VEGF165 RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法:设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA(small interfering RNA),采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞。通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况。在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响。结果:所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少。结论:针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

VEGF165 RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用.方法设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA(small interfering RNA),采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞.通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况.在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响.结果所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少.结论针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡.     

重组血管抑制剂CHM-Ⅰ对骨肉瘤的治疗作用

目的观察重组人软骨调节素(chondromodulin,CHM)蛋白对骨肿瘤的治疗作用.方法利用RT-PCR技术从人软骨组织中扩增出CHM-Ⅰ基因片段,并将其克隆到原核表达载体pET28a,在大肠杆菌中诱导表达和纯化重组人软骨调节素蛋白,将重组蛋白与人脐静脉上皮细胞或MG-63骨肉瘤细胞共培养,观察其对内皮细胞形成管样结构和MG-63骨肉瘤细胞生长的影响;将重组蛋白局部注射裸鼠皮下肿瘤,观察其对肿瘤形成的影响.结果获得纯化的重组人软骨调节素蛋白,该蛋白在体外可以抑制血管内皮细胞管样结构的形成而对肿瘤细胞的生长无影响;重组蛋白瘤内注射可以抑制肿瘤在裸鼠体内的生长.结论重组人软骨调节素蛋白通过抑制血管形成而抑制肿瘤生长,具有良好的临床应用价值.     

全反式维甲酸抑制NDRG1基因在宫颈癌HeLa细胞中的表达

目的 观察全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞体外生长的影响;探讨全反式维甲酸对人宫颈癌HeLa细胞影响的机制及其与NDRG1基因的关系;为全反式维甲酸应用于宫颈癌的治疗提供实验依据。方法 用不同浓度全反式维甲酸作用于人宫颈癌HeLa细胞,采用MTT比色法检测细胞生长情况;RT-PCR和Western blot检测全反式维甲酸对宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因和蛋白表达的影响。结果 全反式维甲酸能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,并且这种抑制作用具有浓度和时间的依赖性(P＜0.05);全反式维甲酸能够上调宫颈癌HeLa细胞中NDRG1基因和蛋白的表达。结论 全反式维甲酸能够抑制宫颈癌HeLa细胞生长,这种抑制作用与NDRG1的表达上调相关。     

IL-24对B16细胞生长抑制作用的体内外实验研究

目的:构建白细胞介素24(Interleukin24,IL24)真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL24真核表达质粒pEGFPIL24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSM)观察其表达,用MTT法检测B16细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的体内生长抑制作用。结果:pEGFPIL24转染B16细胞后,LSM可观察到IL24在细胞中的表达。转染IL24基因的B16细胞体外增殖能力明显受到抑制,细胞被阻滞在G2/M期。与对照组相比,IL24基因治疗组肿瘤在体内的生长受到明显抑制,P<0.05。结论:IL24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。于荷瘤小鼠的瘤内注射pEGFPIL24可抑制肿瘤生长,提示IL24具有明显的体内外抗肿瘤作用。     

新城疫病毒对小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:探讨新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)7793株在体内对肿瘤生长的抑制作用及机制.方法:体外培养人小细胞肺癌NCI-H446细胞,通过皮下接种NCI-H446细胞建立人小细胞肺癌裸鼠移植瘤模型.NDV组裸鼠瘤内注射新城疫病毒,阳性对照组注射顺铂(cisplatin,DDP),阴性对照组注射PBS.观察移植瘤生长情况和裸鼠体质量变化,绘制肿瘤生长曲线.6周后处死裸鼠剥取肿瘤组织,HE染色观察细胞学变化,免疫组织化学法检测移植瘤细胞Bax和Bcl-2蛋白表达情况.结果:NDV注射对肿瘤生长有显著抑制作用,抑瘤率达34.1%;NDV对荷瘤鼠无不良反应;光学显微镜下观察发现,NDV治疗组肿瘤组织有许多散在分布的凋亡/坏死区域.NDV能明显上调Bax蛋白的表达量(P＜0.01),对Bcl-2蛋白表达则无影响.结论:新城疫病毒7793株在体内能够有效抑制移植瘤生长,其抗肿瘤机制可能与上调Bax蛋白的表达有关.     

腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用

目的:研究腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用.方法:利用腺病毒重组技术将VEGF-siRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中,构建重组腺病毒Ad-VEGF-siRNA,重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞,RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平.建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型,以Ad-VEGF-siRNA瘤组织注射治疗,检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad-VEGF-siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用.结果:成功构建了表达VEGF-siRNA的重组腺病毒载体Ad-VEGF-siRNA;体外与体内实验检测Ad-VEGF-siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达.荷人骨肉瘤裸鼠经Ad-VEGF-siRNA治疗后,显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用(P<0.05),并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用(P<0.05).结论:所构建的Ad-VEGF-siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达,使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢,并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生.     

YH-16对宫颈癌Hela细胞及其裸鼠皮下移植瘤作用研究

目的:初步探讨YH-16(重组内皮抑素)对宫颈癌Hela细胞及其荷瘤生长抑制作用及作用机制.方法: 用MTT法检测YH-16对Hela细胞生长抑制作用;用透射电镜观察YH-16处理Hela细胞后的凋亡情况、流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期;将Hela细胞移植至裸鼠皮下成瘤,观察不同浓度YH-16 (0mg/kg、0.4mg/kg、0.75mg/kg和1.5mg/kg)对荷瘤鼠皮下移植瘤生长的影响;TUNEL法观察肿瘤细胞的凋亡;免疫组化方法检测裸鼠移植瘤组织中肿瘤微血管密度(MVD).结果: YH-16具有体外抑制Hela细胞增殖的作用(P<0.01);能诱导Hela细胞凋亡;YH-16能有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05);YH-16 15mg/kg组的肿瘤MVD计数较对照组和其它治疗组明显降低(P<0.05).结论:YH-16具有抑制宫颈癌Hela细胞及其皮下移植瘤生长的作用.     

VEGF（165） RNA干涉诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的：利用RNA干涉技术抑制肿瘤细胞VEGF165基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法：设计针对VEGF165基因的小干扰RNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA（small interfering RNA）,采用lipofectamine2000转染人宫颈癌HeLa细胞。通过Hoechst33258染色、流式细胞术、RT-PCR检测人宫颈癌HeLa细胞体外凋亡情况。在体内实验中建立子宫颈癌荷瘤裸鼠模型,将VEGF siRNA直接注入瘤体,观察siRNA对肿瘤生长的影响,蛋白印迹试验检测VEGF siRNA在体内条件下对VEGF、bcl-2蛋白表达的影响。结果：所设计的两个siRNA均能有效诱导细胞凋亡产生凋亡小体,并使细胞周期阻滞于G0/G1期;VEGF165和bcl-2在mRNA及蛋白水平的表达也受到有效抑制,明显减少。结论：针对人VEGF165基因体外转录合成的siRNA在体内外均可诱导HeLa细胞发生凋亡。     

全反式维甲酸对EC9706荷瘤裸鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察全反式维甲酸的体内抗肿瘤作用，探讨其体内抑瘤的作用机制。方法：采用裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤模型进行体内抑瘤实验研究，应用全反式维甲酸10d后处死裸鼠，观察荷瘤裸鼠的肿瘤生长情况，测定肿瘤生长抑制率；HE染色对肿瘤组织进行细胞形态学观察，TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡，免疫组织化学法检测凋亡相关基因bax及bcl-2蛋白的表达情况。结果：全反式维甲酸对裸鼠EC9706人食管癌细胞实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达60％以上。组织学观察及TUNEL检测结果显示，肿瘤组织中散在凋亡细胞和凋亡小体。免疫组织化学检测结果显示，凋亡相关基因bax蛋白表达增加，bcl-2蛋白表达下降。结论：全反式维甲酸具有较强的体内抗肿瘤作用，作用机制与诱导肿瘤细胞凋亡有关。