环氧化酶-2特异性抑制剂筛选模型的研究

佛波酯诱导静息IH 3T3细胞建立炎症模型，以GAPDH为内标，地塞米松为阳性药物，运用半定量RT-PCR技术，初步建立环氧化酶-2（COX-2）基因转录调控药物筛选模型。RIA法测定Rofecoxib对COX-1酶的作用，并与其对COX-2酶的抑制作用相比较，得到IC50(COX-2)/IC50(COX-1)为0.003，完善在蛋白质水平上筛选COX-2特异性抑制剂的模型。     

白细胞弹性蛋白酶抑制剂筛选模型的建立及抑制剂F02ZA-2554A的研究

利用人源的白细胞弹性蛋白酶建立了一种快速、微量、灵敏的高通量体外筛选方法。利用该模型从微生物菌种库菌株的次生代谢产物中筛选得到一阳性真菌F02ZA-2554。该菌株发酵液经有机溶剂提取、硅胶柱层析、及HPLCODS反相柱层析等活性跟踪下的分离纯化，得到活性化合物F02ZA-2554A，该化合物对白细胞弹性蛋白酶有中等强度的抑制活性，其IC20为32．4μmol／L。通过对该化合物的紫外、质谱、核磁等理化分析，确定该化合物为葸醌类化合物中的大黄素甲醚（physcion），该化合物的抗炎活性属首次报道。     

环氧酶选择性抑制剂筛选模型的建立

目的　建立COX1和COX2活性检测模型,为COX2选择性抑制剂的筛选及抗炎作用机制研究提供可靠方法。方法　COX1抑制剂筛选模型用新生小公牛主动脉内皮细胞为酶源,6-keto-PGF_1α的含量变化评价化合物对COX1的抑制作用。COX2抑制剂筛选模型用激活的小鼠腹腔巨噬细胞,PGE₂含量变化评价化合物对COX2的抑制作用。结果　Indomethacin可显著地抑制COX1的活性, Meloxicam可显著地抑制COX2的活性, 其对COX2的选择性抑制作用高于前者。结论　COX1和COX2抑制剂筛选模型可用于COX2选择性抑制剂的筛选和机制研究。     

四氢苯并咪唑类衍生物的合成及其环氧合酶-2抑制活性

目的 寻找新型不良反应小的环氧合酶-2(COX-2)选择性抑制剂.方法 结合典型COX-2选择性抑制剂基本结构特征,设计并合成一系列新型四氢苯并咪唑类化合物.采用化学发光法测试化合物对环氧合酶-2的抑制活性.结果与结论 设计并合成了13个新型四氢苯并咪唑类化合物,其结构经元素分析、1H-NMR、13C-NMR和MS确证,所有化合物均未见文献报道.部分化合物对环氧合酶-2的抑制活性结果表明,化合物1、3、6对COX-2有一定的抑制作用.     

肉桂提取物调控COX-2的表达改善大鼠良性前列腺增生

目的 研究肉桂乙醇提取物(Cinnamomum cassia Prsel ethanol extract, CE)对良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasa, BPH)的治疗作用及其可能的作用机制。方法 分子对接初步推测CE中3种化合物对环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase, 5-LOX)的结合能力。考察前列腺湿重(prostate weight, PW)、前列腺指数(prostate index, PI),并采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-esion staining, HE)观察大鼠前列腺组织的形态变化;Western-blot和q-PCR检测大鼠前列腺组织中COX-2和5-LOX的蛋白、mRNA表达水平。结果 分子对接结果表明,CE中3种主要活性单体化合物与COX-2及5-LOX蛋白模型均有较好的结合能;Western-blot和q-PCR结果显示,CE能同时降低COX-2及5-LOX在蛋白和mRNA水平上的表达,对COX-2的下调具有显著性;PW、PI及组织病理学切片...     

环氧酶抑制剂对大鼠血小板聚集的影响

目的：研究环氧酶抑制剂艾瑞昔布、氯吲昔布、美洛昔康、塞来昔布和吲哚美辛对环氧酶-1（COX-1）和环氧酶-2（COX-2）的选择性及对大鼠血小板聚集的影响，探讨环氧酶选择性抑制与血小板聚集之间的关系。方法：利用A23187刺激的小鼠腹腔巨噬细胞模型检测COX-1表达的变化；利用LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞模型检测COX-2表达的变化；利用花生四烯酸和胶原作为刺激剂诱导血小板聚集模型检测化合物对大鼠血小板聚集的影响。结果：上述化合物对COX-1和COX-2的表达均有明显的抑制作用，其对COX-1和COX-2抑制率IC50的比值分别为：艾瑞昔布IC50 coxl／IC50 cox2为6．7；氯吲昔布IC50 cox-1／IC50cox-2为3．5；美洛昔康抑制IC50cox-1／IC50COX-2为3．0；塞来昔布C50cox-1／IC50cox-2为61．5；吲哚美辛抑制IC50cox-1／IC50COX-2为0．66。艾瑞昔布、氯吲昔布、美洛昔康和吲哚美辛抑制花生四烯酸诱导的大鼠血小板聚集的IC50分别为2．98×10-6 mol／L、1．13×10-5 mol／L、6．80×10-6mol／L和1．82×10-6mol／L；其抑制胶原诱导的大鼠血小板聚集的Ic50分别为2．89×10-6mol／L、3．24×10-6mol／L、5.4×10-8mol／L和1．87×10-7mol／L。塞来昔布在10-5mol／L，浓度时对花生四烯酸和胶原诱导的血小板聚集无明显抑制作用。结论：上述化合物对环氧酶选者性抑制南强到弱的顺序依次为塞来昔布、艾瑞昔布、氯吲昔布、美洛昔康和吲哚美辛。随环氧酶抑制的选择性降低，化合物对血小板聚集制作用逐渐增强。     

环氧合酶2与新型抗炎药

自从非自体抗炎药（nonsteroidalanti-inflammatorydrugs，NSAIDS）广泛用于临床后，人们往往将其抗炎、解热、镇痛作用及其许多不良反应，均归于抑制前列腺素（prostaglandins，PGs）合成过程中的一个重要限速酶─-环氧合酶（cyclooxygenase，COX）。但是，随着对COX的深入研究，人们发现COX存在两种同工酶，分别为环氧合酶-1（COX-1）和环氧合酶-2（COX-2），这使人们对炎症中COX的作用和NSAIDs的药理机制有了进一步的认识，并随之产生了新的抗炎策略和对COX-2有选择性抑制作用的新型NSAIDS。1COX-2基因和蛋白COX-1基…     

姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2mRNA和COX-2蛋白表达的影响

目的：探讨姜黄素对人胃癌SGC-7901细胞增殖及对环氧酶-2（C0X-2）基因及蛋白表达的影响。方法：应用MTT法考察浓度姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的影响;应用RT-PCR、Western-blotting法检测COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果：5～80μg.mL-1姜黄素对胃癌SGC-7901细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性。姜黄素对COX-2mRNA和COX-2蛋白的表达有不同程度的抑制作用,随着剂量的增加,抑制作用增强,较高浓度（20～80μg.mL-1）的姜黄素对COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达有显著抑制作用（P〈0.01）。结论：姜黄素可能通过抑制COX-2 mRNA和COX-2蛋白的表达抑制胃腺癌细胞SGC-7901的增殖,可能成为一种胃癌预防剂。     

豨莶草对黄嘌呤氧化酶和环氧合酶-2双重抑制作用的虚拟筛选

目的 探究豨莶草对黄嘌呤氧化酶（XOD）和环氧合酶-2（COX-2）具有双抑制活性成分及结合机制。方法 由TCMSP数据库筛选得出豨莶草所含化合物成分,以XOD、COX-2为目标,使用Autodock Tools软件对化合物进行虚拟筛选,并使用Pymol软件针对代表性活性成分与黄嘌呤氧化酶、环氧合酶作用模式进行分析。结果 豨莶草所含的活性成分与XOD的结合能,在-5.0 kcal·moL^-1以下的有5种化合物,与COX-2的结合能,在-5.0 kcal·moL^-1以下的有9种化合物。根据分子间作用力来看,豨莶草中的豆甾醇、豨莶精醇对这两种蛋白的活性位点有氢键相互作用和疏水相互作用。结论 豨莶草中的豆甾醇、豨莶精醇成分可能对XOD和COX-2有双重抑制的效果。     

苯并异硒唑酮磺酰胺衍生物对环氧酶的抑制作用

目的　研究苯并异硒唑酮磺酰胺衍生物对环氧酶的抑制作用。方法　放免法;RT-PCR法。结果　化合物A和B对COX-1和COX-2的代谢产物TXB2和PGE2的IC₅₀ 比值分别为1000和560 ,化合物A和B可抑制LPS诱导的大鼠腹腔巨噬细胞COX-2 mRNA生成,而对COX-1的mRNA生成无影响。结论　化合物A和B为COX-2选择性抑制剂,可抑制COX-2 mRNA的生成     

黄皮酰胺对糖尿病大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质表达的影响

目的探讨黄皮酰胺(Clausenamide,Clau)对糖尿病大鼠海马环氧化酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)mRNA和蛋白质表达水平的影响。方法♂Wistar大鼠腹腔注射链脲佐菌素(48mg·kg-1)建立糖尿病模型,给予不同药物治疗3mon后,分别以RT-PCR法和免疫组织化学法观察大鼠海马COX-2 mRNA和蛋白质的表达。结果①RT-PCR结果显示,糖尿病大鼠海马的COX-2 mRNA表达明显增加(P<0.01);而Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2mRNA表达明显降低(P<0.01);②免疫组化结果显示,糖尿病大鼠海马COX-2的蛋白质表达明显升高(P<0.01),Clau(50、25mg·kg-1)治疗组大鼠海马的COX-2的蛋白质表达明显降低(P<0.01)。结论黄皮酰胺可能通过抑制海马的COX-2mRNA及蛋白质表达起到糖尿病大鼠海马的保护作用。     

二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂抗S180肉瘤作用机制研究

目的探讨二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂对S180肉瘤的生长抑制作用及其可能的机制。方法采用ICR小鼠皮下移植瘤模型,观察二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂对小鼠S180肉瘤生长抑制作用,以及对肿瘤COX-2、VEGF、CD31蛋白表达与白细胞数目的影响。结果二氢青蒿素分别以50、100、150mg·kg-1剂量与环氧化酶2抑制剂美洛昔康10mg·kg-1剂量合用能明显抑制S180肉瘤的生长,抑瘤率最高达55.38%,优于两药单用的效果;免疫组织化学检测表明,3个剂量的二氢青蒿素合用环氧化酶2抑制剂的肿瘤组织COX-2、VEGF及CD31蛋白的表达量均下降;Westernblot方法检测得在高剂量二氢青蒿素(150mg.kg-1.d-1)联合应用美洛昔康(10mg.kg-1.d-1)组VEGF和COX-2蛋白的表达量均有下降,与模型对照组差异有显著性(P<0.05);RT-PCR检测得各合用药物组的肿瘤组织VEGFmRNA表达量均减少(P<0.05)。结论二氢青蒿素联合环氧化酶2抑制剂能明显抑制S180肉瘤的生长,其机制可能与下调肿瘤组织中COX-2和VEGF的表达有关。     

盐酸小檗碱抑制结肠癌细胞环氧化酶-2/钙离子途径

目的探讨盐酸小檗碱对结肠癌细胞系生长、增殖的作用及环氧化酶2/钙离子途径的影响,为阐明盐酸小檗碱作为一种新的结肠癌化学治疗药物进行理论上的准备。方法0.1、0.3、3.0、30.0μmol·L-1的盐酸小檗碱加入到HT29结肠癌细胞系培养液中。MTT法检测细胞的生长和增殖,RTPCR法检测环氧化酶2mRNA,免疫细胞化学法检测环氧化酶2蛋白质表达,ELISA法检测前列腺素E2的含量,免疫荧光分光光度法检测细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)。结果盐酸小檗碱在浓度大于0.3μmol·L-1时则有明显的量效关系抑制细胞的生长、增殖;在浓度大于0.3μmol·L-1时对环氧化酶2mRNA水平和蛋白的表达有明显的抑制作用;对前列腺素E2的生成有抑制作用,可以降低细胞内钙离子浓度。结论盐酸小檗碱通过抑制细胞内钙离子浓度进而通过某些途径抑制COX2在mRNA水平和蛋白质水平的表达,同时也抑制COX2活性进而抑制前列腺素E2的生成,这可能是其抑制HT29细胞生长和增殖的机制之一。     

A COX-2 inhibitor nimesulide analog selectively induces apoptosis in Her2 overexpressing breast cancer cells via cytochrome c dependent mechanisms

Epidemiological and animal model studies have suggested that non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) can act as chemopreventive agents. The cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor nimesulide shows anti-cancer effect in different type of cancers. In the current study, five breast carcinoma cell lines were used to explore the anti-cancer mechanisms of a nimesulide derivative compound 76. The compound dose dependently suppressed SKBR-3, BT474 and MDA-MB-453 breast cancer cell proliferation with IC₅₀ of 0.9 μM, 2.2 μM and 4.0 μM, respectively. However, it needs much higher concentrations to inhibit MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cell growth with IC₅₀ at 22.1 μM and 19.6 μM, respectively. Further investigation reveals that compound 76 induced apoptosis in SKBR-3 and BT474 cells. Since these cells are Her2 overexpressing cells, the Her2 intracellular signaling pathways were examined after the treatment. There was no significant changing of kinase activity. However, the cytochrome c release assay indicated that the apoptosis induced by the compound was mediated by the mitochondria. These results suggest that compound 76 selectively induce apoptosis in Her2 overexpressing breast cancer cells through the mitochondria, and could be used as a lead to design more potent derivatives.     

特异性抑制环氧合酶-2表达的siRNA筛选

目的筛选有效抑制环氧合酶-2(COX-2)表达的小干扰RNA(siRNA)序列,并观察其对细胞中COX-2表达的抑制作用。方法设计针对COX-2的3对(siRNA24,siRNA954,siRNA1553)及一条FAM荧光标记的阴性对照siRNA(称为HK)。在Lipofectamine2000介导下转染人胃癌细胞系SGC-7901。同时采用RT-PCR法和Western blot方法检测细胞中COX-2含量,以β-actin蛋白做内参照。结果当Lipofectamine2000浓度在50μmol.L 1时能实现最大转染效果。与其他各组相比,转染了siRNA954的人胃癌细胞中,编码COX-2 mRNA的含量明显减少(P<0.01)。结论成功设计了针对COX-2的siRNA,并从中筛选出siRNA954,能够有效抑制人胃癌细胞COX-2表达,为肿瘤治疗及其临床应用奠定了基础。     

赤芍801对小鼠巨噬细胞COX-1和COX-2活性、mRNA及蛋白表达的影响

目的研究赤芍801(propyl gallate,PrG)对环氧酶(cy-c looxygenase,COX)活性、mRNA及蛋白表达的影响。方法采用基于小鼠腹腔巨噬细胞的COX-1和COX-2体外筛选模型,用钙离子导入剂(calc ium ionophore A23187)短时刺激小鼠腹腔巨噬细胞,测定培养上清液中的6酮--前列腺素F1α(6-keto-PGFlα)的量反映COX-1活性;用脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)长时间刺激细胞,测定培养上清液中的前列腺素E2(PGE2)的量反映COX-2活性。半定量RT-PCR法检测PrG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2 mRNA表达的影响。W estern b lot法检测PrG对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2蛋白表达的影响。结果PrG体外10,5μmol.L-1浓度下不影响6-keto-PGFαl生成(P>0.05),而在1,0.5,0.1,0.05μmol.L-1浓度下则诱导6-keto-PGF1α生成(P<0.01),并呈较好的剂量依赖性。PrG体外1,10μmol.L-1可抑制PGE2生成(P<0.05)。PrG不同浓度对LPS刺激的Raw小鼠巨噬细胞COX-1、COX-2 mR-NA表达无明显影响。PrG(100,10,1μmol.L-1)浓度下可抑制COX-2蛋白表达,但对COX-1蛋白表达无影响。结论在0.05~10μmol.L-1浓度范围内,PrG低浓度时促进6-keto-PGF1α生成,高浓度时抑制PGE2生成,提示其高浓度时抑制COX-2,低浓度时激活COX-1;不同浓度PrG对COX-1、COX-2 mRNA表达均无明显影响。PrG(1~100μmol.L-1)浓度下可抑制COX-2蛋白表达,但对COX-1蛋白表达无影响。     

翠云草总黄酮对结肠癌HT-29细胞COX-2mRNA表达的抑制作用

目的：研究翠云草总黄酮对结肠癌HT-29细胞环氧化酶-2（COX-2）mRNA表达的影响。方法i以翠云草总黄酮作用于人结肠癌HT-29细胞,用倒置显微镜观察细胞形态学的变化;并设总黄酮高中低剂量组和阴性对照组共4个组别,采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测给药后癌细胞COX-2mRNA表达的水平,用电泳凝胶成像自动分析系统检测各扩增带的产物含量。结果：与阴性对照组比较,翠云草总黄酮可以在mRNA水平上抑制COX-2的表达,且呈量效关系。结论：翠云草总黄酮能在mRNA水平上抑制COX-2,进而抑制COX-2蛋白质表达,这可能是翠云草抗肿瘤作用的机制之一。     

小檗碱对结肠癌的体外作用研究

目的:研究小檗碱对结肠癌lovo细胞的抑制作用。方法:培养人结肠癌lovo细胞,给予不同浓度小檗碱、美洛昔康(10-6、10-5、10-4、10-3mol·L-1),作用细胞6、12、24h后,通过MTT实验观察lovo细胞的增殖情况;采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞环氧化酶-2(COX-2)的表达水平;采用蛋白质免疫印迹(Westernblot)法检测细胞COX-2蛋白的表达水平。结果:小檗碱在浓度>10-5mol·L-1,美洛昔康在浓度>10-4mol·L-1时可明显抑制lovo细胞增殖,诱导其凋亡,且呈浓度和时间依赖性(P<0.01或P<0.05)。小檗碱能浓度依赖性地降低lovo细胞中COX-2mNRA表达,对COX-2蛋白表达也呈浓度依赖性抑制。结论:小檗碱能抑制人结肠癌lovo细胞增殖,诱导其凋亡,作用途径与抑制COX-2表达有关。     

siRNA沉默胃癌SGC-7901细胞COX-2基因对VEGF-C表达与细胞迁移的影响

目的：探讨RNA干扰技术（RNAi）沉默环氧化酶-2（COX-2）基因对血管内皮生长因子-C（VEGF-C）的表达及细胞迁移能力的影响。方法：利用siRNA干扰胃癌SGC-7901细胞COX-2基因,RT-PCR和免疫荧光检测干扰前后COX-2基因和VEGF-C基因在mRNA和蛋白水平表达差异;细胞划痕实验比较COX-2基因对细胞迁移能力变化的影响。结果：COX-2基因干扰后,胃癌SGC-7901细胞中COX-2基因和VEGF-C基因的mRNA和蛋白水平明显下调,组间差异具有统计学意义（P〈0.05）,且COX-2与VEGF-C的表达呈显著正相关性（P〈0.05）;同时胃癌细胞的迁移能力也明显降低。结论：siRNA能特异性地抑制胃癌SGC-7901细胞COX-2基因的表达,进而抑制VEGF-C的表达,降低胃癌细胞的迁移能力,减少胃癌细胞转移。     

原花青素抑制佐剂性关节炎大鼠PGE_2合成的机制

目的研究原花青素对佐剂性关节炎大鼠体内PGE2合成的抑制机理。方法建立大鼠佐剂性关节炎模型,EIA法测大鼠足爪炎症组织中PGE2的含量,RT PCR和Western blot分别检测大鼠腹腔巨噬细胞内COX 2 mRNA和蛋白的表达。结果原花青素显著降低佐剂性关节炎大鼠足爪炎症组织中的PGE2含量,下调大鼠腹腔巨噬细胞COX 2 mRNA和蛋白的表达。结论原花青素对佐剂性关节炎大鼠体内PGE2合成的抑制作用可能与其抑制COX 2 mRNA和蛋白表达有关。