甘露糖结合凝集素与儿童常见感染易感性的关系研究

目的 研究浙江省汉族儿童中甘露糖结合凝集素(MBL)基因多态性和蛋白水平与常见感染(反复呼吸道感染、急性呼吸道感染、CMV活动性感染、体表局部脓肿、中耳炎)易感性的关系.方法 用PCR和测序法对感染组和对照组儿童的MBL基因启动子区和外显子1区的6个突变位点进行检测和分型,用ELISA试剂盒检测两组儿童的血浆MBL蛋白浓度.结果 感染组和对照组均未检测到MBL基因外显子1区+223位点(C/T)和+239位点(G/A)的突变,对照组也未检测到启动子区+4位点(C/T)的突变.启动子区-550位点3种基因型HH、HL、LL在感染组和对照组的频率分别为43.1％、29.1％、27.8％和63.8％、17.1％、19.1％,两组间基因型频率差异有统计学意义(P＜0.05).启动子区和外显子1区所有基因型组合形成的完整基因型可分为与血浆蛋白浓度相关的“YA型”和“XB型”,两种完整基因型频率在感染组和对照组间差异有统计学意义(P＜0.05).感染组和对照组血浆MBL蛋白浓度均呈偏态分布.CMV感染组蛋白浓度低于对照组,急性呼吸道感染和局部脓肿组蛋白浓度高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 包括启动子区和外显子1区在内的MBL基因多态性与儿童常见感染的易感性具有一定相关性.     

单纯性热性惊厥患儿血浆甘露糖结合凝集素水平分析

了解单纯性热性惊厥患儿血浆甘露糖结合凝集素(MBL)水平。对2010年8月至2011年7月住院的61例单纯性热性惊厥患儿,采集急性期与恢复期全血标本各一份,同时收集来院参加入托体检的健康儿全血标本90份,应用ELISA法检测血浆MBL浓度。统计分析采用SPSS软件11.0版。结果显示,疾病组急性期和恢复期血浆MBL浓度分别为(610.4±549.6)ng/ml和(591.5±442.1)ng/ml,二者无显著性差异(Z=0.16,P=0.87),但疾病组急性期(Z=2.23,P=0.03)和恢复期(Z=2.03,P=0.04)血浆MBL浓度均显著低于对照组(765.9±559.9)ng/ml,疾病组血浆MBL浓度低于200ng/ml的个体显著多于对照组(χ2=10.84,P<0.01)。CRP与MBL值间无明显相关性。提示,血浆MBL水平低下导致机体易患呼吸道感染可能是本组大部分患儿发生热性惊厥的潜在诱因。     

汉族儿童MBL基因启动子-221位点、外显子I区SNP和基因单体型分析

研究浙江省汉族儿童MBL基因启动子-221位点和外显子I区单核苷酸多态性(SNP)、基因单体型与血浆MBL水平的关系。血浆MBL浓度的检测采用ELISA法,MBL基因SNP分析采用序列分析法,基因单体型分析采用SHEsis软件,统计分析采用SPSS软件11.0版。结果105例汉族儿童中MBL基因启动子区-221位点X/Y和Y/Y基因型分别占19%和81%,该位点变异频率为0.095;外显子I基因型A/A、A/B和B/B分别占69.5%、27.6%和2.9%,B型变异频率为0.167。基因单体型有YA、YB、XA三种,其中以YA最多见,频率为0.741,其次是YB,频率为0.164。血浆MBL浓度范围为3~6 025 ng/ml,中位数为1057 ng/ml,外显子A/A型的MBL浓度显著高于A/B型,后者又显著高于B/B型;而启动子Y/Y型的MBL浓度比X/Y型高。本研究中汉族儿童MBL基因外显子I区+230位点的变异频率为0.167,外显子I区+230位点变异可导致血浆MBL水平明显下降。     

EV71感染手足口病患儿临床表现与甘露糖结合凝集素表达及基因多态性相关性研究

目的 探讨EV71感染的普通手足口病患儿和重症患儿的临床表现差异与甘露糖结合凝集素(MBL)血清水平、基因多态性的相关性.方法 2009年6月至2011年7月在无锡市儿童医院门诊及住院EV71感染的手足口病患儿作为研究对象,用ELISA方法测定普通病例组、重症病例组的急重期和恢复期、对照组的血清MBL水平,同时对各组作MBL2基因测序,对比分析各组血清MBL,水平和MBL2基因6个常见位点变异频率.结果 重症循环肺衰竭组MBL的血清水平在危重急重期时较普通病例、重症病例脑炎组、对照组有显著升高(P＜0.05)；而在恢复期时,重症病例循环肺衰竭组血清MBI.水平较急重期低约40％,有显著降低(P＜0.05).普通病例组、重症病例组、对照组的MBL2基因启动子区-550位点H/H野生型、+4P野生型、+230位点B/B纯合变异型的变异频率有显著不同(P值分别为0.006、0.043、0.028).缺少型基因的LYPB/LYPB和充足型基因的HYPA/HYPA频率在3组间差异有统计学意义(x2=7.17,P=0.028;x2 =8.55,P=0.014).重症病例组的缺少型基因LYPB/LYPB频率较对照组、普通病例组有显著升高,而充足型基因HYPA/HYPA频率较对照组、普通病例组有显著降低.结论 MBL2基因多态性导致的血清MBL蛋白水平低下与感染EV71的手足口病患儿病情轻重相关,可以作为患儿免疫状况和手足口病危险因素评估依据之一.     

HLA-G14bp基因多态性与儿童Epstein-Barr病毒感染的相关性分析

目的 通过检测Epstein-Barr病毒(EBV)感染传染性单核细胞增多症(IM)患儿人类白细胞抗原G(HLA-G) 14 bp插入/缺失多态性及血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,探讨其与儿童EBV感染IM的相关性.方法 采用PCR结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)技术,对102例EBV感染IM患儿及165例正常对照儿童进行了HLA-G 14 bp插入/缺失多态性检测;采用ELISA检测了51例EBV感染IM患儿及146例正常对照儿童血浆sHLA-G水平.结果 EBV感染IM组与正常对照组HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性分布频率差异有统计学意义(X2=6.742,P=0.034),两组等位基因分布频率差异亦有统计学意义(x2=6.672,P=0.01);EBV感染IM组血浆sHLA-G水平明显高于正常对照组,经检验差异有统计学意义(Z=-9.472,P＜0.01),EBV感染IM组不同基因型间血浆sHLA-G水平差异有统计学意义(H=6.09,P=0.048),14 bp+/+基因型组血浆sHLA-G水平明显低于另两组基因型(Z=-2.376,P=0.018).结论 HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性与儿童EBV感染IM的发生有关,携带14 bp-/-基因型或缺失14 bp等位基因的儿童可能更易发生EBV感染.血浆sHLA-G水平可作为EBV感染IM的辅助诊断指标之一.     

CD40基因5'非翻译区_1位点C/T多态性与Graves病药物治疗停药后复发的相关性

目的:探讨CD40基因5'非翻译区(5'untranslated region,5'UTR)_1位点C/T单核苷酸多态性与山东青岛地区汉族人群Graves病(Graves disease,GD)及药物治疗停药后复发的相关性。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术测定198例GD患者(其中GD初发组80例,GD早期复发组84例,GD晚期复发组34例)和110例正常对照者CD40基因5'UTR_1位点的基因型,并计算其基因型及等位基因频率。结果:①CD40基因5'UTR_1位点的基因型及等位基因频率在GD组和正常对照组中的分布有显著性差异(χ2=23.133,P=0.000;χ2=13.372,P=0.000),GD组CC基因型频率明显高于正常对照组(23.7%vs11.8%),TT基因型频率明显低于正常对照组(7.6%vs26.4%),GD组C等位基因频率明显高于正常对照组(58.1%vs42.7%);②CD40基因5'UTR_1位点的基因型频率在GD初发组与GD复发组的分布有显著性差异(χ2=7.926,P=0.019);GD复发组TT基因型频率明显低于GD初发组(3.4%vs1...     

HLA-G14 bp基因多态性及血浆sHLA-G水平与儿童EV71感染的关系研究

目的 探讨人类白细胞抗原G(HLA-G) 14 bp插入/缺失多态性及血浆可溶性HLA-G(sHLA-G)水平与儿童肠道病毒71型(EV71)感染的相关性.方法 采用聚合酶链反应结合聚丙烯酰胺凝胶电泳(PCR-PAGE)技术,对125例EV71感染重症手足口病(HFMD)患儿及133例正常对照儿童进行HLA-G 14 bp插入/缺失多态性的检测;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测其中66例重型和15例危重型EV71感染HFMD患儿及133例正常对照儿童血浆中sHLA-G水平.结果 EV71感染重症HFMD组HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性14 bp-/-、14 bp+/-和14 bp+/+的频率分别为49.6％、42.4％和8.0％,正常对照组分别为34.6％、48.9％和16.5％,两组基因型多态性分布频率差异有统计学意义(x2=7.850,P=0.020);两组等位基因分布频率差异有统计学意义(x2=7.830,P=0.005,EV71感染重型组血浆sHLA-G水平明显高于正常对照组(Z=-9.692,P=0.000),危重型组血浆中sHLA-G水平明显高于重型组(Z=-2.420,P=0.016).结论 HLA-G 14 bp插入/缺失基因型多态性与儿童EV71感染有关联,血浆sHLA-G水平可作为EV71感染的辅助诊断指标.     

蒙古族与回族人群MBL结构基因型及其与血浆蛋白浓度的关系

目的：分析内蒙古自治区蒙古族人群和宁夏回族自治区回族人群血浆甘露聚糖结合凝集素（MBL）的结构基因型,并探讨其与血浆蛋白浓度的关系。方法：用ELISA法检测血浆MBL浓度,用序列分析法分析MBL基因外显子1区52、54和57密码子的单核苷酸多态性;统计分析采用SPSS软件11.0版,遗传学分析采用SHEsis软件。结果：79例蒙古族人和69例回族人血浆MBL浓度中位数分别为1686和1909ng/ml,两组间无显著性差异（Z=0.63,P=0.4）。蒙古族人群外显子1A/A型、A/B型和B/B型分别占62.0%、35.4%和2.5%,而回族人群A/A型、A/B型和B/B型分别占58.0%、30.4%和11.6%,蒙古族和回族人群＋230位点变异频率分别为0.203和0.268,两者变异频率无显著性差异（χ^2 1.772,P=0.183）。所有样本无C或D型外显子发现。A/A型外显子的血浆MBL浓度显著高于A/B型,后者又显著高于B/B型（χ^2 86.526,P〈0.01）。结论：蒙古族和回族人群MBL基因只有A/A,A/B和B/B3种外显子基因型,A/A型结构基因MBL浓度显著高于A/B型,又显著高于B/B型。     

亚甲基四氢叶酸还原酶基因突变与不明原因复发性流产的关系

目的探讨亚甲基四氢叶酸还原酶（methylenetetrahydrofolate reductase,MTHFR）基因C677T和A1298C突变与不明原因复发性流产（unexplained recurrent miscarriage,u RM）的关系。方法利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）和限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymorphisms,RFLP）方法,检测52例u RM患者（u RM组）和16例可孕妇女（对照组）MTHFR C677T和MTHFR A1298C位点多态性。结果 u RM组中MTHFR 677C/T（26.9%vs 25.0%,P=1.00）和677T/T（17.3%vs 6.3%,P=0.43）基因型频率以及T等位基因频率（30.8%vs 18.8%,P=0.19）高于对照组但无显著性差异;u RM组中MTHFR 1298 A/C（23.1%vs 18.8%,P=0.98）和1298 C/C（13.5%vs 12.5%,P=0.73）基因型频率以及C等位基因频率（25.0%vs 15.6%,P=0.27）高于对照组亦无显著性差异。结论我们的研究结果表明MTHFR C677T和A1298C基因位点突变可能与u RM无关。     

急性呼吸道腺病毒感染患儿血清细胞因子的动态变化

目的探讨急性呼吸道腺病毒（AdV）感染患儿的细胞因子水平,及其在腺病毒感染发病与发展中的致病作用及意义。方法采集临床住院患儿血清和咽拭子,分别用酶联免疫法（ELISA）及实时荧光定量PCR法检测AdV-IgM及AdV核酸,两者结果均为阳性者入选AdV感染组。采用流式细胞蛋白分析技术（CBA）检测20例AdV感染者急性期、恢复期和20例正常对照儿童血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ及IL-17A。结果 AdV感染患儿急性期血清中的IL-2、IL-4、IL-6、TNF、IL-17A水平显著高于恢复期和正常对照组（P〈0.01）;而血清中的IL-10、IFN-γ水平急性期显著低于恢复期和正常对照组（P〈0.05）;恢复期和正常对照组相比差异无统计学意义（P〉0.05）。结论儿童急性呼吸道腺病毒感染会引起细胞因子水平的改变,它们在血清中水平失衡,对发病及病情的发展有一定影响。     

肝炎综合征婴儿HCMV-IgM定量检测的临床价值

目的：探讨检测肝炎综合征婴儿血清中人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）IgM含量在诊断和动态监测婴儿HCMV感染中的临床意义。方法：ELISA检测了97例肝炎综合征婴儿（婴肝患儿）血清HCMV-IgM含量,并对其中48例HCMV-IgM阳性患儿在治疗过程中进行了血清HCMV-IgM定量和肝功能的动态监测。结果：97例婴肝患儿血清HCMV-IgM阳性率为49.48%（48/97）,HCMV肝炎患儿治疗前后血清HCMV-IgM定量检测均值分别为（27.7±3.92）、（12.84±2.87）IU/ml,HCMV肝炎患儿治疗后血清HCMV-IgM定量检测值显著下降（t=19.35,P〈0.05）,并与肝脏转氨酶及总胆红素的下降同步。结论：HCMV感染为婴肝患儿的主要病因,血清HCMV-IgM定量检测有助于婴肝患儿的诊断和婴儿巨细胞病毒性肝炎疗效观察。     

GGC54GAC MBL突变体的构建

目的：在人甘露聚糖结合凝集素（MBL）基因中引入GGC54GAC点突变。方法：设计上下游引物和诱变引物,以汉族人野生型MBLcDNA为模板,采用megaprimer-PCR技术进行定点突变。将PCR产物克隆至pGEM-T载体,酶切和测序分析。结果：以上游引物和诱变引物进行第一轮PCR,获得一约180bp的DNA片段,以此片段和下游引物行第二轮PCR扩增,得到一长约780bp的产物,将其克隆至pGEM-T载体,酶切了现第54位密码中的BanI酶切位点已被破坏,与计算机酶切图谱分析结果一致。序列分析表明,除第54位密码变为GAC外,余与野生型MBL cDNA完全相同。结论：构建成功了GGC54GAC MBL突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机制提供了分子病理模型。     

广东地区汉族人MBL基因GGC54GAC点突变的初步筛查

目的对广东地区汉族人群的甘露聚糖结合凝集素结构基因第一外显子第54位密码点突变(GGC54GAC)进行初步筛查.方法提取外周血白细胞DNA进行相应片段的PCR扩增,再对产物进行单链构象多态性分析.结果在166人中查出野生型纯合子147例,占88.55%,GGC54GAC突变杂合子19例,占11.45%,未发现GGC54GAC突变纯合子.结论广东地区汉族人群MBL基因GGC54GAC突变频率为0.057.     

巨细胞病毒感染与儿童免疫性血小板减少性紫癜的关系探讨

目的探讨人巨细胞病毒（HCMV）感染与儿童免疫性血小板减少性紫癜（ITP）的关系。方法采集154例ITP患儿（ITP组）和50例健康儿童（对照组）的血清样本,用Real-time PCR检测HCMV DNA,ELISA方法检测HCMV IgM、IgG抗体;其中105例ITP患儿和50例健康对照儿童采集了尿液标本,用Real-time PCR检测HCMV DNA,并比较ITP组HCMV DNA阳性患儿与阴性患儿的血小板数量的差异。结果 ITP患儿血清HCMV DNA、HCMV IgM及IgG抗体和尿HCMV DNA阳性率均明显高于健康对照儿童,两组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;ITP组HCMV DNA阳性患儿的血小板数量（29.72±14.54）×109/L与阴性患儿（41.28±18.35）×109/L比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论儿童感染HCMV可能是发生ITP的重要致病因素之一,这对指导临床有效治疗及预防ITP的发生有着积极的意义。     

儿童肺炎支原体感染检测MBL和CRP的意义

探讨肺炎支原体（MP）感染患儿血清甘露糖结合凝集素（MBL）和C-反应蛋白（CRP）水平变化的意义。用EL／SA和速率散射比浊法分别检测患儿血清MBL和CRP水平。结果显示,57例MP感染患儿MBL水平（3．64±1．72mg／L）和CRP（21．44±15．02mg／L）比对照组（2．18±1．05mg／L和2．76±1．81mg／L）显著增高（P〈0．001）。年龄小于8岁患儿MBL水平低于年龄大于8岁患儿,其中8例反复呼吸道感染患儿MBL水平（2．02±1．21mg／L）显著低于其它患儿（3．95±1．63mg／L,P〈0．01）。患儿恢复期CRP水平明显降低。结果提示,血清MBL和CRP水平可作为监测MP感染患儿天然免疫功能的指标,动态检测有助于评价疗效。     

中国汉族、维吾尔族人群甘露聚糖结合凝素基因多态性的检测

分别收集广东省汉族和新疆维吾尔族自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以多聚酶链反应扩增目的基因片段,应用荧光探针杂交可视技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因54位密码点突变(GGC54GAC)。从138份汉族样本中检出GGC54GAC突变型纯合子4例,占2.9%,杂合子30例,占21.74%;120份维吾尔族标本中,检出突变型纯合子3例,占2.5%,杂合子34例,占28.33%。因此,汉族和维吾尔族人群MBL基因GGC54GAC突变的频率分别为0.138和0.167,两民族间无明显差异。     

突变型和野生型MBL基因在COS7细胞中的瞬时表达

采用PCR技术,从质粒pMBLm52、pMBLm54和pMBLm57中分别获取含CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA点突变的人甘露聚糖结合凝集素(MBL)突变体全长编码区cDNA序列,将其分别插入质粒pcDNA4/HisMax C中,构建成相应的3种真核表达载体。将各突变型MBL基因的真核表达载体和野生型MBL基因真核表达载体以脂质体法分别转染COS7细胞。72 h后,以双抗体夹心ELISA技术检测各细胞培养上清中目的蛋白的含量分别为0.980μg/ml、0.971μg/ml、0.900μg/ml和1.047μg/ml;用One-way ANOVA分析这些目的蛋白的含量无显著性差异(P>0.05)。因此,MBL结构基因的点突变并不影响MBL蛋白的合成与分泌。     

Increased frequency of the mannose-binding lectin LX haplotype in Chinese systemic lupus erythematosus patients.

Mannose-binding lectin (MBL) is an important complement-activating protein of the human immune system. As a result of one of three structural gene mutations in exon 1 (variants B, C and D) and/or the presence of a low-efficiency promoter polymorphism, MBL deficiency may be associated with increased susceptibility to infectious diseases and to autoimmune disorders, including systemic lupus erythematosus (SLE). Using a combined approach of heteroduplex generator and polymerase chain reaction, a systematic search for mutations in exon 1 and the promoter region of the MBL gene was performed in a Chinese study population comprising 41 SLE patients and 111 healthy controls. Two alleles, a wild-type allele A and a variant allele B (a previously reported mutation of GGC to GAC at codon 54), were identified in MBL exon 1. The frequency of the B allele (0.15) was higher in the SLE patients than in the healthy controls (0.09), but the difference did not attain statistical significance (P > 0.05). However, for two polymorphisms at positions -550 and -221 in the promoter region, the frequency of the low-MBL-producing haplotype (LX) in the patients (0.2073) was significantly higher than that in the controls (0.0855) (P = 0.003, relative risk = 2.79). Our results suggest that the LX haplotype represents a strong risk factor among Chinese SLE patients. Although of lesser importance, the MBL B allele also may be a risk component in the developing process of SLE in Chinese patients.     

中国维吾尔族人群MBL基因启动子及第一外显子区SNP及其单倍型与基因型研究

收集新疆维吾尔族自治区维吾尔族一般人群血标本,提取白细胞基因组DNA,以序列特异性引物-多聚酶链反应技术检测其甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因启动子区单核苷酸多态性位点-550G/C(称H/L等位基因)、-221C/G(X/Y)、+4C/T(P/Q)和结构基因第一外显子点突变CGT52TGT、GGC54GAC和GGA57GAA(分别称为D、B、C等位基因,野生型即A等位基因),并分析其单倍型与基因型。发现MBL基因启动子区等位基因主要为L、Y、P,第一外显子等位基因只发现B,未检出C和D;检出5种单倍型,其频率分别是HYPA 0.282、LYPA 0.268、LXPA 0.260、LYPB 0.120、LYQA 0.070。检出12种基因型,其频率分别为HYPA/HYPA 0.183、LXPA/LXPA 0.141、LYPA/LYQA 0.113、LYPA/LYPA 0.112、LYPA/LXPA 0.085、HYPA/LYPA 0.085、LXPA/LYPB 0.085、HYPA/LXPA 0.070、HYPA/LYPB 0.042、LYPA/LYPB 0.028、LYPB/LYQA 0.028、YPB/LYPB 0.028。