中国人中的一种新的G6PD基因突变：外显子ⅥcDNA592…

一对Ｇ６ＰＤ缺乏的孪生子作了生化变异型鉴定后，对其中一例进行了基因分析。生化变异型鉴定的所有参数都极为相近，且未见文献报告过，定名Ｇｄ（一）Ｓｈｕｎｄｅ（顺德）。基因顺序分析发现ｃＤＮＡ第５９２位核苷酸由Ｃ变为Ｔ，在中国中未见报告，其为在中国人中发现的第七种突变，故蜇命名为Ｇｈ７突变。     

一对孪生子具有同一新G6PD变异型—Gd(-)Shunde(顺德)

用WHO推荐的G6PD变异型鉴定法鉴定了一对孪生G6PD缺乏新生儿的变异型。发现所有检测生化学参数极为相似。检索了文献资料后确认为一新的G6PD变异型,定名为Gd（-）Shunde（顺德）。     

天津地区G6PD缺陷患者常见基因突变分析

目的研究北方地区葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（ｇｌｕｃｏｓｅ－６－ｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，Ｇ６ＰＤ）基因突变类型、基因突变与人口变迁。方法采用“错配引物”介导的聚合酶链反应／限制性酶切分析法和双脱氧核苷酸指纹印迹检测法，对天津地区２２例Ｇ６ＰＤ缺陷患者进行３种中国南方人群常见的Ｇ６ＰＤ基因突变的分析。结果８例患者（８／２２，３６．４％）有Ｒ４５９Ｌ（１３７６Ｇ→Ｔ）突变；７例患者（７／２２，３１．８％）有Ｒ４６３Ｈ（１３８８Ｇ→Ａ）突变；７例（７／２２）无１３７６和１３８８位点突变病例中，有３例做了Ｈ３２Ｒ（９５Ａ→Ｇ）突变分析，提示１例有该位点突变。结论北方地区也存在中国南方人群常见的３种Ｇ６ＰＤ基因突变，大多数中国北方Ｇ６ＰＤ缺陷患者是由于中国南方移民迁移造成的。     

人类G6PD顺德型〔Gd（－）Shunde〕基因在大肠杆菌中的表达

为了证明一种人类新突变型Ｇ６ＰＤ顺德型，ｃＤＮＡ５９２Ｃ→Ｔ与酶活性降低和其生化特性改变有关，将正常Ｇ６ＰＤｃＤＮＡ，插入人工诱变载体ｐＡＬＴＥＰＲ－１中，用体外定点诱变技术，将ｃＤＮＡ５９２位的Ｃ置换为Ｔ，然后再插入ｐＡＣＩ，在其本身无Ｇ６ＰＤ活性的大肠杆菌ＨＢ３５１突变株中进行表达。实验证明，从ＨＢ３５１株表达出的人Ｇ６ＰＤ，酶活性降低，ＫｍＧ６Ｐ降低，三种底物同类物利用率明显增高，与人类Ｇ６ＰＤ顺德型的生化参数完全一致，表明５９２Ｃ→Ｔ是引起Ｇ６ＰＤ活性降低和生化特性改变的直接原因。     

云南省傣族G6PD一个家系的突变型研究

在调查云南少数民族Ｇ６ＰＤ缺乏症时，采用Ｇ６ＰＤ硝基四氮唑蓝纸片法筛查，按ＷＨＯ标准化方法进行生化变异型鉴定，再用错配碱基ＰＣＲ引入酶切位点法进行ＤＮＡ突变型研究，首次在傣族中发现Ｇ６ＰＤｃＤＮＡ突变型：１３８８Ｇ→Ａ。     

海南汉族、黎族人葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因突变型分析及一种新的G6PD基因突变型的鉴定

目的 阐明海南汉族、黎族人群中葡萄糖－6－磷酸脱氢酶缺乏症的分子基础。方法 用聚合酶链反应、限制性内切酶消化筛查了1388G→A、1360C→T、1024C→T、517T→C、493A→G、487G→A、392G→T和95A→G突变。用单链构象多态性分析筛查其它突变;用核苷酸顺序分析鉴定具有SSCP异常区带样品的突变;。结果 在59例汉族G6PD缺乏症患者中,发现1388G→A14例（23．7％）、871G→A3例（5．1％）、835A→T1例（1．7％）517T→C1例（1．7％）、392G→T3例（5．1％）95A→G4例（6．8％）;在32例黎族G6PD缺乏症患者中,发现1388G→A6例（18．8％）、871G→A3例（9．4％）和95A→G2例（6．3％）;在1例汉族患者中发现了一种新的G6PD基因突变－835A→G突变,此突变导致第279位的苏氨酸被丙氨酸取代,将此突变型命名为G6PD－海口,其酶活性约是正常的10％,此835A→T突变的活性低,后者的酶活性约是正常的40％。分析人G6PD的三维结构模型表明,第279位苏氨酸残基的羟基是维持G6PD亚基相互作用的基团。结论 海南汉族、黎族人群中具有共同的常见G6PD基因突变型;与中国其它地区人群的G6PD基因突变谱比较,结果表明某些G6PD基因突变广泛分布于中国南方不同地区人群中;G6PD第279位苏氨酸残基的可能是维持G6PD亚基相互作用及酶活性的必需基团。     

昆明地区葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变型研究

目的;研究昆明地区葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏症患者的基因突变型。方法：应用突变特异性扩增系统（ＡＲＭＳ）和错配扩增酶切法,检测７６例昆明地区Ｇ６ＰＤ缺乏症患者中Ｇ１３７６Ｔ,Ｇ１３８８Ａ,Ａ９５Ｇ,Ｃ１０２４Ｔ,Ｇ３９２Ｔ,Ｃ５９２Ｔ６种Ｇ６ＰＤ基因突变类型。     

人类G6PD顺德型〔Gd（—）Shunde〕基因在大肠杆菌中的表达

为了证明一种人类新突变型Ｇ６ＰＤ顺德型，ｃＤＮＡ５９２Ｃ→Ｔ与酶活性降低和其生化特性改变有关，将正常Ｇ６ＰＤ ｃＤＮＡ，插入人工诱变载体ｐＡＬＴＥＲ－１中，用体外定点诱变技术，将ｃＤＮＡ５９２位的Ｃ置换为Ｔ，然后再插入ｐＡｃｌ，在其本身无Ｇ６ＰＤ活性的大肠杆菌ＨＢ３５１突变株中进行表达。实验证明，从ＨＢ３５１株表达出的人Ｇ６ＰＤ，酶活性降低，ＫｍＧ６Ｐ降低，三种底物同类物利用率明显增高，与人类Ｇ６     

昆明市新生儿遗传性红细胞G6PD缺下基因频率

应用Ｇ６ＰＤ／６ＰＧＤ比值法对我院１９９９年４－７月出生的新生儿进行的葡萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺乏症检测,并确定新生儿中Ｇ６ＰＤ缺乏症基因频率。结果：５６７名新生儿中（男婴３００人,女婴２６７人）共检出Ｇ６ＰＤ缺乏症患儿６０名（男婴３３人,女婴２７人）。新生儿Ｇ６ＰＤ缺乏症的基因频率为０．１１。女婴中Ｇ６ＰＤ缺乏症的发生率为１０．３％。     

中国人群葡萄糖—6—磷酸脱氢酶基因突变的分析与进展

萄萄糖－６－磷酸脱氢酶（Ｇ６ＰＤ）缺陷是最常见的人类酶缺陷病，该病在中国大陆南方很常见，估计发病率为４．２％。迄今为止，在中国人中共发现１３种Ｇ６ＰＤ基因突变类型。资料表明１３７６Ｍ和１３８８Ｍ是中国人群Ｇ６ＰＤ缺陷者最常见的基因突变类型，其次为９５Ｍ和１０２４Ｍ。似乎４９３Ｍ、４８７Ｍ、１３６０Ｍ和５９２Ｍ为中国台湾特有，１３１１Ｍ和１００４Ｍ为中国广乐特有，而５６３Ｍ为新加坡特有。研究突变类型有助于对临床、突变源和群体遗传学的研究     

海南汉族、黎族人群葡萄糖—6—磷酸脱氢酶基因的1376G→ …

目的 了解海南汉族、黎族人群Ｇ６ＰＤ缺乏症患者的Ｇ６ＰＤ基因１３７６Ｇ→突变。方法 用盐提取法提取Ｇ６ＰＤ缺乏症患者白细胞的ＤＮＡ,用等位基因特异聚合酶链反应检测１３７６Ｇ→Ｔ突变。结果在分析的５９例汉族患者和３２例黎族患者中,１９例汉族患者和１８例黎族患者有Ｇ６ＰＤ基因１３７６Ｇ→Ｔ突变,该突变在汉族、黎患者中所占的比例分别为３２．２％和５６．２％。结论 Ｇ６ＰＤ基因１３７６Ｇ→Ｔ是引起海南黎族     

21－羟化酶CYP21B基因Ile~（172）→Asn错义突变

为了解先天性肾上腺皮质增生症患者的２１－羟化酶ＣＹＰ２１Ｂ基因中Ｉｌｅ~（１７２）→Ａｓｎ错义突变的发生率，根据放大受阻突变体系（Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｕｔａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ，ＡＲＭＳ）的要求，设计了３种引物：５＇ｄ（ＴＴＧＧＧＡＧＡＣＴＡＣＴＣＣＣＴＧＣＴＣＴ）３＇（共同引物）、５＇ｄ（ＡＧＧＴＧＡＧＧＴＡＡＣＡＧＡ）３＇（正常引物）、５＇ｄ（ＡＧＧＴＧＡＧＧＴＡＡＣＡＧＴ）３＇（突变引物），在７例患儿中进行了检测，发现具有本突变者３例。对其中一例进行的家系分析，结果提示：这组引物有快速、简便的优点，不需使用同位素就能对具有Ｉｌｅ~（１７２）→Ａｓｎ变异的高危家庭成员作产前诊断。     

应用PCR—SSCP银染技术检测Wilson病基因第9,14外显子突变

为了研究中国人Ｗｉｌｓｏｎ病基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第９，１４外显子突变特性，方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术初步研究了１４１例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＡＴＰ７Ｂ基因第９及１４外显子分子结构改变，结果：通过用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对患者和正常人的ＤＮＡ的电泳带迁移作对比分析，发现在患者中第９和１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常者分别为６例（２．１％，６／２８２）和４２例（１４．９     

es respectively. Conclusion : According to

为了研究中国人Ｗｉｌｓｏｎ病基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第９、１４外显子突变特征。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染技术初步研究了１４１便Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＡＴＰ７Ｂ基因第９及１４外显子的分子结构改变。结果：通过用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ对患者和正常人的ＤＮＡ的电泳带迁移作对比分析，发现在患者中第９和１４外显子ＰＣＲ扩增产物迁移异常者分别为６例（２．１％，６／２８２）和４２例（１４．９％，４２／２８２）。结论：依据ＤＮＡ单链构象与分子电泳迁移的关系，这一初步结果提示该组病人中ＡＴＰ７日基因的第１４外显子可能存在着较高的突变率。     

PCR直接测序在Wilson病基因第8外显子检出一个突变热点

目的寻找中国人Ｗｉｌｓｏｎ病（ＷＤ）基因突变热点。方法应用ＰＣＲ直接测序法对３０例Ｗｉｌｓｏｎ病患者ＷＤ基因第８外显子进行了突变筛查。结果在１４例患者中发现同一种错义突变Ａｒｇ７７８Ｌｅｕ，其中４例为这一突变的纯合，其余为杂合，突变率为３０％。结论ＷＤ基因第８外显子７７８位密码子（ＣＧＧ→ＣＴＧ）系中国人的突变热点之一。     

DMBA-TPA-MNNG诱发小鼠皮肤肿瘤中p53基因突变

目的探讨ｐ５３基因与化学致癌剂诱发小鼠皮肤肿瘤的关系。方法运用ＰＣＲＳＳＣＰ和直接ＤＮＡ测序法，检测３７例ＤＭＢＡＴＰＡＭＮＮＧ诱发的小鼠皮肤肿瘤［包括６例乳头状瘤，１５例高分化鳞状细胞癌（ＳＣＣＩ）和１６例中分化鳞状细胞癌（ＳＣＣⅡ）］中，ｐ５３基因第５～８外显子的序列改变。结果乳头状瘤均未见ｐ５３基因突变，而２５８％（８／３１例）ＳＣＣ测得突变，其中ＳＣＣⅠ和ＳＣＣⅡ突变率分别为２６６％（４／１５例）和２５％（４／１６例）。在这８例肿瘤中共有９个突变，其中７个位于第８外显子，有７个为Ｇ→Ａ转换。结论ｐ５３基因突变发生于该三步化学致癌法诱发的小鼠皮肤乳头状瘤向ＳＣＣ恶性转化过程中。     

遗传性红细胞葡糖磷酸异构酶缺乏症一例及其变异型鉴定

红细胞葡糖磷酸异构酶遗传性缺乏是引起非球形细胞性溶血的第四位原因。本文报告一例,在检查了患者红细胞18种酶和GSH含量以及双亲的GPI活性后证实为遗传性GPI缺乏症。在此基础上,用溶血液对其变异型作了鉴定。指标为:酶活性、电泳速率、热稳定性、米氏常数(Km)、pH曲线、半乳糖6-磷酸利用率。经比较发现为一新变异型,定名为GPI-广州(GPI-Guangzhou)。     

云南省四个少数民族中所见的G6PD基因突变型

目的 通过鉴定云南省白族、傣族等少数民族中的Ｇ６ＰＤ基因突变型,统计大理市白族Ｇ６ＰＤ缺乏症发生率及基因频率,以了解分子进化和民族起源,并为Ｇ６ＰＤ缺乏症的防治提供理论依据。方法 用错配碱基ＰＣＲ／ＲＥ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＡＲＭＳ法和ＤＮＡ序列分析等检测Ｇ６ＰＤ基因点突变。结果 经ＤＮＡ序列分析确认,首次在白族人群中发现Ｇ６ＰＤ Ｇ１３８８Ａ,发生率４２％、Ｇ１３７６Ｔ发生率２１％、Ａ９５Ｇ发生率     

葡萄糖6磷酸脱氢酶变异型基因研究——I.Gd(一)Taiwan-Hakka型部份基因克隆化分离和鉴定

本文从2例葡萄糖6磷酸脱氢酶变异型——台湾客家型[Gd(一)Taiwan-Hakka]患者基因组DNA中,回收经EcoRI完全酶解的3～5kb片段,与载体λgt10插入重组,用SMR10单菌种系统制备包装提取物,对重组的λgt10进行体外包装,构建成二个基因组基因丈库。用~(32)P标记的G6PD cDNA成功地从文库中初选出12个阳性克隆,挑选其中4个阳性克隆再次杂交予以证实,提取其中2个克隆DNA,经限制酶酶切电泳及斑点杂交鉴定,分离到该变异型基因的插入片段,并将其克隆到M13mp19噬菌体。在国内首次完成Gd(一)Taiwan—Hakka型部份基因克隆化分离与鉴定,为DNA序列分析寻找突变部位打下基础。     

DNA测序产的Wilson‘s病ATP7B基因第14外显子一种新型移码突变

目的：了解中国人肝豆状核变性患者基因（ＡＴＰ７Ｂ基因）第１４外显子（ｅｘｏｎ１４）的突变情况,为该病的基因诊断和治疗提供依据。方法：用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增ＡＴＰ７Ｂ基因的第１４外显子片段,通过ＤＮＡ单链构象多态（ＳＳＣＰ）筛选,以ＰＣＲ产物（ＰＣＲ－ＤＮＡ）循环测序双鉴定。结果;在８５例肝豆状核变性患者和３９例正常人的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ均呈现两种泳动常型（Ⅰ,Ⅱ型）,我们分别对两组中各种带型的