敲低PRMT5基因表达对胃癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制

目的 观察蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）在胃癌细胞中的表达,探讨敲低PRMT5表达水平后对胃癌细胞生物学行为的影响。方法 Western blot检测胃癌细胞系MGC803、SGC7901、MKN45和人胃黏膜上皮细胞GES-1中PRMT5蛋白表达水平,转染siRNA1和siRNA2质粒敲低PRMT5的表达水平,细胞增殖和凋亡实验、Transwell实验分别检测细胞增殖能力、凋亡率和细胞的侵袭能力,Western blot检测β-catenin、Cyclin D1和Bax蛋白表达水平。结果 与GES-1细胞比较,MGC803、SGC7901和MKN45细胞中PRMT5蛋白表达水平增加（P<0.001）。敲低PRMT5表达后细胞的增殖和侵袭能力减弱,凋亡率增加（P<0.05）,β-catenin和Cyclin D1蛋白的表达降低,Bax蛋白的表达增加（P<0.001）。结论 PRMT5在胃癌细胞中表达水平升高,敲低其表达水平后可通过减弱Wnt/β-catenin信号通路转导抑制细胞的增殖和侵袭并促进细胞凋亡。     

TRIM5α对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨TRIM5α(Tripartite motif 5 alpha)对人肝癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 构建TRIM5α质粒,通过酶切、PCR和测序鉴定。将TRIM5α质粒转入人肝癌细胞株(HepG2),通过PCR、Western blot检测TRIM5α的表达。采用RTCA仪器实时检测细胞的增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞的凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果 本研究成功构建了TRIM5α质粒,RT-PCR和Western blot的结果显示构建的TRIM5α质粒可转入HepG2细胞中并且能够抑制肝癌细胞的增殖促进其凋亡。TRIM5α主要是通过抑制Bcl-2的表达,激活Caspase-3的表达从而引起肝癌细胞凋亡,并且TRIM5α还可抑制肝癌细胞体内成瘤。结论 TRIM5α可抑制人肝癌细胞的增殖促进其凋亡并抑制体内成瘤,为进一步研究其作用机制及其临床应用奠定基础。     

SHC SH2域结合蛋白1对肝细胞癌细胞恶性生物学行为的影响及其作用机制

目的:探究SHC SH2域结合蛋白1(SHCBP1)通过与驱动蛋白家族成员18A(KIF18A)相互作用对肝细胞癌(HCC)细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移及干性特征的调控作用。方法:ENCORI数据库分析SHCBP1、KIF18A在HCC组织中的表达以及与HCC患者总体生存率之间的相关性以及SHCBP1与KIF18A表达在HCC组织中的相关性。分析SHCBP1、KIF18A与HCC患者临床病理特征间的关系;STRING数据库预测SHCBP1与KIF18A间潜在的结合关系。体外培养人正常肝细胞系HHL-5、HCC细胞(Huh-7、SNU-449、Hep3B),实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测SHCBP1、KIF18A表达水平;CCK-8检测细胞活力;TUNEL、划痕和Transwell实验分别评估细胞凋亡、迁移和侵袭;体外成球实验检测细胞成球能力;Western blot分析凋亡、转移相关蛋白及干性标志物表达水平。结果:SHCBP1、KIF18A表达均与HCC患者肿瘤分化程度、脉管侵犯及远处转移之间具有显著相关性(均P<0.05);SH...     

着丝粒蛋白T在乳腺癌中表达及其启动子区变异的研究

目的：研究着丝粒蛋白T(CENP-T)在乳腺癌中的表达及生物学功能,并分析其基因启动子序列突变及甲基化程度。方法：用免疫组化法检测26对乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中CENP-T蛋白的表达;同时提取组织基因组DNA,测序分析CENP-T启动子区突变,及亚硫酸氢盐修饰后测序检测其启动子区CpG岛甲基化水平。另采用Western blot法检测MCF10A、MCF7和MDAMB-231细胞系中 CENP-T蛋白的表达。构建 CENP-T siRNA瞬时转染的 MCF7细胞系,Western blot法评价干扰的效果。敲减CENP-T的表达后,采用 MTT法和平板集落形成实验检测 MCF7细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡的变化。结果：乳腺癌组织中CENP-T蛋白表达水平低于癌旁正常乳腺组织,差异具有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中CENP-T启动子区检测出 C1417T、C1545T、C1628G共 3种突变,且启动子区甲基化水平增加 49.5%。细胞系中敲减 CENP-T基因表达后,MCF7细胞的增殖活性增强(P<0.05),集落形成能力增强(P<0.01),G2/M期细胞所占比例明显增加(P<0.01),细胞凋亡率下降(P<0.01)。结论：CENP-T蛋白水平表达下调促进乳腺癌细胞增殖且与启动子区序列突变及甲基化水平增加相关。此结果提示CENP-T表达下调与乳腺癌风险相关。     

下调UHRF1的表达在抑制肝癌进展中的作用

目的 探讨UHRF1的异常表达在肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）进展中的作用机制。方法 采用RT-PCR和Western blot法检测UHRF1在20例HCC标本中的mRNA和蛋白表达水平, Western blot法检测不同转移潜能的肝癌细胞HepG2、SMMC7721、MHCC97L和HCCLM3中的UHRF1 的表达水平;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,MTT法检测细胞增殖,Western blot 法检测BAX和BCL-2表达水平的改变,流式细胞术检测HCCLM3细胞周期和细胞凋亡的变化。结 果 UHRF1在肺癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调（P<0.05）,随着肝癌细胞转移潜能升高而UHRF1表达水平也依次升高（P<0.01）;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,HCCLM3细胞生长速度明显下降（P＜0.05）,HCCLM3细胞的促凋亡蛋白BAX表达水平明显上升,而抑凋亡蛋白BCL-2表达水平明显下降;UHRF1-siRNA干扰HCCLM3细胞48 h时,细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）;但UHRF1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 UHRF1基因在肝癌组织中表达上调,下调UHRF1的表达能够抑制肝癌进展,可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

TRIM59调控波形蛋白促进人肝细胞肝癌细胞的增殖与迁移

目的:探讨三结构域蛋白59（tripartite-motif protein 59,TRIM59)对于人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)细胞增殖与迁移的影响以及波形蛋白（vimentin,VIM）作为其中潜在调控靶点的相关性研究。方法:通过细胞培养和细胞转染得到所需要的人HCC细胞，采用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测其中TRIM59 mRNA的表达水平并通过蛋白印迹法（Western blot）检测TRIM59蛋白质的表达水平；采用慢病毒介导的基因沉默效应与TRIM59过表达质粒进行转染介导的基因过表达效应调控TRIM59 基因的表达，通过集落形成试验检测TRIM59处于不同表达水平时的肝癌细胞系的增殖能力差别；通过细胞划痕试验检测TRIM59 基因处于不同表达水平时HCC细胞的迁移能力差异；并通过考马斯亮蓝法（Bradford法）检测TRIM59基因处于不同表达水平时，VIM的表达情况，通过统计学方法研究TRIM59及VIM表达的相关性。结果:通过定量qRT-PCR与Western blot检测，在所选取的HCC细胞系中，TRIM59 mRNA及TRIM59蛋白质的表达量均高于普通肝细胞（P均<0.01）。细胞集落形成实验显示，在所选的肝癌细胞中，TRIM59的表达与HCC的细胞集落形成数量呈正相关（P均<0.01）。细胞划痕试验显示,TRIM59的表达与HCC的细胞迁移能力呈正相关（P均<0.05）。Bradford法检测显示,在所选取的HCC细胞系中，TRIM59蛋白质的表达与VIM的表达呈正相关（P均<0.01）。结论:TRIM59 促进人HCC细胞的增殖与迁移，可能是通过调控VIM表达而完成，可为HCC的靶向治疗提供新的靶点。     

ACCα在肝细胞癌中的表达及对细胞生长的影响

目的  探讨乙酰辅酶A羧化酶α（acetyl CoA carboxylase alpha，ACCα）在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma ，HCC）中的表达及其在HCC细胞生长中的调控作用。 方法 采用qRT-PCR及Western blot法检测30例HCC患者癌组织及其相应癌旁正常组织中ACCα mRNA与蛋白的表达。采用siRNA下调HCC SNU-368细胞中ACCα的表达后，采用MTS法检测细胞增殖能力，流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。结果 qRT-PCR及Western blot结果显示，HCC组织中ACCα mRNA与蛋白表达水平均显著高于癌旁正常组织（3.26±0.81 vs 1.88±0.64，P=0.021；3.41±0.71 vs 1.74±0.54，P=0.019）。下调ACCα表达后，HCC SNU-368细胞的增殖能力降低（P<0.01），细胞周期进程被抑制（P<0.05），细胞凋亡比例增多（P<0.01）。 结论 HCC细胞SNU-368中ACCα表达显著上调，可能通过诱导细胞周期进程并抑制细胞凋亡促进HCC细胞增殖，ACCα可作为HCC治疗的潜在靶点。     

SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨SGPL1在神经胶质瘤组织中的表达及其对神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法:在TCGA及PROGgene在线数据库中分析SGPL1在神经胶质瘤临床肿瘤组织及正常神经组织中的表达差异,并分析其表达与神经胶质瘤预后生存的关系;在神经胶质瘤细胞系U251和U87中分别敲降和过表达SGPL1,通过RT-qPCR和Western blot实验分别检测SGPL1的mRNA和蛋白表达水平;用CCK-8法、细胞克隆形成实验检测SGPL1敲降和过表达后细胞增殖变化;通过流式细胞术和caspase3/7酶活性试剂检测分析细胞凋亡变化,Western blot实验检测caspase3、PARP及CyclinD1等凋亡相关蛋白的表达;ELISA检测细胞内S1P含量;RT-qPCR检测S1PR5的表达水平;RNA-seq分析SGPL1在神经胶质瘤细胞中调控的信号通路;Western blot实验检测SGPL1敲降和过表达后Phospho-p38-MAPK、Phospho-ERK、Phospho-STAT3及Phospho-NF-κB(p65)的表达变化。结果:TCGA及PROGgene在线数据库分析表明SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与神经胶质瘤患者的预后生存成负相关。在U251中敲降SGPL1后细胞增殖受到抑制,细胞凋亡增加;在U87细胞中过表达SGPL1后能显著促进细胞的增殖能力。SGPL1表达对S1P信号通路无明显影响;RNA-seq结果表明SGPL1在神经胶质瘤细胞内调控细胞增殖死亡信号通路,SGPL1敲降和过表达可影响p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号的变化。结论:SGPL1在神经胶质瘤组织中高表达并与生存预后负相关。在神经胶质瘤细胞内SGPL1可调控p38-MAPK、ERK、STAT3及NF-κB(p65)等细胞增殖生长信号通路,其表达可影响神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡,可能是一个潜在的肿瘤标志物和治疗的分子靶点。     

三结构域家族蛋白22在宫颈癌中的表达及其对高危型人乳头瘤病毒阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

摘 要：［目的］ 探讨三结构域家族蛋白22（tripartite motif protein 22,TRIM22）在宫颈癌中的表达及其与临床病理学特征的关系,并分析TRIM22对高危型人乳头瘤病毒（human papilloma virus,HPV）阳性宫颈癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。［方法］ 收集2017年8月至2018年9月41例手术切除或活检的宫颈癌组织和18例正常子宫颈组织,分别提取总RNA和总蛋白。实时定量PCR分析TRIM22 mRNA表达,Western blot分析TRIM22蛋白水平,并分析TRIM22 mRNA表达变化与患者临床病理学特征的关系。以HPV16阳性宫颈癌细胞系CaSki和HPV18阳性宫颈癌细胞系HeLa为研究对象,用TRIM22表达质粒（pUNO1-hTRIM22a）和对照表达质粒（pUNO1）稳定转染CaSki细胞和HeLa细胞,以未转染细胞为对照组。实时定量PCR和Western blot检测转染后细胞中TRIM22 mRNA表达和蛋白水平。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）检测细胞增殖;Transwell细胞侵袭实验检测细胞侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测抗磷脂酰肌醇3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）和磷酸化AKT（phosphorylated AKT,p-AKT）蛋白表达。［结果］ TRIM22在宫颈癌组织中mRNA表达（0.99±0.16 vs 4.39±1.41,t=15.40,P<0.001）和蛋白水平（0.30±0.12 vs 1.32±0.27,t=19.97,P<0.001）均明显低于正常子宫颈组织,TRIM22在高危型HPV阳性宫颈癌组织中mRNA表达（0.94±0.14 vs 1.17±0.12,t=4.21,P<0.001）和蛋白水平（0.27±0.08 vs 0.43±0.18,t=3.86,P<0.001）均明显低于高危型HPV阴性宫颈癌组织。TRIM22 mRNA表达与淋巴结转移明显相关（1.04±0.16 vs 0.89±0.13,t=3.15,P=0.003）,与肿瘤大小、临床分期无明显相关（P>0.05）。pUNO1转染CaSki细胞和HeLa细胞与未转染细胞在TRIM22 mRNA和蛋白水平、细胞增殖、侵袭数、细胞周期、凋亡率、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达量的差异均无统计学意义（P>0.05）,pUNO1-hTRIM22a转染后CaSki细胞和HeLa细胞中TRIM22 mRNA和蛋白水平显著性高于pUNO1组和对照组（P<0.001）,细胞增殖、侵袭数量（CaSki细胞：31.00±5.30 vs 135.30±17.24 vs 120.40±22.95,F=56.01,P<0.001;HeLa细胞：27.20±9.04 vs 112.80±12.03 vs 117.00±18.56,F=67.45,P<0.001）、处于G2~M期的细胞比例（CaSki细胞：2.04%±0.36% vs 12.72%±1.98% vs 12.40%±1.62%,F=57.82,P<0.001;HeLa细胞：3.07%±1.08% vs 8.26%±2.98% vs 10.92%±3.56%,F=22.82,P<0.001）、PI3K、p-AKT蛋白表达量均显著性低于pUNO1转染细胞和未转染细胞,而凋亡率显著性高于pUNO1组和对照组（CaSki细胞：11.90%±2.78% vs 5.27% ±1.78% vs 6.64%±1.19%,F=16.78,P<0.001;HeLa细胞：18.79%±4.64% vs 6.78%±1.03% vs 5.23%±1.09%,F=27.91,P<0.001）。［结论］ TRIM22在宫颈癌中的表达明显减低,其表达水平与高危型HPV感染、转移恶化密切相关。上调TRIM22表达可明显减弱高危型HPV阳性宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力,促进宫颈癌细胞凋亡。     

TOP2A在非小细胞肺癌中的高表达促进肿瘤细胞的增殖和侵袭能力

目的:探讨编码拓扑异构酶Ⅱα的基因TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达情况及其生物学功能。方法:采用荧光定量PCR方法检测102例非小细胞肺癌及其癌旁组织中TOP2A的mRNA表达水平,Western blot检测其中5对组织中TOP2A蛋白表达水平,分析TOP2A 表达与非小细胞肺癌主要临床病理特征的相关性。干扰非小细胞肺癌细胞株A549和HCC827中TOP2A的表达,MTT法检测其表达对肿瘤细胞增殖的影响,Transwell法检测TOP2A表达下调对肿瘤细胞侵袭能力的影响。应用流式细胞术检测TOP2A敲降后细胞的凋亡率和细胞周期。结果:TOP2A在非小细胞肺癌组织中的表达水平相较癌旁组织明显上升（P<0.05）,干扰TOP2A的表达会抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和侵袭。流式细胞凋亡率实验结果显示转染siTOP2A后的非小细胞肺癌细胞早期凋亡率增加;流式周期分析显示siTOP2A转染后的细胞S期发生阻滞抑制细胞增殖。同时,TOP2A表达水平与非小细胞肺癌的肿瘤分期、淋巴结转移密切相关（P<0.05）。结论:TOP2A在非小细胞肺癌中表达上调,与肿瘤增殖和侵袭等生物学行为密切相关。     

lncRNA TUG1对肝癌细胞增殖及自噬水平的影响

目的:检测长链非编码RNA牛磺酸上调基因（taurine upregulated gene 1,TUG1）在肝癌组织中的表达情况,证实TUG1对肝癌细胞增殖和自噬能力的影响。方法:实时定量PCR检测50例肝癌组织标本以及相应癌旁组织中TUG1的表达水平以及在肝癌细胞系中的表达情况。通过将构建的TUG1过表达质粒转染肝癌细胞系SMMC-7721和HepG2,验证转染效率并采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况;Western blot检测自噬标志蛋白（LC3-Ⅱ/Ⅰ）表达变化;通过实时定量PCR筛选表达差异最显著的自噬相关基因并采用Western blot验证。结果:肝癌组织中TUG1的表达显著高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。TUG1能够显著促进肝癌细胞增殖能力（P<0.05）;并且过表达TUG1后增加了LC3-I向LC3-Ⅱ的转化,促进自噬水平的发生（P<0.05）;TUG1能够显著上调ATG7的基因和蛋白的表达。结论:在肝癌组织中TUG1表达高于癌旁组织;在体外细胞实验中发现,TUG1能够促进肝癌细胞增殖能力,并通过上调ATG7的表达诱导自噬的发生。     

THBS2在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的影响

目的:研究血小板反应蛋白2（thrombospondin 2,THBS2）在肺腺癌组织中的表达及其对肺腺癌细胞H1299和A549迁移能力、侵袭能力、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）的影响,并探究分子机制。方法:运用TIMER和GEPIA数据库分析THBS2 mRNA在泛肿瘤和肺腺癌组织中的表达,利用UALCAN数据库分析THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中的表达差异,通过HPA数据库检测THBS2蛋白在肺腺癌组织中的表达情况。通过免疫印迹实验（Western blot）检测THBS2在人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）和肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达情况。应用质粒转染技术在肺腺癌细胞H1299和A549中分别过表达和敲低THBS2。细胞划痕实验和侵袭实验（Transwell）检测细胞迁移和侵袭能力。Western blot验证THBS2过表达和敲低效率,同时检测EMT相关蛋白和MMP2的表达水平。结果:TIMER数据库与GEPIA数据库检索结果显示THBS2 mRNA在肺腺癌组织中高表达（P＜0.001）。UALCAN数据库分析证明,与正常肺组织相比,THBS2 mRNA在I-IV期肺腺癌组织中均显著表达（P＜0.001）。HPA数据库结果显示,THBS2蛋白在肺腺癌组织中呈现中高等强度表达。细胞划痕实验、Transwell实验和Western blot结果表明,THBS2在人正常支气管上皮细胞和肺腺癌细胞中的表达有显著差异（P＜0.01）;过表达THBS2可增加肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平减少,而N-cadherin和Vimentin表达水平增加（P＜0.01）;相反的,敲低THBS2可抑制肺腺癌细胞H1299和A549迁移与侵袭能力（P＜0.01）,EMT相关蛋白E-cadherin表达水平增加,而N-cadherin和Vimentin表达水平减少（P＜0.01）。结论:THBS2在肺腺癌组织中高表达;THBS2在肺腺癌细胞（H1299、A549）中的表达均显著高于人正常支气管上皮细胞（BEAS-2B）;THBS2在肺腺癌细胞H1299和A549中的过表达和敲低影响迁移、侵袭和EMT的过程,可作为肺腺癌治疗的新型潜在靶点。     

CISD2在肝细胞肝癌组织和细胞中的表达及其临床意义

目的:探究CDGSH铁硫结构域2(CISD2)在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织和细胞中的表达及临床病理意义。方法:采用免疫组织化学染色方法检测100例HCC肿瘤组织标本及46例癌旁肝组织标本中CISD2的蛋白表达水平，分析CISD2与临床病理特征、增殖相关蛋白Ki-67、患者生存率的相关性；运用Western blot法检测人HCC细胞株BEL7404、HepG2、SMMC-7721以及人正常肝细胞株L02中CISD2的表达，分析其表达差异。结果:CISD2在HCC肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁肝组织，CISD2在肝癌细胞株中的表达水平也明显高于正常肝细胞，差异有统计学意义(P＜0.01)。CISD2的表达与HCC患者的肿瘤大小（P＜0.05）以及Ki-67指数相关(P＜0.001)，CISD2高表达患者的总生存率低于低表达者。结论:CISD2在HCC组织和细胞中高表达，其表达水平与患者的预后有关。CISD2可能成为HCC预后判断的标志和治疗的潜在靶点。     

肿瘤坏死因子受体超家族成员21在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的 基于生物信息学分析探讨肿瘤坏死因子受体超家族成员21(TNFRSF21)在肝细胞癌(HCC)中的表达和预后价值、潜在的生物学功能及对免疫微环境的影响.方法 从高通量基因表达(GEO)数据库获取HCC细胞株数据集筛选共交集基因.从癌症基因组图谱(TCGA)数据库获取HCC样本数据信息,分析TNFRSF21表达与总生...     

长链非编码RNA MEG3对肝癌细胞增殖及自噬能力的影响

目的:探讨长链非编码RNA MEG3对肝癌细胞增殖及自噬能力的影响。方法:实时定量PCR检测60例肝癌组织标本以及相应癌旁组织中MEG3的表达水平，并检测MEG3在肝癌细胞系中的表达情况。通过质粒转染方法构建MEG3过表达的肝癌细胞Huh7和HepG2，采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况；Western blot检测自噬相关蛋白（LC3Ⅱ/Ⅰ、p62）表达变化；利用免疫荧光检测LC3变化情况。结果:MEG3在肝癌组织中表达低于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。肝癌细胞中过表达MEG3后，其细胞增殖能力显著降低（P<0.05）；并且过表达MEG3后能减少LC3-I向LC3-Ⅱ的转化，而p62表达升高（P<0.05）；免疫荧光可见明显LC3荧光斑点减少。结论:在肝癌组织中MEG3表达低于癌旁组织；在体外细胞实验中发现，MEG3能够抑制肝癌细胞增殖和自噬水平，有望成为肝癌治疗的潜在靶点。     

c-Myc靶向LncRNA SNHG3对乳腺癌细胞生物学作用的影响

目的:探讨miR-127-3p对卵巢癌细胞生物学行为的影响及其与KIF3B的关系。方法:选取SKOV3、HOSEpiC细胞。SKOV3细胞根据转染不同物质分为NC组、miR-NC组（miR-NC）、miR-127-3p组（miR-127-3p-mimics）、si-NC组（si-NC）和si-KIF3B组（si-KIF3B）。MTT评估增殖;Transwell分析迁移、侵袭;实时荧光定量PCR分析miR-127-3p、KIF3B mRNA含量;Western blot分析KIF3B蛋白表达。生物学、荧光素酶报告评估miR-127-3p与KIF3B的作用。结果:SKOV3细胞miR-127-3p水平低于HOSEpiC细胞（P＜0.01）,SKOV3细胞KIF3B蛋白、基因mRNA含量高于HOSEpiC细胞（P＜0.01）。与NC组、miR-NC组相比,48和72 h时miR-127-3p组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降（P＜0.05）,与NC组、si-NC组相比,48和72 h时si-KIF3B组细胞增殖、迁移和侵袭能力下降（P＜0.05）。与NC、miR-NC组比较,miR-127-3p组KIF3B蛋白表达水平下降（P＜0.01）。与WT-KIF3B组相比,miR-127-3p+WT-KIF3B组细胞荧光素酶活性下降（P＜0.01）。结论:卵巢癌细胞低表达miR-127-3p,高表达KIF3B,miR-127-3p上调可能通过KIF3B抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

ZW10相互作用着丝粒蛋白对神经母细胞瘤增殖的影响及机制研究

目的:探讨ZW10相互作用着丝粒蛋白(ZW10 interacting kinetochore protein, ZWINT)对神经母细胞瘤(neuroblastoma, NB)细胞增殖的影响及作用机制。方法:利用NB数据集分析ZWINT表达水平与NB预后及临床分期的关系。EdU实验、流式细胞术和γH2AX免疫荧光染色分别检测干扰ZWINT表达对NB细胞增殖、周期分布和DNA损伤修复能力的影响。免疫组织化学/蛋白质印记(Western blot)检测MYCN扩增和无扩增组织及细胞系中ZWINT的表达情况。荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测干扰/过表达MYCN对ZWINT表达的影响。在线预测ZWINT的启动子区域MYCN的结合位点,ChIP-PCR和荧光素酶实验验证MYCN靶向调控ZWINT表达。强力霉素诱导Tet-on MYCN SH-SY-5Y细胞过表达MYCN同时干扰ZWINT表达,检测ZWINT对MYCN介导的细胞增殖、周期和DNA损伤修复功能的影响。结果:ZWINT表达水平与NB患儿总生存率、无事件生存率呈负相关,其表达随NB分期升高而增高。ZWIN...     

LAMC3在肺腺癌中的表达及对细胞生物学行为的影响

目的:探讨层粘连蛋白亚基γ3（laminin subunit gamma 3,LAMC3）在肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）中的表达及对细胞生物学行为的影响。方法:通过在线生物信息学数据库GEPIA查询LAMC3在LUAD组织中的表达情况;收集2018年1月至2020年12月本院收治的行LUAD手术的48例LUAD患者的LUAD组织及癌旁组织,使用RT-qPCR检测了组织中LAMC3的mRNA表达水平,并分析LAMC3表达水平与LUAD患者临床病理特征的相关性。体外培养人LUAD细胞株（A549、H1299、PC-9）和人正常肺细胞株MRC-5,使用RT-qPCR和Western blot检测了细胞中LAMC3的mRNA和蛋白表达水平。将PC-9细胞分为5组:对照组（control组）、si-NC组、LAMC3沉默组、pcDNA3.1-NC组、LAMC3过表达组,采用小分子RNA干扰技术（siRNA）和pcDNA3.1质粒转染构建LAMC3沉默/过表达细胞,RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中LAMC3的mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测各组细胞增殖活力;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell小室实验检测各组细胞的迁移、侵袭能力;Western blot检测各组细胞中上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）相关蛋白［E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin,VIM）、基质金属蛋白9（matrix metalloproteinase 9,MMP-9）］的表达。结果:LAMC3在LUAD组织和细胞中低表达,且LAMC3低表达与肿瘤大小、TNM分期和淋巴结转移显著相关（P＜0.05）。沉默LAMC3后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力以及N-cadherin、VIM、MMP-9的表达升高,细胞凋亡率和E-cadherin的表达降低（P＜0.05）;过表达LAMC3后,细胞的增殖、迁移和侵袭能力降低,细胞凋亡率升高（P＜0.05）,且LAMC3过表达后细胞中E-cadherin的表达升高,N-cadherin、VIM、MMP-9的表达降低（P＜0.05）。结论:LAMC3在LUAD的发生发展中发挥着重要作用,过表达LAMC3可抑制LUAD细胞的增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与抑制EMT有关。     

TRIM59 通过结合 BCLAF1 调控人皮肤黑色素瘤 SK-MEL-2 细胞的恶 性生物学行为

目的：探究三结构域蛋白59（TRIM59）调控人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-2增殖、细胞周期、凋亡及迁移侵袭的作用机制，及其与Bcl2相关转录因子1（BCLAF1)之间的关系。方法：qPCR和WB法检测人表皮黑色素细胞HEMn-LP、人皮肤黑色素瘤细胞SK-MEL-2、UACC903、A375及36例邢台市人民医院2019年2月至2021年7月收集的皮肤黑色素瘤组织中TRIM59的mRNA和蛋白表达，使用脂质体将si-con、si-TRIM59转染至SK-MEL-2细胞中，WB法检测干扰TRIM59表达对细胞中周期蛋白D1（CCND1）、细胞周期素依赖性激酶2（CDK2）、肿瘤抑制蛋白基因（TP53）和 BCLAF1 蛋白表达的影响，CCK-8法、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell实验检测对细胞的活性、凋亡、迁移和侵袭的影响，免疫共沉淀（Co-IP）实验检测对细胞中TRIM59蛋白与BCLAF1结合能力的影响。结果：与HEMn-LP细胞相比，SK-MEL-2、UACC903、A375细胞中TRIM59 mRNA和TRIM59、BCLAF1蛋白均呈高表达（均P<0.05），SK-MEL-2细胞中TRIM59表达水平最高。相较于si-con组和Normal组，沉默TRIM59后，SK-MEL-2细胞的活性显著降低，细胞周期阻滞于G2期，CCND1、CDK2的蛋白表达显著降低，TP53蛋白和细胞凋亡率均显著升高，划痕抑制率明显升高，迁移侵袭细胞数明显降低（均P<0.05）。免疫共沉淀实验结果显示，TRIM59与BCLAF1之间存在蛋白结合关系。TRIM59与 BCLAF1 在肿瘤组织中的表达呈显著的正相关（r=0.878，P<0.001）。结论：干扰TRIM59表达能够抑制人皮肤黑色素瘤SK-MEL-2细胞的增殖、迁移和侵袭而促进凋亡，抑制SK-MEL-2细胞的恶性生物学行为，其机制可能与TRIM59结合BCLAF1有关。