微小RNA-3682-3p通过下调GAS8基因促进肝癌细胞迁移、侵袭的研究

目的探讨肝细胞癌中miR-3682-3p的表达情况、临床意义和作用机制。方法待实验所需肝癌细胞、正常肝细胞(L02)培养与转染后,采用实时定量PCR(qPCR)检测miR-3682-3p在肝癌组织、癌旁组织、L02细胞和肝癌细胞系中的表达情况,利用TCGA数据库分析正常肝组织、肝癌组织中miR-3682-3p的表达差异,分析miR-3682-3p的表达与肝癌患者临床病理特征、预后的关系;通过Transwell实验评价细胞侵袭、迁移能力;通过TargetScan数据库预测获得下游靶基因,采用qPCR、Western blotting法分析miR-3682-3p对生长抑制特异性基因8(GAS8)的表达的调控作用,并利用双荧光素酶报告基因实验加以验证。结果与癌旁组织和正常肝细胞比较,miR-3682-3p在肝癌组织、细胞系中均高表达(P0.05),并与门静脉侵犯、Edmondson分级、TNM分期有关;基于TCGA数据库数据的生存分析显示,miR-3682-3p高表达与不良预后相关;在MHCC97-H细胞中敲减miR-3682-3p显著抑制细胞的侵袭、迁移(P0.05);通过生物信息学预测加以实验验证证实GAS8是miR-3682-3p的直接靶基因,并通过回复实验证实GAS8介导了miR-3682-3p对肝癌细胞侵袭及迁移能力的促进作用。结论 miR-3682-3p在肝癌中通过靶向抑制抑癌基因GAS8从而促进肝癌细胞侵袭、迁移。     

微小 RNA-744-5p靶向整合素连接激酶对膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-744-5p(miR-744-5p)对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制.方法 选取2016年2月至2018年11月枣庄矿业集团枣庄医院接收的经病理确诊的56例膀胱癌病人病理组织切片,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测56例膀胱癌组织和对应癌旁组织中miR-744-5p表达水平.分别转染miR-744-5p模拟物(mimics)、miR-744-5p抑制剂或共转染miR-744-5p mimics与整合素连接激酶(ILK)过表达载体至膀胱癌BIU-87、T739细胞,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,蛋白质印迹法(Western Blotting)检测过细胞中细胞周期蛋白(Cyclin D1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP-2)和钙黏附蛋白E(E-cadherin)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证miR-744-5p与ILK调控关系.结果 与癌旁组织相比,膀胱癌组织中miR-744-5p表达水平显著降低[(0.98±0.10)比(0.25±0.02),P<0.05].过表达miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数及Cyclin D1和MMP-2蛋白表达降低(P<0.05),而P21和E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05).抑制miR-744-5p后,BIU-87和T739细胞OD值、迁移数和侵袭数升高(P<0.05).miR-744-5p靶向结合并负调控ILK,过表达ILK逆转过表达miR-744-5p对BIU-87和T739细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 膀胱癌组织中miR-744-5p呈低表达,过表达miR-744-5p可阻碍膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭,而抑制miR-744-5p则起相反的作用,其可能通过靶向负调控ILK表达发挥作用.     

虫草素通过调控miR-524-5p表达抑制口腔鳞癌HSC3细胞的增殖、迁移及侵袭

摘要：目的:探讨虫草素通过调控微小RNA-524-5p（miR-524-5p）表达对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响。方法:体外培养口腔鳞癌细胞HSC3,分别使用不同浓度(10,20,40μmol·L-1)的虫草素处理;采用甲基噻唑基四唑（MTT）检测细胞增殖; Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-524-5p的表达水平;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、p21、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达量;分别将miR-524-5p mimics或anti-miR-524-5p转染至HSC3细胞后,采用上述方法检测细胞增殖、迁移及侵袭。结果:与对照组比较,虫草素各浓度组细胞增殖抑制率显著升高（P<0.05）,迁移细胞数及侵袭细胞数显著减少（P<0.05）,Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白水平显著降低（P<0.05）,p21、E-cadherin蛋白水平及miR-524-5p的表达水平显著升高（P<0.05）,且虫草素浓度组间的上述指标比较差异均有统计学意义（P<0.05）; miR-524-5p过表达可抑制HSC3细胞增殖、迁移及侵袭,而抑制miR-524-5p表达可减弱虫草素对HSC3细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论:虫草素可能通过上调miR-524-5p的表达从而抑制口腔鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

miR-338-5p通过靶向TSHZ3促进膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨miR-338-5p通过靶向TSHZ3调控膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-338-5p在33例膀胱癌组织和癌旁组织中的表达;在膀胱癌T24和UM-UC-3细胞中分别转染mimics-NC、miR-338-5p mimics、inhibitor-NC和miR-338-5p inhibitor,qRT-PCR检测转染效率;采用CCK-8实验检测过表达或者敲低miR-338-5p对膀胱癌细胞增殖能力的影响;Transwell实验检测miR-338-5p对膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响;TargetScan、miRDB和Targetminer数据库预测miR-338-5p潜在的靶基因,选定靶基因TSHZ3;双萤光素酶报告基因实验和Western blot验证miR-338-5p和TSHZ3的靶向关系;在膀胱癌细胞中共转染miR-338-5p mimics和TSHZ3过表达质粒,通过CCK-8和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western blot检测过表达miR-338-5p或者TSHZ3对Wnt/β-c...     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

lncRNA LINC00858靶向微小 RNA-363-3p促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨LINC00858通过靶向miR-363-3p对肝癌HCCLM3细胞生物学行为的影响.方法 选取2017年1月至2019年1月青海省第五人民医院收治的肝癌病人30例,获取其肝癌组织及其癌旁组织.设置si-NC组、si-LINC00858组、si-LINC00858+anti-miR-NC组和si-LINC00858+anti-miR-363-3p组.实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测LINC00858和miR-363-3p表达水平;双荧光素酶报告实验验证LINC00858和miR-363-3p的靶向关系;CCK-8检测细胞增殖活性;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)法检测相关蛋白表达.结果 肝癌组织中LINC00858高表达(2.85±0.27),miR-363-3p低表达(0.58±0.05).LINC00858靶向调控miR-363-3p;抑制LINC00858能够上调p21表达,下调细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达,降低细胞活力、迁移数、侵袭数(P<0.05).干扰miR-363-3p表达逆转了抑制LINC00858表达对肝癌HCCLM3细胞增殖、迁移和侵袭的影响.结论 抑制LINC00858通过靶向上调miR-363-3p抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.     

circ-LRP6调控miR-515-5p/IL-6通路影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的 探讨环状RNA低密度脂蛋白受体相关蛋白6（circ-LRP6）对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法 选取44例卵巢癌患者的癌组织及癌旁组织,培养正常人卵巢上皮细胞HUM-CELL-0088及卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3、A2780,采用实时荧光定量PCR检测卵巢癌组织和细胞中circ-LRP6、微小RNA-515-5p（miR-515-5p）的表达水平;双荧光素酶报告实验检测miR-515-5p与circ-LRP6之间的靶向关系;将circ-LRP6干扰表达载体、miR-515-5p过表达载体、miR-515-5p抑制表达载体与circ-LRP6干扰表达载体转染至卵巢癌细胞SKOV3中,蛋白质印迹法（Western blotting）检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、基质金属蛋白酶（MMP）2、MMP9、白细胞介素6受体（IL-6R）蛋白的表达;CCK-8法检测SKOV3细胞活性;Transwell小室法检测细胞迁移和侵袭。结果 与癌旁组织及HUM-CELL-0088细胞相比,卵巢癌组织和SKOV3、OVCAR3、A2780细胞系中circ-LRP6表达水平显著升高,miR-515-5p表达水平显著降低（P<0.05）。双荧光素酶报告实验证实circ-LRP6可靶向负调控miR-515-5p的表达。低表达circ-LRP6或过表达miR-515-5p均可抑制Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,降低细胞活性,抑制细胞迁移和侵袭（P<0.05）。同时,抑制circ-LRP6和miR-515-5p表达可上调SKOV3细胞中Cyclin D1、MMP2、MMP9、IL-6R的表达,增强细胞活性,促进细胞迁移和侵袭（P<0.05）。结论 抑制circ-LRP6表达可能通过上调miR-515-5p抑制IL-6,从而抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭。     

基于网络通路调控食管鳞状细胞癌发生的分子机制

目的:探讨食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)中circSSPO/microRNA-6820-5p(miR-6820-5p)网络通路调控ESCC增殖、迁移和侵袭的可能分子机制。方法:对收集得到的ESCC组织样本进行RNA提取和全转录组测序和差异分析，使用流式细胞术检测细胞的凋亡水平，平板克隆检测细胞的增殖情况，Transwell迁移和侵袭实验检测细胞的迁移与侵袭情况。结果:生物信息学预测和RNA测序结果筛选得出circSSPO和miR-6820-5p与ESCC的进展相关，在ESCC中，miR-6820-5p低表达，circSSPO高表达。而且通过体外细胞实验进一步证明circSSPO可以通过抑制miR-6820-5p从而诱导ESCC细胞致癌特性。结论:circSSPO是一种在ESCC组织中丰富表达的致癌circRNA,并且circSSPO/miR-6820-5p网络通路与ESCC的增殖、迁移和侵袭有关。     

微小 218?5p调控 Wnt家族成员 2B抑制骨肉瘤细胞 143B的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨肉瘤细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法 2016年1月至2019年1月,实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在骨肉瘤与正常骨组织及正常成骨细胞株与骨肉瘤细胞株的表达差异.应用CCK-8法检测过表达miR-218-5p对人骨肉瘤细胞株143B增殖的影响;细胞划痕实验检测和Transwell小室实验检测过表达miR-218-5p对骨肉瘤细胞143B迁移能力的影响.同时,应用在线miRNA靶基因预测软件预测miR-218-5p的靶基因,并应用荧光素酶报告实验进行结合位点验证.蛋白质印迹法验证靶基因的蛋白表达水平.结果 miR-218-5p在骨肉瘤组织中的表达水平(0.59±0.21)％明显低于正常骨组织,骨肉瘤细胞系中的表达水平(0.712±0.015)％、(0.685±0.016)％、(0.542±0.021)％、(0.524±0.011)％明显低于正常成骨细胞,P<0.05.同时,与对照组相比,过表达miR-218-5p(miR-218-5p mimic)的骨肉瘤细胞143B的细胞活力t6h(0.274±0.011),t24h(0.514±0.04),t48h(0.828±0.16),t72h(1.212±0.013),侵袭(164±12)个和迁移距离(26±2.4)％明显减弱,P<0.05.应用TargetScan网站进行预测,结果显示Wnt家族成员2B(WNT2B)为miR-218-5p的潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验结果表明miR-218-5p直接靶向WNT2B;蛋白质印迹法证实miR-218-5p过表达组细胞中WNT2B蛋白的表达水平较对照组明显减少.结论 miR-218-5p在人骨肉瘤组织和癌细胞中低表达,其可能通过靶向WNT2B抑制骨肉瘤细胞143B的增殖、迁移和侵袭.     

miR-125a-5p对卵巢癌细胞的增殖迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨miR-125a-5p对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用的靶基因。方法 购入正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC,卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910各1株,通过实时定量聚合酶链式反应（RT-PCR）检测人卵巢上皮细胞HOSEpiC以及卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平。利用生物信息学方法预测miR-125a-5p的靶基因,构建预测靶基因3’端非编码区（3’-UTR）的野生型（WT）和突变型（mut）荧光素酶报告基因质粒,通过双荧光素酶报告基因法验证miR-125a-5p与预测靶基因的靶向作用。利用慢病毒感染的方法建立稳定过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞,使用荧光定量PCR和Western blot检测靶基因的表达水平。利用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞增殖能力的变化,通过Transwell迁移和侵袭试验分析过表达miR-125a-5p的SKOV3细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 正常人卵巢上皮细胞HOSEpiC中miR-125a-5p的表达水平高于卵巢癌细胞SKOV3、A2780、ES2和HO8910中miR-125a-5p的表达水平,其中SKOV3中miR-125a-5p的表达水平最低,差异均有统计学意义（P<0.05）,选择SKOV3进行后续实验。生物信息学分析显示,miR-125a-5p能够靶向结合Rab3D的3’-UTR;双荧光素酶报告基因分析证实miR-125a-5p能够靶向作用于Rab3D的3’-UTR。筛选稳定表达miR-125a-5p和si-Rab3D及相应对照的SKOV3细胞,分别命名为SKOV3/miR-125a-5p组,SKOV3/si-Rab3D组,SKOV3/miR-NC组和SKOV3/si-NC组。在SKOV3/miR-125a-5p组中,Rab3D的表达水平低于SKOV3组和SKOV3/miR-NC组,差异均有统计学意义（P<0.05）。细胞增殖能力检测结果显示,与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,SKOV3/miR-125a-5p组在72小时和96小时细胞增殖能力降低,差异有统计学意义（P<0.05）。Transwell迁移和侵袭试验结果显示,SKOV3/miR-125a-5p组分别与SKOV3组和SKOV3/miR-NC组相比,细胞迁移和侵袭能力均显著下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 miR-125a-5p能够靶向作用Rab3D,抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

微RNA-182-5p激动剂和抑制剂对肝癌细胞增殖和迁移的影响

目的研究微RNA(miR)-182-5p激动剂和抑制剂对肝癌细胞增殖和迁移的影响。方法采用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹法检测非肝细胞癌(HCC)肝组织,HCC组织及邻近组织标本中miR-182-5p的表达水平以及RND3的mRNA/蛋白表达水平。建立患者来源的HCC细胞培养物,并进行miR-182-5p激动剂和抑制剂转染处理,以分别模拟miRNA的过表达和敲减。通过Transwell细胞侵袭实验监测体外HCC细胞的迁移。通过细胞活力和增殖评价体外HCC细胞的生长。结果与非HCC或邻近的HCC组织相比,HCC组织中的miR-182-5p明显上调,与RND3 mRNA表达呈负相关。使用miR-182-5p激动剂可显著降低HCC细胞中RND3 mRNA/蛋白质表达水平。通过荧光素酶试验和顺乌头酸酶2(AGO2)-RNA免疫沉淀分析,验证了miR-182-5p对RND3 mRNA具有靶向作用。MiR-182-5p激动剂可显著降低RND3表达,促进HCC细胞体外迁移和侵袭,可能是通过Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)和ROCK2的抑制来实现。结论miR-182-5p可以通过靶向RND3来提高体外HCC细胞的迁移和增殖。使用miR-182-5p抑制剂,可以抑制体外肝癌细胞的迁移和增殖。     

长链非编码 RNA SNHG16靶向微小 RNA-7-5p对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA SNHG16对喉癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其作用机制.方法 选取2016年10月至2018年12月重庆医科大学附属第三医院收治的25例喉癌病人,于术中切取喉癌组织及其相应癌旁组织并冻存.体外培养喉癌Hep-2细胞,Hep-2细胞,按照随机数字表法分为si-NC组(转染无意义干扰序列si-NC)、si-SNHG16组(转染si-SNHG16)、si-SNHG16+anti-miR-NC组(共转染si-SNHG16与anti-miR-NC)、si-SNHG16+anti-miR-7-5p组(共转染si-SNHG16与anti-miR-7-5p).采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测喉癌及其癌旁组织中SNHG16、微小RNA-7-5p(miR-7-5p)的表达.采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)、Transwell实验检测抑制SNHG16表达后Hep-2细胞的增殖、迁移及侵袭能力的变化.生物信息学预测SNHG16的靶标miRNA,双荧光素酶报告实验验证SNHG16与miR-7-5p的靶向作用.抑制miR-7-5p表达验证SNHG16对Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭的作用.结果 喉癌组织中SNHG16的表达水平较癌旁组织升高(P<0.05),miR-7-5p的表达水平明显降低(P<0.05);与si-NC组相比,si-SNHG16组抑制SNHG16的表达后可明显抑制Hep-2细胞的增殖能力[48 h:(0.95±0.09)比(0.47±0.05),P<0.05],迁移[(124±12)比(51±5),P<0.05]及侵袭细胞数[(115±11)比(43±4),P<0.05]减少;SNHG16可靶向结合miR-7-5p;抑制miR-7-5p可逆转抑制SNHG16对Hep-2细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用.结论 抑制SN-HG16表达可负性调控miR-7-5p的表达而减弱喉癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.     

舒芬太尼调控 miR-1抑制肝癌细胞 MHCC97-H增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的 探讨舒芬太尼调控微小RNA-1(miR-1)表达对人肝癌MHCC97-H细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 本研究起止时间为2018年3月至2019年9月,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测不同浓度的舒芬太尼对人肝癌MHCC97-H细胞活力的影响,qRT-PCR检测舒芬太尼对MHCC97-H细胞中miR-1表达的影响;通过脂质体转染法将miR-1抑制剂(inhibitor)及阴性对照转染至MHCC97-H细胞,实验分为Control组、舒芬太尼(Sufentanil)组、转染对照(Sufentanil+NC)组和转染(Sufent-anil+miR-1)组.细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测各组MHCC97-H细胞增殖能力,Transwell实验检测各组MHCC97-H细胞侵袭能力,划痕实验检测各组MHCC97-H细胞迁移能力,蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组MHCC97-H细胞中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达情况.结果 不同浓度的舒芬太尼对肝癌MHCC97-H细胞活力具有不同程度的抑制作用;与Control组比,Sufentanil组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(1.00±0.09)比(2.25±0.24)]明显升高(P<0.05),细胞增殖[(0.54±0.05)比(0.34±0.03)]、侵袭[(106.24±8.25)个比(51.34±5.02)个]和迁移能力[(37.36±4.01)％比(16.34±1.72)％]降低(P<0.05),MMP-2[(0.33±0.04)比(0.15±0.02)]和MMP-9[(0.24±0.02)比(0.11±0.01)]的表达下调(P<0.05);与Sufentanil+NC组比,Sufentanil+miR-1组MHCC97-H细胞中miR-1的表达[(2.20±0.21)比(1.42±0.15)]明显降低(P<0.05),细胞增殖[(0.32±0.03)比(0.46±0.04)]、侵袭[(52.36±5.14)个比(91.16±6.06)个]和迁移能力[(17.11±1.71)％比(29.85±3.10)％]升高(P<0.05),MMP-2[(0.15±0.02)比(0.27±0.02)]和MMP-9[(0.13±0.01)比(0.19±0.02)]的表达上调(P<0.05).结论 舒芬太尼可通过调控miR-1的表达抑制人肝癌MHCC97-H细胞的增殖、侵袭和迁移,其机制可能与调控MMP-2和MMP-9表达有关.     

LINC00691负调控miR-512-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨LINC00691对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞恶性生物学行为的影响。方法 RT-qPCR检测30例NSCLC患者癌组织和对应癌旁组织中LINC00691和miR-512-5p的表达。双荧光素酶报告基因实验验证LINC00691和miR-512-5p的靶向关系。将A549细胞分为si-NC组、si-LINC00691组、miR-NC组、miR-512-5p组、si-LINC00691+anti-miR-NC组和si-LINC00691+anti-miR- 512-5p组,MTT和克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术、Transwell检测细胞凋亡、迁移和侵袭,Western blotting检测细胞中Ki67、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 LINC00691在NSCLC癌组织中表达水平上升（P<0.05）,而miR-512-5p表达水平下降（P<0.05）。LINC00691在A549细胞中负调控miR-512-5p。沉默LINC00691表达或过表达miR-512-5p可降低A549细胞的存活率、克隆形成数、迁移和侵袭数以及Ki67、N-cadherin蛋白表达水平,提高其凋亡率,上调Cleaved-caspase3、E-cadherin蛋白表达水平（P<0.05）。沉默miR-512-5p表达逆转了沉默LINC00691表达对A549细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用及凋亡促进作用。结论 沉默LINC00691可能通过靶向上调miR-512-5p表达来抑制NSCLC细胞的增殖、迁移和侵袭,并促进其凋亡。     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00094对A549细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用和对细胞凋亡的促进作用。结论 LINC00094可靶向抑制miR-19b的表达,从而抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-331—3p在肝细胞癌中表达的研究

目的运用实时荧光定量PCR（qRT—PCR）技术检测miR-331—3p在肝癌细胞株和肝癌组织中的表达,探讨其在肝癌中表达的临床意义及潜在临床价值。方法采用基于2^-△△Cr的qRT—PCR检测miR-331—3p在正常肝细胞株（HL-7702）、不同侵袭转移能力的肝癌细胞株（HepG2、MHCC97-H、HCCLM3）的表达,同时收集5例正常肝组织、30例肝癌组织及癌旁组织,进行定量分析,并分析miR-331—3p与肝癌患者临床病理特征的关系。结果与正常肝细胞株相比,miR-331—3p在肝癌细胞株中表达下调,且随着肝癌细胞株侵袭转移程度增加,其表达下调越明显（P〈0．05）;与正常肝组织相比。肝癌组织中miR-331—3p有不同程度的表达下调（P〈0．05）,且与肝癌患者肿瘤多发结节（P=0．036）、低分化程度（P=0．035）以及伴有静脉浸润（P=0．016）等临床病理特征相关。结论miR-331-3p在肝癌的发生、发展过程可能发挥重要作用,miR-331—3p有望成为肝癌新的生物标志物或预后因子。     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的 探讨MicroRNA-129-2(miR-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路.方法 将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为miR-129-2 mimics高表达组和miR-129-2 mimics阴性对照组(miR-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组.体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达.采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力.结果 miR-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较miR-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与miR-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);miR-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);miR-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而miR-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05).结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关.