真菌多糖激发子对桦褐孔菌多酚积累影响的研究

目的 研究真菌多糖激发子对深层培养的桦褐孔菌抗氧化和抗肿瘤酚类化合物积累的影响.方法 在桦褐孔菌的培养基中分别加入15、45、100 μg/mL的真菌多糖激发子,测定胞内外多酚的量和主要组成成分,抗氧化活性和抗肿瘤活性,并测定不同培养条件下菌丝体内苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶的活性.多酚的量以Folin-Ciocalteu法测定.利用HPLC法测定多酚的组成成分.抗氧化活性以清除超氧阴离子的能力表示.利用MTT法测定多酚对HeLa细胞的抑制率.苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶活性均以分光光度计法测定.结果 添加45μg/mL的真菌多糖激发子可使桦褐孔菌胞内、胞外酚类化合物分别达到最高水平71.8和182.1 mg/L,明显地高于正常对照组胞内(42.6 mg/g)和胞外(83.6 mg/L).真菌多糖激发子显著提高了苯丙氨酸解氨酶和一氧化氮合酶的活性.不同培养条件下产生的胞内、胞外酚类化合物主要组成成分不同,但均具有抗氧化和抗肿瘤等活性,尤其是添加45 μg/mL真菌多糖激发子的培养体系.结论 真菌多糖激发子可上调深层发酵培养的桦褐孔菌酚类化合物的积累以及抗氧化和抑制肿瘤细胞的活性.     

影响桦褐孔菌培养菌丝体水解鞣质积累的因素

目的探索影响人工培养条件下桦褐孔菌菌丝体水解鞣质积累的因素。方法以菌丝体干质量和水解鞣质的量为指标,对不同碳源、氮源、pH以及不同金属离子作用下的菌丝体干质量和水解鞣质的量进行测定。结果最适合桦褐孔菌积累水解鞣质的碳、氮源是葡萄糖和蛋白胨,最佳pH是5.5。Cu2 在0.8mmol/L,Co2 在1.6mmol/L,Zn2 在1.6mmol/L,Mn2 在1mmol/L,NH4 在4mmol/L时都能明显地促进水解鞣质的合成。结论以葡萄糖和蛋白胨为碳、氮源,pH为5.5的培养基有利于桦褐孔菌水解鞣质的积累。Cu2 ,Co2 ,Zn2 ,Mn2 添加到上述培养基中是进一步提高培养产物水解鞣质积累的有效手段。     

鲍氏针层孔菌生产菌丝体及胞外多糖的液体发酵培养

目的：考察营养因子和环境因子对鲍氏针层孔菌液体发酵生产菌丝体和胞外多糖产量的影响。方法：通过摇瓶实验，对不同的碳源、氮源、接种量、起始pH 和温度进行筛选。结果：鲍氏针层孔菌液体发酵生产菌丝体和胞外多糖时，所需的最优碳源和氮源分别是葡萄糖和大豆蛋白胨；适宜的接种量、起始pH、温度分别为6％，6.0，28 ℃。结论：通过摇瓶实验获得的数据将为鲍氏针层孔菌工业化液体深层发酵培养提供参考。     

药用真菌粗毛黄褐孔菌生物学性质的研究

目的:研究药用真菌粗毛黄褐孔菌的生物学特性,为粗毛黄褐孔菌人工培养和工业化生产培养提供参考。方法:考察粗毛黄褐孔菌菌株在不同温度、光照下对菌丝生长的影响,酯酶同工酶酶谱。同时对液体培养粗毛黄褐孔菌的碳源、氮源和初始pH对菌丝生物量和胞外多糖含量的影响进行了研究。结果:粗毛黄褐孔菌菌丝在25℃生长速度较快,黑暗培养有利于菌丝生长,粗毛黄褐孔菌有8条酯酶同工酶。在液体培养条件下,综合考虑生物量和胞外多糖产量,葡萄糖是较好的碳源,酵母膏是较好的氮源,在6.5~7.5范围内的初始pH值较好。结论:为粗毛黄褐孔菌人工培养和工业化液体深层发酵培养提供参考。     

表观遗传修饰剂线性肟酸对桦褐孔菌三萜合成的影响

目的 三萜类化合物是药用真菌桦褐孔菌产生的主要次生代谢产物之一,但其在实验室培养条件下积累量较少。旨在研究组蛋白去乙酰化酶（histone deacetylase,HDAC）活性抑制剂线性肟酸（suberoylanilide hydroxamic acid,SAHA）对桦褐孔菌三萜合成的调控。方法 液体摇瓶发酵法培养桦褐孔菌,并在培养液中添加SAHA。采用荧光定量PCR测定三萜合成相关基因转录水平,香草醛-高氯酸法测定细胞内和发酵液中三萜的含量。结果 SAHA的添加提高了桦褐孔菌体内编码3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A合成酶、3-羟基-3-甲基戊二单酰辅酶A还原酶、甲羟戊酸激酶、二磷酸酯脱羧酶、角鲨烯合成酶和羊毛甾醇合成酶等基因的表达水平。SAHA显著提高了桦褐孔菌菌丝体内和发酵液中三萜的积累量。SAHA诱导下桦褐孔菌菌丝体内三萜积累量达（66.4±5.24）mg/g,明显高于对照组[（22.7±3.3）mg/g],并且胞外三萜的含量由对照组的（30.5±2.7）mg/L提高至（49.3±3.8）mg/L。此外,经SAHA处理后桦褐孔菌胞内三萜清除自由基的能力显著提高。结论 SAHA...     

桦褐孔菌多糖对小鼠抗氧化清除自由基作用的研究

目的:探讨桦褐孔菌抗氧化清除自由基的作用。方法:应用DPPH法测定桦褐孔菌多糖自由基清除率;采用力竭游泳实验测定小鼠血清相关指标。结果:桦褐孔菌多糖随着浓度增加自由基清除率逐渐增高,一定浓度后清除率基本不变;显著降低小鼠运动后MDA、CK、BUN和LDH含量,升高SOD,提高运动耐力。结论:桦褐孔菌多糖具有良好的自由基清除能力,具有良好的抗疲劳作用。     

桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能的影响

目的 探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响.方法 应用溶血空斑实验和单核巨噬细胞吞噬功能实验,探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响.结果 桦褐孔菌多糖能使小鼠抗体分泌细胞数明显增多,明显的提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能.结论 桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能有促进作用.     

桦褐孔茵多糖对小鼠免疫功能的影响

目的探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响。方法应用溶血空斑实验和单核巨噬细胞吞噬功能实验，探讨桦褐孔菌多糖对正常小鼠免疫功能的影响。结果桦褐孔菌多糖能使小鼠抗体分泌细胞数明显增多，明显的提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能。结论桦褐孔菌多糖对小鼠免疫功能有促进作用。     

均匀设计优化桦褐孔菌多糖提取工艺的研究

目的:优化桦褐孔菌多糖的提取工艺.方法:采用均匀设计分别对影响提取和醉沉的因素进行优化.结果:最佳提取工艺为固液比1:15,提取时间90min,提取次数2次.最佳醇沉工艺为生药浓度1.0g·mL-1,乙醇终浓度65%.结论:优化的桦褐孔菌多糖提取工艺和醇沉工艺经济、稳定、合理可行.     

紫芝液体深层发酵液的抗肿瘤活性部位研究

目的 寻找紫芝液体深层发酵液的最佳抗肿瘤活性方法.方法 采用液体深层发酵得到菌丝体,利用小鼠移植肿瘤模型追踪测试抗肿瘤活性,导向得到最佳抗肿瘤活性部位,并用苯酚-硫酸法测得其总多糖质量分数;3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定其还原糖质量分数,并对活性部位进行体外的细胞毒试验.结果 紫芝液体深层发酵液的最佳抗肿瘤活性部位为胞内水提醇沉得到沉淀的水溶部分(样品B)含多糖88.4%,含还原糖3.15%,该部分不含蛋白质;在ig给药剂量为40.5mg/kg时,该活性部位对H22肝癌小鼠的抑瘤率为63.94%,对Lewis肺癌小鼠的抑瘤率为58.32%;该活性部位对A549、LoVo、CEM、QGY-7703等4种人肿瘤细胞的IC50值分别为160、29.28、45.06、37.38μg/mL.结论 紫芝液体深层发酵液的最佳抗肿瘤活性部位为胞内水提醇沉物可溶于水部分,对小鼠移植肿瘤有较好的抑制作用,但体外细胞毒作用较弱.     

均匀设计优化桦褐孔菌多糖提取工艺的研究

目的:优化桦褐孔菌多糖的提取工艺。方法:采用均匀设计分别对影响提取和醇沉的因素进行优化。结果:最佳提取工艺为固液比1:15,提取时间90min,提取次数2次。最佳醇沉工艺为生药浓度1.0g·mL^-1,乙醇终浓度65%。结论:优化的桦褐孔菌多糖提取工艺和醇沉工艺经济、稳定、合理可行。     

响应面法优选N-14菌株发酵黄芪总多糖的工艺条件

目的:优化益生菌N-14发酵黄芪总多糖的工艺条件。方法:采用UV测定总多糖含量,检测波长620 nm。在单因素试验基础上,以总多糖得率为响应值,底物添加量、发酵时间和灭菌时间为自变量,通过响应面试验优选黄芪总多糖发酵工艺。结果:最佳发酵条件为底物添加量4 g,发酵时间24 h,灭菌时间15 min,p H 7,接种量1%。黄芪总多糖得率6.56%,与预测值6.69%偏差较小,较水提醇沉工艺的4.17%提高了57.31%。结论:响应面分析法可用于优选益生菌N-14发酵黄芪的工艺条件,优选的工艺条件稳定可行,为该药材资源的充分利用提供参考。     

药用真菌有柄树舌菌丝培养特性的研究

目的:考察有柄树舌菌丝适宜的培养条件,为其人工栽培、液体发酵生产提供依据。方法:通过有柄树舌菌丝固体培养生长速度和液体培养生物量的测定,对不同温度、光照、初始pH、碳源、氮源和碳氮比条件下有柄树舌菌丝生长进行了研究。结果:有柄树舌菌丝生长的最佳培养条件是:温度25℃,避光,初始pH5.5,碳源为蔗糖,氮源为酵母膏,适合的碳氮比范围40∶3～100∶3(最适为60∶3)。结论:实验获得的数据将为药用真菌有柄树舌的人工栽培和液体发酵提供参考。     

不同理化因素对天山雪莲组培苗生长及总黄酮量的影响

目的研究不同理化因素对天山雪莲组培苗生长和总黄酮生物合成的影响。方法测定不同理化因素影响下天山雪莲组培苗干质量和总黄酮量。结果利于天山雪莲生长及黄酮积累的培养条件:MS培养基附加6-BA 0.5 mg/L,NAA 0.05mg/L,氮源浓度40 mmol/L,NH4+-NO3比例为15︰25,碳源蔗糖质量浓度40 g/L,pH值5.0～6.0,光照强度2 500 lx,温度25℃。结论各项最佳培养条件的组合总体上可以促进天山雪莲生长和总黄酮生物合成,氮源、碳源和温度对天山雪莲生长及总黄酮量的影响最为明显。     

外界条件的改变对红花离体培养的影响

目的 研究外界培养条件的变化对红花离体培养过程中不同发育阶段培养物的影响.方法 以红花种子诱导的无菌苗子叶为外植体,分别接种至含有不同碳氮源、不同PH值、不同温度、不同湿度和不同光照的培养基中,观察其生长情况.结果 通过实验筛选出蔗糖浓度为3%,KNO_3浓度为MS培养基中KNO_3浓度的2倍,最佳pH为6.2,红花离体培养体系在24℃,30%的相对湿度,16 h光照,8 h黑暗交替培养的条件下,最利于红花的分化.结论 3%的蔗糖作为碳源,最适合愈伤组织的生长;2倍于MS培养基中的KNO_3含量有利于愈伤组织的生长和不定芽的分化;pH值为6.2时,最适宜红花不同阶段培养物的生长;24℃为红花离体培养的最适温度,生根时的温度为21℃较好;湿度为50%时,适于愈伤组织鲜重积累,30%的湿度适于不定芽分化和生根;黑暗培养利于鲜重积累,16 h光照,8 h黑暗交替培养有利于不定芽的分化,8 h光照,16 h黑暗交替培养有利于生根.     

高产溶栓酶纳豆芽孢杆菌的选育及发酵工艺优化

 目的 N ⁺ 注入诱变选育纳豆芽孢杆菌 , 获得溶血栓酶高产菌株，优化发酵工艺。 方法 N⁺ 注入诱变纳豆芽孢杆菌，在摇瓶中进行发酵工艺优化。 结果 在 N⁺ 注入剂量为 3.64 × 10¹⁵ ions·cm^-2 时，正突变率最高，突变株 234 表现出良好的稳定性。最佳发酵培养基和发酵条件为：碳源葡萄糖 , 氮源大豆蛋白胨 , 碳氮比 3 ∶ 1 （ 6% 葡萄糖， 2% 大豆蛋白胨），起始 pH 7, 温度 30 ℃，接种量 8% ，装液量为每 100 mL 为 20 mL 。在最佳发酵工艺下，突变菌株 234 的产酶活性酶活达到 1 380 U·mL^-1 。 结论 诱变选育的正突变株性状优良， N⁺ 注入诱变是一种有效的菌种选育方法。     

蜜环菌菌丝体液体培养条件的优化

目的:对蜜环菌的液体培养条件进行优化,确定蜜环菌菌丝体的适宜培养条件。方法:通过测定菌丝体生物量的方法,利用液体摇瓶培养方式,筛选适宜的碳源、氮源、无机盐和生长因子,用统计学方法确定液体发酵培养基中碳源、氮源、无机盐和生长因子的最适浓度,最终确定蜜环菌的液体培养基配方。结果:碳源的最适种类为糊精,氮源最适种类为豆饼粉提取液,玉米浆、硫胺素都有促生长作用,乙醇作为小分子碳源对蜜环菌菌体生长有显著促进作用,培养基中添加硫酸铵和硝酸钠对菌体生长有抑制作用,添加磷酸二氢钾促进菌体生长。结论:通过对液体发酵培养条件优化,蜜环菌液体培养的培养基配方如下:25%的豆饼粉提取液,2%的玉米浆,2.5%的糊精,0.06%的硫胺素,1.0%的乙醇,0.3%的磷酸二氢钾,pH值6.0。以此培养基培养蜜环菌,最终菌丝体收率可达到1.9 g/100m l。     

不同来源黄芪多糖提取物对淋巴细胞增殖的影响及其化学组成分析

目的 考察不同来源黄芪多糖提取物对体外脾淋巴细胞增殖的影响,明确其活性差异,对比分析其化学组成.方法 MTT法分别检测黄芪多糖提取物对正常脾淋巴细胞、ConA活化脾淋巴细胞增殖的影响;硫酸苯酚法结合重量法分别测定样品中总糖、多糖、醇不溶组分含量.结果 各批样品对正常脾淋巴细胞均有显著的促增殖作用(P＜0.01或P＜0.05),除SSK外,各样品在低浓度时促增殖作用较强,促增殖率为39.4％ ～ 186.4％;XZX、XHS、SLH1对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖具有显著抑制作用(P＜0.01),且在4 mg·ml-时抑制作用最强,抑制率为52.9％～104.0％,作用大小为XZX＞XHS＞SLH1,其余各批样品无明显抑制作用;各批样品醇不溶组分含量为18.74％～60.67％,多糖含量为7.22％～44.74％,大小顺序为XZX＞ XHS＞ SLH1＞ SLH2＞ SSK.结论 不同来源黄芪多糖提取物的质量差异十分显著.     

20种中药糖含量与寒热药性关系的Fisher判别分析

目的：研究20种中药中糖的含量与中药寒热药性的相关性。方法：运用费林氏容量法测定20味中药总糖的含量,硫酸-蒽酮比色法测定总多糖的含量,碱式硫酸铜法测定单糖的含量,并利用Fisher统计方法分析实验数据。结果：10种热性中药的总糖和单糖含量都明显高于10种寒性中药,统计分析显示：P<0.05;总多糖含量测定的统计结果显示：P>0.05;Fisher法建立判别函数,判别正确率为85%。结论：Fisher统计分析方法可以从糖含量方面对20味中药的寒热药性进行判别,20种中药中糖的含量与寒热药性具有相关性,提示糖类物质是寒热药性的物质基础之一。