α-突触核蛋白在大鼠脑神经元中的亚细胞定位

目的 研究α-突触核蛋白(α-SYN)在大鼠脑神经元的亚细胞分布.方法 利用2种新的识别不同表位的抗α-SYN单克隆抗体2E3和3D5,应用免疫组织化学、免疫荧光标记和Western blot分析法对α-SYN在大鼠脑神经元的分布进行观察.结果 2E3单抗检测到α-SYN主要存在于神经元的突触前终末;3D5单抗除了能够检测到突触前终末的α-SYNCh,还可以检测到α-SYN在神经细胞核的大量存在.Western blot分析表明,2种抗体在胞质和核组分中均可以检测到一个19 ku的蛋白,与α-SYN的表观分子质量一致.结论 α-SYN免疫活性物质不仅存在于脑神经元的突触前神经末梢,而且也存在于核中,但识别不同表位的抗体对不同亚细胞部位的α-SYN的结合能力不同.     

大鼠丘脑前核内海马下托复合体谷氨酸能传入终末与皮质投射神经元的突触联系

目的 探讨大鼠丘脑前核-海马下托复合体神经元环路的突触结构及谷氨酸分布特征.方法 应用HRP束路追踪结合包埋后胶体金免疫电镜技术.结果 在丘脑前核内,可见HRP顺行标记的海马下托复合体传入轴突终末,终末多为卵圆形,内含圆形透亮突触小泡和数个线粒体.其做为突触前成分与HRP标记的树突或非HRP标记的树突形成非对称性突触.在谷氨酸胶体金免疫反应切片上,胶体金颗粒标记胞体、树突、轴突终末等.HRP标记的轴突终末和一些非HRP标记的与突触后成分形成非对称性突触的轴突终末(Gray Ⅰ型)内,胶体金颗粒密度明显大于背景(胞体、树突、Gray Ⅱ型轴突终末等)的胶体金颗粒密度.其平均胶体金颗粒密度为突触后树突的3倍多,为对称性轴突终末(Gray Ⅱ型)的6倍多.在两张邻近的连续切片,γ-氨基丁酸(GABA)胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记Gray Ⅱ型轴突终末,背景标记极少;而非对称性轴突终末(Gray Ⅰ型)胶体金颗粒标记极弱.谷氨酸胶体金免疫反应切片上,Gray Ⅱ型轴突终末胶体金颗粒标记极弱.GABA阳性轴突终末与HRP标记的树突形成对称性突触,在同一树突上可见GABA能轴突终末形成的对称性突触和其他轴突终末形成的非对称性突触.结论 丘脑前核内来自海马下托复合体投射神经元的轴突终末是谷氨酸能的;来自海马下托复合体皮质投射神经元轴突终末,在丘脑前核与投射至海马下托皮质的神经元树突形成非对称性轴-树突触.     

大鼠丘脑前核神经元内γ-氨基丁酸及其受体的表达

目的:探讨大鼠丘脑前核内γ-氨基丁酸(GABA)及其GABAA受体(GABAARα1和β2subunits)的表达,从形态学角度为系统研究丘脑前核的功能提供依据。方法:分别采用包埋后胶体金免疫电镜技术和原位杂交检测丘脑前核内GABA及GABAARα1和β2mRNA的表达。结果:(1)在丘脑前核,GABAARα1和GABAARβ2阳性神经元分布较密集,细胞形态较一致。空白对照切片为阴性,未见GABAARα1和GABAARβ2mRNA表达阳性神经元。(2)GABA胶体金免疫反应切片上,GABA胶体金颗粒浓重标记GrayⅡ型轴突终末,而树突、神经元、胶质细胞及背景标记极少。GABA能阳性轴突终末与中小型树突形成对称性轴-树突触,也与神经元胞体形成对称性轴-体突触。结论:提示在丘脑前核能够合成GABAARα1和GABAARβ2,且GABA能轴突终末与神经元的树突或胞体形成对称性突触。     

猫丘脑中央外侧核内脊丘系终末与丘脑-皮质投射神经元之间的突触联系

本实验应用顺行溃变和HRP逆行追踪相结合的方法，首次在电镜水平对猫丘脑中央外侧核内脊丘系终末与丘脑-皮质投射神经元之间的突触联系进行了研究．在脊髓第4颈段刀切损毁一侧侧索和前索后，将HRP注射于同侧大脑前上薛氏回和中上薛氏回前端。在电镜下于损毁同侧中央外侧核内可见下列突触连结：（1）溃变的脊丘系轴突终末与标记树突形成的轴-树突触；（2）溃变的脊丘系轴突终末与非标记树突形成的轴-树突触，个别非标记树突含有突触小泡；（3）正常的轴突终末与HRP标记树突和胞体形成的轴-树突触和轮一体突触；（4）正常的两个轴突终末与HRP标记树突形成的轴-轴-树连续性突触；（5）非标记的含突触小泡的突触前树突与HRP标记树突形成的树-树突触。同时可见大量汇聚型突触复合体。本文首次报道在丘脑中央外侧核内，脊丘系终末与丘脑-皮质投射神经元之间存在着直接的突触联系。     

猫外侧颈核内脊颈纤维终末与颈丘脑投射神经元间的突触联系

本实验采用顺行溃变和ＨＲＰ逆行追踪结合的方法研究了猫脊颈丘脑通路在外侧颈核水平的突触联系。在脊髓颈段刀切损毁一侧背外侧索后将ＨＲＰ注射于对侧丘脑腹后外侧核。在电镜下于损毁同侧的外侧颈核内可见到下列突触联系：（１）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成的轴—树突触；（２）溃变的轴突终末与标记的神经元胞体形成的轴—体突触；（３）溃变的轴突终末及正常的轴突终末与标记的中央树突形成的汇聚型突触复合体；（４）溃变的轴突终末与非标记的神经元树突和胞体形成的轴—树和轴—体突触；（５）正常轴突终末与标记的神经元树突和胞体形成的轴—树和轴—体突触。此外，在正常的神经元成分之间还可见到许多类型的突触。     

猫丘脑腹后外侧核内皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接

用ＣＢ－ＨＲＰ逆行追踪与顺行溃变相结合的方法，对描丘脑腹后外侧核内的来自大脑皮质体感Ⅰ区的皮质—丘脑纤维终末与丘脑—皮质投射神经元之间的突触连接进行了电镜观察。向猫大脑皮质体感Ⅰ区内注射ＣＢ－ＨＲＰ５ｈ后，电解损毁原注射部位，术后动物存活４ｄ。电镜下发现丘脑瓜后外侧核内存在５种突触连接方式；（１）溃变的轴突终未与ＨＲＰ标记神经元胞体形成轴－体突触；（２）溃变的轴突终末与ＨＲＰ标记的树突形成轴—树突触；（３）溃变的轴突终末和其它突触前成分共同与中央树突形成汇聚型的突触复合体；（４）溃变的轴突终末与未标记树突形成的轴—树突触；（５）正常的轴突终末与ＨＲＰ标记神经元形成对称型的轴—体突触。     

氧化应激诱导多巴胺能MES23.5细胞α-突触核蛋白C-末端片段核转位

目的研究α-突触核蛋白（α-Syn）和氧化应激的相互作用关系。方法用200μmol／L H2O2,处理多巴胺能MES23．5神经细胞作为氧化应激的细胞模型。采用免疫荧光、硫磺素S组织化学染色和免疫印迹技术检测细胞氧化应激反应中α-突触核蛋白的表达状态和亚细胞定位。结果200μmol／L H2O2处理可诱导α-突触核蛋白从细胞浆转位到细胞核内,而且转位到细胞核内的是约10kD的α-突触核蛋白C-末端片段,而存在于细胞浆内的是完整的α-突触核蛋白。硫磺素S染色显示,转位到细胞核内的α-突触核蛋白C-末端片段呈非聚集状态。结论氧化应激可诱导多巴胺能MES23．5神经细胞α-突触核蛋白C末端约10kD的片段核转位。     

大鼠下丘脑第三脑室周催产素样神经元与脑脊液关系的电镜研究

本研究用高浓度戊二醛灌注固定、包埋前ABC免疫酶染色方法,显示了大鼠下丘脑第三脑室周与脑脊液密切相关的室管膜内及室管膜下OT-LI神经元丛。结果发现:在室旁核后大细胞亚核水平,第三脑室腔的顶及底部常有一些OT-LI轴突终末突入第三脑室腔,与脑脊液相接触,其纤维来源不明;透射电镜下见:这些OT-LI轴突终末附于室管膜细胞之上或夹行于微绒毛之间,常与第三脑室室管膜形成一种类似突触的连接,绝大多数OT-LI轴突终末内含有大量线粒体,其轴突包膜均呈节段性增厚。在视前区至室间孔水平的第三脑室底部,可见到OT-LI神经元胞体突入室管膜细胞间,似部分与脑脊液直接接触,透射电镜下见此类OT-LI神经细胞仅隔一层极薄的室管膜细胞浆与脑脊液相接触。在第三脑室侧壁室管膜下常有较密集的室管膜下神经元树突丛,透射电镜下常见到紧贴室管膜下走行的OT-LI树突,而且往往有轴突与之形成轴-树突触。上述结果提示,室管膜下的OT-LI神经元及树突可能既接受脑脊液中各种信息物质的调控又受到一些传入神经轴突终末的突触性传入控制而实施其分泌活动;突入脑室腔的OT-LI辅突可能是脑脊液中OT的产生途径之一。     

三叉神经本体觉中枢通路第二、三级神经元之间突触连接的发现及突触构筑学研究—溃变与HRP逆行追踪法相结合的电镜观察

将HRP注入丘脑腹后内侧核逆行追踪,将海人酸注入三叉神经脊束核吻侧亚核背内侧部造成顺行溃变,在电镜下对王百忍等发现的三叉神经本体觉中枢通路三级神经元所在地—”带状区”内的二、三级神经元的突触联系进行了探索。结果在“带状区”内发现了由溃变终末与HRP逆行标记的胞体、树突形成的轴-体、轴-树突触,从而在突触水平确证了这条通路的存在。另外还发现,同时存在着由正常轴突终末与HRP逆标神经元胞体、树突所形成的轴-体或轴-树突触;正常轴突终末与溃变终末所形成的轴-轴突触;溃变终末与未标记的神经元胞体、树突所形成的轴-体、轴-树突触。还见到少量的突触小球结构。本文也对”带状区”突触连接模式的特征及意义作了讨论。     

迷走神经背核尾侧部内神经降压肽样免疫反应终末联系的电镜研究

用辣根过氧化物酶逆行标记法结合免疫细胞化学法(PAP法)对大鼠迷走神经背核尾侧部内神经降压肽样免疫反应终末的核内联系进行了电镜下的研究.发现少量神经降压肽样免疫反应轴突终末与HRP逆行标记的副交感节前神经元的树突构成非对称性突触;大多数神经降压肽样免疫反应轴突终末与未标记中间神经元的胞体和树突构成对称性或非对称性突触,以轴-树突触为主;未标记的轴突终末也可同HRP逆行标记的副交感节前神经元的胞体和树突构成对称性或非对称性突触.由此认为核内神经降压肽样免疫反应终末可通过直接或间接联系(后者为主)作用于副交感节前神经元,从而参与对内脏、心血管活动的调节.     

大鼠下丘脑室旁核向迷走神经背核投射的电镜研究

电解损毁大鼠一侧下丘脑室旁核后,将HRP注入同侧颈迷走神经干,电镜观察迷走神经背核中室旁核的投射纤维终末的超微结构及突触联系.结果:迷走神经背核中室旁核的少量纤维终末可以与副交感节前神经元的胞体和树突构成突触;多数终末与该核内中间神经元等的胞体、树突、树突棘及轴突构成突触.以轴-树突触为主,突触类刑以Gray I型为主.     

大鼠外侧膝状体背核的主要突触构筑

外侧膝状体背核(DLG)的突触构成成份主要来自视网膜、视皮质、丘脑网状核的轴突终末和DLG内神经元的突起。视网膜和视皮质来的轴突终末对DLG投射神经元和中间神经元的树突形成非对称性突触,丘脑网状核的轴突终末则对这两类神经元构成对称性突触,而中间神经元树突具有轴突样作用,对投射神经元树突形成对称性突触。这些结果有助于我们了解视觉信息在DLG内的加工处理过程。     

大鼠三叉神经本体觉中枢通路上第三级核团内PV样阳性终末与丘脑投射神经元的突触联系

目的 观察大鼠三叉神经本体觉中枢通路上第三级核团内Paralbumin样阳性轴突终末与丘脑投射神经元之间是否存在突触联系。方法 用HRP逆行追踪和包埋前免疫电镜相结合的双重标记法。将WGA-HRP注入丘脑腹后内侧核逆行标记投射神经元。结果 WGA-HRP注入丘脑腹后内侧核(VPM)后，WGA-HRP标记神经元主要分布在感觉主核背内侧部(Vpdm)、三叉上核尾外侧部(Vsup-CL)以及三叉神经运动核腹侧区(AVM)和上橄榄核背侧区(ADO)。电镜下可见PV样阳性神经元的轴突终末与WGA-HRP标记的胞体或者树突形成突触联系。另外PV阴性神经元的轴突终末也与WGA-HRP标记的胞体或树突形成突触联系，这些胞体或树突偶尔为PV阳性。结论 在三叉神经本体感觉信息从第三级神经元向丘脑腹后内侧核(VPM)传递的过程中，PV样阳性神经元可能通过突触传递机制而发挥作用。     

大鼠脊髓胶状质内含P物质(SP)及脑啡肽(ENK)神经终末的超微结构

水文应用超微免疫组织化学技术探讨正常及切断后根大鼠胶状质(SG)内P物质(SP)及脑啡肽(ENK)轴突终末的分布及其突触联系。电镜观察发现:SP或ENK免疫反应产物主要分布于轴突终末的大颗粒囊泡的内面,小清亮囊泡及线粒体的外表面,在未应用秋水仙素的情况下,ENK样免疫反应性也可出现于树突及核周质,但电子密度较低。大量的含SP或ENK的终末,分别和未标记树突形成突触。但也偶然见到肽能神经终末与未标记轴突或胞体接触或形成突触联系。常遇到三或四联体,亦偶可见到以含SP轴突终来为中心的突触球。切断后根,手术侧既可见到变性轴突(SP阳性)与未标记轴突接触,又可见到ENK阳性轴突终末与溃变轴突接触,但为数不多。因此认为:通过SP阳性一级传入细纤维传递的感觉信息既可汇集于神经元的一个树突又可多向传递于若干个神经元。ENK在胶状质的抑制作用主要为突触后,但ENK对含SP的一级传入纤维的突触前抑制也不能排除。     

大鼠三叉神经脊束核尾侧亚核Ⅱ层内CB样、PV样阳性结构的分布及其突触联系

本研究用免疫组织化学方法观察了CalbindinD-28k(CB)样和Parvalbumin(PV)样胞体、纤维和终末在三叉神经脊束核尾侧亚核(Vc)Ⅱ层内的分布及它们的突触联系.在光镜下观察到CB样和PV样阳性胞体、纤维和终末在Ⅱ层内侧带(Ⅱi)最为密集,PV样阳性神经元的胞体稍大,但数量少于CB样阳性神经元,在电镜下观察到CB样或PV样阳性结构主要形成下列4种突触联系:(1)阳性轴突终末与阳性或阴性轴突终末形成对称性轴-轴突触和少量非对称性轴-轴突触;(2)阳性轴突终末与阳性树突形成非对称性和对称性轴-树突触;(3)CB样阳性轴突终末与阴性树突主要形成非对称性轴-树突触,PV样阳性轴突转末与阴性树突主要形成对称性轴-树突触;(4)阴性轴突终末与阳性树突形成非对称性和对称性轴-树突触.另外还可见到CB样或PV样阳性或阴性树突、轴突及终末与CB样、PV样阳性或阴性的初级传入纤维终末形成Ⅰ型和Ⅱ型突触小球.Ⅰ型突触小球数量较多,有典型的扇贝样初级传入纤维终末和不均一的小泡,线粒体少;Ⅱ型突触小球的初级传入纤维终末粗大而清亮.外观不规则,有均匀一致的小泡和丰富的线粒体.根据上述结果可以推知在面口部伤害性信息的传递和调控过程中,VeⅡ层神经元发挥着重要的作用.     

猫三叉神经尾侧脊束核—丘脑—皮质通路在丘脑水平的突触联系

本文采用HRP逆行追踪与顺行溃变结合法对猫三叉神经尾侧脊束核-丘脑-皮质通路在丘脑腹后内侧核内的突触联系型式进行了研究。在电镜下发现,丘脑腹后内侧核內有五种突触联系形式:(1)溃变轴突终末与HRP标记树突形成轴-树突触;(2)溃变轴突终末与HRP标记的胞体形成轴-体突触,上述两类突触型式为该通路在丘脑水平的直接突触联系方式,此外尚有(3)溃变轴突终末与非HRP标记的树突形成的轴-树突触;(4)HRP标记树突与非溃变轴突终末形成轴一树突触;(5)HRP标记树突与非HRP标记的含有突触小泡的突触前树突形成的树-树突触。本文首次报道了三叉丘系纤维与丘脑皮质投射神经元间的直接突触联系方式为轴-树和轴-体突触。同时也发现了以树突为中心的突触复合体,它是该通路在丘脑水平的一个显著特点。     

大鼠三叉神经本体感觉中枢通路二、三级核团内Parvalbumin样阳性神经元突触联系的电镜研究

本教研室以往的研究证实 Parvalbum in样免疫阳性细胞广泛分布于三叉神经本体感觉中枢四级通路的各级中继核团 ,其中有 30 %～ 5 0 %为投射神经元。本研究应用电镜免疫组织化学技术进一步对此通路第二、三级神经元所在地的 Parvalbumin样阳性神经元及其纤维和终末的突触联系进行了观察。结果显示 Parvalbum in样阳性结构主要形成以下几种突触联系 :( 1) Par-valbumin样阳性轴突与 Parvalbumin样阳性胞体或树突形成轴 -体或轴 -树突触 ,其中以非对称性突触为主 ,对称性突触较少 ;( 2 )Parvalbumin样阳性轴突分别与 Parvalbumin样阴性神经元的胞体或树突形成轴 -体或轴 -树突触 ,这些突触联系以对称性为主 ,非对称性大约占 30 %左右 ;( 3) Parvalbumin样阴性终末与 Parvalbumin样阳性树突形成以对称性为主的轴 -树突触 ,这种突触大约占所有突触联系的 5 0 %。以上结果表明 :面口部本体感觉信息由三叉神经中脑核神经元向丘脑腹后内侧核传递的过程中 ,Par-valbumin样阳性轴突终末可通过突触传导机制而兴奋或抑制二、三级核团内的投射或中间神经元而发挥其重要作用     

组织化学染色与免疫电镜双标记方法在检测大鼠脑干前包钦格复合体细胞色素氧化酶活性中的应用北大核心CSCD

目的研究脑干前包钦格复合体(pre-B9t C)细胞色素氧化酶(COX)的活性变化。方法采用COX的组织化学染色与pre-B9t C的标记物神经激肽1受体(NK1R)纳米金-银加强免疫组织化学染色双标法,进行pre-B9t C特定神经核团尤其是不同亚细胞结构的COX活性检测,并进行COX活性的半定量分析。结果光镜下NK1R免疫反应性(NK1R-ir)产物主要分布于pre-B9t C神经细胞膜,清晰勾勒神经元轮廓,COX组织化学染色呈棕色,弥漫表达于NK1R-ir神经元胞质及突起内。电镜下NK1R-ir金颗粒主要分布于pre-B9t C神经元胞体和树突膜内表面,胞质内也可见金颗粒标记。pre-B9t C神经元不同亚细胞结构(胞体、轴突终末、树突)线粒体的形状和分布均有不同,在胞体和轴突终末线粒体多为圆形和椭圆形,在树突则以长杆状线粒体多见,胞体线粒体多为管泡状嵴,而板层嵴线粒体以轴突终末和树突多见。轴突终末内线粒体多聚集分布,树突内线粒体多近胞膜散在分布,但在突触部位,线粒体分布密集,且局部膨大接近突触后膜,这与突触的信息传递功能需要大量ATP产生密切相关。COX活性反应产物分布于线粒体嵴上,线粒体嵴电子密度不同表明COX活性不同。轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体。结论 pre-B9t C神经元不同亚细胞结构能量代谢不同,其中轴突终末和树突线粒体COX活性明显高于胞体,尤其突触部位线粒体分布密集,且表达高COX活性。将COX组织化学技术和免疫电镜技术相结合,为检测区域性COX活性,尤其是区域内不同亚细胞结构的COX活性提供了新方法。     

降钙素基因相关肽、甘丙肽免疫反应在大鼠臂旁外侧核分布的超微结构特征分析

应用免疫电镜包埋前染色技术对降钙素基因相关肽、甘丙肽免疫反应在大鼠臂旁外侧核分布的超微结构特征进行了研究。在臂旁外侧核腹外侧区中,常见降钙素基因相关肽阳性轴突终末与阴性树突及树突棘形成轴-树或轴-棘突触,大多为非对称型,少数为对称型;也可见阳性树突或阳性胞体与阴性轴突终末形成的轴-树或轴-体突触。阳性轴突终末含清亮小泡和致密核心小泡。臂旁外侧孩腹外侧部中甘丙肽阳性结构大多为阳性轴突终末,部分为阳性树突及阳性胞体。阳性树突常呈丛状分布于血管附近,阳性轴突常与阴性树突,阳性树突常与阴性轴突形成轴-树突触,大多为非对称型。臂旁外侧核腹外侧亚核的甘丙肽阳性结构分布基本与前者相似,但轴-树突触大多为对称型,而且一些阳性轴突与血管基膜紧贴。     

大鼠纹状体parvalbumin阳性中间神经元的超微结构

目的:研究纹状体parvalbumin (Parv)阳性中间神经元在神经通路上的突触连接.方法:利用免疫组织化学和神经示踪方法标记SD大鼠纹状体Parv及其相关神经元,光镜和电镜观察阳性神经元的结构和位置关系.结果:Parv阳性中间神经元中等大小,散在分布于纹状体,以背外侧居多.光镜免疫双标记显示Parv阳性中间神经元与皮质、丘脑和中脑黑质的传入轴突终末形成明显的形态位置上的邻近关系,其轴突终末则与纹状体不同类型投射神经元在光镜下也形成邻近关系.Parv阳性中间神经元的免疫电镜观察显示阳性产物主要游离于胞体、树突和轴突的胞质内.Parv阳性中间神经元的胞体和树突均接受大量的非对称型突触传入.Parv阳性轴突终末平均大小为(0.62±0.28)μm,可见其与纹状体神经元的树突、胞体和树突棘形成对称型突触,其中与树突形成的突触占69.64%,与胞体和树突棘形成的突触分别为26.78%和3.58%.结论:纹状体Parv阳性中间神经元形态学上与皮质、丘脑、黑质以及纹状体投射神经元形成突触连接,提示其可能在调节纹状体信息传入和输出过程中具有重要作用.