滇重楼内生真菌的分离及其抑菌活性

目的 从滇重楼新鲜植株中分离内生真菌并研究其代谢产物抑制人体病原细菌的能力.方法 滇重楼新鲜植株表面消毒后, 采用YPD平板分离培养内生真菌.各菌株的液体发酵物经乙酸乙酯萃取并浓缩.然后, 以金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、屎肠球菌3种可感染人体的细菌为指示菌, 采用滤纸片琼脂扩散法测定抑菌活性.结果 分离到54株内生真菌.其中20株内生真菌有抑菌活性, 活性菌株占总菌株数量的37%.其中, J09对上述3种细菌的抑菌圈直径分别为 (49.67±1.25) mm、 (50.33±0.52) mm、 (37.00±1.63) mm, 经形态学观察及分子生物学鉴定, J09为灰黄青霉.同时, 经高效液相色谱检测确定, 该抑菌成分并非青霉素或灰黄霉素.结论 内生真菌 (J09) 的代谢产物抑菌活性较强, 具有开发抗菌药物的潜在价值.     

金叶女贞内生真菌分离及抑菌活性

［摘要］目的　探讨金叶女贞内生真菌的多样性及其次生代谢产物抑制细菌活性．方法　采用植物组织块培养分离法从金叶女贞茎和叶中分离内生真菌,分别进行YPD液体培养,将培养物过滤后用丙酮萃取次生代谢产物,以大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为试验指示菌株,用滤纸片法分别测定次生代谢产物对3种供试菌的抑菌活性．结果　从金叶女贞茎和叶中共分离得到29株内生真菌,有25株内生真菌对试验菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的86.2%．不具抗菌活性的菌株为4株,占总分离菌株的13.8%．结论　金叶女贞茎、叶中均存在丰富的内生真菌资源,其次生代谢产物具有良好的抑菌活性．     

1株滇重楼内生真菌的研究——抑真菌活性及分离鉴定

目的 分离滇重楼内生真菌,研究其抑制病原性真菌的作用并进行分类鉴定.方法 从滇重楼植株中分离培养内生真菌.在体外,用指示菌株金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、普通变形杆菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌及白色念株菌进行抑菌活性筛选.对具有抑制白色念珠菌的内生真菌菌株进行培养,观察显微形态特征,确定其分类地位.结果 从滇重楼的根中分离到一株内生真蒲菌株,对白色念株菌有较强抑制作用,鉴定为尤孢菌群.结论 滇重楼内生真菌无孢菌群菌株LRF4具有抑制白色念珠菌的作用.     

忽地笑内生菌的分离及发酵产物抑菌活性研究

目的 探讨忽地笑内生菌的分离及发酵产物抑菌活性.方法 从忽地笑鳞茎中分离内生菌,分别进行发酵培养,采用其发酵浓缩液做体外抑菌试验,观察对常见病原菌的抑制作用.结果 从忽地笑鳞茎中分离出10株内生菌,其中真菌L-10对金黄色葡萄球菌和白色念珠菌均有不同程度的抑制作用,其抑菌圈直径分别达到15、11 mm.结论 忽地笑内生菌可以产生具有抑菌活性的次生代谢产物,为新型抗菌药物的筛选提供了新的分离途径.     

3种仙人掌植物内生真菌抑菌活性的研究

目的从墨西哥仙人掌、元江仙人掌、绿仙人掌的肉质茎中分离内生真菌,并进行初步鉴定及活性筛选。方法选择30种病原微生物作为指示菌进行抑菌试验。结果从3种仙人掌的茎中分离出111株内生真菌,其中49株内生真菌对一种或多种病原微生物有抑制作用,来自墨西哥仙人掌、元江仙人掌、绿仙人掌的抗菌活性菌株比例分别为48.4%、42.9%及42.3%,其中平板抑菌直径大于15mm的高抗菌株有20株。抗菌活性菌株主要分布于青霉属、曲霉属等19个属中。结论首次从仙人掌中分离和鉴定出111株内生真菌,仙人掌内生真菌中广泛分布着活性菌株。     

贵州5种药用植物内生菌的分离及次级代谢产物研究

目的 分离筛选具有抗菌活性及抗肿瘤活性的药用植物内生菌.方法 采集贵州地道药用植物大黄、刺梨、杜仲、白芍和刺五加等5种组织材料,经表面消毒、无菌匀浆后,用改良的GYM培养基和TWYE培养基进行分离,利用耐药大肠杆菌、耐药金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌及白色链球菌等测试菌和稻瘟霉模型对分离菌株的发酵产物进行筛选,并通过HPLC对活性菌株发酵产物做进一步分析.结果 分离得到植物内生菌180株,其中46株有不同程度的抗菌活性,占分离菌株总数的25.6％,58株菌有不同程度的抗稻瘟霉活性,占分离菌株总数的32.2％.结论 5种药用植物中内生菌种类极其丰富,且有活性的菌株所占比例较高,HPLC检测有新的紫外吸收峰,值得对其次级代谢产物进一步研究.可见贵州药用植物具有丰富的活性内生菌资源,有巨大的开发研究价值.     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌。方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定。结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3%,其次是不产孢真菌Sterile mycelia（28.1%）和链格孢属Alternaria sp.（21.9%）。各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少。共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性。对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune。结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径。     

植物内生真菌的抗菌活性研究

目的　研究植物内生真菌的抗菌活性。方法　在紫金山和栖霞山采集的 18种健康植物中共分离得到了 1838株内生真菌 ,分属于 4 6个类群分别测定对发酵液乙酸乙酯提取物的抗菌活性 ,对药用植物络石活性菌株头孢菌Tj5R代谢产物进行富集与分离并进行活性追踪。结果　在检测的 2 33株内生真菌发酵液乙酸乙酯提取物的抗菌实验中 ,15 6株内生真菌的代谢产物对一种或多种测试真菌或细菌具有一定的抑制作用 ,其中 15株具有很强的抗菌活性。在药用植物络石的活性内生菌株头孢菌Tj5R富集的固体发酵代谢产物中分离得到的 8个化合物中有 3个化合物表现出抗菌作用 ,其中一个化合物对白色念珠菌的MIC值为 1.95 μg/mL ,比阳性对照酮康唑 (MIC值 3.9μg/mL)活性要强。 结论　内生真菌的代谢产物普遍具有一定的抗菌作用      

蚌花内生真菌类群分布及抗菌、抗肿瘤活性的初筛

目的 分析蚌花内生真菌的类群分布,并筛选具有抗菌和抗肿瘤活性的内生真菌菌株.方法 通过菌落特任、显微孢子观察及基于ITS序列分析的分子鉴定方法分析蚌花各部位内生真菌的类群组成,采用酶标仪法和MTT法对35株代表性内生真菌发酵液的抗菌活性和抗肿瘤活性进行筛选.结果 从蚌花的叶、花瓣、花蕊共分离到310株内生真菌,叶中以球座菌属(53.1％)、刺盘孢属(29.2％)为主要类群,花瓣的主要类群为刺盘孢属(39.1％)和曲霉属(24.5％),花蕊的主要类群为青霉属(47.1％)和曲霉属(41.4％).35株代表性内生真菌发酵液的抗菌、抗肿瘤活性分析结果显示,对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌、痢疾杆菌、伤寒沙门菌和白色假丝酵母菌具有抑制作用的活性菌株比例分别为80.0％、57.1％、40.0％、45.71％、28.57％和45.71％,对肝癌细胞BEL-7402和乳腺癌细胞MCF-7具有抑制作用的活性菌株分别占85.71％和68.57％.结论 蚌花内生真菌的类群分布具有一定的组织特异性;蚌花内生真菌的代谢产物具有较高比率的抗菌和抗肿瘤活性,有望成为筛选新型抗菌和抗肿瘤药物的重要资源库.     

滇重楼内生灰黄青霉抑菌产物的热稳定性

目的 对1株滇重楼内生灰黄青霉的代谢产物108号洗脱物进行成分分析和热稳定性研究, 并与阿莫西林的热稳定性进行对比.方法 采用薄层色谱法和柱色谱法分离提纯该菌株的次生代谢产物;在体外以金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、屎肠球菌为指示菌, 检测108号洗脱物抑菌效果 (纸片法) , 根据抑菌圈直径对比108号洗脱物与阿莫西林的热稳定性.结果 从该灰黄青霉次生代谢产物中, 分离得到组分108号洗脱物.经紫外扫描法及薄层色谱分析, 初步判定分离产物108号洗脱物为单一化合物.常温下, 其对3种不同指示菌的抑菌圈依次为24 mm、25.3 mm、7.6 mm;经121.3℃加热处理后, 与阿莫西林相比, 该化合物对指示菌均保持了较稳定的抑菌圈直径.结论 化合物108号洗脱物可以耐受高压蒸汽灭菌, 在一定程度上具有较强的热稳定性.     

桃儿七内生真菌分离及其抑菌活性初步研究

目的 探明桃儿七内生真菌资源多样性及其抑菌活性特征。方法 通过组织块法对内生真菌进行分离,并选择5种植物病原真菌和4种细菌作为指示菌,采用对峙法和改进的菌块法测定抑菌活性。结果 从桃儿七根、茎、叶中分离出49株内生真菌,根部最多,22株,其次为茎部,18株,叶部最少,9株;经形态学分类鉴定归于2个目,3个科,9个属,梭孢霉属为优势菌属;有22株菌对1种或多种供试植物病原真菌有不同程度的抑制作用,占分离菌株数的44.8%,有8株菌对2种或多种供试植物病原真菌有明显的抑制作用,其占所分离菌株总数的16.3%,有3株菌对4种或多种供试植物病原真菌有明显抑制作用,2株内生真菌分别对2种供试指示细菌具有明显的抑制作用。结论 桃儿七内生真菌具有多样性和明显的抗外源真菌活性,抑菌活性菌株主要分布在曲霉属、单孢枝霉属、梭孢霉属,其内生真菌的研究和开发具有重要的生态和经济意义。     

Polyketide and benzopyran compounds of an endophytic fungus isolated from C innamomum mollissimum: biological activity and structure

ObjectiveTo study bioactivity and compounds produced by an endophytic Phoma sp. fungus isolated from the medicinal plant Cinnamomum mollissimum.MethodsCompounds produced by the fungus were extracted from fungal broth culture with ethyl acetate. This was followed by bioactivity profiling of the crude extract fractions obtained via high performance liquid chromatography. The fractions were tested for cytotoxicity to P388 murine leukemic cells and antimicrobial activity against bacteria and pathogenic fungi. Compounds purified from active fractions which showed antibacterial, antifungal and cytotoxic activities were identified using capillary nuclear magnetic resonance analysis, mass spectrometry and admission to AntiMarin database.ResultsThree known compounds, namely 4-hydroxymellein, 4,8-dihydroxy-6-methoxy-3-methyl-3,4-dihydro-1H-isochromen-1-one and 1-(2,6-dihydroxyphenyl) ethanone, were isolated from the fungus. The polyketide compound 4-hydroxymellein showed high inhibitory activity against P388 murine leukemic cells (94.6%) and the bacteria Bacillus subtilis (97.3%). Meanwhile, 4,8-dihydroxy-6-methoxy-3-methyl-3,4-dihydro-1H-isochromen-1-one, a benzopyran compound, demonstrated moderate inhibitory activity against P388 murine leukemic cells (48.8%) and the fungus Aspergillus niger (56.1%). The second polyketide compound, 1 (2,6-dihydroxyphenyl) ethanone was inactive against the tested targets.ConclusionsThese findings demonstrate the potential of endophytes as producers of pharmacologically important compounds, including polyketides which are major secondary metabolites in fungi.     

竹黄菌发酵液萃取物的抗菌活性研究

目的 进行竹黄菌的人工培养，并对其发酵液的抗菌活性进行研究以筛选天然抗菌新药。方法 采用限定性培养基质，对竹黄菌进行发酵培养，然后用乙酸乙酯萃取发酵液，对萃取物进行体外抗菌实验。结果 从野生竹黄菌分离得到竹黄菌无性型3株，并摇瓶发酵，发酵液的乙酸乙酯萃取物体外抗菌试验表明：对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)为0．4mg／mL，最低杀菌浓度(MBC)为3．19mg／mL。对白地霉和黑曲霉的MIC和MBC均为0．024mg／mL。结论 竹黄菌发酵液中具有天然抗菌活性物质，且抗菌作用明显，有较广的抗菌谱。     

小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究

目的 分析小连翘(Hyperioums sampsonii Hance)内生真菌的分布特征和抗菌活性.方法 采用内生菌分离法分离菌株,双培养法对峙试验测定其抗菌性.结果 从小连翘的根、茎、叶等不同的器官中分离得到81株内生真菌,经形态学分类鉴定分属于4个目,5个科,26个属,其中头孢霉属(Cephalosporium sp.)和丝核菌属(Rhizoctonia sp.)为优势菌群.不同部位内生真菌的类型、数量和分布存在差异,根部有31株,分属于12属;茎部有12株,分属于10属;叶部有38株,分属于13属.通过平板对峙实验发现,从小连翘所分离的内生真菌中54.32%对某些植物病原真菌有拮抗活性.结论 小连翘内生真菌及其代谢产物中具有潜在活性物质,值得深入研究.     

黎药角花胡颓子提取物不同极性部位抗菌活性研究

目的研究角花胡颓子水提取液及石油醚、乙酸乙酯、正丁醇各萃取部位的抑菌效果。方法采用平板法,测定角花胡颓子水提取液及各萃取部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和白假丝酵母菌的抑菌效果。结果角花胡颓子正丁醇萃取部位对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌有较强的抑菌作用（抑菌率为100%）;石油醚萃取部位对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用（抑菌率〉90%）。结论角花胡颓子正丁醇萃取部位具有较强的抑菌作用。     

水母雪莲内生真菌Aspergillus sp. TPXq 的次级代谢产物研究

目的 研究藏药水母雪莲内生真菌Aspergillus sp. TPXq的次级代谢产物。方法 菌种采用震荡培养箱扩大培养,经反复硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱、开放ODS柱色谱、高效液相色谱等方法进行分离纯化;并根据化合物的理化性质及波谱数据鉴定结构。结果 从来自藏药水母雪莲的一株内生真菌Aspergillus sp. TPXq的培养液中分离得到8个环二肽和1个生物碱类化合物。分别鉴定为3-异丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅰ）、3-异戊基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅱ）、3-仲丁基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅲ）、3-苄基-吡咯并哌嗪-2,5-二酮（Ⅳ）、3-苄基-6-对羟基苄基-2,5二酮（Ⅴ）、3,6-二甲基哌嗪-2,5-二酮（Ⅵ）、3-异丁基-6-异丙基哌嗪-2,5-二酮（Ⅶ）、3-异丁基-6-苄基哌嗪-2,5-二酮（Ⅷ）、Chaetominine（Ⅸ）。结论 其中化合物Ⅳ~Ⅷ为曲霉属Aspergillus.sp真菌中首次分离得到。细胞毒测试结果表明,以上化合物Ⅰ~Ⅷ对于A549和MCF-7肿瘤细胞均显示弱细胞毒活性（>50μg/mL）,化合物Ⅸ对A549和MCF-7肿瘤细胞均具有显著的细胞毒活性,IC₅₀值分别为0.18μg/mL和0.89μg/mL。      

青翘石油醚部位抗菌成分的筛选

目的:筛选青翘石油醚部位抗菌成分,为进一步从连翘中寻找高效低毒的抗菌新药和抗菌先导化合物奠定基础。方法:采用K-B纸片扩散法测定青翘石油醚部位中不同化学部位对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌的敏感性。结果:青翘石油醚部位中不同化学部位对不同菌株表现了不同程度的抗菌作用:大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>白色念珠菌。对于这三种菌珠,抗菌活性部位都集中于FrA6～FrA10。结论:青翘中石油醚部位极性较大的结构具有较强的抗菌活性,是青翘发挥清热解毒功效的结构基础。     

海洋盐单胞菌属微生物的鉴定及生物学活性分析

目的对36株海洋盐单胞菌进行16S rDNA的序列测定和生物学活性的初步分析。方法用PCR方法扩增36株细菌的16S rDNA序列,将获得的全部序列运用Clustal X1.8软件进行多序列比对并用MEGA4.1软件绘制进化树。利用MTT法测定菌株发酵液的细胞毒活性;采用DPPH和ABTS抗氧化模型检测菌株发酵液的抗氧化活性;采用人白细胞弹性蛋白酶(human leukocyte elastase,HLE)抑制剂筛选模型检测菌株发酵液对HLE的抑制率。结果经与GenBank数据库比对,36株菌均与盐单胞菌属有很高的相似性(96%～99%)。菌株发酵液有不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性。11株菌对HepG2细胞有抑制作用,抑制率为(4.40±1.2)%～(24.90±3.5)%;20株菌对HL-60细胞有抑制活性,抑制率为(1.70±1.1)%～(50.90±4.2)%。7株菌对ABTS自由基有清除能力,清除率为(4.49±2.1)%～(58.43±4.4)%;3株菌对DPPH自由基有清除能力,清除率为(5.68±3.7)%～(59.06±3.2)%;3株菌具有HLE抑制活性,抑制率为(12.71±1.81)%～(71.19±5.62)%。结论 36株海洋盐单胞菌属微生物表现出不同程度的细胞毒活性、抗氧化活性和HLE抑制活性,部分高活性菌株具有潜在的药用研究价值。