红染色和抗酸染色无法确诊的病例更具意义。     

Quality of sputum in the performance of polymerase chain reaction for diagnosis of pulmonary tuberculosis

Settingfaster alternative techniques are required to improve the diagnosis and control of pulmonary tuberculosis.ObjectiveTo evaluate the sample quality in the performance of PCR for diagnosis of pulmonary tuberculosis.MethodDuring one year, sputum samples were collected from 72 pulmonary tuberculosis patients and 12 non-tuberculosis controls, which were admitted to the Nereu Ramos hospital, Florianópolis city, Brazil. The samples were subjected to Ziehl-Neelsen-stained sputum smear microscopy and Lowestein-Jensen medium culture, which were defined as gold standard tests for mycobacteria, and polymerase chain reaction (PCR). Those samples that presented more than 40% of viable cells and less than 25% of epithelial cells were defined as high quality samples.ResultsPCR showed sensitivity of 55.6%, specificity of 41.7%, positive predictive value of 85.1%, negative predictive value of 13.5%, and accuracy of 53.6%. High quality samples showed sensitivity of 72.4%, specificity of 50%, positive predictive value of 91.3%, negative predictive value of 20%, and accuracy of 69.7%. Low quality samples showed sensitivity of 44.2%, specificity of 37.5%, positive predictive value of 79.2%, negative predictive value of 11.1%, and accuracy of 43.1%.Conclusionuse of high quality samples improved significantly the PCR performance, especially on their sensitivity and positive predictive values.     

不同结核分支杆菌抗原对结核病的诊断价值

目的　研究不同结核分支杆菌单体蛋白抗原在结核病体液免疫诊断中的价值。方法以快速免疫色谱法（ＩＣＴＴＢ卡） 检测结核分支杆菌５ 种单体蛋白的抗原性，观察其在结核病诊断中的敏感性和特异性，并与ＰＰＤ 皮试及脂阿拉伯糖甘露糖（ＬＡＭ） 相比较。结果　ＩＣＴＴＢ 卡、ＬＡＭ 及ＰＰＤ皮试诊断结核病的敏感性分别为５５．９％ 、５２．６％ 、７５．０％ ，后者与前二者间差异均有显著意义（ Ｐ＜０ ．０５）；ＩＣＴＴＢ卡、ＬＡＭ、ＰＰＤ皮试诊断肺结核的特异性为８７ ．６％ 、６２．９％ 、６８．９％ ，前者与后二者间差异均有非常显著意义（ Ｐ＜ ０．０１）；ＩＣＴＴＢ卡诊断肺结核病的临床阳性预计值为８８ ．５％ ，临床阴性预计值为５３ ．８ ％ ；非结核病例中的ＩＣＴＴＢ阳性主要由抗原４、５ 阳性所致，如果去除抗原４ 、５，那么ＩＣＴＴＢ诊断结核病的特异性将提高到９８．９％ 。结论　血清结核分支杆菌单体蛋白抗原性的测定是肺结核病一项有用的辅助诊断手段。     

γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用评价

目的探寻γ-干扰素体外释放试验在结核诊断中的应用价值方法 34例菌阳肺结核患者,238例菌阴肺核患者,33例非结核患者,30例健康体检者,分别进行血清结核杆菌抗体检测、结核菌素试验(TST)以及结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放酶联免疫试验(TB-IGRA),对其检测结果进行统计分析。结果TB-IGRA、血清结核杆菌抗体试验以及TST的诊断敏感性分别为87.13%、76.10%和64.71%;诊断特异性分别为90.48%、66.67%和71.43%;阳性预测值分别为97.53%、90.79%和90.72%;阴性预测值分别为61.96%、39.25%和31.91%;诊断效率分别为87.77%、74.33%和65.97%。TB-IGRA的诊断敏感性和诊断特异性均显著高于血清结核杆菌抗体试验以及TST(P0.01)。结论 TB-IGRA对结核的诊断具有较高敏感性和特异性,对于菌阴肺结核的辅助诊断和疑似结核感染患者的排除优于其它两种方法。     

线性探针技术诊断耐多药肺结核的临床应用评价

目的评价线性探针杂交技术(简称HAIN技术)快速检测耐多药肺结核的临床效果。方法对122例涂阳肺结核患者痰标本同时进行HAIN技术和罗氏培养及药敏试验,检测异烟肼、利福平的耐药情况,并对结果进行比较。结果 HAIN技术对肺结核患者耐多药的检测效果和传统罗氏培养法相比无显著差异(P0.05)。HAIN技术检测异烟肼和利福平的灵敏度分别为73.08%、82.76%,阳性预测值分别为79.17%、80.00%;检测耐多药的灵敏度为57.89%,阳性预测值为64.71%;所有检测结果的特异度和阴性预测值均90%。结论 HAIN技术是快速诊断耐多药肺结核的好方法,但检测效果存在一定的局限性。     

巢式实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA的临床应用

目的探讨巢式实时荧光定量PCR（QNRT-PCR）检测结核分枝杆菌（MTB）DNA的临床价值。方法应用SYBR Green I建立检测结核分枝杆菌MTP64基因的QNRT—PCR方法,分别检测24份肺结核患者痰液,27份结核性胸膜炎患者胸水,以及对照组75份痰液和胸水的MTBDNA含量。结果以培养为金标准,QNRT—PCR敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）分别为95．83％、61．54％、69．70％和94．12％,结核性胸膜炎的阳性率为70．37％。三种PCR方法阳性率比较,差异具有统计学意义（P〈0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR拷贝数配对检验差异没有统计学意义（P〉0．05）,QNRT—PCR与实时荧光定量PCR的Cr值配对检验差异具有统计学意义（P〈0．01）。结论QNRT—PCR方法可检测痰液和胸水MTB DNA,对含微量MTB DNA样本的高敏感性在结核病的早期诊断中有重要参考价值。     

荧光双标记定量结核杆菌在肺结核诊断中的应用价值

目的　对痰荧光双标记定量结核杆菌检测法用于肺结核诊断的价值进行评估。方法　 135例肺结核患者和 6 0例非肺结核患者的痰液用荧光染色涂片、改良罗氏培养和荧光双标记定量结核杆菌法检测 ,同时测定血结核抗体。结果　菌阳、菌阴肺结核组荧光双标记法的敏感性分别为 83% ,5 3% ,特异性为 10 0 % ;血结核抗体的敏感性分别为 6 3% ,5 3% ,特异性为 95 %。结论　荧光双标记法诊断肺结核的特异性高 ,适合于临床应用 ,而敏感性有待进一步提高。     

血T-SPOT.TB联合肺泡灌洗液TbDNA检测对诊断肺结核的应用价值

目的分析血T-SPOT.TB联合肺泡灌洗液(BALF)Tb DNA检测对肺结核诊断的价值。方法选择2013.3~11月86例疑似肺结核患者,经确诊后分为肺结核组46例、肺炎组40例,均行T-SPOT.TB、BALF-Tb DNA、BALF涂片、痰涂片、PPD、结核抗体检测,对各检测结果进行对比,并行T-SPOT.TB与BALFTb DNA联合检测与单用检测、涂片法、PPD、结核抗体对比分析。结果血T-SPOT.TB、BALF-Tb DNA敏感性分别为84.8%、80.4%,特异性分别为80.0%、77.5%,两者联合检测敏感性为100.0%,阳性预测值为97.1%,阴性预测值为100.0%,与单用检测对比,差异有统计学意义(P0.05),与涂片法、PPD、结核抗体对比,存在显著差异(P0.01)。结论血T-SPOT.TB与BALF-Tb DNA联合检测提高了肺结核的诊断阳性率,弥补对方不足,减少肺结核的漏诊、误诊,是一个有前途的检测方法。     

Diagnostic value of gastric aspirate smear and polymerase chain reaction in smear-negative pulmonary tuberculosis

OBJECTIVE: The aim of this study was to determine the validity of acid-fast bacilli (AFB) smear and polymerase chain reaction (PCR) from gastric aspirates for the diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis. METHODOLOGY: A cross-sectional study was conducted in a university hospital. One hundred and nine patients with suspected pulmonary tuberculosis in whom either sputum smears were negative or who were not producing sputum were recruited to the study. All patients underwent gastric aspiration after an overnight fast followed by standard fibreoptic bronchoscopy. Specimens were subjected to AFB smear, culture, and pathological examination. PCR was performed on culture filtrate after 1 week of incubation. RESULTS: Eight patients did not complete the follow-up schedule. Of the 101 patients with final outcomes, a diagnosis of pulmonary tuberculosis from microbiological evidence was established in 54 patients. The gastric aspirate smear, PCR, or either one of them was positive in 34, 30, and 39 tuberculosis patients, respectively. There were 13 false positive smears from 47 non-tuberculosis patients, with five resulting from non-tuberculous mycobacteria (NTM). The PCR was falsely positive in eight patients, five of whom had previous histories of tuberculosis. The overall sensitivity, specificity, positive predictive value, and negative predictive value of gastric aspirate examination by combined smear and PCR were 72, 58, 66, and 64%, respectively. CONCLUSIONS: Gastric aspiration is a useful tool for the diagnosis of smear-negative pulmonary tuberculosis warranting institution of antituberculosis treatment. Interpretation of the results should be cautious in those who have had tuberculosis in the past or who have been at risk for acquisition of NTM.