慢性间歇性低压低氧预处理可减轻大鼠放射性心脏损伤

目的 研究慢性间歇性低压低氧(CIHH)对急性期放射性心脏损伤影响及作用机制。方法 成年雄性SD大鼠48只随机分为空白对照组、CIHH组、照射组和CIHH+照射组。CIHH处理为动物在接受照射前置于低压氧仓预处理。记录左心室功能,测定心肌梗死面积。Masson染色后计算心肌胶原容积分数(CVF),ELISA法检测心肌组织总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)含量。蛋白印迹法检测纤维化标志物Ⅰ型胶原(COL-1)、内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP表达情况。差异检验采用双因素方差分析。结果 CIHH预处理后再照射大鼠左心室收缩及舒张功能有所改善,心肌梗死面积减小。CIHH+照射组较照射组CVF下降同时伴随COL-1表达水平降低(P<0.01,P<0.01)。CIHH+照射组T-SOD活力较照射组明显升高[(185.19±3.20) U/mgprot∶(156.61±4.60) U/mgprot,P<0.01],MDA浓度下降[(1.36±0.17) nmol/mgprot∶(2.36±0.21) nmol/mgprot,P<0.01]。CIHH+照射组与照射组比较内质网应激标志性蛋白GRP78和CHOP蛋白水平亦均降低(P<0.05,P<0.01)。结论 CIHH预处理在一定程度上能改善放射线引起的冠状动脉损伤,增强心脏对缺血再灌注损伤耐受性,减小缺血再灌注后心肌梗死面积,并减少小血管周围和心肌间质胶原沉积。CIHH可能通过抑制氧化应激、内质网应激及抑制心肌纤维化等对心肌起保护作用。     

miR‐26a调控CTGF表达在放射性心脏损伤中作用的实验研究

目的 探讨miR‐26a在实验鼠放射性心脏损伤（RIHD）中的调节作用。方法 以C57/BL6小鼠构建RIHD模型,检测心功能、纤维化、胶原蛋白1（COL1）、结缔组织生长因子（CTGF）及miR‐26a的表达。双荧光素酶试剂盒检测CTGF是否是miR‐26a的靶基因。在心肌成纤维细胞转染miR‐26a up及miR‐26a down慢病毒,构建miR‐26a过表达和低表达细胞模型,检测心肌成纤维细胞的增殖、凋亡及CTGF的表达。结果 小鼠心脏被辐射后心功能下降、心肌纤维化重塑,COL1和CTGF表达增加,miR‐26a表达下降。双荧光素酶报告基因检测证实CTGF是miR‐26a的靶基因。过表达miR‐26a可抑制心肌成纤维细胞CTGF表达,抑制心肌成纤维细胞增殖,促进凋亡,分泌胶原蛋白;低表达miR‐26a则得到相反的实验结果。结论 miR26a可能通过靶向调控CTGF的表达,影响心肌成纤维细胞的功能,参与放射性心肌纤维化的过程,有望成为RIHD新的治疗靶点。     

PDTC通过抑制NF-κB及下游通路减轻大鼠急性RIHD

目的 探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)能否通过抑制NF-κB及下游通路减轻大鼠急性RIHD。方法 将21只成年雄性SD大鼠随机分为空白对照组、单纯照射组和PDTC+照射组3组各7只。单纯照射组及PDTC+照射组大鼠接受心前区局部6 MV X线20 Gy单次照射。PDTC+照射组在照射前30 min腹腔注射PDTC,120 mg/kg,1 次/d,第1—14天。照射后第14天取心脏组织观察病理学变化,通过Masson染色计算心肌CVF,蛋白印迹法及实时荧光定量qPCR分别检测3组大鼠心肌组织的NF-κB家族成员p50、p65、HIF-1α、CTGF、COL-1蛋白及mRNA表达量变化。采用t检验差异。结果 HE染色结果显示PDTC+照射组与单纯照射组比较,大鼠心肌细胞水肿减轻,炎症细胞浸润得到改善,成纤维细胞减少。Masson染色结果显示PDTC干预可减轻照射后大鼠心肌细胞间质胶原沉积,半定量分析结果显示PDTC+照射组大鼠的CVF为(9.99±0.32)%,与单纯照射组的(22.05±0.21)%下降(P<0.05)。蛋白印迹和qPCR结果显示PDTC+照射组大鼠心肌组织p50、p65、HIF-1α蛋白表达及mRNA水平较单纯照射组均明显下降(P均<0.05);CTGF蛋白表达水平及mRNA水平较单纯照射组有下降趋势(P均>0.05);COL-1蛋白表水平达较单纯照射组下降(P<0.05);mRNA水平较单纯照射组有下降趋势(P>0.05)。结论 PDTC可通过抑制NF-κB的激活及其下游HIF-1α的转录减轻大鼠急性RIHD。     

NF-κB及下游通路与大鼠急性期放射性心肌纤维化相关性研究

目的 建立急性放射性心脏损伤大鼠模型,观察急性心肌组织炎症反应和纤维化等病理学表现,探讨NF-κB及其下游通路是否与心肌纤维化相关。方法 成年雄性SD大鼠14只,完全随机法均分为对照组和照射组。照射组采用6 MV X线单次20 Gy经心前区照射构建放射性心脏损伤模型,照射后第14天应用HE染色观察心肌细胞及细胞间质形态学改变;Masson染色观察胶原纤维分布情况,并以CVF作半定量分析指标进行成组t检验。蛋白印记法及qPCR法分别检测大鼠心肌组织NF-κB基团成员p50、p65及其下游通路HIF-1α、CTGF、COL-1蛋白及mRNA表达量变化。结果 大鼠心脏局部照射后第14天,照射组较对照组心肌细胞水肿明显、排列紊乱,部分心肌细胞断裂、心肌细胞核轻度固缩、核染色加深,少量异形细胞核,心肌间质可见大量炎症细胞浸润、成纤维细胞增多。Masson染色显示胶原纤维广泛分布于心肌细胞间质,与对照组相比照射组大鼠心肌胶原明显增多,正常心肌细胞排列紊乱、有被胶原纤维替代的趋势。半定量分析结果显示照射组CVF明显高于对照组(22.05%:3.76%,P=0.003)。蛋白印记法及qPCR法结果显示心肌组织p50、p65、HIF-1α、CTGF、 COL-1蛋白表达及mRNA水平照射组较对照组均明显升高(P均<0.05)。结论 急性放射性心脏损伤病理学表现为心肌细胞水肿、细胞间质大量炎症细胞浸润、成纤维细胞增多、胶原纤维增多。其损伤机制可能与心肌组织NF-κB激活有关,同时放射线可引起其下游通路HIF-1α、CTGF在蛋白和基因水平表达上调,可能在放射性心肌炎症向纤维化发展过程中起到重要作用。     

C57BL/6小鼠放射性心肺功能不全动物模型建立

目的 建立C57BL/6小鼠放射性心肺功能不全动物模型。方法 24只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、照射组。照射组接受胸部局部单次20 Gy电子线照射,照后饲养6个月。超声心动检查心功能,血气分析检测血氧分压(PaO₂),Tunel染色法检测细胞凋亡,Masson染色法检测心肺纤维化。结果 照射组LVEF (68.60±10.92)%与对照组(81.75±8.79)%降低(P<0.01);照射组心脏凋亡指数(23.90±6.60)%比对照组(3.25±3.38)%增高(P<0.01);照射组心脏CVF (15.42±5.72)%比对照组(1.45±0.64)%增高(P<0.01)。照射组PaO₂(86.10±7.60) mmHg比对照组PaO₂(107.16±9.01) mmHg下降(P<0.01);照射组肺脏凋亡指数(27.90±8.94)%比对照组(2.50±3.55)%增高(P<0.01);照射组肺脏CVF (17.76±5.77)%比对照组(2.50±3.55)%增高(P<0.01)。结论 辐射使心肺凋亡纤维化重塑,进而导致心肺功能的下降,成功构建C57BL/6小鼠放射性心肺功能不全动物模型。     

miR-133b靶向HER-2对结肠癌细胞放射敏感性影响

目的 研究miR-133b对结肠癌细胞(SW620细胞)凋亡及放射敏感性影响并探讨其机制。方法 采用脂质体法转染miR-con组(转染miR-con)、miR-133b组(转染miR-133b mimics)、si-con组(转染si-con)和si-HER-2组(转染si-HER-2) SW620细胞,然后进行0、2、4、6、8 Gy照射。使用qRT-PCR、Western blot、流式细胞术、克隆形成实验和双荧光素酶报告基因实验分别检测各组细胞中miR-133b表达、HER-2蛋白表达、细胞凋亡、细胞存活分数和细胞荧光活性。结果 与照射前相比,照后SW620细胞中miR-133b表达降低(P<0.05),HER-2表达升高(P<0.05)。过表达miR-133b、敲减HER-2均可降低SW620细胞存活分数(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05)。miR-133b可抑制野生型HER-2细胞荧光活性(P<0.05),且可负向调控HER-2蛋白表达。结论 miR-133b可抑制SW620细胞存活,促进细胞凋亡,增强放射敏感性,其机制可能与靶向HER-2有关。     

RNA干扰HMGB1基因对食管鳞癌细胞X线照射后增殖与迁移能力影响

目的 RNAi技术干扰人食管鳞癌细胞中HMGB1基因表达,观察X线照射后细胞增殖活性、迁移和存活能力及细胞周期分布。方法 RT-PCR和Western blot法检测HMGB1 mRNA和蛋白表达;分别采用MTS和Transwell方法检测食管鳞癌细胞ECA109、KYSE30细胞增殖活性和迁移能力;克隆形成实验检测各组细胞的存活能力;流式细胞术检测照射后各组的细胞周期分布。结果 照射组ECA109、KYSE30细胞中HMGB1 mRNA和蛋白表达水平较未照射组明显增加(P<0.05),且存在剂量-效应和时间-效应关系;MTS结果显示食管鳞癌细胞的增殖水平在照射后不同时间点均明显降低(P<0.01);HMGB1沉默组细胞中HMGB1 mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组和NC组(P<0.01);克隆形成实验结果显示HMGB1表达降低后,肿瘤细胞的放射敏感性明显增加(P<0.01);Tanswell侵袭小室模型检测显示照射后4 h沉默组穿膜细胞数明显降低(P<0.01),且沉默组G0/G1期比例明显高于对照组和NC组,S期比例显著低于其他组,照射后这种趋势更明显(P<0.01)。结论 RNAi干扰技术降低食管鳞癌细胞中HMGB1的表达,降低了细胞增殖和迁移能力,通过诱导照射后G0/G1期阻滞增加了放射敏感性。     

大鼠放射性心脏损伤模型建立及其早期检测指标

目的 探索SD大鼠心脏15Gy分3次照射所致放射性心脏损伤模型的建立及其早期检测指标变化,并分析联合重组人血管内皮抑制素(Endostar)的影响。方法 75只SD成年雄性大鼠随机分为空白对照组(C组)、Endostar组(E组)、25Gy照射组(MHD25组)、15Gy照射组(MHD15组)、15Gy照射联合Endostar组(MHD15+E组),分别在干预后24、48h和15d取血测CK、CK-MB、LDH和CRP,在1、3、6个月行大鼠心脏超声心动图后每组随机处死5只大鼠取心肌组织行HE、Masson染色。双因素方差分析统计。结果 与C组比较,6个月MHD15组出现心肌纤维化晚于MHD25组出现。各照射组在3个月后出现射血分数、缩短分数降低(P<0.05),且程度相似(P>0.05)。心肌酶及炎症因子各组间相近(P>0.05)。结论 大鼠心脏15Gy分3次照射早期可造成心脏功能损伤,如射血分数、缩短时间降低,晚期可导致心肌纤维化,并比高剂量照射延迟出现。照射基础上联合Endostar对大鼠的放射性心肌损伤无明显影响。     

miR-29a对人胃癌细胞增殖、迁移的影响及其机制研究

目的：探讨微小RNA-29a（miR-29a）对人胃癌细胞增殖、迁移的影响及其机制。方法：胃癌SGC-7901细胞随机分为miR-29a转染组、质粒对照组、空白对照组、信号转导子与转录激活子3（STAT3）抑制组。miR-29a转染组、质粒对照组采用脂质体转染法分别将has-miR-29a mimics质粒、siRNA对照质粒转染至人胃癌SGC-7901细胞，STAT3抑制组细胞加入STAT3抑制剂溶液，空白对照组不做处理。实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）和Western blot法检测转染后细胞中miR-29a、血管内皮生长因子（VEGF）、STAT3、细胞周期蛋白D1（cyclin D1）mRNA和蛋白的表达情况；MTT、划痕实验分别检测细胞增殖和迁移情况。结果：qPCR和Western blot实验结果显示，与空白对照组和质粒对照组比较，miR-29a转染组的miR-29a相对表达水平升高，VEGF、cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达水平与p-STAT3/STAT3比值均下降（P < 0.01）。MTT实验与划痕实验结果显示，与空白对照组和质粒对照组比较，miR-29a转染组细胞在培养24、48、72 h的细胞相对增殖率及迁移率降低（P < 0.01）。与空白对照组比较，STAT3抑制组细胞的cyclin D1 mRNA及蛋白相对表达水平、p-STAT3/STAT3比值均降低，细胞相对增殖率与迁移率降低（P < 0.01）。结论：miR-29a能降低VEGF mRNA、蛋白的表达，抑制人胃癌细胞增殖和迁移，其机制可能与下调p-STAT3及cyclin D1的表达有关。     

急性期放射性心肌损伤病理学表现及损伤机制研究

目的 建立实验动物模型观察急性期放射性心肌损伤的病理学表现,探索损伤机制。方法 12只成年雄性SD大鼠按完全随机法均分为对照组和照射组。照射组采用6 MV X线单次20 Gy经心前区照射构建放射性心脏损伤模型,照后第14天HE染色观察心肌细胞及细胞间质形态学改变,Masson染色观察胶原纤维分布情况。以心肌胶原容积分数(CVF)半定量分析。ELISA法检测总超氧化物歧化酶(T-SOD)活力和丙二醛(MDA)浓度。蛋白印迹法检测纤维化标志性蛋白Ⅰ型胶原(COL-1)和内质网应激相关蛋白GRP78和CHOP的表达水平。组间比较采用t、t’或非参数秩和检验。结果 大鼠心脏局部照射后第14天,照射组较对照组心肌细胞排列紊乱,明显水肿,部分心肌细胞断裂,心肌细胞核轻度固缩,心肌间质炎性细胞渗出。心肌组织胶原纤维主要分布于小血管周围及心肌细胞间质。照射组CVF明显高于对照组(11.35%、5.23%,P=0.000),COL-1表达水平升高(P=0.000)。放射线引起心肌组织T-SOD活力增高(156.61、137.06 U/mgprot,P=0.042),同时伴MDA浓度上升(2.36、1.31 nmol/mgprot,P=0.007)。放射线引起心肌组织内质网应激蛋白GRP78和CHOP表达水平均升高(GRP78,P=0.037,CHOP,P=0.009)。结论 急性期放射性心肌损伤的病理学表现主要为心肌细胞变性,间质炎性渗出,小血管周围和心肌间质胶原沉积。放射性心脏损伤急性期内即可发生心肌组织纤维化,机制可能与放射线引起的氧化应激、内质网应激有关。     

lncRNA MEG3通过调控miR-21表达增加肺癌细胞放射敏感性

目的 探讨长链非编码RNA (lncRNA) MEG3对肺癌细胞H1299的放射敏感性调控机制。方法 运用qRT-PCR法检测具有放射抗性的H1299细胞中MEG3、miR-21-5p的表达。将过表达对照组(转染pcDNA3.1)、过表达MEG3组(转染pcDNA3.1-MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-21-5p组(转染anti-miR-21-5p)、过表达MEG3+过表达miR-NC组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-NC)、过表达MEG3+过表达miR-21-5p组(转染pcDNA3.1-MEG3和miR-21-5p mimics)均用脂质体法转染。克隆形成实验检测细胞存活分数,流式细胞术检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞中MEG3与miR-21-5p的结合力。结果 与正常肺上皮细胞相比,H1299细胞中MEG3表达明显降低,miR-21-5p表达明显升高;过表达MEG3或抑制miR-21-5p均可促进H1299细胞凋亡,增强放射敏感性;MEG3可靶向调控miR-21-5p的表达。过表达miR-21-5p可逆转MEG3对H1299细胞放射增强作用。结论 lncRNA MEG3可增强H1299细胞放射敏感性,其机制也许可能与靶向miR-21-5p有关。     

lncRNA MEG3 increases the radiosensitivity of lung cancer cells by regulating miR-21

Objective To investigate the regulatory mechanism of long-chain non-coding RNA (lncRNA) MEG3 on the sensitivity of lung cancer cell line H1299 to irradiation. Methods The expression of MEG3 and miR-21-5p in lung cancer cell line H1299 was detected by qRT-PCR. Overexpression control group (transfected with pcDNA3.1), MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA3.1-MEG3), miR-NC inhibition group (transfected anti-miR-NC), miR-21-5p inhibition group (transfected with anti-miR-21-5p), MEG3 overexpression+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-NC), MEG3 overexpression+miR-21-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-MEG3 and miR-21-5p mimics) were all transfected into H1299 cells by liposome method treated with 4Gy irradiation. Cell survival fraction was detected by colony formation assay. Cell apoptosis was detected by flow cytometry. The binding of MEG3 to miR-21-5p in cells was assessed by dual luciferase reporter assay. Results Compared with normal lung epithelial cells, the expression of MEG3 was significantly decreased, whereas the expression of miR-21-5p was significantly increased in the radioresistant lung cancer cells H1299. Overexpression of MEG3 or inhibition of miR-21-5p could promote the apoptosis and enhance the radiosensitivity of H1299 cells. MEG3 could targetedly regulate the expression of miR-21-5p. Overexpression of miR-21-5p could reverse the enhanced radiosensitivity of MEG3 to H1299 cells. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of lung cancer cells H1299 to irradiation. The mechanism may be related to targeting miR-21-5p.     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

LncRAN MEG3 regulates the radiosensitivity of cervical cancer cells by targeting miR-181a-5p

Objective To evaluate the effect of long-chain non-coding RNA MEG3(LncRNA MEG3) on the radiosensitivity of cervical cancer cells, and to explore its underlying mechanism. Methods The expression of LncRNA MEG3 in cervical cancer cells was detected by qRT-PCR. In the overexpression control group (transfected with pcDNA 3.1), LncRNA MEG3 overexpression group (transfected with pcDNA 3.1-LncRNA MEG3), miR-NC inhibition group (transfected with anti-miR-NC), miR-181a-5p inhibition group (transfected with anti-miR-181a-5p), LncRNA MEG3+miR-NC overexpression group (co-transfected with pcDNA3.1-LncRNA MEG3 and anti-miR-NC), LncRNA MEG3+miR-181a-5p overexpression group (co-transfected with pcDNA 3.1-LncRNA MEG3 and anti-miR-181a-5p), all plasmids were transfected into SiHa cells by liposome method. The cell survival fraction was assessed by colony formation assay. The cell apoptosis rate was evaluated by flow cytometry. The cell fluorescence activity was assessed by dual luciferase reporter assay. The expression levels of PTEN, p-Akt and Akt proteins were detected by Western blot. Results Compared with the radiosensitive group, the expression of LncRNA MEG3 was significantly down-regulated in radiation-resistant cervical cancer tissues (P<0.05), and its expression level was positively correlated with the sensitivity of cervical cancer cells. Overexpression of LncRNA MEG3 or inhibition of miR-181a-5p could significantly enhance the irradiation sensitivity and promote the apoptosis of cervical cancer cell line SiHa (both P<0.05). The fluorescence activity of wild-type LncRNA MEG3 cells was inhibited by miR-181a-5p. Overexpression of miR-181a-5p reversed the irradiation sensitization and pro-apoptosis effect of LncRNA MEG3 and the regulation of the PTEN/Akt signaling pathway on cervical cancer cell. Conclusion LncRNA MEG3 can enhance the sensitivity of cervical cancer cells to radiation exposure, probably by targeting the miR-181a-5p and regulating the PTEN/Akt signaling pathway, which will provide a new direction for improving clinical prognosis of cervical cancer patients.