成年起病脊肌萎缩症SMN基因外显子7缺失的初探

目的 探讨成年起病的脊肌萎缩症（SMA）患者的运动神经元存活基因SMN的缺失情况。方法 用聚合酶链反应－酶切技术对15例SMA病人及33例正常对照的外显子7进行检测，明显有无缺失。结果 3例SMA的SMN的基因外显子7纯合缺失，其余12例和对照组均阴性。结论 SMN基因外显子7缺失可作为成年起病SMA的辅助诊断，以提示SMA遗传的异质性。     

成人型脊髓性肌萎缩症的基因研究

目的：研究我国成人型脊髓性肌萎缩症（SMA）患者的运动神经元生存基因（SMN）及神经细胞凋亡抑制蛋白（NAIP）基因外显子的缺失情况。以探讨此二种基因与成人型SMA之间的关系。方法：应用PCR法检测30例成人型SMA患者，30例表型正常的SMA直系亲属及30例正常对照的SMN基因第7，8号外显子和NAIP基因第5，6号外显子缺失情况。结果：成人型(Ⅳ型）SMA未检测到SMN基因第7，8号外显子及NAIP基因外显子5和（或）6的缺失。结论：成人型SMA未检测到SMN基因缺失，其发病可能与SMN基因缺失无关；NAIP基因在SMA发病中的作用尚不清楚，有待进一步研究。     

脊髓性肌萎缩运动神经元存活基因和神经元凋亡抑制蛋白基因缺失的研究

目的 :研究国人脊髓性肌萎缩 (SMA )基因缺失特点。方法 :应用 PCR扩增及限制性内切酶技术对 15例儿童型 SMA ( 型 7例 , 型 4例 , 型 4例 )和 2例成人型 SMA进行运动神经元存活基因 (SMN)第 7外显子和神经元凋亡抑制蛋白基因 (NAIP)第 5外显子缺失分析 ,并对 1例有阳性家族史的家系进行了羊水胎儿产前诊断。结果 :14例儿童型 SMA携有 SMN基因第 7外显子缺失 ,占 93% ;2例 型 SMA携有 NAIP基因第 5外显子缺失 ,占 2 8.6 %。 2例成人型 SMA未显示 SMN或 NAIP基因缺失。结论 :儿童型 SMA的 SMN基因缺失频率高 ,可应用于临床 ,提高 SMA诊断率 ,适于产前诊断及鉴别诊断。 NAIP基因缺失可能与 SMA的严重程度有关。成人型SMA与儿童型 SMA为非等位基因突变。     

SMN基因诊断小儿脊髓性肌萎缩症

目的了解儿童期发作的进行性脊髓性肌萎缩(SMA)患者的运动神经元存活基因(SMN)的缺失,探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法用于SMA疾病的诊断价值。方法应用PCR-RFLP方法对3例SMA可疑患儿及其父母5例的SMN1基因外显子7和8进行了检测,并对其进行基因测序。结果3例SMA可疑患儿中3例均有SMN1基因缺失,为外显子7和8联合缺失。其父母均无SMN1基因缺失。基因测序支持诊断。结论用PCR-RFLP法对高度可疑儿童型SMA的病例进行诊断,具有较高敏感性和特异性,简便易行。     

儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断

目的：建立儿童型脊髓性肌萎缩症（SMA）的特异性基因诊断。方法：应用聚合酶链反应－限制性片段长度多态性（PCR－RFLP）技术,对11例临床诊断为SMA的患儿及21例正常儿童的运动神经元存活（SMN）基因进行了检测。结果：11例SMA患儿的SMN基因外显子7均有缺失。21例正常对照儿童均无SMN基因外显子7缺失。结论：应用PCR－RFLP技术对儿童型SMA患儿进行基因诊断,具有高度敏感性和特异性,简便易行。     

中国西南地区汉族脊肌萎缩症患者SMA相关基因分子特征

目的 以中国西南地区汉族人群为研究对象,构建脊肌萎缩症（SMA）相关基因拷贝数变化频率,为SMA的临床诊断和分型提供依据。方法 收集62例临床诊断为SMA的无亲缘关系患者,以及50例无亲缘关系的正常人作为健康对照组,采用多重连接酶依赖的探针扩增技术（MLPA）分析运动神经元基因（SMN）和神经原凋亡抑制蛋白基因（NAIP）的拷贝数。 结果 62例患者中,SMAⅠ～Ⅳ型分别占30.65%（19/62）、41.94%（26/62）、16.13%（10/62）、11.29%（7/62）。SMN1基因外显子7纯合缺失占98.38%（61/62）,SMN1基因外显子8纯合缺失占82.26%（51/62）。SMAⅠ型患者中NAIP基因外显子5有68.42%（13/19)纯合缺失,26.32%（5/19）杂合缺失;SMAⅡ～Ⅳ型患者中NAIP基因外显子5有13.95%（6/43）纯合缺失,62.79%（27/43）杂合缺失。SMAⅠ型患者中68.42%（13/19）有1～2拷贝的SMN2基因,SMAⅡ型中84.62%（22/26)有2拷贝以上的SMN2基因,90.00%（9/10)SMAⅢ型和85.71%（6/7)SMAⅣ型患者有2拷贝以上的SMN2基因,且发现有5拷贝和6拷贝SMN2基因。结论 SMN1基因缺失是SMA的主要致病原因,SMN2和NAIP基因拷贝数变化可以影响SMA病情严重程度。     

儿童型脊髓性肌萎缩症的基因诊断(附10例报告)

目的:建立儿童型脊髓性肌萎缩症(SMA)的特异性基因诊断平台。方法:应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)技术,对10例临床诊断为SMA的患儿及15例正常个体的运动神经元存活(SMN)基因第7、第8号外显子进行检测。结果:10例SMA患儿的SMN基因第7、第8外显子全部缺失,而15例正常个体均无SMN基因第7、第8外显子的缺失。结论:应用PCR-RFLP技术对儿童型脊髓性肌萎缩症患儿进行基因诊断具有高度的敏感性和特异性,可作为SMA的诊断方法。     

茂名地区育龄妇女脊髓性肌萎缩症SMN1突变携带者筛查与分析

目的 对茂名地区育龄妇女进行脊髓性肌萎缩症(SMA)运动神经元存活基因1(SMN1)突变携带者筛查,掌握SMA流行病学数据,为SMA家系进行遗传咨询、基因筛查和产前诊断提供依据。方法 收集2020年5月-2021年8月在茂名市妇幼保健院进行孕检的1 898名妇女临床资料和肘静脉外周血样本。采用MGB探针实时多重荧光定量PCR法,分别对SMN1第7外显子和第8外显子的拷贝数进行相对定量检测,并分析目的基因的缺失情况及携带频率,为男女双方均为阳性携带者的夫妇进行产前诊断。结果 在1 898名育龄妇女中,共检测出脊髓性肌萎缩症SMN1突变携带者49例,携带率为2.58%;其中SMN1-7杂合缺失/SMN1-8杂合缺失最多33例(1.74%),其次为SMN1-7未见缺失/SMN1-8杂合缺失12例(0.63%)和SMN1-7杂合缺失/SMN1-8未见缺失4例(0.21%)。2对双方均为阳性携带者夫妻的3例胎儿羊水标本中2例为SMN1-7杂合缺失/SMN1-8杂合缺失和SMN1-7杂合缺失/SMN1-8未见缺失,建议继续妊娠;1例为SMN1-7纯合缺失/SMN1-8纯合缺失,建议对胎儿进行终止妊...     

应用聚合酶链式反应-酶切法进行脊髓性肌萎缩的基因诊断及产前诊断

目的：建立一种高效,快速的脊髓性肌萎缩（SMA）的基因诊断与产前诊断的方法。方法：基于运动神经元生存基因（SMN）基因的两个同源拷贝碱基上的差异,采用聚合酶链反应（PCR）－酶切的方法,选择特异的酶切位点对11例SMA患儿进行SMN基因检测。同时采用SMN基因内部及旁侧的C161,C171,C212,C272等4对（CA)n对4个家系进行连锁分析。结果：11例SMA患儿中10例患儿缺失SMNt7,8号外显子,1例患儿仅缺失7号外显子。4个SMA家系中有3个胎儿未发现与先证者完全相同的SMN基因片段,1个胎儿检测到与先证者完全相同的SMN基因片段。结论：该方法快速,简便,适合临床推广。     

羊水细胞培养进行脊肌萎缩症的产前诊断

目的 应用错配聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）方法进行脊肌萎缩症（spinal muscular atrophy,SMA)的产前诊断。方法 基于运动神经元生存基因（SMN）的两个同源拷贝碱基的差异，通过羊水细胞培养，应用错配PCR-RFLP法对2例有SMA阳性家族史的胎儿进行产前基因诊断。结果 2例均无SMN基因外显子缺失。结论 SMN基因缺失检测技术是高效、快速的SMA产前诊断的方法。     

Diagnosis of Progressive Spinal Muscular Atrophy by Using Polymerase Chain Reaction

Ｃｈｉｌｄｈｏｏｄ ｏｎｓｅｔｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｔｈｙ(Ｓ ＭＡ)ｉｓａｃｏｍｍｏｎａｕｔｏｓｏｍａｌｒｅｃｅｓｓｉｖｅｄｉｓ ｏｒｄｅｒａｆｆｅｃｔｉｎｇ 1ｉｎ 60 0 0ｌｉｖｅｂｉｒｔｈｓａｎｄｉｓｄｉｆ ｆｉｃｕｌｔｔｏｄｉａｇｎｏｓｅ .Ｔｈｅｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｄｅｆｅｃｔｒｅｍａｉｎｓｕｎｋｎｏｗｎ .Ｉｔｄｅｐｅｎｄｓｏｎｃｌｉｎｉ ｃａｌｈｉｓｔｏｒｙ ,ｓｙｍｐｔｏｍｓ ,ｓｉｇｎｓ ,ＥＭＧａｎｄｍｕｓ ｃｌｅｂｉｏｐｓｙｔｏｍａｋｅａｄｉａｇｎｏｓｉｓ.Ｔ…     

Compound heterozygous mutation in two unrelated cases of Chinese spinal muscular atrophy patients

Background Infantile proximal spinal muscular atrophy (SMA) is a common autosomal recessive neuromuscular disorder. Approximately 90%–95% cases of SMA result from homozygous deletion of survival motor neuron gene 1 (SMN1) and 5% cases are caused by compound heterozygous mutation (a SMN1 deletion on one allele and a subtle mutation on the other allele).

Methods In this research, two unrelated patients were clinically diagnosed according to the criteria of proximal SMA. Genetic diagnosis was performed to detect the homozygous deletion of exon 7 of SMN1 by PCR-restriction fragment length polymorphism (RFLP) and genomic sequencing. Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) analysis was carried out to measure copy numbers of SMN1, SMN2 and neuronal apoptosis inhibitor protein (NAIP) in the patients. Further sequencing of SMN1 allele-specific PCR (AS-PCR) and SMN1 clones were also performed to analyze the point mutation of SMN1 gene. Additionally, the pedigree analysis of these two families was carried out to identify the transmission of the mutation.

Results The inconsistent results using PCR-RFLP and genomic sequencing showed homozygous deletion of exon 7 of SMN1 and heterozygous deletion accompanied with a suspicious mutation in SMN1 gene, respectively. MLPA analysis of these two cases exhibited one SMN1 copy deletion. One identical c.863G>T (p.Arg288Met) mutation was found in two cases by sequencing the SMN1 clones, which confirmed that both cases were SMA compound heterozygotes. One case showed partial conversion to form hybrid SMN (SMN2 I7/SMN1 E8) identified by clones sequencing and another case carrying 3 SMN2 implied complete conversion from SMN1 to SMN2.

Conclusion p.Arg288Met is more a disease-causing mutation than a polymorphism variation, and children with this mutation may have more severe phenotypes.

     

Analysis of the survival motor neuron and neuronal apoptosis inhibitory protein genes in Malay patients with Spinal Muscular Atrophy

In Malaysia, Spinal Muscular Atrophy (SMA) is diagnosed based on clinical observation with or without muscle biopsy. Molecular analyses of the SMA-related genes have not been available so far. In this preliminary study, we searched for homozygous deletion of Survival Motor Neuron (SMN1) and Neuronal Apoptosis Inhibitory Protein (NAIP) genes in Malay patients with SMA and found homozygous deletion of SMN1 exon 7 and 8 in all the patients while homozygous deletion of NAIP exon 5 was detected in only our type 1 patients but not in the type 3 patient. To the best of our knowledge, these are the first SMA cases diagnosed at the molecular level in Malaysia.     

Prenatal diagnosis of Werdnig-Hoffmann disease in China

Objective To establish a means for prenatal prediction of spinal muscular atrophy (SMA) through survival motor neuron (SMN) gene deletion analysis and genetic counseling in families with a child affected with SMA.Methods Genetic analysis for prenatal prediction of Werdnig-Hoffmann disease was performed in a at risk Chinese family by polymerase chain reaction (PCR)-single-strand conformation polymorphism(SSCP) in SMN gene exons 7 and 8.Results The pregnancy was positive for the homozygous deletion of the SMN gene, thus the fetus was diagnosed as being affected and the pregnancy was terminated.Conclusion This approach is fast and reliable for DNA-based prenatal diagnosis of WerdnigHoffmann disease.     

运用DHPLC技术分析非纯合缺失型脊髓性肌萎缩症患儿的SMN基因拷贝数

目的 建立一种准确、快捷的方法,定量检测运动神经元存活基因(SMN)的拷贝数,以便分析非纯合缺失型脊髓性肌萎缩症(SMA)患儿中SMNl基因的杂合性缺失.方法 应用等位基因特异PCR(AS-PCR)分别进行SMN1与SMN2基因的特异扩增,用另外2个无关基因作内对照,进行变性高效液相色谱法(DHPLC)分析,确定基因拷贝数.结果 (1)改进的双重AS-PCR与DHPLC相结合的技术,能够有效分离SMN1和SMN2基因,通过与对照基因的对比,可准确地判断SMN基因的拷贝数,SMN1和SMN2基因1～4拷贝之间不存在重叠.(2)38例非纯合缺失SMA患儿中,20例的SMN1基因为1个拷贝(52.6%),判断为SMN1基因的杂合性缺失,其中15例(75.0%,15/20)的SMN2基因为2个拷贝,5例(25.0%,5/20)SMN2基因为3个拷贝.(3)30名SMN1基因纯合缺失型突变患者的双亲中,有24名(80.0%)的SMNl基因为1个拷贝.结论 本研究所建立的方法能够准确、快捷地检测SMN基因的拷贝数.