RNA干扰与头颈部肿瘤基因功能研究和基因治疗

目前，RNA干扰已广泛应用于肿瘤研究工作中，并取得了一些突破性进展。本文简介了RNAi干扰作用机制、作用特点、RNA干扰技术及其在头颈部肿瘤基因功能研究和基因治疗中的应用进展。     

肿瘤研究的又一把新钥匙——长链非编码RNA

非编码RNA是一类不具有编码蛋白质功能的RNA分子,但是他们在生命活动中发挥着重要调控作用。随着对非编码RNA研究深入,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）成为目前研究的热点。研究表明,lncRNA在肿瘤的发生、发展过程中发挥着多种作用,有希望成为肿瘤新型标志物,在肿瘤诊断、治疗以及预后评估方面显示出良好的应用前景。本文对lncRNA在肿瘤领域的研究现状做一综述。     

RNA干扰与鼻咽癌的研究进展

RNA干扰（RNAi）是利用双链小片段RNA高效、特异性地降解细胞内同源mRNA，阻断体内基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型［1］。近几年，RNA干扰研究在国内外迅速开展，并且扩大到许多方面，如抑制病毒的研究、抑制多药耐药基因的表达 、在人体寄生虫研究中的应用、基因治疗、肿瘤研究等。而鼻咽癌的发病机制与许多致病因素有关，实验研究表明RNAi可以通过多种途径影响鼻咽癌细胞的生长，因此RNAi可能为鼻咽癌治疗提供新的方法。     

RNA干扰技术应用于抗人乳头瘤病毒研究

生物体基因组对入侵的外源核苷酸序列相当敏感，在长期的进化中，生物体内形成了一套有效的防御措施，RNA干扰就是其中之一，RNA干扰被称为基因组的免疫系统。本文在简单介绍RNA干扰机制和特点的基础上，详细介绍这种技术在抗人乳头瘤病毒研究中的实验进展。     

RNA干扰技术与喉癌

RNA干扰是近年来出现的一种新技术,是高度特异的mRNA水平上的基因沉默,在抗病毒、肿瘤、免疫疾病等方面有着广阔的发展前景.运用RNAi技术将小分子干扰RNA(siRNA)应用于喉癌研究可能为喉癌的治疗另辟蹊径,现对RNAi技术在喉癌中的研究进展做一综述.     

抑制表皮生长因子受体基因表达的pSIREN-ShuttleRNAi表达载体的构建

［摘要］目的：构建抑制表皮生长因子受体（EGFR）基因表达的RNA干扰（RNAi）质粒表达载体pSIREN Shuttle EGFR。方法:化学合成3条编码短发夹RNA序列的、特异靶向EGFR基因的寡核苷酸链，各69个碱基，退火，克隆到RNAi Ready pSIREN Shuttle载体的人源U6启动子的下游，重组构建RNAi质粒， 3种载体转染人鼻咽癌细胞株（CNE），用RT-PCR 分析pSIREN Shuttle EGFR载体对EGFR基因的mRNA表达抑制效果。结果：重组构建的pSIREN Shuttle EGFR载体经插入基因片段序列分析，表明69个碱基成功插入到预计位点，并且序列完全一致。CNE细胞EGFR基因的mRNA被明显抑制。结论：RNAi质粒表达载体介导对EGFR基因的RNA干扰可能是鼻咽癌干预治疗的一种有效手段。     

微小RNA在中枢神经系统可塑性调节中的作用

近年来,随着生物信息学分析技术的进步,微小RNA有关的作用机制逐渐被人们认识。人类基因组中的微小RNA多达1500个,其通过对mRNA转录及稳定性的负向调控在发育、分化中发挥重要作用。微小RNA与中枢神经系统有着紧密联系。研究表明它不仅与学习、记忆、药物成瘾性及一些中枢神经系统疾病相关,在中枢神经系统可塑性调节中也发挥重要作用。本文就微小RNA在中枢神经系统可塑性中的作用研究进展做一综述。     

miRNA与鼻咽癌侵袭转移关系的研究进展

微小RNA（micro RNA,miRNA）是一类由内源基因编码长度为17～25个核苷酸的非编码单链RNA分子,它们主要参与在基因转录后水平的调控。早在1993年,Lee等在秀丽新小杆线虫（C．elegans）体内发现miRNA存在。     

RNA干扰与头颈部肿瘤基因功能研究和基因治疗

目前,RNA干扰已广泛应用于肿瘤研究工作中,并取得了一些突破性进展。本文简介了RNAi干扰作用机制、作用特点、RNA干扰技术及其在头颈部肿瘤基因功能研究和基因治疗中的应用进展。     

长链非编码RNA在甲状腺乳头状癌中的表达谱分析

研究发现长链非编码RNA（long noncoding RNA, lncRNA）在人类多种恶性肿瘤（如肝癌、肺癌、乳腺癌等）的发生和发展中发挥重要作用,但其在甲状腺肿瘤中的表达及作用机制的研究较少[1～4]。本研究采用基因芯片检测甲状腺乳头状癌（papillary thyroid carcinoma,PTC）和甲状腺良性肿瘤组织中lncRNAs/mRNAs的表达,筛选PTC差异性表达的lncRNAs,为探讨其在PTC发生发展中的作用提供实验依据。     

鼻咽癌基础研究的新前沿——长链非编码RNA

最新研究证明人类基因组中的非蛋白编码部分在致癌和肿瘤细胞转移中有重要作用。在众多种类的非蛋白编码RNA中,长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）在癌症生物学中承担了关键的监管作用。本文对lncRNA在人类肿瘤,特别是鼻咽癌中的研究现状做一综述。     

RNA干扰与喉鳞癌

RNA干扰是指双链RNA在细胞内特异性地诱导同源互补的mRNA降解,从而阻断相应基因表达的现象。RNA干扰有可能发展成为一种新型的基因治疗方式。初步的实验结果表明,用RNA干扰治疗喉癌的设想有可能变成现实。     

RNA干扰及其在喉鳞癌研究中的应用

RNA干扰(RNA interference,RNAi)是指一种双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)分子在Mrna(messenger RNA)水平关闭相应序列基因的表达后,使其沉默或表达下调,从而达到抑制某种特定基因表达的目的,是一种序列特异性的转录后基因沉默[1].     

miRNA在下咽癌中的作用机制及其研究进展

下咽鳞状细胞癌是较为常见的头颈部侵袭性恶性肿瘤之一,尽管医疗水平已有较大进步,但由于其发病位置隐蔽,症状出现较晚,易发生淋巴结转移,导致患者预后较差.微小RNA已被报道参与广泛的生物学过程,成为癌症发生和发展过程中的关键调控者.本文就在下咽癌中异常表达的微小RNA调控机制及研究进展做一综述.     

CD44基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定

目的构建CD44基因RNA干扰（RNA interference,RNAi）慢病毒表达载体并在下咽癌FaDu细胞株上鉴定其沉默效率,为研究目的基因沉默后下咽癌肿瘤细胞致瘤性的改变提供稳定可靠的载体。方法针对目的基因CD44mRNA的序列,按照RNA干扰序列的设计原则,设计、合成4个CD44基因特异性小分子干扰iRNA（small interference RNA,siRNA）靶点,将其合成短发卡hRNA（short hairpin RNA,shRNA）并退火成双链DNA,与慢病毒载体重组形成shRNA表达载体,利用PCR和测序鉴定获取正确克隆。将筛选出的最有效重组载体与慢病毒包装质粒共转染293T细胞并测定病毒滴度。随后将其感染下咽癌FaDu细胞株细胞,采用Real-time PCR检测靶基因的沉默效率。结果对LV-CD44-shRNA载体进行双酶切鉴定,证实短发夹RNA正确插入慢病毒载体,DNA测序证实插入序列正确,CD44基因RNA干扰重组慢病毒载体经293T细胞成功包装后,其病毒滴度为8E＋8TU/ml。RNA干扰下咽癌FaDu细胞CD44基因后,CD44 mRNA水平显著下降,干扰效率大于70%。结论成功构建了CD44基因的shRNA慢病毒表达载体,能够在细胞水平有效沉默靶基因,为CD44基因沉默后下咽癌肿瘤细胞生物学改变的研究打下了较坚实的基础。     

环状RNA在鼻咽癌中的作用及其研究进展

鼻咽癌是一种鼻咽部的上皮细胞恶性肿瘤，目前主要的治疗方式为放射性治疗(放疗),其死亡率的下降与诊疗技术的提高密切相关。复发和转移仍是影响鼻咽癌预后的主要因素，患者对放疗的抵抗性往往导致预后较差。近年来鼻咽癌的发病机制研究取得了许多进展，除了编码基因可以调控蛋白质翻译，非编码RNA的作用也被证明，他们可以在RNA水平上调节多种病理生理过程。环状RNA(circRNA)主要通过充当竞争性内源RNA或微小RNA(miRNA)海绵分子，竞争性结合miRNA,调节miRNA活性，调控基因在RNA水平的表达，促进或抑制相关反应，影响疾病的发生发展。circRNA的生物学特性及表达特异性使其有望成为鼻咽癌诊断和治疗决策的潜在生物标记物，基因敲除也可能成为鼻咽癌新的治疗途径。本文重点聚焦circRNA在鼻咽癌中的作用及近期研究进展进行综述。     

RNA干扰技术沉默上皮型钙黏蛋白表达对体外培养的喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的　通过RNA干扰（RNA interference,RNAi）技术沉默喉癌He p - 2 细胞上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,探讨E-cadherin对Hep-2细胞增殖能力的影响。方法　设计、合成特异性小干扰RNA（siRNA）和无基因沉默功能的阴性siRNA转染Hep-2细胞,获得下调E-cadherin基因表达的体外培养的Hep-2细胞;荧光定量PCR检测E-cadherin基因的沉默效果;体外细胞增殖实验（MTT）检测Hep-2细胞体外增殖能力的变化。结果　①重组质粒和脂质体质量体积按1：1转染时,转染效率最高组siRNA-3达65%。②荧光定量PCR：重组质粒pRNAT-U6.1/Neo-siRNA1、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA2、pRNAT-U6.1/Neo-siRNA3使E-cadherin mRNA的表达下调。以空白对照组为基准（设为1）,E-cadherin相对于β-actin的改变倍数siRNA-1组=0.00092,siRNA-2组=0.00143,siRNA-3组=0.00045,阴性对照组=3.44898,差异有统计学意义。③MTT：经特异性siRNA处理的Hep-2细胞生长速度较对照组增快,差异有统计学意义。结论　有效抑制Hep-2细胞E-cadherin mRNA的表达使Hep-2细胞的增殖能力增强。     

靶向c-Met的shRNA重组质粒的构建及生物活性鉴定

目的设计以人c-Met基因为靶向的短发夹RNA（short hairpin RNA,shRNA）,构建携带此shRNA的重组质粒,检测其抑制c-Met mRNA及蛋白表达的效应,筛选RNAi作用最强的shRNA片段。方法设计3对针对c-Met基因不同位点的shRNA片段,构建携带此shRNA的重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-shRNA,通过脂质体介导的方法将其转染到喉癌Hep-2细胞株中。采用RT-PCR及Western-Blot法检测c-Met mRNA及蛋白表达情况,比较转染前后其表达的变化,判断各shRNA的干扰效应。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,经过RT-PCR及Western-Blot法检测,转染干扰质粒后,c-Met基因的mRNA水平及蛋白表达水平均下调,以重组质粒pSilencer 2.0/c-Met-sh RNA2效应最显著。结论成功构建了针对c-Met基因的重组RNAi质粒,为下一步探讨c-Met基因对喉癌Hep-2细胞的生物学行为的作用奠定了基础。