基因芯片快速检测常见水中致病菌的初步应用研究

目的：利用基因芯片技术，尝试对从实际样品中分离的几种常见致病菌进行快速检测鉴定。方法：通过PCR扩增检测靶基因，采用基因芯片与扩增产物在一定条件下进行杂交，杂交结果通过ScanArray 3000芯片扫描仪读取并与标准杂交图谱比较，从而判定样品中细菌的种属。结果：对分离的20株细菌进行了基因芯片的杂交检测，并用传统方法对这些菌株进行了鉴定，基因芯片检测结果与传统方法鉴定结果的一致性为95％(19／20)。结论：基因芯片技术检测水中常见致病菌具有快速、准确、易于操作等优越性，值得推广应用。     

细菌核糖体23 S亚单位基因芯片在感染性疾病快速诊断中的应用研究

目的研究建立快速检测细菌DNA的方法,建立含有10种细菌探针的检测用基因芯片模型. 方法使用合成的扩增细菌核糖体23 S亚单位(23S rDNA)寡核苷酸探针,制备基因芯片;设计23S rDNA通用引物,应用PCR(聚合酶链反应)法,扩增细菌核糖体23S亚单位基因(23S rDNA),扩增后产物与芯片上的探针杂交,用荧光扫描仪检测信号;对23种临床常见致病菌、培养物及临床病例标本采用本方法进行检测,并与常规细菌培养法比较. 结果基因芯片检测临床致病菌具有较高的特异性和灵敏性. 结论利用寡核苷酸探针基因芯片检测系统具有一定的种属鉴别能力,比常规培养法快速、准确.     

应用液相芯片技术快速检测常见食源性致病菌的研究

目的建立一种基于多重PCR技术联合液相芯片技术快速、准确同时检测沙门菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌的方法。方法针对5种食源性致病菌的目标基因设计特异性的引物探针,建立5种食源性致病菌的多重PCR检测方法,将PCR产品与偶联核酸探针的微球混合物进行杂交,利用液相芯片检测仪来检测杂交结果,并对检测方法的重复性、灵敏度、特异性进行评价,以及使用实际样本对该方法进行初步验证。结果该方法检测5种食源性致病菌,重复性良好,变异系数均2%;沙门菌inv A与霍乱弧菌hly A的检测灵敏度为50 cfu/ml,单核细胞增生李斯特菌Hly、金黄色葡萄球菌Sa442、副溶血性弧菌toxR的检测灵敏度为100 cfu/ml;检测的特异度为100%。结论本研究建立的液相芯片检测方法能快速、准确、特异地同时检测沙门菌、副溶血性弧菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、金黄色葡萄球菌5种常见的食源性致病菌。     

多重PCR检测在多种常见肠道致病菌中的效果观察

目的:探讨多重PCR检测在多种常见肠道致病菌中的应用效果。方法:取四种常见的肠道致病菌作为研究对象,包括:大肠杆菌O157、副溶血性孤菌、普通变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌等,采用多重PCR法对四种肠道致病菌进行检测,并与临床模拟样品进行验证,分析多重PCR检测在多种常见肠道致病菌中的应用效果。结果:单重PCR结果显示:对于变形杆菌扩增出大小为522bp的特异性片段;单核细胞增生李斯特菌扩增出大小为155bp的特异性片段;大肠杆菌O157扩增出大小为366bp的特异性片段;副溶血性孤菌扩增出大小为199bp的特异性片段。多重PCR结果测定显示:大肠杆菌O157、副溶血性孤菌、普通变形杆菌、单核细胞增生李斯特菌特异性表明只有该四种菌扩增出特异性条带,其他均为阴性;灵敏度结果显示:多重PCR测定菌落计数数量级为103CFU/mL。结论:将多重PCR技术用于多重常见肠道致病菌中效果理想,能快速、准确的筛查致病菌,为临床治疗提供依据。     

应用肠道菌共同抗体检测几种肠道致病菌的特异性初步观察

用实验室自制的肠道菌共同抗原（ Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏ ｍ ｍ ｏｎ ａｎｔｉｇｅｎ ，ＥＣＡ） 免疫兔制备兔抗ＥＣＡ 抗血清，结合间接血凝试验，对肠道致病菌中的致病性大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌以及非肠道致病菌进行检测。结果表明，检测致病性大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌的阳性率分别为９５－０ ％ （１９／２０） 、９６－６ ％ （２８／２９） 、９３－３ ％ （１４／１５） ，总有效率为９５－５ ％ （６１／６４） 。而非肠道菌的阳性率仅为９－５ ％ （２／２１） 。说明本实验室制备的ＥＣＡ 抗体特异性强，可利用间接血凝试验技术，对肠道致病菌中的大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌进行快速检验     

常见食源性致病菌基因芯片鉴定技术

目的：建立鉴定食源性致病菌的基因芯片技术。方法：采用复合PCR方法扩增致病菌特异性DNA片段，结合基因芯片杂交技术鉴定不同的食源性致病菌。结果：本研究完成了采用3对引物的复合PCR扩增；不同致病菌特异性核苷酸片段同时布阵在一张芯片上；标记物质采用了非放射性的生物素，经不同标准菌种、实际检验样品和水平测试样品的考核验证，该鉴定系统灵敏度达620cfu／g，特异性高，基因芯片质量稳定，该鉴定系统基本含盖了目前食源性致病菌鉴定的需要。结论：常见食源性致病菌基因芯片鉴定技术，可为常规细菌检验方法的最终鉴定提供进一步佐证，尤其在一些培养条件苛刻的致病菌（产单核李斯特菌、弯曲菌等）的鉴定，以及在VITEK仪无法鉴定和手工鉴定判断误差大的情况下，基因芯片方法将发挥其独特的技术性优势，大大提高检验鉴定结果的准确性。     

导流杂交基因芯片技术在肠道致病菌检测中的应用研究

目的建立导流杂交芯片技术检测粪便标本中8种肠道致病菌。方法以细菌16S rDNA和23S rDNA序列设计通用引物和寡核苷酸探针,将活性氨基标记的探针依次固定在BiodyneC膜上,制成检测芯片,用标记生物素的引物进行PCR扩增,将扩增产物与检测芯片在核酸分子快速杂交仪上进行杂交,以POD和TMB进行显色,判断结果;应用该方法检测8种肠道致病菌标准菌株和120份腹泻患者粪便标本,通过细菌培养结果比较该方法的有效性。结果120份临床粪便标本中,采用导流杂交芯片共检出68份（56.67%）携带肠道致病菌;细菌培养鉴定出63份（52.50%）携带肠道致病菌,其中58份导流杂交芯片与细菌培养结果一致,准确率为85.29%。结论导流杂交芯片技术能够快速准确检测8种常见肠道致病菌,而且适用于流行病学调查研究。     

半套式聚合酶链反应检测牛奶中部分肠道致病菌

目的 建立一套食物中的单核细胞增生性李斯特氏菌、耶尔森氏菌和融溶血性弧菌等肠道致病菌的快速检测方法。方法 采用裂解法提取DNA与各自的三条引物进行二次聚合酶链反应扩增（简称半套式PCR），检测模糊阳性牛奶中部分肠道致病菌。结果 常规PCR能检出100个活菌的存在，在其产物进行半套式PCR检测时有10个活菌存在时即可扩增出特异性产物，提高10倍。最低检测限可达10cfu（集落形成单位）。结论 本方法具有特异性强、敏感性高、简便快速等特点。     

分型基因芯片检测疟原虫的研制及应用

目的 研制快速检测间日疟原虫和恶性疟原虫等并可进行分型的基因芯片。方法 筛选疟原虫高度保守而且具有种属特异性的瓣RNA基因片断为探针，制备疟原虫诊断和分型的基因芯片；检测时提取标本中的疟原虫核酸，用不对称PCR技术进行扩增和荧光标记，然后与检测芯片杂交，进行扫描和分析。结果 建立的疟原虫检测芯片能特异和敏感的对间日疟原虫和恶性疟原虫诊断及分型。结论 成功制备用于疟原虫快速侦检和分型的基因芯片，对疟疾的预防和控制具有重要意义。     

多重寡核苷酸连接-聚合酶链式反应-通用基因芯片检测食源性致病菌方法的建立

目的建立一种基于多重寡核苷酸连接-聚合酶链式反应(MOL-PCR)的食源性致病菌通用基因芯片检测方法。方法针对细菌性食物中毒8种常见致病菌,在各自特异性引物之间设计一对首尾相接的上、下游检测探针。采用多重PCR富集靶序列并作为模板,通过多重连接酶检测反应及通用不对称PCR标记,获得大量含标签互补序列(Anti-tag)的荧光标记单链产物,可与芯片上固定的标签序列(Tag)进行杂交检测。结果该方法能特异性地鉴别单一和多重目标菌感染。纯培养物的检测灵敏度为(1.1~8.5)×10~2CFU/mL。对96份食物中毒和临床腹泻样本检测,芯片结果与常规分离与生化鉴定及荧光定量PCR结果一致。结论该方法为快速、准确、灵敏、高通量地鉴定食源性疾病的病原菌提供了一种新型检测平台。     

寡核苷酸芯片技术检测肠杆菌科食源性感染常见致病菌的研究

目的：建立肠杆菌科食源性感染常见致病菌的快速检测方法。方法：选带正电荷的尼龙膜作为寡核苷酸芯片载体，采用寡核苷酸芯片技术对肠杆菌科食源性感染常见致病菌进行检测和鉴定。结果：在同一条件下运用多重PCR扩增出14种（属）细菌的16SrRNA、23SrRNA基因片段，随后应用寡核苷酸芯片技术对致病菌进行检测得到了相应的特异性杂交图谱。结论：建立的寡核苷酸芯片技术可快速检测肠杆菌科食源性感染常见致病菌，为食源性感染的快速诊断与预防奠定了良好的基础。     

肠道门诊165例腹泻患者的病原菌及流行病学分析

目的了解北京市2010年肠道门诊就诊患者的病原菌检出率、流行特征和危险因素,以便针对重点人群制定肠道传染病的防治策略。方法回顾性总结并运用描述性研究,对2010年4-9月在医院肠道门诊按腹泻病就诊的165例患者,分别进行细菌学、流行病学调查,并采集粪便标本进行细菌检测。结果在165例腹泻患者粪便标本中,检出病原菌13株,占7.9%,主要为志贺菌属与霍乱弧菌,患者中男性多于女性,以20~50岁的病例居多;可疑致病的食物以熟肉冷荤、水产品等为主。结论 2010年腹泻患者的病原菌检出率不高,但有霍乱病例,提示对该病仍应重点预防控制;由于感染性腹泻与非感染性腹泻从临床症状上难以鉴别,应针对重点人群开展有效预防控制工作。     

基于16S和23S rDNA基因芯片检测和鉴定七种临床常见病原菌

目的 以细菌16S rDNA和23S rDNA基因为靶序列建立可检测临床七种常见病原菌寡核苷酸芯片系统.方法 采用双重PCR扩增标本中靶细菌16S和23S rDNA基因片段.构建能同时检测肠出血性大肠埃希菌O157:H7、副溶血性弧菌、沙门菌、霍乱弧菌、单核细胞增生李斯特菌、空肠弯曲菌和志贺菌的寡核苷酸芯片,并考核芯片的检测特异性、灵敏度和重复性.采用所建立的寡核苷酸芯片检测81例腹泻患者粪便样本.结果 双重PCR可同时扩增上述七种病原菌的16S和23SrDNA基因靶序列.所研制的寡核苷酸芯片检测灵敏度可达103 cfu/ml,非靶细菌无阳性结果 ,不同批间和批内芯片的变异系数为3.89%～5.81%.寡核苷酸芯片检测粪便样本的阳性率为39.5%(32/81),与常规细菌学检查法检测结果 的符合率达到96.3%(78/81),菌种鉴定结果 符合率为96.8%(31132).结论 研究建立的寡核苷酸芯片法在检测七种病原菌时具有简便、快速、准确、高通量等优点,适合于临床样本检测及流行病学现场调查.     

烟台市食品行业从业人员肠道致病菌的检测及意义

目的:对烟台市从事食品行业人员的肠道致病菌进行检测,为当地食品安全的危险性评估提供依据。方法:检测2009年-2011年烟台市25600名从事食品行业的服务人员的肠道致病菌;检测方法按照国家标准GB/T4789-2003《食品卫生检验方法微生物学部分》的规定;检测菌群范围包括:沙门菌、志贺菌、豚鼠气单胞菌、致泻性大肠杆菌、溶藻弧菌、嗜水气单胞菌、霍利斯弧菌、非O1群霍乱弧菌、副溶血弧菌。结果:(1)根据生化鉴定结果表明其生化谱线符合率为93.8%～99.9%;(2)检出肠道细菌254份,阳性率为0.99%,其中弧菌科细菌为144株(含117株副溶血弧菌,12株溶藻弧菌,6株温和气单胞菌,5株非O1群霍乱弧菌,2株豚鼠气单胞菌,1株嗜水气单胞菌,1株霍利斯弧菌),占检出肠道细菌的56.69%;肠道杆菌细菌为110株(含76株沙门菌6,株志贺菌,9株致病性大肠杆菌,14株侵袭性大肠杆菌,5株产毒性大肠杆菌,占检出肠道细菌的43.30%。肠道致病菌的阳性率呈现出逐年下降的趋势,差异有显著的统计学意义;(3)检出的肠道致病菌中,以副溶血弧菌(46.06%)和沙门菌(29.90%)阳性率为最高。结论:食品行业服务人员病原菌携带的肠道致病菌以肠道弧菌为主要的病原菌。对该人群进行健康携带病原细菌调查,有利于找出微生物引起食源性疾病的关键控制点,从而采取针对性措施来规范相关人员健康检查的工作以保障食品卫生安全。     

环介导恒温扩增技术在检测儿童下呼吸道病原菌的临床应用分析

目的利用环介导恒温扩增技术探究儿童下呼吸道病原菌检测结果的临床分布特点,为实际临床工作提供参考。 方法收集2018年8月至2019年7月在天津市某儿童医院初诊为呼吸道病原菌感染的2517例患者,采集支气管肺泡灌洗液标本或深部痰标本,采用环介导恒温扩增芯片法检测下呼吸道的13种病原菌,并对检测结果进行分析。 结果应用环介导恒温扩增芯片法检测2517例下呼吸道感染住院患儿,共检出1771例病原菌阳性(痰液1174例(46.64%),肺泡灌洗液597例(23.72%))。芯片法检出的主要病原菌为肺炎支原体934例(37.11%)、肺炎链球菌557例(22.13%)、耐甲氧西林葡萄球菌397例(15.78%)、流感嗜血杆菌295例(11.72%)和金黄色葡萄球菌214例(8.50%)。不同季节感染呼吸道病原菌的阳性率不同,小儿肺炎支原体感染全年均有发生,以秋冬季多见,肺炎链球菌冬季多见,耐甲氧西林葡萄球菌春季多发,流感嗜血杆菌以春夏多发。单一病原菌感染1179例(46.84%),混合感染1338例(53.16%)。 结论对儿童检测下呼吸道病原菌感染,芯片法具有操作简单、快速、准确,明显缩短标准周转时间(TAT),且灵敏度更高、病原体覆盖面广等优势,能更好地服务于感染性疾病的快速诊断、抗生素的早期筛选以及合理使用。     

非荧光法与荧光法芯片检测细菌感染的研究

目的 研制一种用于快速检测急症常见感染细菌的芯片反应系统。方法 应用生物信息学技术，设计检测细菌的探针和聚合酶链反应扩增引物，探针点制成寡核苷酸芯片，待测样本经扩增并标记生物素或CY5荧光素后与芯片杂交，再经链酶亲和素-碱性磷酸酶显色反应后，获得肉眼可见的杂交信号，或通过荧光检测仪读出样本的检测结果。结果 建立了针对临床急症患者标本的非荧光法与荧光法芯片检测系统，芯片的检测灵敏度(大肠埃希菌)为10～100CFU／反应体系。结论 两种方法不仅能快速、灵敏地检测靶细菌感染，且重复性好、信号强及不易出现非特异信号。生物素酶联显色芯片法由于更为经济、简便而有重要的临床价值。     

核酸检测及相关技术在食源性致病菌快速检测中的研究

传统的细菌分离、培养与鉴定由于需时较长,难以适应食源性疾病预防控制的需要。近年来,伴随着核酸检测技术的迅猛发展,各种能够快速检测食源性致病菌的方法相继诞生。本文就聚合酶链式反应及其衍生技术、核酸恒温扩增技术、寡核苷酸微阵列技术、免疫磁性细胞分离技术及DNA生物传感器技术在沙门菌、金黄色葡萄球菌、肠出血性大肠埃希菌等食源性致病菌快速检测中的应用研究进行综述。     

云浮市市售3类食品肠道致病菌污染状况调查

目的 了解云浮市市售熟肉类、面包糕点类及水产类等3类食品受5种肠道致病菌的污染状况及各类肠道致病菌的分布及菌株生物学特点,为预防食源性疾病提供科学依据.方法 每月抽取一定数量3类食品样品,依据国标检验方法,对样品分别进行沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌、蜡样芽胞杆菌和副溶血性弧菌的分离培养、生化试验,必要的菌株再作血清学鉴定分型.结果 共检验3类食品样品1 353份,检出肠道致病菌32株,总检出率是2.37%;其中蜡样芽胞杆菌11株,副溶血性弧菌9株,沙门菌5株,致泻性大肠埃希菌4株,志贺菌3株;熟肉类食品、面包糕点类食品及水产类食品肠道致病菌检出率分别是2.95%、1.59%、2.66%;7、8、9月3个月的致病菌检出率相对较高,沙门菌、志贺菌、致泻性大肠埃希菌的主要血清型是鼠伤寒沙门菌,福氏志贺2 a、肠道致病性大肠埃希菌（EPEC）.结论 云浮市市售3类食品均存在肠道致病菌污染,熟肉类食品以蜡样芽胞杆菌和沙门菌为主,面包糕点类食品以蜡样芽胞杆菌为主,水产类食品以副溶血性弧菌为主,3类食品的污染程度虽不算严重,但亦应引起卫生监督管理部门重视,加强监管和监测力度,减少和避免云浮市食源性疾病的发生.     

基于非对称发夹探针的杂交链反应技术应用于病原菌检测的实验研究

目的 应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术,检测肺炎克雷伯菌不对称PCR产物,建立一种新的病原菌快速检测方法.方法 采用Array Designer 4.0软件,针对肺炎克雷伯菌的16S rDNA可变区域设计非对称发夹式DNA探针,优化探针浓度,以不对称PCR扩增肺炎克雷伯菌16rDNA可变区所制备的单链DNA为靶序列,采用HCR进行检测和分析.结果 HCR体系中发夹探针最佳浓度为1μmol/L;当靶序列初始浓度≥0.05μmol/L时,通过琼脂糖凝胶电泳可观察到明显的HCR聚合物;不对称PCR法制备的单链DNA可以启动杂交反应.结论 应用基于非对称发夹探针的杂交链反应技术检测病原菌具有反应体系简单,无需酶促反应等优点,可对血流感染病原菌基因组进行简便、快速、特异的检测.     

DNA探针在呼吸机相关性肺炎病原学检测中的诊断价值

目的建立一种早期、快速检测呼吸机相关性肺炎致病菌的分子生物学方法。方法采用聚合酶链反应合成铜绿假单胞菌、甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯杆菌和流感嗜血杆菌这5种细菌的特异DNA探针和细菌16SrRNA的通用探针,分别与生物素标记的细菌、病毒和真菌DNA杂交。杂交法和培养法同时检测100份痰液标本。结果所合成的DNA探针具有高度特异性,与其他细菌、病毒、真菌间无交叉反应。该方法可检测出1 ng细菌DNA。杂交法阳性率显著高于培养法。结论所合成的DNA探针敏感性高,特异性强,具有较高的应用价值,可应用于临床标本检测。