催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶

催化神经毒剂梭曼水解的抗体酶赵毅民荣康泰徐勤惠（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）梭曼是难防难治的有机磷毒剂．为了寻找新的解毒途径，本研究设计并合成了全新化合物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯．此化合物可竞争性地抑制梭曼水解酶...     

梭曼水解酶及活性肽片

梭曼水解酶及活性肽片刘昌玲，姜厚理，孙曼霁军事医学科学院毒物药物研究所（北京１００８５０）梭曼水解酶广泛存在动植物组织和微生物中，本文阐明了几种来源不同组织和细菌中提取的梭曼水解酶及水解梭曼的活性肽片。牛肝和微球菌中提取了梭曼水解酶，它们水解梭曼的米...     

脯氨肽酶在军事医学中的应用

应用酶清除神经性化学毒剂及有机磷农药的研究课题已有 5 0多年。 194 6年Mazur[1] 首次报道了兔组织中一种酶有水解二异丙氟磷酸酯 (DFP)的能力。 1992年国际生化组织 (TheInternationalUnionofBiochemistry)将此酶定义为有机磷酸酸酐水解酶 (Organophophorusacidanhydrolase ,OPAA ,E .C .3.1.8.2 )。它能水解多种有机磷酸乙酰胆碱酯酶抑制剂 ,包括DPF、神经性化学毒剂梭曼 (Soman)、沙林 (Sarin)和塔崩 (Tabun)以及杀虫剂对硫磷 (parathion)和对氧磷 (paraoxon)等。酶法去污染及化学毒剂的销毁意义重大。以前曾根据水解底物的不…     

人 G类有机磷毒剂水解酶的性质(英文)

观察了部分纯化的人肝 G类毒剂水解酶 ( G酶 )的一些生化性质 .二硫苏糖醇 ( 5mmol·L-1)使G酶活性在 37℃ ,30 min内抑制 35% ;对氯汞苯甲酸 ( 1 - 1 0 0 0 μmol· L-1)不影响 G酶活性 .说明二硫键对酶分子的三维结构至关重要 ,而没有游离巯基参与酶的催化反应 .人肝 G酶专一性地水解带P- F键的有机磷化合物梭曼 ,但不催化带 P- O,P- C或 P- S键的有机磷化合物的反应 .     

鱿鱼神经节的有机磷毒剂水解酶

<正> 作者用华氏呼吸检压法测定了软体动物鱿鱼太平洋褶桑鱼(Todarodes pacificus Steenstrup)的神经节部位的有机磷毒剂水解酶活力,并进行了初步分离。结果发现鱿鱼的脑、头部神经节、星状神经节均含有较丰富的水解酶,此酶可水解DFP和梭曼两种毒剂。 依利诺斯工学院Hoski曾对此酶进行过纯化,但未提及电泳纯度的鉴定。我们用0.01 M pH7.5的磷酸缓     

人的基因工程氨酰基脯氨酸二肽酶的多效酶活性(英文)

目的　研究人氨酰基脯氨酸二肽酶除催化水解C端为脯氨酸残基的二肽外 ,是否还有G类有机磷化合物水解酶 (G酶)活性。方法　用基因工程技术克隆及表达人的重组氨酰基脯氨酸二肽酶。氨酰基脯氨酸二肽酶及G酶活性用常规方法测定。结果　COS 7细胞表达的人氨酰基脯氨酸二肽酶催化有机磷化合物梭曼的水解 ,也水解二肽化合物Gly Pro。两种活性比未转染的COS 7细胞高 2倍。比较转染了带有氨酰基脯氨酸二肽酶基因的重组载体的COS 7细胞和对照组细胞中的两种酶活性 ,可以看到有平行的升高趋势及恒定的酶活性比值。结论G酶和氨酰基脯氨酸二肽酶为同一个酶 ,或至少属于同工酶     

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度

微量电鳐乙酰胆碱酯酶抑制法测定低剂量梭曼浓度刘星，陈起展梭曼是一种能对机体内乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）强烈抑制而产生毒性的有机磷化合物。我们在Ｈａｍ－ｍｏｎｄ［１］等建立的微量ＡＣｈＥ抑制法测定微量有机磷毒剂浓度基础上改进，建立了一种新型的测定方法，其...     

神经性毒剂中毒对动物心脏损伤的研究

神经性毒剂从结构上可分为Ｇ类毒剂 (主要包括沙林、梭曼、塔崩 )和Ｖ类毒剂 (ＶＸ)。它和有机磷农药杀虫剂一样 ,同属于有机磷酸酯类化合物 ,具有毒性大、作用迅速、防治困难等特点 ,是外军装备的主要化学战剂之一。作为有机磷化合物 ,神经性毒剂的主要中毒机制是抑制乙酰胆碱酯酶活力 ,使乙酰胆碱不能很快被酶水解 ,造成乙酰胆碱在中枢及外周神经系统的蓄积 ,进而诱发一系列胆碱能神经亢奋症状。中毒者出现流涎、肌颤、大汗、缩瞳、步态不稳、呼吸困难、心律不齐、惊厥及昏迷等 ,严重时危及患者生命。在神经性毒剂急性中毒的致死原因中 ,…     

过氧化氢酶对梭曼水解的催化作用

本文就过氧化氢酶与梭曼反应的性质进行了研讨，证明过氧化氢酶是催化梭曼水解的反应物，而不是简单的“中和”反应物；过氧化氢酶催化梭曼水解的米氏常数为０．２ｍｍｏｌ·Ｌ－１．叠氮化钠对过氧化氢酶催化梭曼和过氧化氢反应的影响是不同的，这种差别意味着过氧化氢酶分子具有两个分离的活性部位。     

人血清对氧磷酶的部分纯化及解毒效应

目的　寻求对氧磷酶 (paraoxonase ,EC 3.1.8.1)作为外源性抗毒剂对抗G类有机磷毒剂的可能性。方法　采用亲和凝胶柱层析进行了人血清对氧磷酶的部分纯化 ,测定了其对于不同底物的米氏常数 (Km)以及钙离子对于酶活性的影响 ,比较了不同种属的对氧磷酶活性 ,采用体外解毒 ,体内染毒的方法检测了对氧磷酶对于不同的底物的作用。结果部分纯化的对氧磷酶对于梭曼和对氧磷均有较好的催化水解作用。以对氧磷为底物时 ,Km 值为 0 .2 2mmol·L- 1,比活性为 375 μmol·min- 1·g- 1蛋白 ;以梭曼为底物时 ,Km 值为 0 .6 0mmol·L- 1,比活性为 4 34μmol·min- 1·g- 1蛋白。不同种属来源的血清对氧磷酶的活性差异较大 ,是造成不同种属动物对有机磷毒剂中毒敏感性差别的原因之一。部分纯化的对氧磷酶在含 1mmol·L- 1CaCl2 的缓冲液中活性良好 ,加入乙二胺四乙酸 (EDTA)后 ,无论以对氧磷或梭曼为底物 ,酶活性均受到明显抑制 ,表明人血清对氧磷酶是钙离子依赖性酶。EDTA的pI50 约为 1.8mmol·L- 1。人血清对氧磷酶能有效地水解对氧磷、梭曼、沙林、塔崩及敌敌畏 ,但对VX及乐果无效 ,表明其对P F、P CN及P O键有选择性 ,对P S键无作用。结论　对氧磷酶可作为G类毒剂的抗毒剂     

神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的…

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯ＰＩ５０为７．９－９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林＝ＶＸ＞塔崩，肟类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ－６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯 酶的重化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则母，且不药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显     

二乙酰单肟和硝苯地平对梭曼中毒小鼠的保护

羟酸酯酶（ｃａｒｂｏｘｙｌｅｓｔｅｒａｓｅ,ＣａＥ）,是一组能催化水解羟酸酯生成羟酸和乙醇的同工酶,在体内主要分布于肝、肺、血浆、小肠等组织器官。研究表明,梭曼中毒时不仅抑制乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）,而且还可逆性结合并抑制ＣａＥ。ＣａＥ与梭曼结合可使体内游离梭曼浓度降低,从而减轻梭曼对靶部位ＡＣｈＥ的抑制。因此ＣａＥ作为内源性毒剂清除剂已引起了人们的广泛重视。那么,通过加速梭曼抑制的ＣａＥ的重活化,或扩张外周血管增加血浆ＣａＥ与梭曼的结合,充分调动ＣａＥ在体内解毒潜力,可能对提高梭曼的防治水平有…     

神经性毒剂对人脑乙酰胆碱酯酶的抑制及肟类药物的重活化作用

本文观察了神经性毒剂沙林，梭曼，塔崩和ＶＸ对纯化人脑乙酰胆碱酯酶的抑制作用及肟类药物对这些毒剂抑制的酶的体外重活化作用。结果表明，毒剂抑制人脑乙酰胆碱酯酶的ｐＩ５０为７．９一９．１，毒剂的抑制能力为：梭曼＞沙林≈ＶＸ＞塔崩，脂类药物氯磷定，双解磷，双复磷和ＨＩ一６对沙林和ＶＸ抑制的人脑乙酰胆碱酯酶的重活化作用非常显著，但对梭曼和塔崩抑制的酶则弱，且不同药物对这两种毒剂抑制的乙酰胆碱酯酶的重活化作用也明显不一样，与大鼠脑乙酰胆碱酯酶的实验结果相似。     

S—腺苷—L—高半胱氨酸水解酶及其抑制剂的研究进展

ＳＡＨ水解酶是人体内的基本代谢酶之一，８０年代以来，它作为一种新的抗病毒靶点而受到广泛的重视。对近年来有关ＳＡＨ水解酶的结构以及ＳＡＨ水解酶抑制剂作为抗病毒剂的研究进行了综述讨论。     

血浆中游离梭曼的电鳐乙酰胆碱酯酶抑制测定法

梭曼是一种对体内乙酰胆碱酯酶 (ＡＣｈＥ)有强烈抑制作用的有机磷化合物。由于梭曼毒性强且在体内降解迅速 ,国外目前主要通过大进样量气相色谱或气 质联用方法来检测[1,2 ] ,其优点是 :(1)灵敏度较高 ,如检测下限可达1 5 ｐｇ/ｍｌ血浆 ;(2 )可以将梭曼的 4个异构体分开 ,以便研究各异构体在体内的动力学过程。不足之处是 :检测设备价格昂贵 ,样本的预处理过程比较繁琐 ,检测时间较长 ,不适合临床上对毒剂浓度的快速检测。基于ＡＣｈＥ活性抑制测定有机磷毒剂浓度的文献也有报道 ,优点是灵敏、简便[3 ] 。然而 ,该法在检测血浆中残留梭曼…     

黄杆菌对硫磷水解酶及大肠杆菌过氧化氢酶无水解梭曼活性

黄杆菌对硫磷水解酶及大肠杆菌过氧化氢酶无水解梭曼活性邵煌孙曼霁（军事医学科学院毒物药物研究所，北京１００８５０）黄杆菌（Ｆｌａｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．ｓｔｒａｉｎＡＴＣＣ２７５５１）和缺陷假单胞菌（ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｄｉｍｉｎｕｔａＭＧ）的对...     

缺氧条件下有机磷毒剂梭曼对大鼠心肌损伤的实验研究

有机磷毒剂——梭曼是难防难治的神经性毒剂之一,其主要中毒机理是对机体乙酰胆碱酯酶(AChE)的抑制,造成胆碱能神经系统功能紊乱,引起中毒症状[1,2]。缺氧条件下梭曼中毒是可能发生在高原缺氧地区的一种特殊的化学中毒损伤,是在一种损伤(缺氧或梭曼中毒)的基础上加上另一种致伤效应(梭曼中毒或缺氧),无疑将使这种特殊损伤伤情和致伤机制复杂化,并增加救治难度。1　材料与方法1.1　动物和药品Wistar大鼠,体重(210±20)g,雌雄不限,由第三军医大学实验动物中心提供;梭曼,纯度94.6%,由军事医学科学院毒物药物研究所提供,临用时配制丙二醇-生理…     

羧酸酯酶在梭曼解毒中的作用

羧酸酯酶 (CaE)也称脂族酯酶 ,是一组能催化水解羧酸酯生成羧酸和乙醇的同工酶 ,活性中心含有丝氨酸残基。研究表明 ,小鼠按 5mg·kg- 1iv及5 0mg·kg- 1ipCaE的专一性抑制剂甲苯基苯代二烷磷苷氧化物 (CBDP)后 ,梭曼则对小鼠的毒性分别增加了 15 .6 ,19.6倍 ,提示CaE在体内发挥了重要的解毒作用。CaE的解毒机制 ,目前认为有 2种 ,一种是水解机制 ,即对有机磷化合物酯键的水解作用 ;另一种是代谢转化机制 ,即CaE活性中心的丝氨酸羟基与梭曼的磷原子相互作用 ,使CaE发生膦酰化。CaE在体内分布广泛 ,但主要集中在肠道和肝脏中 ,这两个器官其结合部位约占CaE总结合部位的80 %。但由于梭曼、沙林等在肝脏中的通过比例极小 ,所以肝脏、肠道这两个庞大的“CaE库”并未发挥出其应有的解毒潜力。相比之下 ,处于第一屏障关卡的血液和肺脏中的CaE虽然仅占机体总结合部位的 3% ,但却在梭曼解毒中发挥了至关重要的作用 ,研究证实 ,梭曼对动物毒性的种属差异、性别差异、年龄差异与其血浆、肺脏中CaE活性差异相一致。CaE在体内有着巨大的解毒潜力 ,如能通过CaE诱导 ,CaE重活化 ,改变血流分布 ,使更多的梭曼向肝脏、肠道中分布 ,就有可能提高机体的内在解毒能力 ,那么在梭曼解毒中将有重要意义     

4种高毒有机磷化合物体外稳定性及小鼠染毒后体内活性持续时间

目的 评价梭曼、沙林、塔崩和维埃克斯(VX)4种有机磷化合物的体外稳定性及小鼠染毒后毒剂分子在血液中活性持续时间，为有机磷化合物中毒救治中药物的使用频率和给药时间等提供参考和指导。方法 (1)有机磷化合物体外稳定性评价。梭曼、沙林和VX分别用无菌水稀释1×10⁵倍，塔崩用无菌水稀释1×10⁴倍，将以上稀释好的4种有机磷化合物再分别用PBS稀释100倍后置37℃恒温培养箱孵育，分别在0,10,20,40,90,120和240 min取出一定量有机磷化合物与乙酰胆碱酯酶(AChE)溶液0.2 g·L^-1反应，采用Ellman法测定AChE活性，并计算酶活抑制率。(2)有机磷化合物染毒小鼠后血液分离物对AChE活性抑制作用。将4种有机磷化合物配置成不同浓度梯度后对KM小鼠进行腹部皮下染毒，以组内小鼠未出现死亡时的最高使用剂量为随后建模的动物染毒剂量，在该剂量染毒后分别于0,10,20,40,90,120和240 min取全血，采用超滤离心法分离各时间点体内残留的有机磷化合物并采用Ellman法测定其对AChE活性抑制率。结果 ...     

梭曼单链抗体的基因克隆和表达

成功地扩增了有机磷毒剂梭曼类似物１－羟基－１－对胺基苯基甲膦酸单频哪基醇酯与血蓝蛋白结合物免疫小鼠脾细胞中抗体重链和轻链基因片段，构建了单链抗体可变区基因（ＶＨ－ｌｉｎｋｅｒ－ＶＬＤＮＡ），并将该基因克隆到噬菌体表达载体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ的外壳蛋白ｇ３ｐ基因中，使单链抗体以融合蛋白的形式在Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１中表达在噬菌体表面，构成噬菌体抗体库．通过免疫亲和淘洗和竞争抑制酶联免疫吸附测定法筛选，得到１２株克隆，其分泌的单链抗体与梭曼有结合活性．