戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的鉴定

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ｈｅｐａｔｉｔｉｓＥｖｉｒｕｓ,ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定,并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度;微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度;腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,３周后取血清进行抗体检测;利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接种病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ,ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性;在２ＢＳ、Ａ５４９细胞中连传３代,病毒滴度稳定,在ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中病毒滴度稍低;在接种Ｆ８６株病毒的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠中可检出特异性抗体;在其细胞培养物中检出ＨＥＶ聚合酶区一段核苷酸序列,测序结果与我国８７Ａ株的同源性为９８．７％。结论：Ｆ８６株病毒不能凝集人Ｏ型红细胞,对２ＢＳ、Ａ５４９及ＬＬＣ－ＭＫ２细胞均敏感,对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠不致病。部分序列的测定结果表明该株病毒确为ＨＥＶ,从而由国外实验室证实ＨＥＶ可用人源性细胞分离。     

中国大陆庚型肝炎病毒结构区与非结构区部分cDNA基因的序列分析

作者在建立检测庚型肝炎病毒酶免疫和ＰＣＲ技术的基础上，将抗－ＨＣＶ上阳性病人血清经逆转录－巢式ＰＣＲ分离部分ＨＧＶｃＤＮＡ片段，用与ＨＧＶ基因互补的特异寡核苷酸引物进行双脱氧核苷酸链末端终止法－ＰＣＲ直接测序。结果表明，中国大陆ＨＧ－３０２Ⅰ株部分ｃＤＮＡ序列与Ｌｉｎｎｅｎ等报道的ＨＧＢ美国株ｃＤＮＡ序列有极高的同源性。     

戊型肝炎病毒F86株的某些生物学性状及分子生物学特征的 …

目的：对法国赠送的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）Ｆ８６株进行生物学性状与基因特征的鉴定，并与我国分离的８７Ａ株病毒进行比较。方法：用常量法测定病毒的血凝滴度；微量滴定法测定在２ＢＳ、Ａ５４９、ＬＬＣ－ＭＫ２细胞中的病毒滴度；腹腔注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，３周后取血清进行抗体检测；利用ＲＴ－ＰＣＲ方法从接触病毒的细胞培养液中直接检测病毒ＲＮＡ，ＰＣＲ阳性产物纯化回收后克隆并测序。结果：Ｆ８６株病毒血凝试验阴性；     

反义寡核苷酸体外抗丁型肝炎病毒的初步研究

以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。     

登革2型病毒NS3基因的扩增及序列测定

采用热酚法从登革２ 型病毒４３ 株（Ｄ２ ４３） 感染的Ｃ６／３６ 细胞中提取了病毒ＲＮＡ,以病毒ＲＮＡ 为模板,进行Ｄ２ ４３ 株ＮＳ３ 基因ｃＤＮＡ 片段的反转录 ＰＣＲ 扩增,片段长度为１１７６ ｂｐ。将扩增的ｃＤＮＡ 片段克隆到Ｔ 载体ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ｋｓⅡ（ ＋ ） 中。通过双脱氧法测定了ｃＤＮＡ片段序列,与国际标准株ＮＧＣ株序列一致。     

戊型肝炎病人及实验感染猴粪便中戊型肝炎病毒基因的检出

采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）结合ＤＮＡ杂交技术，直接检测急性戊型肝炎病人和实验感染猴粪便标中的戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）基因，将从粪便标本中提取的ＲＮＡ反转录合成ｃＤＮＡ后，用ＨＥＶ特异引物进行套式ＰＣＲ扩增，并用长臂光敏生物素村记的ＨＥＶＥＴ１．１核酸探针进行杂交，结果显示，直接从６份病人１０％粪悬液标本中提取的ＲＮＡ进行ＲＴ－ＰＣＲ，在琼脂糖凝胶电泳上未见任何信号带，点杂交也未见阳性，但     

PCT检测HCV-RNA阳性与血清HCV抗体的对比研究

ＰＣＴ检测ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性与血清ＨＣＶ抗体的对比研究武警河南总队医院病理科梁喜林，郑晓芙，彭亚丁，粟娟（郑州４５００５２）关键词ＰＣＲ检测，ＨＣＶ－ＲＮＡ，抗－ＨＣＶ采用ＰＣＲ技术检测ＨＣＶ－ＲＮＡ及酶免检测血清丙型肝炎抗体（抗－ＨＣＶ）来测定及辅...     

PCNA基因反义RNA表达质粒的构建及对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应

为观察ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应,用ＤＮＡ重组法将人ＰＣ－ＮＡ基因反向克隆到真核细胞表达质粒ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中,构建成ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲ－ＰＣＮＡ,用ＬｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＴＭ介导转染人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,并接种于裸鼠背部皮下。经Ｇ４１８筛选获得的转染细胞系ＳＧＣ／ＰＣＮＡ与亲本细胞相比,其生长速度减慢,ＲＮＡ、蛋白质生物合成受到抑制,Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期ＤＮＡ含量降低,移植瘤生长速度减慢,瘤体平均直径（０．５４±０．１３）ｃｍ,明显小于对照组（１．５１±０．１１）ｃｍ。结果表明,ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对胃癌裸鼠移植瘤生长具有明显的抑制作用。     

HCVC 蛋白基因在 E . coli 中的表达及其抗原表位分析

ＨＣＶＣ蛋白基因在Ｅ．ｃｏｌｉ中的表达及其抗原表位分析逯好英徐东刚肖定华潘和平王春杰＊军事医学科学院基础医学研究所北京１００８５０丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）是单股正链ＲＮＡ病毒，不同分离株之间其基因组序列变异较大，不同区段变异程度也各不相同，相比之下Ｃ区...     

α 粒子诱发人胎气管永生化纤维细胞恶性转化相关基因的分析

目的探索辐射诱发细胞恶性转化相关基因。方法本实验利用３’端引物ＨＴ１１Ｍ（Ｇ，Ｃ，Ａ）与５’端引物ＨＡＰ１７～２４所配的２４对引物同时对ＳＨＴＦ（ＳＶ４０ｉｍｍｏｒｔａｌｉｚｅｄｈｕｍａｎｆｅｔａｌｔｒａｃｈｅａｌｆｉｂｒｏｂｌａｓｔＳＨＴＦ）细胞和经２３８Ｐｕα粒子照射后能在软琼脂上形成克隆的此细胞（αＳＨＴＦ）的ｍＲＮＡ进行反转录ＰＣＲ扩增，６％测序胶电泳，放射自显影。结果发现有２３条基因片段在αＳＨＴＦ细胞中表达，ＳＨＴＦ细胞中不表达。回收差异的基因片段，随机取其中１２条重新扩增后得到６条扩增片段。其中Ｃ１７－５，Ｃ２３－１两片段经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｄｏｔ杂交后，均与αＳＨＴＦ细胞ＲＮＡ有强阳性杂交信号，与ＳＨＴＦ细胞ＲＮＡ无杂交信号。结论本实验证实了ＳＨＴＦ和αＳＨＴＦ细胞的基因表达有差异存在。     

人源汉坦病毒H8205株S基因NP编码区的序列测定及其NP强抗 …

目的：确定人源汉坦病毒Ｈ８２０５株在汉坦病毒属中的分类地位及找出核衣壳蛋白（ｎｕｃｌｅｏｃａｐｓｉｄ,ＮＰ）强抗原性的分子生物学基础。方法：采用半套式ＲＴ－ＰＣＲ扩增Ｈ８２０５Ｓ基因核衣壳蛋白（ＮＰ）编码区,克隆于载体ｐＢＶ２２０中并进行序列测定。测序结果用ＰＣＧＥＮＥ分析。结果：Ｈ８２０５株Ｓ基因ＮＰ编码区为１２９０ｂｐ（含两端引物序列）与７６－１１８株核苷酸的同源性为８３．０％,氨基到的同源性     

利用T─载体克隆法对人脑源性神经营养因子全长基因PCR产物的克隆

利用Ｔ－载体克隆法完成了含信号肽及前导肽的人脑源性神经营养因子（ｂｒａｉｎ－ｄｅｒｉｖｅｄｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ，ＢＤＮＦ）全长基因ＰＣＲ产物的克隆。序列测定结果表明，所克隆的人ＢＤＮＦ基因从起始密码子ＡＴＧ到终止密码子ＴＡＧ的７７４ｂｐ中，除下游端ＰＣＲ引物因为采用猪的ＰＣＲ引物而有一个碱基改变外，其它序列与国外文献报道序列完全一致。该碱基改变不影响氨基酸序列     

长链RT-PCR扩增我国登革2型病毒5′半分子

登革病毒是单股正链ＲＮＡ病毒 ,基因组全长约 11ｋｂ ,近95 %为编码基因 ,由单一的开放读码框编码 3种结构蛋白和7种非结构蛋白。目前登革病毒致病机制仍不很清楚 ,也缺乏安全有效的疫苗。反向遗传学技术 ,即由病毒的全长ｃＤＮＡ克隆体外转录获取ＲＮＡ病毒的技术 ,为深入研究ＲＮＡ病毒基因组结构和功能、筛选候选疫苗株等方面的工作开辟了新途径 ,该技术实现了对ＲＮＡ病毒基因组的直接操作 ,具有广阔的应用前景。已报道的登革病毒全长ｃＤＮＡ克隆有 4株 ,均为体外连接法获得 ,即用逆转录ＰＣＲ(ＲＴ ＰＣＲ)法扩增出小片段ｃＤＮＡ逐…     

PCNA基因反义RNA表达质粒的构建及人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应

为观察ＰＣＮＡ基因反义ＲＮＡ表达质粒对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制效应,用ＤＮＡ重组法将人ＰＣＮＡ基因反向克隆到真核细胞表达质粒ｐＤＯＲ－ｎｅｏ中,构建成ＰＣＮＡ基因真核表达质粒ｐＤＲ－ＰＣＮＡ,用Ｌｉｐｏｆｅｃｔ ＡＭＩＮ＾ＴＭ介导转梁人胃癌细胞系ＳＧＣ－７９０１,并接种于裸鼠背部皮下。经Ｇ４１８筛选获得的转染细胞系ＳＧＣ／ＰＣＮＡ与亲本细胞相比,其生长速度减慢,ＲＮＡ、蛋白质生物合成受到抑制,Ｓ期、     

用多重及套式PCR同时检测血清中的HBV和HCV方法的建立

首次应用多重及套式ＰＣＲ技术同时检测人血清中的ＨＢＶ和ＨＣＶ。将抽提的ＨＢＶＤＮＡ和（或）ＨＣＶＲＮＡ在含ＡＭＶ逆转录酶、ＴａｑＤＮＡ多聚酶以及ＨＢＶ和ＨＣＶ外套引物的ＰＣＲ缓冲引物的ＰＣＲ缓冲液中进行逆转录后连续进行ＰＣＲ扩增，以第一轮扩增产物为模板，在含ＨＢＶ和ＨＣＶ内套引物的ＰＣＲ反应体系中进行第二轮扩增，产物经电泳后，以ＤＮＡ分子量标志物或已知片段做参考，出现５２３ｂｐ和（或）２６０ｂｐ产     

HIP PAIN FOLLOWING REPLACEMENT OF ARTIFICIAL BIPOLAR FEMORAL HEAD:AN ANALYSIS OF 13 CASES

ＨＩＰＰＡＩＮＦＯＬＬＯＷＩＮＧＲＥＰＬＡＣＥＭＥＮＴＯＦＡＲＴＩＦＩＣＩＡＬＢＩＰＯＬＡＲＦＥＭＯＲＡＬＨＥＡＤ：ＡＮＡＮＡＬＹＳＩＳＯＦ１３ＣＡＳＥＳＫＯＮＧＲｏｎｇ（孔荣），ＦＡＮＧＳｈｉ－ｙｕａｎ（方诗元），ＫＯＮＧＦａｎ－ｊｉｎ（孔繁锦）．...     

PERIPHERAL NERVE REPAIR IN RATS USING VASCULARIZED FROZEN IN-SITU MUSCLE AUTOGRAFT

ＰＥＲＩＰＨＥＲＡＬＮＥＲＶＥＲＥＰＡＩＲＩＮＲＡＴＳＵＳＩＮＧＶＡＳＣＵＬＡＲＩＺＥＤＦＲＯＺＥＮＩＮ┐ＳＩＴＵＭＵＳＣＬＥＡＵＴＯＧＲＡＦＴＷＡＮＧＹａｎ（王岩）１，ＺＨＵＳｈｅｎｇ－ｘｉｕ（朱盛修）１，ＨＵＮＧＬＫ２，ＬＥＵＮＧＰＣ２１．Ｄｅｐ...     

胃癌组织中EB病毒感染状况

为探讨ＥＢ病毒（ＥＢＶ）感染与胃癌（ＧＣ）发生的关系，作者应用原位聚合酶链反应（ＰＣＲＩＳ）及一步反转录（ＯＲＴ－ＰＣＲＩＳ）对ＧＣ、慢性萎缩性胃炎（ＣＡＧ）、慢性浅表性胃炎（ＣＳＧ）３组病例１３６例组织标本进行ＥＢＶ ＤＮＡ或ＥＢＶ ＲＮＡ检测。发现ＥＢＶ在ＧＣ组检出率达２９．６％（１６／５４）、ＣＡＧ组为１１．６％（６／４３     

抗HBsAg人IgG表达载体的构建及其在CHO细胞中的表达

尝试将一株来源于人源性噬菌体抗体库的抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ,转换成完整的抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ。方法：采用重叠ＰＣＲ方法,在抗ＨＢｓＡｇ人Ｆａｂ的Ｖｋ和ＶＨ基因的５’端接上合工合成的人ｋ链的前导序列,构建表达完整ＩｇＧ１的真核表达载体,转染ＣＨＯ（ＤＨＦＲ＾－）细胞,用ＥＬＩＳＡ、ＲＴ－ＰＣＲ和免疫印迹检测抗ＨＢｓＡｇ人ＩｇＧ的表达,通过ＤＨＦＲ／ＭＴＸ体系及金属离子诱导提高Ｉｇ表达。结果：获得表达量     

输血传播病毒-DNA聚合酶链方法的建立及应用

目的：建立输血传播病毒（ＴＴＶ）－ＤＮＡ聚合酶链反应方法并应用于新疆地区不同人群ＴＴＶ感染的检测。方法：根据已报道的ＴＴＶ基因痛列（ＤＤＢＪ序列号：ＡＢ００８３９４）,通过引物设计软件ＳＱＮＣＥ和ＯＬＩＧＯ在其ＯＲＦ１区设计一对ＰＣＲ引物,扩增产生一个３１５ｂｐ的扩增片段,产物经ＢｇⅠⅡ酶切分别产生一个２１９ｂｐ和９６ｂｐ的酶切片段。结果：用建立的ＰＣＲ方法在１５例维存尔族转氨酶升高的非甲－非庚型