幼鼠持续惊厥状态脑损伤时托吡酯的神经保护作用

目的：研究托吡酯对惊厥性脑损伤是否具有保护作用。方法：制作毛果芸香碱惊厥持续状态动物模型，给予托毗酯干预，检测海马区神经元坏死、凋亡、凋亡蛋白表达和胶质细胞增生变化情况。结果：毛果芸香碱惊厥持续状态模型鼠病理损伤特点为神经元坏死、细胞凋亡、凋亡蛋白表达增多，胶质细胞增生。托吡酯可减少海马区细胞坏死：CA3区坏死细胞百分比由(72．1&;#177;13．4)％降至(20．6&;#177;7．2)％(P&;lt;0．05)；CA1区由(67．1&;#177;9．3)％降至(18．3&;#177;4．8)％(P&;lt;0．05)；减少细胞凋亡：CA1区单位面积凋亡细胞数由9．4&;#177;6．1降至1．7&;#177;0．8(P&;lt;0．05)；减少凋亡蛋白表达：单位面积caspase-3阳性面积由1．49&;#177;0．25降至0．71&;#177;0．12(P&;lt;0．05)；缓解胶质细胞增生：单位面积胶质细胞数由47．3&;#177;3．6降至19．5&;#177;3．9(P&;lt;0．05)。结论：托吡酯对幼鼠惊厥性神经变性，可减少神经的死亡和凋亡，缓解胶质细胞增生。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡与丝裂素活化蛋白激酶表达的变化

背景：丝裂素活化蛋白激酶是一组与神经元的存活凋亡有关的蛋白激酶，睡眠剥夺可以引起神经元凋亡。 目的：观察睡眠剥夺大鼠丝裂素活化蛋白激酶表达的变化并分析其可能的意义。 设计：完全随机分组的前瞻性研究。 单位：郑州大学生理学教研室神经研究室。 材料：实验于2000—06／2002—10在郑州大学完成。选取成年健康SD大鼠24只。方法：24只大鼠随机分为快眼动睡眠剥夺组、快眼动睡眠剥夺对照组和正常对照组3组，每组8只。睡眠剥夺组从早晨8点始，连续剥夺睡眠72h。正常对照组则置饲养笼中饲养，维持正常的睡眠-觉醒周期。观察其形态学变化。另取24只大鼠分组同上用于丝裂素活化蛋白激酶的检测。采用TUNEL染色法观察睡眠剥夺大鼠的海马神经元形态学变化，观察细胞外信号调节激酶活性的变化和c-Jun氨基末端激酶蛋白表达量的变化。 主要观察指标：①观察睡眠剥夺大鼠海马神经元的形态学变化。②观察海马神经元细胞外信号调节激酶和c-Jun氨基末端激酶表达的变化。 结果：①海马神经元形态学变化：快眼动睡眠剥夺组大鼠CA1和CA3区可见较多的凋亡阳性细胞，主要分布在海马的锥体细胞层。CA2区仅见极少量凋亡细胞，CA4区偶见凋亡细胞。正常对照组和快眼动睡眠剥夺对照组海马组织切片中未见明显阳性细胞。②细胞外信号调节激酶活性的变化：快眼动睡眠剥夺组明显低于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组（1764．00&;#177;941．56，6139．67&;#177;2863．62，56昏700&;#177;2763．41，t=3．2111，0．9863，P〈0．05）。③c-Jun氨基末端激酶的阳性表达：快眼动睡眠剥夺组明显高于快眼动睡眠剥夺对照组和对照组（87．5％，25％，75％，t=3．4121．P〈0．05）。 结论：睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元丝裂素活化蛋白激酶活性的变化，可能与神经元的凋亡有关。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

睡眠剥夺引起成年大鼠脑海马神经细胞增殖及干细胞因子的表达

目的：观察快眼动睡眠剥夺对成年大鼠脑海马齿状回神经细胞增殖的影响，并探讨干细胞因子mRNA表达的变化。方法：实验于2000-03／2002-03在郑州大学医学院完成。将SD大鼠36只随机分为正常对照组、快眼动睡眠剥夺组及快眼动睡眠剥夺对照组，每组12只，其中6只动物在睡眠剥夺后立即灌流固定，余6只动物饲养3周后进行同样的处理。各组动物于剥夺睡眠当日12：00腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷100mg／kg，连续剥夺快眼动睡眠72h，应用细胞增殖标记免疫组化及原位杂交染色观察各组动物脑海马神经细胞增殖分化及干细胞因子mRNA表达的变化。结果：36只大鼠全部进入结果分析。①快眼动睡眠剥夺组脑海马齿状回区细胞增殖率[(22．21&;#177;0．84)％]明显高于快眼动睡眠剥夺对照组和正常对照组[(3．97&;#177;0．53)％和(3．81&;#177;0．50)％，(F：1594，P&;lt;0．001)1。正常对照组和快眼动睡眠剥夺对照组脑海马齿状回区细胞增殖率相似(P&;gt;0．05)。②快眼动睡眠剥夺组脑海马齿状回区干细胞因子mRNA表达增强，阳性积分高于快眼动睡眠剥夺对照组和正常对照组[(134．50&;#177;52．06)，(67．69&;#177;16．95)，(70．61&;#177;19．84)分，(F=6．305，P&;lt;0．05)]，睡眠剥夺3周后部分增殖细胞可表达成熟神经元标记神经元特异性烯醇化酶。结论：快眼动睡眠剥夺可引起成年大鼠脑海马齿状回区神经细胞增殖数目增多，部分新增殖细胞3周后能分化为成熟神经元。表明睡眠不仅对神经系统的成熟和发育具有重要影响，而且对成熟大脑的神经干细胞增殖也具有一定的作用。     

针刺诱导脑缺血耐受的实验研究

目的：探讨预先针刺是否能诱导脑缺血耐受而具有脑保护作用及对神经元凋亡的影响。方法：实验在黑龙江中医药大学神经解剖教研室进行。取40只Wistar大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑缺血组、针刺预处理组各10只。针刺预处理组脑缺血前给予针刺，采用“4-动脉阻断”方法建立大鼠全脑缺血模型。神经元内氏体亚甲兰特殊染色法观察大鼠脑缺血后海马CA1区神经元内氏体变化；原位细胞凋亡检测法(TUNEL染色)及电镜观察脑缺血后大脑皮质、海马CA1区神经元凋亡情况。结果：脑缺血组皮质、海马CAl区可见大量棕色TUNEL染色阳性细胞核，皮质为(65．36&;#177;10．18)个／视野，海马CA1区(58．34&;#177;9．64)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(10．63&;#177;5．39)个／视野，海马CAt区为(12．16&;#177;5．69)个／视野，较脑缺血组明显减少(q=6．55，8．73，P&;lt;0．05)，内氏体染色阳性细胞数脑缺血组皮质为(16．16&;#177;8．31)个／视野，海马CA1区(21.66&;#177;9．39)个／视野，针刺预处理组阳性细胞核皮质(55．36&;#177;12．19)个／视野，海马CAl区为(79．36&;#177;10．69)个／视野，较脑缺血组明显增多(q=7．65，9．23，P&;lt;0、05)。结论：针刺预处理可以诱导脑缺血耐受，减轻缺血后神经元损伤，抑制神经元凋亡可能是预先针刺发挥脑保护作用的一种途径。     

大鼠脑组织经反复高加速度暴露后bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶的表达

背景：反复高正加速度(+Gz)暴露可引起脑损伤，但其病理机制尚不清楚。目的：了解反复高正加速度(+Gz)暴露后大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶基因的表达变化，探讨细胞凋亡在反复高+Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。设计：以SD大鼠为研究对象的随机对照实验研究。单位：一所医院的航空医学研究中心。材料：选用体质量为180～220g健康雄性SD大鼠26只，随机分成对照组和+Gz暴露组，其中对照组4只，+Gz暴露组22只。干预：将大鼠固定于动物离心机的转臂上，头朝向离心机轴心，+Gz暴露组条件为G值+14Gz，增长率1．5G／s，峰值持续时间45s，共作用3次，两次中间间歇0．5h。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤，所承受的G值为+1Gz。分别于暴露后0．5，6．0，24．0和48．0h断头取脑。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测对照组和+Gz暴露后0．5，6．0，24．0和48．0h大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平，并用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测脑组织中凋亡细胞。主要观察指标：各组大鼠+Gz暴露后大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平。结果：+Gz重复暴露后6h，大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0．32&;#177;0．08)明显低于对照组(0．69&;#177;0．15)，bax，p53和ICE mRNA表达水平[(．55&;#177;0．09)，(0．48&;#177;0．12)，(0．79&;#177;0．12)]明显高于对照组[(0．33&;#177;0．09)，(0．31&;#177;0．05)，(0．51&;#177;0．09)]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。+Gz重复暴露后24h，大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0．28&;#177;0．05亦明显低于对照组(0．69&;#177;0．15)，bax，p53和ICEmRNA表达水平[(0．61&;#177;0．15)，(0．54&;#177;0．07)，(0．84&;#177;0．15)]亦明显高于对照组[(0．33&;#177;0．09)，(0．31&;#177;0．05)，(0．51&;#177;0．09)]，差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。+Gz重复暴露后0．5h和48h，大鼠脑组织bcl-2，bax，p53和ICEmRNA表达水平与对照组比较，差异无显著性意义(P&;gt;0．05)。+Gz重复暴露后6h和24h在大脑皮质、海马CA1区和纹状体可见部分神经元细胞发生凋亡。结论：反复高+Gz暴露可引起大鼠脑组织中bcl-2，bax，p53和白细胞介素1β转化酶表达变化，细胞凋亡可能是反复高Gz暴露致脑损伤的机制之一。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景:睡眠剥夺是否引起细胞变性,其信号传导是否与某些基因调控有关。目的:探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计:随机对照实验研究。地点和材料:实验地点:郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠,雌雄不限,体质量(200±20)g,由河南省实验动物中心提供。干预:采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化,应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2,baxmRNA表达。主要观察指标:睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化;海马bcl-2和baxmRNA表达。结果:快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1,CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多,异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6.60±2.24)%,(1.69±0.45)%,(6.87±1.32)%,(1.74±0.98)%。CA1,CA3区细胞凋亡率和CA2,CA4区相比较差异有显著性意义(t=5.26～6.95,P<0.05)。bcl-2mRNA阳性信号表达积分值较强,四个区之间差异无显著性意义,baxmRNA表达增强犤CA1为(211.12±59.85);CA3为(205.56±56.99)犦与CA2和CA4区犤(123.42±22.80),(124.21±20.47)犦比较差异有显著性意义(t=3.20～4.36,P<0.05)。结论:睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡,与凋亡相关的bcl-2,baxmRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2003—03／2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注，促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U／b注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2，6，12，24，48h，应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数：生理盐水对照组再灌注后12，24，48h比正常对照组细胞数明显减少[(268．6&;#177;44．5)个／视野。(240．8&;#177;22．5)个／视野，(201．8&;#177;30．7)个／视野，(337．3&;#177;45．3)个／视野，t=2．845—5．587，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286．7&;#177;33．8)个／视野，(271．9&;#177;30．4)个／视野，(258．3&;#177;29．5)个／视野，t=3．189—5．589，P&;lt;0．01]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24、48h比正常对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显增多[(16．5&;#177;3．5)个／视野，(28．4&;#177;6．5)个／视野，(48．8&;#177;7．6)个／视野，(60．7&;#177;10．2)个／视野，(81．6&;#177;12．3)个／视野，(8．8&;#177;2．1)个／视野，t=2．985—6．324，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显减少[(12．7&;#177;3．4)个／视野，(21．5&;#177;5．8)个／视野，(32．7&;#177;4．6)个／视野，(42．8&;#177;6．6)个／视野，(51．8&;#177;9．5)个／视野，t=3．457—6．347，P&;lt;0．01]。③脑海马CA1区热休克蛋白70表达水平：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24，48h比正常对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．264&;#177;0．027，0．328&;#177;0．053，0．475&;#177;0．067，0．587&;#177;0．095，0．512&;#177;0．063，0．225&;#177;0．024，t=3．254—6．028，P&;lt;0．01)，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12h比生理盐水对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．335&;#177;0．033，0．448&;#177;0．055，0．647&;#177;0．078，t=3．262—5．483．P&;lt;0．01)。结论：促红细胞生成素治疗可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，使热休克蛋白70表达上调，从而起到了对神经细胞的保护作用。     

电针对脑缺血再灌注大鼠海马Fos蛋白的影响

目的：探讨脑缺血再灌注后电针对大鼠海马Fos蛋白表达的影响：方法：SD大鼠18只，体质量250～280g，雌雄不限。动物随机分为3组．对照组、模型组和治疗组。采用夹闭大鼠双侧颈总动脉造成的脑缺血再灌注损伤模型，电针百会、风池、大钟及足三里穴，频率2～20Hz，强度2．0A，持续30min，4h后观察海马Fos蛋白的表达。结果：电针能明显加强脑缺血再灌注后海马各区Fos蛋白的表达：治疗组与模型组相比海马各区阳性细胞数显著增加，CA1区（236&;#177;26．126&;#177;19.P&;lt;0.05)；CA3(328&;#177;80，212&;#177;55．P&;lt;0.05)：CA4(594&;#177;104．381&;#177;92、P&;lt;0．01)：DG(621&;#177;111，341&;#177;89．P&;lt;0.01)。结论：缺血再灌注可诱导海马Fos蛋白的显著表达，电针可增强Fos蛋白的表达。     

艾灸大椎穴对慢性应激大鼠神经营养因子的影响

目的：试图发现艾灸大椎穴对慢性应激状态下大鼠海马神经元及脑源性神经营养因子(brain-erived neurotrohic factor，BDNF)的影响。方法：SD雄性大鼠18只，按随机数字表法分为正常组、模型组、艾灸组。应用孤养和长期不可预见性的中等强度刺激造成慢性应激失调模型，观察各组大鼠海马神经元的变化。采用苏木精-伊红(HE)染色、尼氏体染色的方法光镜下观察海马神经元形态的改变，用免疫组织化学的方法对海马BDNF阳性神经元进行染色，并用图像分析仪定量分析。结果：慢性应激可致大鼠海马神经元明显受损，BDNF阳性神经元数量亦显著减少，形态以空泡为主。与模型组比较，艾灸穴对此有明显改善作用。艾灸组海马BDNF阳性神经元的平均光密度CA2，CA3，CA3区面积百分比：(16．98&;#177;1．34)％，(32．77&;#177;2．38)％，(2．48&;#177;0．25)％；模型组相应指标分别为(12．21&;#177;1．58)％，(19．89&;#177;3．82)％，(1．04&;#177;0.38)％(F=6．25。P&;lt;0.05；F=12．27，11．45，P&;lt;0.01)。结论：艾灸大椎穴对慢性应激大鼠BDNF有良性调节作用，并对海马神经元有保护作用。     

次声作用引起大鼠海马细胞凋亡对学习记忆功能的影响

目的：次声是频率小于20Hz的声波，较广泛地存在于自然和社会环境中。脑是对次声作用较为敏感的器官。观察8Hz 90dB次声对大鼠海马CA1区细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响，探讨相关机制。方法：将56只SD大鼠随机分为7个组，即对照组、次声作用7，14，21，28，35，42d组，每组8只。通过免疫组织化学方法观察海马CA1区各层Fas蛋白表达状态；通过TUNEL染色观察各层细胞凋亡情况。结果：CA1区各层Fas蛋白阳性表达7d组(12．83&;#177;2．18，32，5&;#177;3．21，2．73&;#177;1．25)均较对照组显著降低(P均&;lt;0．05)，14d组(74．03&;#177;9．27，80．58&;#177;14．33，22．87&;#177;3，34)。Fas蛋白阳性表达较7d组明显升高(P均&;lt;0．05)；21d(42．07&;#177;9．46，40．84&;#177;8．61)和28d（50．62&;#177;9.34，51．38&;#177;10．87)组分子层及多形层Fas蛋白阳性表达较14d组明显降低(P均&;lt;0，05)；21d组细胞层(7．13&;#177;2．28)Fas蛋白阳性表达较对照组明显降低(P&;lt;0．05)，28d组细胞层(38．16&;#177;3．42)Fas蛋白阳性表达较对照组明显升高(P均&;lt;0．05)；35d(30．12&;#177;9．37，34.89&;#177;14．5，18．47&;#177;5．26)、42d组(19．25&;#177;4．31。35．52&;#177;8．7,20．46&;#177;1．15)3层Fas蛋白阳性表达均显著下降(P均&;lt;0．05)，且与对照组无显著差异(P&;gt;0.05)。14d组各层均可见明显细胞凋亡，以多形层和分子层为著；21d组偶见细胞凋亡；其余各组均未见明显细胞凋亡。结论：8Hz 90dB次声作用后，大鼠海马CA1区Fas蛋白阳性表达1周受到抑制，14d左右Fas蛋白阳性表达代偿性增强，40d左右恢复到正常水平。次声作用后Fas蛋白高表达与细胞凋亡有密切关系。次声作用引起的海马细胞凋亡可能在次声引起的学习记忆功能障碍中起重要作用。     

平肝熄风汤对脑出血大鼠海马细胞色素C氧化酶活性和细胞凋亡影响的同步研究

背景：细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase．EGO)是线粒体呼吸链中的终端酶，在细胞的有氧代谢及氧化磷酸化产能过程中起关键作用，近来发现线粒体能量生成与细胞凋亡关系极为密切，其CCO活性改变与脑缺血缺氧后神经元损伤密切相关。目的：从神经元线粒体能量代谢和细胞凋亡的角度探讨中药复方平肝熄风汤对脑出血神经元损伤的保护作用机制。设计：以实验动物为研究对象，随机对照的实验研究。单位：湘雅医院中西医结合研究所和远程医学中心。材料：实验于2003—11—02／11—09在中西医结合研究所动物实验室(省重点实验室)完成，选择健康雄性SD大鼠80只，由卫生部湘雅医学院实验动物中心提供。方法：采用VⅡ型胶原酶诱导大鼠脑出血模型，以组织化学方法结合灰度值半定量测定CCO活性，采用Tunel法检测细胞凋亡。主要观察指标：①脑出血大鼠术侧海马CA1区CCO活性：②脑出血大鼠术侧细胞凋亡。结果：造模12h，脑出血大鼠海马CA1区CCO活性52．12&;#177;3．75较假手术组26．98&;#177;6．32明显降低(P&;lt;0．01)，凋亡细胞[(13．56&;#177;1．72)个／视野]较假手术组[(4．32&;#177;1．04)个／视野]明显增多(P&;lt;0．01)，随后均呈进行性加重。用平肝熄风汤治疗后可维持其CCO活性，减少细胞凋亡。结论：脑出血神经元损伤与神经元CCO活性降低及细胞凋亡有关。平肝熄风汤能维持线粒体关键酶CCO活性，改善细胞有氧代谢，减少细胞凋亡，可能为平肝熄风汤对脑出血继发性神经元损伤保护机制之一。     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的：探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Caspase-8蛋白表达与神经元保护作用的关系。方法：雄性Wistar大鼠70只，随机分为对照组（10只)、预处理组(10只)、缺血预处理组(25只)和缺血组(25只)。四血管阻断法复制全脑缺血模型，尼氏和TUNEL染色法观察脑皮质及海马CA1区神经元数和凋亡细胞数，免疫组化方法检测Caspase-8蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果：①缺血7d时，缺血预处理组皮质及海马CA1区神经元数无显著变化[(2.68&;#177;8．5)个／视野]，缺血组神经元数则显著减少[（135.0&;#177;5.6）个／视野]。②缺血预处理组Caspase-8蛋白缺血12h表达升高[(125.6&;#177;9.0)个／视野]，24h达高峰[(167.0&;#177;8.1)个／视野]：缺血组(caspase-8蛋白缺血6h表达升高[(154．2&;#177;18.4)个／视野]，12h达高峰[（222.8&;#177;17.1)个／视野]：各对应时点缺血组Caspase-8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多。③缺血预处理组和缺血组均在缺血12h皮质及海马CA1区凋亡细胞数开始增多[(15．5&;#177;2．1)，（39.8&;#177;3．9)个／视野]，缺血48h凋亡细胞数达高峰[(68.3&;#177;13.6），(328.4&;#177;24．0)个／视野]，但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多。结论：全脑缺血可能通过诱导Caspase-8蛋白的表达增多，启动细胞凋亡，导致缺血后神经元凋亡的发生，缺血预处理延缓并降低缺血后Caspase-8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一。     

神经肽Y2受体促进大鼠学习记忆的机制

目的：观察双侧海马插管注射神经肽Y2受体的反义寡核昔酸对大鼠海马c-fos基因mRNA和蛋白表达的影响，探讨Y2受体在学习记忆中可能的作用机制。方法：双侧海马插管注射Y2受体的反义、错义寡核苷酸或生理盐水，应用RT-PCR和免疫组化方法检测大鼠海马中c-fos基因在跳台法训练后的表达水平变化。结果：①反义组大鼠海马珊基因mRNA表达水c-fos平23．40&;#177;8．87明显低于生理盐水组60．38&;#177;15．52和错义组53．14&;#177;11．71，差异有显著性意义(F=22．54，P&;lt;0．001)。但错义组与生理盐水组之间大鼠海马c-fos基因的mRNA表达水平差异无显著性意义，(P&;gt;0．05)。②反义组大鼠海马c-fos蛋白阳性细胞数在海马CA1，CA3和齿状回分别为16．33&;#177;6．18，27．00&;#177;9．72和109．67&;#177;23．44，均低于生理盐水组和错义组，而错义组与生理盐水组之间。c-fos蛋白表达水平差异无显著性意义。结论：神经肽Y2受体可能是通过调节。如c-fos基因的表达参与大鼠的记忆形成过程。     

大鼠脑组织缺血再灌注后促红细胞生成素对神经元的保护

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量、凋亡细胞数量变化、脑组织匀浆一氧化氮含量、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性改变的影响。方法：实验于2003-03／2004-12在解放军第三军医大学附属新桥医院中心实验室完成。选择健康Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只，缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)，缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。除正常对照组线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注。促红细胞生成素组于再灌注开始时经腹腔按2000U／kg注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2．6，12，24，48h，每个时间点6只。应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用硝酸还原酶法测定脑组织一氧化氮含量，羟胺法测定脑组织超氧化物歧化酶活性，硫代巴比妥酸法测定脑组织中丙二醛含量。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞计数：促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286.7&;#177;33.8)，(268.6&;#177;44.5)个／视野；(271．9&;#177;30．4)．(240．8&;#177;22，5)个／视野：(258，3&;#177;29．5)，(2018&;#177;307)个／视野；(t=3.189～5.589，P&;lt;0.01)]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：促红细胞生成素治疗组再灌注后6，12，24，48h比生理盐水对照组阳性细胞数明显减少[(21.5&;#177;5.8)，(28．4&;#177;6．51个／视野：(327&;#177;4．6)，(48.8&;#177;7.6)个／视野；(42.8&;#177;6.6)，(60．7&;#177;10.2)个／视野；(51.8&;#177;9.5)个／视野，(81.6&;#177;12．3)个／视野，(t=3.457～6.347,P&;lt;0.01)1。③脑组织一氧化氮含量：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6．12，24，48h比生理盐水对照组一氧化氮含量明显降低[(48．2&;#177;5．1)，(59，4&;#177;5．5)mmol／L;(51．4&;#177;6，3)，(66，3&;#177;98)mmol／L：(59．7&;#177;6．6)，(80.7&;#177;10.2)mmol／L；(55．7&;#177;8．1)，(77．8&;#177;9.2)mmol／L：(49.3&;#177;6．7)，[67．3&;#177;7，1)mmol／L，(t=3．258～5，624，P&;lt;0．01)]。④脑组织超氧化物歧化酶活性：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组超氧化物歧化酶活性明显增高[(3.78&;#177;0.74)，(3.21&;#177;0．31)μkat／L；(3．41&;#177;0.43)，(2．92&;#177;0.31)μkat／L；(3．21&;#177;0．35)，(2．51&;#177;0．27)μkat／L；(3．64&;#177;0．55)，(3.01&;#177;0.32)μkat／L；(4．10&;#177;0.56)，(3.55&;#177;0.41)μkat／L，(t=3．485～6，457，P&;lt;0．01)]。⑤脑组织丙二醛含量：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组丙二醛含量明显降低[(40.7&;#177;4．4)，(54.6&;#177;6．7)μmol／L；(51.3&;#177;5.4)，(65.7&;#177;8．8)μmol／L；(61.7&;#177;7．2)，(77.4&;#177;7.5)μmol／L；(53.8&;#177;6．4)，(67．8&;#177;9.1)μmol／L；(39．7&;#177;4．0)，(53．3&;#177;4.9)μmol／L，(t=3.541～6.045，P&;lt;0．01)]。结论：促红细胞生成素可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马cAl区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，降低一氧化氮生成量，使脂质过氧化反应的程度减轻，起到了对神经细胞的保护作用。     

新生大鼠缺氧缺血性脑损伤时血红素氧化酶-1mRNA及其蛋白的表达

探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(hypoxic-ischemia brain damage。HIBD)后海马区血红素氧化酶-1(heine oxygenase-1，HO-1)mRNA和蛋白表达的变化及作用。方法：7d龄sD仔鼠72只，完全随机分为HIBD组和假手术对照组。用原位杂交及免疫组化观测两组在不同时间点海马区HO-1mRNA及蛋白阳性细胞数量的变化。结果：HIBD组右侧海马HO-1mRNA表达4h开始升高(42．8&;#177;6．1，t=25，P&;lt;0．05)，12h达高峰(85．7&;#177;6．4)，48h开始略有下降(67．7&;#177;6．1)，72h后(52．3&;#177;5．2)仍高于对照组(25．0&;#177;5．1，t=9．2，P&;lt;0．01)。HO-1蛋白的表达与HO-1 mRNA表达变化规律相一致。结论：HO-l mRNA及其蛋白表达的增加在新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的发病机制中有重要作用。     

绞股蓝总皂苷对血管性痴呆大鼠海马一氧化氮合酶阳性神经元及核酸的保护作用研究

背景：绞股蓝对实验性脑缺血大鼠具有脑保护功能，血管性痴呆大鼠同样具有海马神经元的缺血缺氧性损伤，绞股蓝对此是否也有保护作用?目的：观察绞股蓝总皂苷(gypenosides，GP)对血管性痴呆(vascular dementia，VD)大鼠海马神经元型一氧化氮合酶(neuronal nitric oxide synthase，nNOS)阳性神经元及核酸的保护作用。设计：随机对照研究。地点和对象：研究在武警医学院中心实验室进行，二级雄性wistar大鼠30只，体质量240—260g，由天津市医学实验动物中心提供。干预：采用随机数字法将30只雄性大鼠分为对照组、模型组及给药组。模型组用改进的Pulsinelli 4-血管阻断方法建立大鼠VD模型。给药组：灌胃给药GP200mg／kg，按照大鼠VD模型的制备方法进行手术。对照组：同样进行手术但不灼烧颈动脉，不夹闭颈总动脉。主要观察指标：①大鼠海马nNOS表达。②大鼠海马DNA和RNA荧光染色强度。结果：模型组大鼠海马CAl区和CA3区nNOS阳性神经元数分别为(20．47&;#177;4．22)个和(25．47&;#177;3．52)个，明显少于对照组【(24．73&;#177;5．72)和(37．13&;#177;5．10)个】(P&;lt;0．05)，DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度(反映DNA和RNA含量)也明显减弱。给药组海马CA1区和CA3区nNOS阻性神经元数分别为(30．00&;#177;3．63)个和(38．00&;#177;5．00)个，比模型组明显增多(P&;lt;0．001)；给药组海马DNA和RNA吖啶橙染色后的荧光强度强于模型组，且与对照组相似。结论：GP可明显增强血管性痴呆大鼠海马nNOS阳性神经元的表达，对海马神经元DNA和RNA损伤有保护作用。     

地佐环平对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl－2蛋白和Bax蛋白表达的影响

目的：观察N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK-801对缺氧缺糖海马脑片CA1区：Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法：新生6～9dSD大鼠断头取脑，制备海马脑片，将各孔脑片单纯随机分为3组，分别为正常对照组(HOTC)、单纯缺氧缺糖组(OGD)和预加MK-801再缺氧缺糖组(MK-801+OGD)。海马脑片进行缺氧缺糖培养，最后进行免疫组织化学染色和图像分析处理。结果：各组海马脑片CA1区均有不同程度Bcl-2，Bax蛋白表达。OGD组Bcl-2蛋白的表达(15．7&;#177;1．1)弱于HOTC组[18．5&;#177;O．9)和MK-801+OGD组(18．O&;#177;O．9)，差异均有显著性意义(F=6．495，P&;lt;O．05)；OGD组Bax蛋白的表达(13．1&;#177;2．5)强于HOTC组(7．3&;#177;1．1)和MK-801组(8．7&;#177;1．1)，其差异均有显著性意义(F=9．770，P&;lt;O．05)。同时，OGD组CA1区出现细胞缺失形成的空洞，其他两组与OGD组相比有所减少。结论：MK-801可增强缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白的表达，降低Bax蛋白的表达，并减轻该区锥体细胞损伤程度。     

海马小白蛋白阳性神经元对缺血反应的区域性特征

背景：短暂全脑缺血再灌流早期海马各区域小白蛋白(parvalbumin，PV)阳性神经元的变化程度以及变化时间是否存在敏感性差异?目的：研究缺血敏感脑区海马的PV阳性神经元的改变以及缺血性脑损伤的细胞分子机制。设计：随机对照的实验设计。地点和对象：实验在中山大学中山医学院人体解剖学教研室完成。40只成年健康雄性大鼠，由中山大学中山医学院实验动物中心提供。干预：建立4管阻塞缺血大鼠模型，随机分为正常对照组，缺血再灌流0，6，12，24h共5组，每组8只。全脑缺血20min后再分别灌流0～24h。PV免疫组织化学反应观察海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。主要观察指标：海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。结果：正常对照组大鼠海马各区域(CA1，CA2，CA3)的始层、锥体层、放射层和腔隙分子层，齿状回的颗粒层、分子层及多形层(门区)的切片观察均出现PV阳性反应。再灌流6～12h内见PV阳性神经元出现胞体肿胀、胞浆染色变淡等变化。放射层突起密度减少；PV阳性终末的颗粒密度稀疏，以锥体细胞胞体周围的变化为明显。PV阳性神经元数目：缺血再灌流0h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．66&;#177;3．06)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(4．33&;#177;1.53)个；再灌流6h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．33&;#177;3．51)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(5．00&;#177;1．73)个；再灌流24h时，海马CA1区从(0．33&;#177;1．53)个减少为(2．33&;#177;4．93)个，门区从(1．67&;#177;1．53)个减少为(3．33&;#177;4．51)个；上述缺血再灌流组PV阳性神经元数目减少与缺血前比较有统计学意义(t=4．4505～9．2258，P&;lt;0．05)。结论：海马PV阳性神经元对全脑缺血存在区域敏感性差异。