miR-206 通过靶向 CDK14抑制雌激素诱导的ER-α36阳性胃癌 BGC-823 细胞的增殖和侵袭

目的：探讨miR-206对雌激素诱导的ER-α36阳性胃癌（gastric cancer, GC）细胞BGC-823增殖和侵袭的影响及其相关 机制。方法: 用不同浓度（1、10和100 pmol/L）的雌二醇（estradiol,E2）刺激ER-α36阳性BGC-823细胞后,用qPCR法检测miR-206 表达水平,MTT法和Transwell实验分别检测细胞的增殖和侵袭能力,WB法检测细胞中CDK14的表达。将miR-206 mimic、 miR-NC、pcDNA-CDK14、pcDNA-vector 等转染 ER- α36 阳性 BGC-823 细胞 ,并给予 100 pmol/L 的 E2 处理后 ,用 MTT 法和 Transwell小室法分别检测细胞的增殖和侵袭能力,WB法检测细胞中CDK14的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证miR-206 与CDK14之间的靶向关系。结果: E2能显著降低ER-α36阳性BGC-823细胞中miR-206表达水平（P<0.05或P<0.01）、增强细胞 的增殖和侵袭能力（P<0.05或P<0.01）、上调细胞中CDK14的表达水平（P<0.01）。过表达miR-206能显著降低E2诱导的ER-α36 阳性BGC-823细胞的增殖和侵袭能力（均P<0.01）。miR-206通过直接结合CDK14 mRNA的3''-UTR发挥抑制作用,从而负向调 节CDK14的表达,进而抑制ER-α阳性BGC-823细胞的增殖和侵袭能力（均P<0.01）。结论: miR-206通过靶向CDK14从而抑制 雌激素诱导的ER-α36阳性GC细胞的增殖和侵袭。     

Snail转录因子与ER-α36介导的雌激素信号在胃癌肿瘤细胞成球作用中的研究

目的 探讨Snail转录因子与ER-α36介导的雌激素信号在胃癌肿瘤细胞中的成球作用.方法 应用无血清的培养液DMEM/F12悬浮培养胃癌细胞系SGC7901及SGC7901/ER-α36重组细胞系High36和Low36.测定肿瘤细胞球体中Snail+细胞的含量,运用Western blot检测技术鉴定Snail和相关蛋白在肿瘤细胞球体中的表达.给予不同浓度的雌激素刺激,观察不同浓度雌激素对肿瘤细胞球体的影响,检测雌激素处理后Snail蛋白的表达等.结果 超低吸附培养皿无血清悬浮培养肿瘤微球体的效果优于普通培养皿,大约培养1周可形成肿瘤细胞球体,且形成的数量最多,这些肿瘤细胞球体中的细胞可以稳定传代继续形成新的微球体,同时,Snail+细胞含量升高,并且其蛋白在肿瘤细胞球体中的表达增高.ER-α36高表达的High36细胞系经无血清悬浮培养1周后形成的肿瘤微球体数增加.0.1 μmol浓度的ER刺激胃癌细胞株细胞,可以诱导Snail、ER-α36表达上调,而1 μmol浓度的ER刺激却作用相反(P﹤0.05).结论 低浓度的ER可以诱导胃癌细胞株细胞Snail转录因子与ER-α36高表达,Snail转录因子与ER-α36高表达与肿瘤细胞的成球作用关系密切.     

三氧化二砷和肼苯哒嗪体外诱导雌激素受体α表达强弱的比较

目的 本文拟比较三氧化二砷和肼苯哒嗪两种去甲基化药物在最佳有效浓度时,诱导MDA-MB-231细胞株雌激素受体重新表达作用的差异.方法 以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象,经2.0 μmol/L As2O3和10μmol/L肼苯哒嗪处理后,采用免疫组织化学技术检测ER-α受体的表达.结果 经2.0 μmol/L As2O3与10μmol/L肼苯哒嗪处理的MDA-MB-231细胞ER-α受体的表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 两种去甲基化药物在各自最佳去甲基化作用浓度时,对于高甲基化失活的雌激素受体ER-α基因去甲基化作用差异无统计学意义.     

雌激素在乳腺癌细胞中通过雌激素受体-ɑ调节PES1的表达及其稳定性的体外实验研究

目的:阐明PES1在乳腺癌细胞株中的表达情况以及PES1与雌激素受体-ɑ（estrogen receptor-ɑ,ER-ɑ）的关系。方法:培养不同的乳腺癌细胞系BICR、ZR75,采用免疫荧光法检测PES1的表达及定位,并通过顺势转染RNA干扰技术抑制PES1的表达,利用平板克隆形成实验和MTT实验检测细胞的生长增殖表型改变。同时,用不同浓度梯度及不同时间点的雌激素刺激相关乳腺癌细胞,用蛋白印迹法检测PES1的蛋白表达水平。最后,利用雌激素刺激上述细胞并通过RNA干扰抑制ER-ɑ后,使用蛋白印迹法检测PES1蛋白表达水平,同时,在放线菌酮的作用下,进一步检测乳腺癌细胞中PES1与ER-ɑ之间的相关性和稳定性,并进一步检测ER-ɑ对PES1的泛素化水平的影响。结果:我们通过免疫荧光发现PES1在几种乳腺癌细胞中均表达,并进一步证明干扰PES1可以抑制乳腺癌细胞克隆的形成及生长。此外,我们在乳腺癌细胞中发现雌激素主要通过其受体ER-ɑ提高PES1的蛋白水平,进一步发现雌激素对PES1转录的影响并不明显,而可能是通过ER-ɑ影响PES1的泛素化水平进而增强PES1蛋白的稳定性。结论:对于乳腺癌细胞,内源性ER-ɑ和PES1在乳腺癌的发生发展中相互协调发挥着重要作用。     

ER-α30和ER-α36在乳腺癌组织的表达及意义

目的探讨新型雌激素受体亚型ER-α30和ER-α36在乳腺癌中的表达及与他莫昔芬治疗预后的关系。方法收集2015年1月至2015年11月间在河北北方学院附属第一医院接受他莫昔芬内分泌治疗的Luminal A型乳腺癌患者75例,并收集同时期30例ER(-)乳腺癌患者组织。采用免疫组化染色SP法检测ER-α30和ER-α36蛋白表达。分析ER-α30和ER-α36蛋白表达与Luminal A型乳腺癌临床病理特征的关系。随访患者的无病生存时间(DFS)。采用Cox风险比例回归模型分析影响DFS的因素。结果Luminal A型乳腺癌组织中ER-α30蛋白阳性表达率为32.0%(24/75),低于ER(-)乳腺癌组织(P<0.05)。ER-α30蛋白表达与TNM分期、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移、孕激素受体状态有关(P<0.05)。ER-α36蛋白阳性表达率为52.0%(39/75),与ER(-)乳腺癌组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。ER-α36蛋白表达与TNM分期和肿瘤直径有关(P<0.05)。随访时间为11~54个月,患者48个月无病生存率为64.0%(48/75)。ER-α30阳性患者48个月无病生存率为33.33%(8/24),阴性患者为78.43%(40/51),差异具有统计学意义(P=0.001)。ER-α36阳性患者48个月无病生存率为48.7%(19/39),阴性患者为80.6%(29/36),差异具有统计学意义(P=0.002)。Cox风险比例回归分析显示,ER-α30、ER-α36是影响Luminal A型乳腺癌患者DFS的独立预后因素(P<0.05)。结论Luminal A型乳腺癌ER-α30和ER-α36阳性表达者接受他莫昔芬治疗无病生存期较短,其有望成为预测他莫昔芬治疗反应性的重要指标。     

磷酸化应激诱导蛋白1和雌激素受体-α蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及相关性分析

目的：观察分析磷酸化应激诱导蛋白1（STIP1）与雌激素受体-α（ER-α）蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达情况,分析二者与甲状腺乳头状癌发生、发展的相关性。方法选取甲状腺乳头状癌患者81例,共收集石蜡包埋乳头状癌组织81例,癌旁正常甲状腺组织15例,转移癌甲状腺组织25例,单纯桥本氏甲状腺炎（CLT）组织23例,分别为甲状腺乳头状癌组、对照组、淋巴结转移癌组、CLT组,观察各组STIP1与ER-α蛋白表达情况及相关性。结果甲状腺乳头状癌组及淋巴结转移癌组STIP1与ER-α蛋白表达阳性率均高于CLT组及对照组,组间比较差异有统计学意义（P﹤0.05）;甲状腺乳头状癌组中STIP1与ER-α蛋白表达呈正相关,比较差异具有统计学意义（r=0.614,P=0.009）。结论 STIP1与ER-α蛋白在甲状腺乳头状癌中高表达,可能参与了甲状腺乳头状癌的发生、发展与转移过程,二者表达呈正相关性,表明二者可能在甲状腺癌的发展中起到一定的协同作用,参与促进甲状腺乳头状癌的淋巴结转移。     

甲状腺激素对乳腺癌细胞中雌激素受体α和甲状腺激素受体β的影响

背景与目的：目前，甲状腺激素对乳腺肿瘤的影响尚不明确。本实验目的足研究乳腺癌细胞系中雌激素受体α-（ER—α）和甲状腺激素受体β（TR—β）的表达水平及相互关系，观察经甲状腺激素（T3）刺激后，激素受体表达水平的改变，探索受体表达水平改变的可能机制．方法：通过实时定量PCR（realtimePCR）测定7株乳腺癌细胞系中ER—α和TR—β的mRNA水平，观察T3刺激对ER-α、TR—β和视黄醛衍生物x受体d（RXR—d）的表达水平的调节，并测定T3作用后在SK—BR-3细胞中多个基因表达谱。结果：在SK—BR-3、MDA-MB-231和MDA—MB-435中ER-35和TR—B低水平表达，MCF7、BT20、BT474和T47D中ER-α和TR—β均高水平表达．受T3刺激后，ER—α（-）的细胞系中ER—α、TR—β和RXR-α表达都受到不同程度的上调．而在ER—α（＋）的细胞系中术观察到该现象．SK—BR-3在1、3刺激后，E2FI、转化生长因子（TGF）一BlR、TGF-p2R和人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达上调，TGF—β1和p21下调。结论：ER-α和TR—β的表达水平住乳腺癌细胞一}1密切相关，T3对乳腺癌细胞的影响与细胞内源性ER-α水平相关.     

三氧化二砷体外诱导雌激素受体α表达的初步研究

目的本文拟探讨三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）诱导因高甲基化失活的雌激素受体重新表达的可能性。方法以雌激素受体高甲基化失活的人乳腺细胞系MDA-MB-231细胞系为研究对象，经不同浓度As203处理后，采用RT-PCR技术检测ER-α基因mRNA表达。结果经1．0μmol／L、2．0μmol／L和4．0μmol／L．As2O3处理的MDA-MB-231细胞均能扩增出ER-α基因。结论一定浓度的As2O3可通过去甲基化作用诱导MDA—MB-231细胞系重新表达ER-α。     

量子点免疫荧光技术在脑胶质瘤组织芯片上的应用

目的探讨窖蛋白．1（caveolin．1,Cav-1）、细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（CD147）在人脑胶质瘤中的表达以及临床意义,并分析二者的相关性。方法在脑胶质瘤组织芯片上,利用新型半导体纳米微晶体——量子点（QDs）免疫荧光技术检测Cav-1、CD147的蛋白表达。结果Cav-1和CD147蛋白在人脑胶质瘤组织中的阳性表达率分别为42．86％、71．43％,与正常脑组织相比,CD147蛋白的表达差异有显著性（P=0．042）。Cav-1和CD147蛋白表达与胶质瘤患者的性别、年龄和组织学类型均无关（P〉0．05）,而与病理学分级均显著相关（P〈0．05）。Cav-1和CD147蛋白在人脑胶质瘤组织中的阳性表达呈显著负相关（P=0．001,r=-0．730）。结论量子点免疫荧光技术能精确检测人脑胶质瘤组织芯片上不同蛋白的定位。Cav-1和CD147蛋白在人脑胶质瘤的恶性进展中可能起拮抗作用。     

乳腺癌组织缺氧与雌激素受体-α的关系

目的:缺氧是乳腺癌常见的现象,并可能诱导肿瘤的进展。雌激素受体(ER)-α状态是乳腺癌预后和内分泌治疗疗效的重要预测指标。本研究旨在揭示乳腺癌中缺氧与ER-α表达的关系。方法:51例患者经配体结合法证实为ER阳性的乳腺癌。采用免疫组织化学染色的方法观察ER-α的异质性表达与多种缺氧标志的关系。结果:免疫组织化学染色发现本组有49例乳腺癌为ER-α阳性。无论乳腺导管内癌(n=29)还是浸润性癌(n=20),ER-α蛋白在邻近坏死灶的区域都出现了下降(P分别≤0.0001);ER-α的区域性下调还与缺氧诱导基因CA-Ⅸ和Glut-1的表达有关(P<0.0001)。结论:乳腺癌中ER-α区域性的表达下降与缺氧有关。因此缺氧可能促使乳腺癌在进展过程中向ER-α阴性的表型演变。     

Fzd2诱导ER阴性乳腺癌细胞上皮-间质转化

目的:分析Frizzled 2（Fzd2）在雌激素受体阴性（ER-）乳腺癌中的表达及其对ER-乳腺癌细胞上皮-间质转换（epithelial-mesenchymal transition，EMT）的影响。方法:采用免疫组化方法检测Fzd2在乳腺癌组织中的表达；采用Western blot检测Fzd2、E-cadherin、Vimentin、Slug、Zeb1在乳腺癌细胞中的表达；采用伤口愈合试验和Transwell试验检测细胞迁移和侵袭。结果:Fzd2在ER-乳腺癌组织及细胞系中过表达；Fzd2敲减促进Hs578T细胞表达E-cadherin，减少Hs578T细胞表达Vimentin、Slug和Zeb1；Fzd2敲减抑制Hs578T细胞迁移和侵袭。结论:Fzd2诱导ER-乳腺癌细胞发生EMT；Fzd2可能作为ER-乳腺癌防治的一个潜在靶向分子。     

维甲酸抑制雌激素受体阳性乳腺癌细胞生长机制的研究

目的探讨雌激素受体的表达对维甲酸抑制乳腺癌细胞生长的影响和ＲＡＲα表达的变化。方法雌激素受体阴性的乳腺癌细胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１细胞,采用分子生物学质粒转染技术,将ＥＲ阴性的乳腺癌细胞ＭＤＡ－ＭＤ－２３１转染成ＥＲ阳性细胞。结果发现ＥＲ转染后的细胞不仅ＲＡＲα的基础表达升高,而且ＲＡ能明显抑制该细胞的生长。同时还发现,无论是已确立的雌激素受体阳性的乳腺癌细胞株,还是雌激素受体转染后的细胞,雌激素都能明显刺激ＲＡＲα的表达。结论雌激素通过ＥＲ上调ＲＡＲα量的表达,在维甲酸对乳腺癌细胞生长的抑制中起着很重要的作用。     

ER-α36在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的:研究ER-α36(estrogen receptor-alpha 36)在乳腺癌组织中的表达状态及在乳腺癌发生、发展和临床预后中的作用。方法:选取河南省肿瘤医院乳腺科及郑州大学第一附属医院乳腺科2010年3月-2013年3月间653例乳腺癌组织,用RT-PCR技术和免疫组化技术检测组织中ER-α36、ER-α66、PR和Her-2的表达,分析ER-α36的表达与上述指标及临床病理特征之间的关系。结果:ER-α36的总体表达率是40%（261/653）。在Her-2阳性组织中的表达率63%（78/124）,显著高于阴性组35%（183/529）,P<0.05。在ER-α66/PR/Her-2三阴性组织中的表达率66%（69/104）,显著高于非三阴性组35%（192/549）,P<0.05。在ER-α66阳性和阴性样本中及在PR阳性和阴性样本中的表达率,差异没有统计学意义(P>0.05)。在III+IV期乳腺癌组织中的阳性表达率54%（165/305）,明显高于I+II期28%（96/348）,P<0.05。在淋巴结转移阳性乳腺癌组织中的表达率55%（184/335）,显著高于无转移组织24%（77/318）,P<0.05。结论:ER-α36可能在乳腺癌的发生、发展及淋巴结转移过程中具有重要作用,并与Her-2的表达、乳腺癌分期及淋巴结转移有关,有望成为新的肿瘤标记物及临床诊治的新靶点。     

表观遗传学对乳腺癌雌激素受体-α的调控

目前,内分泌治疗是激素受体阳性乳腺癌主要的治疗手段,而雌激素受体-α（ Estrogen re-ceptor-α,ER-α）是这种治疗的主要靶分子之一。乳腺癌中ER的功能受很多因素影响,如ER基因的改变、微环境的改变、信号转导通路的变化等等,而其中表观遗传学的变化引起ER表达量及功能的改变日益引起重视。在表观遗传学的改变中,ER启动基因的甲基化是发生几率最高的,也是研究最广泛的,它能导致ER表达的下调或缺失。组蛋白修饰也可影响ER-α的表达及功能。而特定micro RNAs（ miR-NAs）能调节乳腺癌细胞ER-α的表达并影响乳腺癌对他莫昔芬（ Tamoxifen,TAM）反应性。     

AP-2α对大肠癌SW620细胞增生的影响及其作用机制

目的研究转录因子激活蛋白-2d（AP-2α）对大肠癌细胞株SW620增生能力的影响及可能的作用机制。方法构建pcDNA3．1（＋）-AP-2α重组质粒,采用脂质体介导质粒转染人SW620细胞,利用MTT法检测其对SW620细胞增生能力的影响;荧光定量PCR方法和Western印迹法检测转染前后各组细胞中雌激素受体-β（ER-β）表达水平的变化。结果转染AP-2α后SW620细胞内AP-2α mRNA含量及蛋白表达水平显著升高。MTT结果提示,转染AP-2α基因后SW620细胞增生速度受到抑制。转染AP-2α基因后ER-β mRNA和蛋白表达增加,且在转染48h增加最为明显,ER—β mRNA和蛋白质分别增加了94．47％和54．67％,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论AP-2α可抑制SW620细胞的增生,其抑制机制很可能与增强ER-β的表达有关。     

人脑胶质瘤组织培养的干细胞样细胞具有体外高侵袭能力

目的:分离培养人脑胶质瘤干细胞样细胞(glioma stem-like cell,GSLC),研究其体外侵袭力。方法:选取中国医科大学第一医院神经外科2008年10月至2009年1月间住院患者手术切除的脑胶质瘤组织8例,以无血清成球培养法培养胶质瘤细胞球;免疫细胞化学实验检测其CD133的表达;荧光免疫显微镜观察其分化后胶质细胞标志物GFAP和神经元标志物TU-20的表达;matrigel侵袭实验检测其侵袭力,并与原代脑胶质瘤细胞进行比较。结果:成功分离培养出人脑胶质瘤细胞球细胞,该细胞表达干细胞标志物CD133;能自我更新与增殖;诱导分化后,GFAP和TU-20均为阳性表达,提示其为GSLC。胶质瘤细胞球细胞侵袭细胞数显著多于原代胶质瘤细胞[(261.23±87.20)vs(116.08±63.88)个,P<0.01];此外,胶质瘤细胞球细胞穿过matrigel胶后可再次聚集成球状生长。结论:成功分离培养人脑胶质瘤组织中的GSLC,其体外具有较高的侵袭力,可能参与脑胶质瘤的侵袭和转移。     

SKOV3卵巢癌细胞中雌激素对LRP16的调控作用及其影响

目的：研究雌激素受体ER阳性的卵巢癌细胞系中,E2对LRP16的调控作用以及LRP16对细胞增殖的影响。方法：Northern Blot、Western Blot方法分别检测RNA、蛋白表达水平;生长曲线测定过表达或抑表达LRP16对SKOV3细胞生长特性的影响。结果：雌激素敏感的BG-1细胞系中,E2正调控LRP16的表达;而不同浓度雌激素处理雌激素不敏感SKOV3细胞,LRP16蛋白的表达下降,而ICI182 780对其作用相反;LRP16对SKOV3细胞的生长、增殖有微弱的调节作用。结论：在雌激素不敏感的SKOV3细胞系中,E2对LRP16的调节作用及LRP16发挥的生长调节作用与雌激素敏感的BG-1卵巢癌细胞系及乳腺癌体外研究结果不同。提示雌激素不敏感浆液性卵巢癌中E2对LRP16的调控可能存在新的机制,可能用来解释部分卵巢癌对内分泌治疗敏感性不同的原因。     

人恶性胶质瘤干细胞的分离与鉴定

目的:从人恶性胶质瘤中分离并鉴定胶质瘤干细胞。方法:采用神经干细胞无血清培养方法,分离胶质瘤干细胞,免疫细胞化学法、有限梯度稀释实验、二代球体形成分析、流式细胞分析等方法对胶质瘤干细胞进行鉴定。结果:3例患者原代培养胶质瘤细胞中CD133 细胞分别为7.4%、2.8%和4.2%。每100个原代胶质瘤细胞中可形成1个左右的胶质瘤细胞球;胶质瘤细胞球细胞均表达神经干细胞标记CD133和Nestin,不表达分化标志GFAP和MAP2,少数细胞表达分化标记MBP。每100个原代胶质瘤细胞球体细胞可形成6.07±2.15个悬浮生长的二代胶质瘤细胞球,二代细胞球细胞表达CD133和Nestin。胶质瘤细胞球细胞分化后细胞多数表达GFAP,少数表达MAP2和MBP。胶质瘤球体干细胞的增殖较原代胶质瘤细胞慢。胶质瘤球体细胞1×103个时可成瘤,原代培养的胶质瘤细胞需1×107。结论:采用神经干细胞培养条件可以很简便的分离出悬浮生长的胶质瘤球体干细胞。分离出的胶质瘤球体干细胞表达CD133抗原,具备肿瘤干细胞的基本特征。     

乳腺癌中miR-221、miR-222表达水平对GATA3和FOXA1蛋白的影响及其作用机制

目的： 探讨乳腺癌中miR-221和miR-222（miR-221/222）表达水平对GATA结合蛋白3（GATA3）和叉头框蛋白A1（FOXA1）表达的影响及其作用机制。方法： 收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2020年1月—2021年5月经手术切除的86例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本,分别采用茎环引物实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学方法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平及GATA3、FOXA1蛋白的表达水平,分析其与临床病理指标的关系。进一步在5种乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、SKBR3、MDA-MB-231和BT-549）中转染miR-221/222 mimics后,采用qPCR检测各细胞中miR-221/222的表达水平;采用Western blot检测转染后MCF-7细胞中GATA3、FOXA1、雌激素受体-α（ER-α）和钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达;用细胞划痕和迁移侵袭实验检测转染后MCF-7细胞修复和迁移侵袭能力。结果： 在乳腺癌组织中,miR-221/222的表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织（P=0.00）。miR-221/222表达水平在FOXA1、GATA3、ER-α及孕激素受体（PR）阴性表达组均显著高于阳性表达组（P<0.01）;在Her-2阳性和高表达Ki-67的乳腺癌中较Her-2阴性和低表达Ki-67组显著升高（P<0.05）;在三阴性和Her-2阳性亚型乳腺癌中显著高于Luminal A和Luminal B1型乳腺癌（P=0.00）;而miR-221/222水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期无显著相关关系（P>0.05）。在5种乳腺癌细胞系中,miR-221/222在MCF-7细胞中均低表达。与对照组相比,在MCF-7细胞中瞬时转染miR-221/222 mimics后miR-221/222表达显著升高（P<0.05）,且内源性的GATA3和FOXA1蛋白表达被抑制（P<0.01）,上皮细胞相关分子ER-α和E-cadherin表达显著下降（P<0.01）;划痕修复能力和迁移侵袭能力均显著增强（P<0.01）。结论： miR-221/222可能通过下调GATA3和FOXA1的表达促进乳腺癌的迁移和侵袭。