103 Pd放射性支架诱发犬胆管损伤后平滑肌细胞增殖抑制和凋亡的相关研究及意义

目的:探讨犬胆管损伤后增殖平滑肌细胞受辐射后细胞增殖抑制和凋亡发生的关系.方法:在犬胆管内分别植入103 Pd放射性支架和普通胆管支架,取出胆管标本采用ABC法进行增殖细胞核抗原(PCNA)免疫组化染色和平滑肌细胞凋亡染色.结果:103Pd支架组犬胆管组织平滑肌细胞PCNA蛋白阳性表达率为33.33%,而普通支架组犬胆管组织平滑肌细胞PCNA蛋白阳性表达率为83.33%,103Pd支架组PCNA蛋白阳性表达率明显低于普通支架组(P＜0.01).而103Pd放射性支架组犬胆管增殖平滑肌凋亡细胞数明显大于普通支架组犬胆管增殖平滑肌细胞数(P＜0.05),而且103Pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,而普通支架组犬胆管腔有明显狭窄.结论:辐射可以抑制平滑肌细胞增殖,同时可诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,抑制犬胆管再狭窄.     

103pd放射性支架诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡及对抑癌基因影响和意义

目的探讨辐射对抑癌基因(p53基因)在辐射诱导犬胆管增殖平滑肌细胞凋亡中的影响和意义.方法12只犬随机分两组,每组6只,在犬胆管内分别植入103pd(103钯)放射性支架和普通胆管支架,术后30d取出胆管标本进行HE染色和p53基因原位杂交,DAB染色,p53基因表达阳性者为细胞浆呈棕黄色,和平滑肌细胞凋亡染色,阳性凋亡细胞为细胞核有棕黄色颗粒.结果103pd放射性支架组犬胆管平滑肌细胞p53基因阳性表达率为83.33%,而普通支架为16.66%,两组之间比较差异有非常显著性(P＜0.01);同时,103pd放射性支架组犬胆管增殖平滑肌凋亡细胞数明显大于普通支架组犬凋亡细胞数,两组之间比较差异有显著性(P＜0.05),而且103pd放射性支架组犬胆管腔无明显狭窄,普通支架组犬胆管腔有明显狭窄.结论以上结果证实辐射可以激活p53基因,使其功能提高,诱导犬胆管平滑肌细胞凋亡,抑制犬胆管再狭窄.     

103Pd放射性支架对bcl-2表达影响的研究

目的:探讨γ射线对bcl-2基因的影响及意义.方法:将103钯(103Pd)放射性支架和普通支架分别植入犬的肝外胆管,免疫组化方法检测γ射线诱导犬胆管壁凋亡增殖平滑肌细胞中的bcl-2表达,计数凋亡细胞,计算机图像分析系统检测两组胆管管腔面积.结果:bcl-2表达103Pd支架组较普通支架组为弱,胆管出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管无明显狭窄;普通支架组未出现增殖平滑肌细胞明显凋亡,肝外胆管有明显狭窄.结论:bcl-2表达与细胞凋亡发生和细胞对辐射敏感性有关;103附放射性支架通过降低bcl-2表达,促进胆管壁增殖平滑肌细胞凋亡,从而抑制肝外胆管狭窄.     

103钯放射性支架诱导胆管癌细胞凋亡及对抑癌基因的影响和意义

目的探讨103钯(103pd)放射性支架对p53抑癌基因在辐射诱导胆管癌细胞凋亡中的影响和意义。方法 12只裸鼠随机分2组,每组6只,在裸鼠胆管癌内分别植入103pd放射性支架和普通胆管支架,术后30 d取出胆管癌标本进行HE染色和p53基因原位杂交,DAB染色p53基因表达阳性者细胞质呈棕黄色,胆管癌细胞凋亡染色细胞核中有棕黄色浓染的为阳性细胞。结果103pd放射性支架组胆管癌细胞p53基因阳性表达率为89.63%,而普通支架组为21.76%,2组比较差异有统计学意义(P<0.01);103pd放射性支架组胆管癌凋亡细胞数明显大于普通支架组,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论103pd放射性支架可以激活p53基因,使其功能提高,诱导胆管癌细胞凋亡。     

103钯放射性支架对平滑肌肌动蛋白在犬胆管损伤愈合过程中的表达影响及意义

目的观察胆管内放射对平滑肌肌动蛋白(SMA)在犬胆管损伤愈合过程中的表达影响,探讨^103钯(^103Pd)放射性支架抑制胆管损伤后狭窄的作用及意义。方法通过犬肝外胆管损伤模型将^103Pd放射性支架和普通支架分别植入犬肝外胆管内,分别于手术后30d取材行SMA免疫组织化学SP染色观察。结果^103Pd放射性支架组犬胆管SMA表达较弱,而普通支架组却较强,但是^103Pd放射性支架组犬胆管腔狭窄程度比普通支架组轻。结论^103Pd放射性支架犬胆管内放射可以减弱SMA在胆管愈合过程中的表达,从而可以抑制胆管损伤后因胆管瘢痕性挛缩导致的胆管狭窄。     

尿道内放射与Bax/Bcl-2基因表达及细胞凋亡关系的实验研究

目的探讨^103Pd支架对雄性新西兰白兔尿道组织Bax/Bcl-2基因表达的影响及与细胞凋亡的关系。方法分别将普通支架和^103Pd同位素支架置入兔的尿道内,术后30d取尿道标本,采用免疫组化、Tunel方法检测尿道组织Bax/Bcl-2基因表达及细胞凋亡情况。结果放射性支架组尿道组织Bax蛋白表达明显上调,其阳性率为83.3%,明显高于普通支架组的16.7%（P﹤0.05）;Bcl-2蛋白表达降低,其阳性率为33.3%,明显低于普通支架组的83.3%（P﹤0.05）。放射性支架组成纤维细胞、平滑肌细胞等凋亡明显,细胞凋亡数为161.93±26.21,尿道无明显狭窄;普通支架组细胞凋亡不明显,细胞凋亡数为65.27±13.39,尿道出现不同程度的狭窄。结论103Pd放射性支架通过增强Bax基因表达、降低Bcl-2基因表达,可促进兔尿道组织细胞凋亡,抑制尿道损伤愈合过程中管腔的再狭窄。     

125I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖的作用

目的 探讨125I支架抑制犬胆管损伤后胆管平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄的可行性.方法 实验犬12 只(体质量15～18 kg),随机分为普通支架组和125I支架组各6 只.用切断吻合法,造成胆总管损伤.术后30 d胆道狭窄形成后,分组将普通支架及125I支架从胆总管末端开口处释放到胆总管内.置入支架后60 d 分别行病理形态学检测,用免疫组织化学方法测定P53蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen) 及平滑肌肌动蛋白(smooth muscle actin),并测定外周血和支架周围放射性.结果 支架置入后60 d,与普通支架组比较, 125I 支架组胆管最大内膜厚度显著减少(P<0.05),两组胆管狭窄面积百分比分别为(53.72±13.89) %和(17.34±9.28) %,差异有显著性(P<0.05), 125I 支架组胆管腔周长及胆管腔面积均较普通支架组明显增加(P< 0.05) ,125I支架组胆管平滑肌增殖细胞核抗原(PCNA) 及平滑肌肌动蛋白(SMA) 表达较弱,而P53蛋白表达增高,后者平滑肌PCNA 及SMA表达增高,而P53蛋白表达较弱.结论 125I 支架照射可抑制平滑肌细胞增殖,预防胆管再狭窄.     

103Pd支架对血管损伤后再狭窄的预防作用与对VSMC增殖和凋亡的影响

目的探讨 103Pd支架对再狭窄预防作用的量效关系与相应对VSMC增殖和凋亡的影响.方法 40只雄兔随机分为普通支架组和核素支架各剂量组(8只/组).支架置入术后8周行腹主动脉造影、免疫组化染色、有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)测定及细胞凋亡检测.结果核素支架组随剂量增加,支架段最小内径增大而狭窄程度减小;边缘段最小内径核素支架25 Gy和35 Gy组大于普通支架组(P＜0.05).支架段和边缘段PCNA阳性细胞比率及MAPK积分光密度,核素支架各组均小于普通支架组(P＜0.01),而凋亡指数,核素支架除5 Gy组外均大于普通支架组(P＜0.01).结论 103Pd支架可减少支架内狭窄程度,显示出量效关系,且不引起边缘再狭窄. 103Pd支架既抑制VSMC增生、移行也诱导凋亡细胞的数量增加.     

103pd放射性支架持续照射犬胆管放射性损伤的动物实验研究

目的 寻找动物胆管金属内支架植入方法，观察动物胆管植入^103pd(^103钯)放射性支架，胆管腔内照射的放射性损伤。方法 实验动物为雄性健康杂种犬，体重15-20kg。照射方法及条件：麻醉下经手术植入^103pd放射性金属支架于犬的胆管腔内，^103pd的方向性活度分别为3．4，4．5，6，7，8和10mCi，不同的放射性活度照射，30天后取出^103pd放射性金属支架和胆管标本进行放射性损伤的评价。结果 ^103pd的不同放射性活度照射犬的胆管后，在胆管HE染色片上，光镜下可见的胆管放射性损伤：放射性活度为3．4mCi时，粘膜损伤；放射性活度为6mCi时，损伤达肌层，放射性活度为10mCi时，损伤达外膜层，并出现胆管穿孔。根据不同放射性活度，胆管放射性损伤的效应曲线，得到ED50为7．64mCi。结论 ^103pd金属支架胆管腔内近距离照射有明显的剂量效应关系。此动物实验方法接近于临床，实验方法是可行和实用的。     

103Pd放射性支架植入犬胆管的可行性及安全性实验研究

目的观察动物胆管植入103Pd放射性支架后胆管腔内照射的放射性损伤。方法实验动物为雄性健康Beagle犬,体重9￣11kg。麻醉下经手术植入103Pd放射性金属支架于犬的胆管腔内,支架放射性活度分别为0、3.5、5.5、7.5、10mCi,植入30d后取出金属支架和胆管,胆管经组织切片HE染色,光镜下评价胆管放射性损伤,同时监测肝肾功能、血淀粉酶。结果放射性活度为3.5mCi时光镜下可观察到胆管黏膜损伤;放射性活度为7.5mCi时胆管放射性损伤达肌层;放射性活度为10mCi时未出现胆管穿孔。放射性支架对于周围脏器无损伤,安全性高。结论103Pd放射性支架胆管腔内近距离照射有明显的量效关系,为应用于临床治疗胆管恶性肿瘤提供了实验依据。     

Intrabiliary radiation inhibits smooth muscle formation and biliary duct remodelling after balloon overstretching injury in dogs

Background Internal metallic stents have been widely used in clinical practice, but a high postoperative restenosis rate limits its application. The purpose of this study was to determine the effect of intrabiliary radiation on muscle formation and biliary duct remodeling after biliary duct balloon injury in dogs. Methods Twenty male dogs (15-20 kg) were randomly divided into treatment group (n=10) and control group (n=10). Balloon overstretching injury was induced using a balloon catheter placed across the biliary duct. Subsequently, a 103Pd radioactive stent was positioned at the target site in each animal in the treatment group, providing the injured biliary duct with a radiation dose of 12.58×10(7) Bq. Dogs in the control group received Ni-Ti stents. All the dogs were killed one month after initial injury. The injured sections were dissected free from the dogs, and were processed for histological and morphological study. Cross-sections were stained with hematoxylin-eosin, Masson’s trichrome, and Verhoef-van Giesen. Muscle formation area and lumen area were determined using a computer-assisted image analysis system. Results Compared with the control group, 103Pd radioactive stents significantly reduced muscle formation area (78.3%, P＜0.01), and percentage area of stenosis ［control stents: (60.0±21.6)%, 103Pd radioactive stents: (31.6±9.5)%］. In addition, in the treatment group, the biliary duct lumen area was significantly larger than that in the control group (P＜0.01). Conclusions 103Pd radioactive stents providing a radioactive dose of 12.58×10(7) Bq are effective in reducing muscle formation and biliary duct remodeling after balloon overstretching injury.     

Induction of biliary cholangiocarcinoma cell apoptosis by 103Pd cholangial radioactive stent γ-rays

Background In recent years, interventional tumor therapy, involving implantation of intra-cholangial metal stents through percutaneous trans-hepatic punctures, has provided a new method for treating cholangiocarcinoma, ^103Pd cholangial radioactive stents can concentrate high radioactive dosages into the malignant tumors and kill tumor cells effectively, in order to prevent re-stenosis of the lumen caused by a relapsed tumor. The aim of the present study was to investigate the efficacy of y-rays released by the ^103pd biliary duct radioactive stent in treating cholangiocarcinoma via induction of biliary cholangiocarcinoma cell apoptosis.
Methods A group of biliary duct cancer cells was collectively treated with a dose of y-rays. Cells were then examined by the 3-（4,5-dimethyl thiazol-2-yl）-2,5-diphenyl terazolium-bromide （MTF） technique for determining the inhibition rate of the biliary duct cancer cells, as well as with other methods including electron microscopy, DNA agarose gel electrophoresis, and flow cytometry were applied for the evaluation of their morphological and biochemical characteristics. The growth curve and the growth inhibition rate of the cells were determined, and the changes in the ultrastructure of the cholangiocarcinoma cells and the DNA electrophoresis bands were examined under a UV-lamp.
Results The y-ray released by ^103Pd inhibited cholangiocarcinoma cell growth, as demonstrated when the growth rate of the cells was stunned by a y-ray with a dosage larger than 197.321 MBq. Typical features of cholangiocarcinoma cell apoptosis were observed in the 197.321 MBq dosage group, while cell necrosis was observed when irradiated by a dosage above 245.865 MBq. DNA agarose gel electrophoresis results were different between the 197.321 MBq irradiation dosage group, the 245.865 MBq irradiation dosage group, and the control group.
Conclusions ^103pd radioactive stents which provide a radioactive dosage of 197.321 MBq are effective in the treatment of cholangiocaminoma; ^103pd radioactive     

支架植入对兔血管平滑肌细胞PCNA和Cyclin E表达及细胞凋亡的影响

【目的】观察支架植入后对血管中膜平滑肌细胞增殖和凋亡的影响,探讨支架植入后再狭窄的发生机制。【方法】将雄性新西兰兔50只随机分为球囊组和支架组,设正常对照。分别于术后第3、7、14、28、56天取材研究①用免疫组化检测血管中膜平滑肌细胞中增殖细胞核抗原（PCNA）和细胞周期蛋白E（CyclinE）的表达;②用TUNEL染色法测定血管中膜平滑肌细胞的凋亡。【结果】与对照组比较,支架组和球囊组PCNA、CyclinE表达及细胞凋亡均有显著增加。支架组与球囊组比较,①PCNA和CyclinE表达明显增加,术后第7天,支架组和球囊组PCNA阳性率为24.36%±0.55%vs18.74%±1.09%(P<0.01),CyclinE阳性率为22.65%±1.00%vs17.68%±1.10%(P<0.01);②支架组血管中膜平滑肌细胞的凋亡也较球囊组显著增加,最大凋亡率在术后第7天,12.46%±1.13%vs5.54±0.53%(P<0.01);③PCNA和CyclinE的阳性率与平滑肌细胞凋亡阳性率的比值,球囊组大于支架组。【结论】支架组较球囊组导致明显的平滑肌细胞增殖,同时也导致更显著的平滑肌细胞凋亡,使支架植入后再狭窄的程度减轻。     

胃癌组织P53、PCNA蛋白表达及细胞凋亡的研究

目的探讨P53、PCNA蛋白表达和胃癌细胞凋亡关系及其它们在胃癌发生发展中的可能作用。方法采用TUNEL及流式细胞术分别检测60份胃癌、癌旁正常黏膜组织细胞凋亡和P53、PCNA蛋白表达。结果胃癌组织细胞凋亡率明显低于癌旁正常组织（〈0.01）;P53、PCNA蛋白在胃癌组织中的表达率明显高于癌旁正常组织（〈0.01）。胃癌P53阳性组细胞凋亡率低于P53阴性组,而PCNA平均荧光强度高于P53阴性组。低分化胃癌病例其P53、PCNA蛋白高于高中分化的病例。有淋巴结转移的胃癌病例其P53、PCNA蛋白高于无淋巴结转移的病例。结论胃癌组织中癌细胞凋亡明显受到抑制,胃癌组织中P53高表达及细胞增殖活跃状态在胃癌的发生发展过程中起重要作用。     

PCNA和bcl-2在金仓鼠胆管癌和胆管细胞增生中的表达

目的 建立肝内胆管癌（ICC）动物模型,观察增殖细胞核抗原（PCNA）和bcl-2在肝内胆管癌发生发展的病理过程中的表达。方法 60只6周龄雄性金仓鼠,随机分为正常对照组、单纯结扎胆总管组和二异丙醇亚硝胺（DIPN）组,分别在实验的5、10及15周分扎处死动物,观察其形态学变化。免疫组化SABC法检测胆管癌组织和胆管上皮细胞增生中PCNA和bcl-2的表达。结果 PCNA标记指数（PCNA LI）在胆管腺癌中最高（78.5%）,不典型增生（51.6%）、腺瘤样增生（50.3%0、胆管肠上皮化生（40.3%）、小胆管囊性增生（25.5%）和小胆管增生（23.6%）次之,正常胆管上皮（3.1%）最低（P＜0.01）。bcl-2在胆管组织癌变过程中的阳性表达率分别是：正常胆管上皮30％（3／10）、量管增生20％（2／10）、肠上皮化生20％（2／10）、腺瘤样增生40％（4／10）、不典型增生40％（4／10）、腺癌最高,为80％（8／10）（P＜0.05）。结论 PCNA标记指数在肝内胆管癌和胆管上皮细胞增生中明显高于正常胆管组织,提示胆管癌的发生有是从正常胆管组织到间变,再发展为胆管癌;抑制细胞凋亡的bcl-2的过表达可能是DIPN诱发的肝内胆管癌发生的重要机制。     

犬胆管金属支架诱导胆管内皮的增殖规律

目的 探讨胆管金属支架植入后胆管内皮随时间的增殖规律.方法 采用经皮经肝穿刺胆囊的途径于犬胆总管下段植入支架,随机分配入1、3、12、24个月4个时间组,分别取支架上段及支架覆盖段胆管组织,通过免疫组化方法检测各组胆管内皮PCNA和Ki-67的表达情况,并通过HE染色测量支架覆盖段胆管壁厚度,比较不同位置胆管内皮增殖水平的差异,比较相邻时间组支架覆盖段胆管内皮增殖活性及胆管壁厚度的差异,采用两随机样本t检验进行统计学分析.结果 共18只实验犬建模成功.免疫组化及病理结果显示各时间组支架覆盖段胆管内皮的增殖活性明显高于支架上段(P＜0.05);支架覆盖段胆管内皮的增殖活性及胆管壁厚度在支架植入后1个月内明显增高(P＜0.05),之后经过一个相对的增殖平衡期,在支架植入后3～12个月期间再次逐渐增高并维持高增殖状态(P＜0.05).结论 胆管金属支架能够诱导胆管内皮增殖,这种增殖活性在支架植入后3～12个月之间逐渐显现并加强,并在支架植入12个月以后继续维持.     

移植静脉平滑肌细胞凋亡及相关基因表达与增殖关系的动态研究

目的 探讨移植静脉狭窄发生机制。方法 建立１００只Ｗｉｓｔａｒ大鼠自体颈静脉移植与肾下腹主动脉模型。采用透射电镜、原位ＤＮＡ片断末端标记（ＴＵＮＥＬ）和免疫组织化学法、检测移植静脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）凋亡及相关基因ｂａｌ－２、ｂａｘ蛋白和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）的表达。结果 术后１￣８周,移植静脉ＴＵＮＥＬ及ＰＣＮＡ阳性ＶＳＭＣｓ多于对照静脉（Ｐ〈０．０１）;术后１￣２周为ＴＵＮＥＬ及Ｐ