纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜对细胞毒性评价

目的用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测羟基磷灰石（HA）对人脐带内皮细胞可能存在的细胞毒性。方法用MTT比色方法评价材料的细胞毒性。设常温漫提液组和高温浸提液组。两组均设置各自对应的阳性和阴性对照组。将加入浸提液和材料并培养72h后的各组样品分别在倒置相差显微镜下观察细胞在浸提液中及在材料边缘的形态变化及生长状况,以细胞毒性实验来评价生物材料生物相容性。参照国际标准化组织（ISO）制定的细胞毒性实验的标准,即ISO10993—5：1992（医疗器械生物学评价细胞毒性实验体外法》之评价标准和要求。结果材料浸提液与细胞共培养组24h时观察常温浸提液、高温浸提液及阴性对照组的HUVEC细胞形态、数量,各实验组与阴性对照组差异无统计学意义。结论HA材料对人脐带内皮细胞生长抑制反应级别为1级或0级,无明显毒性作用,有良好的细胞相容性。     

染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞毒性研究

目的:评价染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的细胞毒性.方法:(1)间接接触毒性试验:制备染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道浸提液,培养L929细胞,然后采用MTT比色法测定相对增殖率.(2)直接接触毒性试验:将L929细胞与染料介导光氧化处理去细胞牛颈静脉带瓣管道直接接触培养,在不同时间观察细胞...     

奥硝唑缓释膜用于鼠类动物的生物安全性评价

目的 探讨奥硝唑-羧甲基壳聚糖缓释膜（药膜）对鼠类动物的生物安全性。方法①10只小鼠随机分为实验组和对照组,分别于尾静脉注射药膜浸提液和生理盐水进行全身急性毒性反应;②以V79系小鼠成纤维细胞为实验细胞,以RPMI1640培养液为阴性对照组,0．64％苯酚溶液为阳性对照组,采用MMT法进行细胞毒性实验;③40只豚鼠试验前24h背部脱毛,分别用药膜浸提液、基质浸提液、生理盐水、2,4-二硝基氯苯涂擦脱毛区,计算四种溶液的致敏率;④10只大鼠于脊柱两侧肌肉内埋植药膜,第1、2、4、6周切取标本计算降解百分率。结果该药膜无细胞毒性,无全身急性毒性及皮肤过敏性,药膜第2周已降解,至第6周几乎完全降解。结论药膜具有良好的生物安全性和降解性,可望用于临床。     

染料介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的细胞毒性研究

目的 评价染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣膜的细胞毒性。方法 将L929细胞经亚甲基蓝介导光氧化处理去细胞猪主动脉瓣浸提液培养后,用MTT比色法测定其相对增殖率。将L929细胞与染料介导光氧化处理去细胞猪主动脉瓣直接接触培养,于不同时间观察细胞的生长状态。将L929细胞种植于染料介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣表面,用扫描电镜观察其生长情况。结果 染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的性质稳定,细胞毒性程度为0～Ⅰ级。L929细胞与瓣膜材料直接接触培养生长良好,形态学无明显改变。结论 染料亚甲基蓝介导的光氧化处理去细胞猪主动脉瓣的细胞相容性良好。     

新型有序纳米介孔生物玻璃材料对体外培养成骨细胞的影响

目的探讨新型有序纳米介孔生物活性玻璃材料（mesoporous bioactive glass,MBG）对体外培养成骨细胞（osteoblast,OB）粘附、增殖、分化及矿化的影响。方法用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞,进行原代培养;成骨细胞与不同浓度的MBG浸提液作用后,MTT法测定细胞增殖;PNPP法检测碱性磷酸酶活性;矿化结节计数和面积测量分析MBG对成骨细胞矿化能力的影响。同时扫描电镜对直接在MBG材料上培养的OB进行细胞形态学和粘附情况分析。结果0.5%以下各浓度组MBG浸提液均对成骨细胞增殖无影响,而1%浓度组对细胞增殖有轻度抑制,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.01）;各浓度MBG浸提液均可以增强碱性磷酸酶活性,与对照组相比,其中0.0625、0.125、0.25%浓度明显提高ALP活性,差异有统计学意义（P〈0.01）;0.0625%浓度时,矿化结节数目差异无统计学意义（P〉0.05）,而矿化结节面积差异有统计学意义（P〈0.01）;扫描电镜下细胞形态分化良好,细胞相互之间及细胞与材料之间结合良好。结论不同浓度MBG浸提液对成骨细胞的增殖和分化有不同的作用,低浓度对成骨细胞的增殖和分化有更好的作用。MBG材料有良好的生物相容性,有望成为新型骨组织修复替代材料或骨组织工程支架材料。     

华通胶修饰的聚己内酯静电纺丝人工血管支架的构建及性能分析

目的 构建华通胶(WJ)修饰的聚己内酯(PCL)静电纺丝人工血管支架,并分析其性能。方法 采用胰蛋白酶法对WJ组织进行脱细胞处理,通过组织学染色和生化成分定量分析WJ组织的脱细胞效率,以及脱细胞前后WJ组织生化成分的差异。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测脱细胞前后WJ组织生物活性因子的水平差异。将经过处理的WJ与PCL混合制备纺丝液,并采用静电纺丝技术制备管状的WJ/PCL静电纺丝人工血管支架,分析其纳米纤维结构、纤维直径分布、生物力学性能及血液相容性。结果 通过胰蛋白酶法脱细胞处理可有效去除WJ基质的细胞核成分,保留了WJ基质的大部分生化成分[包括糖胺聚糖(GAG)、蛋白质、纤维、透明质酸和羟脯氨酸]以及生物活性因子[包括血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源性生长因子(PDGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)]。经静电纺丝技术制备的WJ/PCL静电纺丝人工血管支架呈现典型的纳米纤维结构,且经傅立叶红外光谱(FTIR)验证,其同时含有WJ和PCL的特征峰。WJ/PCL静电纺丝人工血管支架表现出良好的生物力学特性和血液相容性,可有效抑...     

晚期内皮祖细胞在纳米聚-L-乳酸支架膜表面的粘附和增殖

目的通过比较晚期内皮祖细胞在纳米无序及有序聚-L-乳酸支架膜表面粘附、增殖情况,为优化组织工程材料提供一种新途径。方法通过静电纺丝技术制备纳米聚-L-乳酸纤维支架,行低温等离子体技术改性及I型胶原表面涂覆,与晚期内皮祖细胞复合培养,并进行细胞双荧光染色鉴定,通过不同时间点两组材料晚期内皮祖细胞粘附和增殖率的测定比较及光镜、荧光显微镜和扫描电镜观察支架材料对种子细胞形态特征等方面的影响。结果制得的纳米聚-L-乳酸纤维孔径在300～400nm之间,孔隙率>90%;细胞粘附12h基本完成;各时间点有序膜组增殖率明显高于无序膜组(P<0.05)。细胞在支架膜上生长良好,无序膜组细胞生长较散在、杂乱;有良好空间定向效果的有序纤维支架有利于细胞沿纤维定向附着、伸展、增殖,分泌胞外基质。结论晚期内皮祖细胞是理想的组织工程种子细胞来源;纳米聚-L-乳酸有序膜支架能促进种子细胞在材料表面的粘附、增殖,并能较好地保持细胞形态,是一种理想的血管组织工程支架材料。     

生物可降解镁合金的全身毒性试验

目的评价生物可降解镁合金在动物体内的急、慢性全身毒性,为生物可降解镁合金支架的切割及临床安全应用提供科学依据。方法参照国际标准化组织(ISO)对医用植入材料的评价标准,将大鼠分为对照组及试验组。试验组和对照组分别经大鼠尾静脉注射制备好的生物可降解镁合金浸提液和生理盐水,观察两组急性全身毒性反应。试验组背部皮下及心肌内植入生物可降解镁合金,对照组不植入任何材料,对两组进行血液常规、血生化指标、脏器系数及病理组织学检查,观察两组慢性全身毒性反应。结果生物可降解镁合金在动物体内无急性毒性反应,在动物体内长期植入不引起明显的血液常规、血生化指标及各器官系统结构的改变。结论生物可降解镁合金无明显生物毒性,在动物体内未见急性及慢性全身毒性反应。     

纳米纤维仿生支架可诱导iPSC向心肌细胞分化

目的 利用诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cell,iPSC）与纳米纤维仿生支架构建人工心肌,探讨纳米纤维支架用于诱导多能干细胞心肌特异性分化的可行性及潜在作用,为构建组织工程心肌提供参考。方法 采用静电纺丝技术制作聚己内酯/明胶复合纳米纤维仿生支架,接种鼠源Oct4-GFP+ iPSCs培养分化15 d。鼠源Oct4-GFP+ iPSCs同样接种于组织培养皿,培养分化15 d作为对照组。免疫荧光染色检测心肌细胞特异性标志物,流式细胞计数统计心肌细胞分化效率。结果 Oct4-GFP+ iPSCs能够在聚己内酯/明胶复合纳米纤维仿生支架上正常增殖、分化;培养15 d后,Oct4-GFP+ iPSCs在支架上分化出心肌细胞特异性标志物cTnT/MLC2a双染阳性的心肌细胞;而且支架组心肌细胞分化效率显著高于对照组（P<0.05）。结论 聚己内酯/明胶纳米纤维仿生支架支持iPSCs增殖,且能够促进其向心肌细胞分化,适用于组织工程心肌构建。     

新型组织工程化心脏瓣膜材料的体外生物学性能评价

目的:评价枝化状聚乙二醇(PEG)交联去细胞猪主动脉瓣的生物相容性。方法:依据GB/T16886.6-1997标准,利用直接接触法和浸提液接触法(间接接触)检测所制备的组织工程化心脏瓣膜材料的致凝血性能、致溶血性能,采用AlamarBlue?细胞活力检测法和Annexin V凋亡检测法评价材料的细胞毒性,并应用形态学方法检测瓣膜表面细胞粘附增殖情况,以新鲜天然瓣膜和去细胞瓣膜作为对照。结果:新型材料不会明显刺激血小板引起其粘附、激活(与天然瓣膜对比,P0.5)。材料接触对凝血功能(INR,APTT)无显著影响。材料直接或间接溶血率均符合生物材料国家标准。AlamarBlue?法检测显示,与材料直接或间接接触对细胞增殖无显著影响,间接接触不增加细胞凋亡概率(P0.1)。细胞接种于材料表面后增殖迅速,形态正常,扫描电镜示细胞连接致密,呈单层排列覆盖材料。结论:枝化状PEG交联去细胞猪主动脉瓣的离体生物相容性达到GB/T16886.6-1997标准,是一种有潜力的组织工程化心脏瓣膜替代材料。     

State of knowledge of helminth fauna of freshwater fishes of Poland

A total 89 fish and lamprey species has been recorded from Polish freshwater habitats. Twenty-seven of them (30.3%) have not been surveyed for parasitic helminthes. Some of the latter fishes are either rare or not easily accessible. Other live only in specific habitats in scattered localities. An important obstacle for studying parasite faunas of some fishes may be their status on an endangered species. Among the non-surveyed fishes, are those which have been relatively recently introduced to Poland or migrated there on their own. The present paper attempts to review all hitherto not studied helminthologically fish species, their habitats, localities and current protection status.     

高血压降压治疗目标的再认识

根据传统的高血压水平的定义,1993年WHO高血压治疗指南提出血压控制目标为<140/90mm Hg(1mm Hg=0.133kPa),但是并非所有患者都必须将血压降至同一水平,而应根据患者情况进行个体化治疗。Framingham进行的一项长达10～12年的心血管事件研究发现,第5年后,正常上限血压[收缩压(SBP