银杏叶提取物对血管内皮细胞的保护作用

目的 观察银杏叶提取物(GBE)对动脉粥样硬化模型大鼠血管内皮细胞的影响,并初步阐明其机制.方法 将15只SD大鼠随机分为对照组、模型组、GBE组.用高胆固醇饲料喂养12周制备动脉粥样硬化大鼠模型.GBE组给予GBE水溶液96 mg·kg-1·d-1灌胃,12周后取主动脉进行组织病理学检查,以电泳迁移率变动分析法(EMSA)检测核转录因子-κB(NF-κB)活性,用放射免疫法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平,用酶联免疫吸附试验测量可溶性血栓调节蛋白(sTM)水平.结果 电镜下显示,模型组血管内皮细胞存在明显的崩解现象,而GBE组损伤轻微.与对照组比较,模型组主动脉NF-κB活性、血清TNF-α、II-6和sTM水平均显著升高,GBE组也有升高,但明显低于模型组(P均＜0.05).NF-κB活性与TNF-α、IL-6、sTM水平呈显著直线相关,sTM与TNF-α、IL-6呈显著直线相关(P均＜0.05).结论 GBE可以通过抑制主动脉中NF-κB的活性、减轻过度的炎症反应而发挥保护内皮细胞的作用.     

葛根素在大鼠全脑缺血-再灌注时对核因子-κB表达的影响

目的:探讨葛根素在全脑缺血-再灌注损伤中的作用机制.方法:采用Pulsinelli法建立大鼠全脑缺血-再灌注模型.分别在大鼠全脑缺血10 min后再灌注2、6、12、24和48 h时,用免疫组织化学法检测海马CA1区核因子-κB(NF-κB)的活性和抑制蛋白-κB(IκB)的表达,用原位杂交法检测肿瘤坏死因子-α mRNA(TNF-α mRNA)的表达,用苏木精-伊红(HE)染色检测存活神经元数目.结果:全脑缺血-再灌注后,NF-κB的活性和TNF-α mRNA的表达在2 h即明显升高,分别在6 h和12 h达到高峰,48 h仍高于假手术组(P均<0.01);IκB的表达在2 h有明显下降,6 h降至最低点,以后逐渐升至2 h水平,存活神经元数目随再灌注时间的延长而逐渐较少(P均<0.01).在各对应时间点,葛根素可明显降低NF-κB的活性(P均<0.05), 增加IκB的表达和存活神经元数目(P<0.05或 P<0.01);在6～48 h时降低TNF -α mRNA的表达(P<0.05).结论:全脑缺血-再灌注时,葛根素可通过抑制IκB的降解及NF-κB的活性,下调TNF-α mRNA的表达,而起到脑保护作用.     

一氧化氮和白介素-10抑制核因子-κB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4 h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1 h最显著(P＜0.01).结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

一氧化氮和白介素—10抑制核因子—kB活化的实验研究

目的探讨一氧化氮(NO)和白介素-10(IL-10)对内毒素(LPS)诱导的肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化的调节,为临床运用提供理论依据.方法用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、NO+LPS组和IL-10+LPS组.用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量.结果LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h显著高于正常对照组(P＜0.01);NO+LPS组和IL-10+LPS组的NF-κB活性和TNF-α含量与LPS组相比均明显下降,尤在刺激后1h最显著(P＜0.01).结论LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;NO和IL-10可抑制NF-κB活化,减少TNF-α的释放,缓解LPS诱导的ALI.     

血管紧张素-Ⅱ活化肺微血管内皮细胞核因子-κB的研究

目的 探讨血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)对肺微血管内皮细胞(HPMEC)核因子-κB(NF-κB)的活性的影响,以及经典途径在Ang Ⅱ介导的NF-κB活化过程中的作用.方法 本实验分为:Ang Ⅱ组:10-6 mol/L AngⅡ分别刺激HPMEC 0、0.5、1、2、4 h;氯沙坦组:10-6mol/L氯沙坦(AngⅡ 1型受体阻滞剂)预先处理HPMEC 1 h,再予相同10-6mol/L AngⅡ刺激细胞2 h,提取胞浆蛋白和胞核蛋白.凝胶电泳迁移率分析实验(EMSA)观察细胞中NF-κB的DNA结合活性.Western印迹检测细胞浆中抑制因子κBα(IκBα)的含量.结果 AngⅡ刺激HPMEC 0.5 h后细胞中NF-κB活性明显上升(144.5±16.1),在2h达到峰值(270.1±27.2),4 h(215.1±17.8)较2 h有所下降,但仍高于0 h水平,以上各时间点与AngⅡ刺激细胞0 h(100.0±25.1)相比,差异有统计学意义(P＜0.05).与Ang Ⅱ刺激HPMEC 0 h IκBα含量(44.4%±2.1%)相比,0.5 h后IκBα含量即开始明显下降(38.9%±3.6%,P＜0.05),2 h后IκBα含量下降最为明显(32.6%±2.3%,P＜0.05),4 h细胞中IκBα含量较2 h有所上升,但仍然明显低于ArgⅡ刺激0 h细胞中IκBα的含量(40.1%±4.7%,P＜0.05).氯沙坦组NF-κB活性(115.4±10.7)和IκBα含量(43.6%±3.7%)与AngⅡ组0 h相比无明显差异.氯沙坦组中NF-κB活性明显低于AngⅡ组2 h,氯沙坦组中iκBα的含量亦明显高于AngⅡ组2 h.结论 AugⅡ能通过AT1介导HPMEC中NF-κB活化.经典途径参与了AagⅡ诱导的HPMEC中NF-κB活化过程.     

多肽cSN50通过核质转运受体Importinα抑制HepG2细胞核因子-KB及其下游因子的表达

目的 研究乙醇、内毒素是否通过核转录因子NF-kappaB即IκB-NF-κB-importinα途径引起细胞炎症、凋亡和诱导下游基因TNF-α、Caspase-3的表达;cSN50作为一种穿膜多肽通过阻断NF-κB与importinα结合,从而抑制NF-κB核转位及其下游基因的表达,起到保护细胞的作用.方法 应用流式细胞仪观察HepG2经不同浓度乙醇、内毒素刺激后的细胞凋亡率;分光光度计法测Caspase-3活性;ELISA法检测细胞培养上清TNF-α;Western blot法检测NF-κB p50、importinα3、IκBα,间接免疫荧光法测p50、IκBα、importinα3的活化水平.结果 乙醇、内毒素刺激后TNF-α、Caspase-3的值量效上与空白对照组比差异均有统计学意义(P均＜0.05),细胞核内p50显著增加(P＜0.05),胞浆IκBα下降(P＜0.05),cSN50( 100 μmol/L)能部分阻断P50的核转位及其下游因子的表达(P＜0.05).结论 急性酒精肝损伤中,NF-κB的核转位在此损伤中起重要作用,cSN50能部分抑制被刺激后的HepG2细胞核中NF-κB活性及其下游基因的表达.     

烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB活化与肾损伤关系的研究

目的研究烫伤脓毒症大鼠肾脏核转录因子-κB (NF-κB)活化与肾损伤的关系.方法采用30%总体表面积Ⅲ度烫伤加内毒素攻击制备烫伤脓毒症大鼠模型.54只Wistar大鼠随机分为正常对照组、烫伤脓毒症1、2、6、12和24 h组,烫伤脓毒症1、2和6 h+NF-κB抑制剂吡咯烷二硫基甲酸酯(PDTC)组.采用凝胶电泳迁移率改变分析法(EMSA)检测肾组织NF-κB活性;采用酶联免疫吸附法检测血浆及肾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的变化;采用自动生化分析仪检测血肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)含量.结果肾组织NF-κB活性于烫伤脓毒症后1 h明显增强并达到高峰(P<0.01),PDTC可显著降低烫伤脓毒症后1 h NF-κB的活性.烫伤脓毒症后1 h和2 h血浆及肾组织中TNF-α水平均明显增高(P均<0.01),PDTC可显著降低伤后血浆TNF-α水平(P均<0.01),对肾组织中TNF-α水平影响不明显.烫伤脓毒症后BUN及SCr含量均明显增高(P均<0.01),PDTC对BUN和SCr含量均无显著影响.结论 NF-κB抑制剂可降低烫伤脓毒症大鼠肾组织NFκB活性,但对肾脏功能无明显保护作用.     

大鼠颅脑损伤后脑NF-κB的活性和NF-κB mRNA表达的变化及意义

目的 观察颅脑损伤后不同阶段脑NF-κB的活性和NF-κB mRNA表达的变化,探讨其在颅脑损伤后继发性损伤中意义及相关机制.方法 建立颅脑损伤模型,通过光镜观察颅脑损伤后病灶周围脑组织变化,采用免疫组化方法检测脑组织中NF-κB及TNF-α的表达情况,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达情况.结果 颅脑损伤后不同阶段NF-κB蛋白表达及mRNA表达明显高于对照组（P＜0.05）,并且NF-κB表达水平与TNF-α呈正相关关系（r=0.519,P＜0.05）,且与组织炎症损伤程度一致.结论 颅脑损伤后各时间点脑NF-κB呈过度激活状态,与TNF-α水平的变化一致,且病理上颅脑损伤炎症损害严重程度相平行,这可能是颅脑损伤后继发性损伤发生的一个机制.     

严重烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子的变化及免疫功能机制

背景严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质.烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚.目的观察严重烫伤后不同时相点及运用特异性NF-κB抑制剂吡咯啉烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB活性、IκB-α的表达及肿瘤坏死因子(TNF-α)的变化,从信号转导的角度探讨巨噬细胞功能紊乱的机制.设计随机对照的实验研究.单位创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室.材料实验于1999-01/06在第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成.实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠30只.干预以小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤.实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48 h组.收集腹腔巨噬细胞.采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,免疫印迹法测IκB-α的表达,反转录-PCR测TNF-α mRNA的表达.主要观察指标①检测TNF-α的含量.②测定NF-κB的活性.③检测IκB-α的表达.④测TNF-α mRNA的表达.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰,为(1 085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P＜0.01).NF-κB活性于伤后明显活化,于2 h达到了高峰(t=13.31,P＜0.01),为(56.8±7.3)RDU,早于TNF-α的增多.与正常对照组相比,IκB-α的表达于烫伤后2 h显著下降(t=4.23,P＜0.01),达到0.632±0.086,以后上升,至24 h达到高峰(t=7.06,P＜0.01),为1.161±0.097,48 h稍降(t=4.82,P＜0.01),为1.149±0.167.以伤后12 h为调控点,予PDTC后NF-κB活性及TNF-α mRNA表达量均显著下降(P＜0.01).结论烫伤后NF-κB活性及TNF-α表达明显增强,IκB-α对NF-κB在高水平上维持着一种制约关系.烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞内NF-κB信号途径参与TNF-α表达的调控.     

肝X受体激动剂GW3965预处理对大鼠肝移植再灌注期肝脏保护作用的实验研究

目的探讨经过GW3965预处理激动肝X受体(LXR)后对SD大鼠肝移植缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用及其机制。方法 70只雄性、健康的SD大鼠,分为假手术组(SO组,14只)GW3965预处理组(GW3965组,14对)和原位肝移植组(OLT组,14对);术后分别检测各时相点的血清转氨酶、肝组织病理改变、血浆炎症因子(TNF-α、IL-1)水平,肝病理组织中NF-κB表达水平。结果再灌注6、24h后原位肝移植组与GW3965组血浆炎症因子表达水平、血清转氨酶、肝脏组织病理损伤程度、核因子κB(NF-κB)表达水平均高于SO组;而再灌注6、24h后,GW3965组血清转氨酶、血浆炎症因子表达水平、肝脏组织病理损伤、NF-κB表达水平低于OLT组,差异有统计学意义(P0.05)。结论预先经过GW3965激动供肝的LXR后可以有效降低肝移植再灌注期肝脏内毒素信号通路中的核因子κB NF-κB表达和其下游炎症肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1(IL-1)因子的产生,从而有效保护移植供肝缺血再灌注的损伤。     

电针对脑缺血大鼠NF-κB及TNF-α表达的影响

目的:探讨核转录凶子-κB(NF-κB)活性和肿瘤坏死因子(TNF-α)在脑缺血再灌注大鼠海马表达变化的规律和电针干预对其影响.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针治疗组.采用改良线栓法制备局灶型脑缺血(MCAO)再灌模型,电针"大椎"、双侧"内关"穴.运用免疫组化检测法观察海马组织NF-κB-p65蛋白的表达及核转位:用放射免疫法测定各组大鼠海马组织中TNF-α含量的变化.结果:模型各组大鼠缺血侧海马CA1区NF-κB-p65蛋白表达和海马组织TNF-α含量显著增高(P＜0.01).与模型各组大鼠相比,电针治疗组缺血侧海马组织CA1区NF-κB-p65蛋白表达和TNF-α含量均显著降低.结论:TNF-α的表达上调后可活化NF-KB,参与脑损伤后继发性炎症反应过程,电针能抑制其活化可以减轻脑缺血再灌注时的炎症反应,发挥神经保护作用.     

白介素-10对内毒素诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB活化及肿瘤坏死因子释放的调节

目的 探讨白介素-10对内毒素(LPS)诱导肺泡巨噬细胞核因子-κB(NF-κB)活化及肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达的调节,为临床运用白介素-10提供理论依据。方法 用支气管肺泡灌洗法收集肺泡巨噬细胞(PAM)进行培养,分正常对照组、LPS组、IL-10＋LPS组。用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和ELISA法分别检测核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α含量。结果 LPS组NF-κB活性和TNF-α含量在刺激后0.5～4h明显高于正常对照组;IL-10＋LPS组NF-κB活性和TNF-α含量均显著低于LPS组。结论 LPS诱导PAM的NF-κB活化,导致TNF-α基因表达增强;白介素-10可抑制NF-κB活化而减少TNF-α的释放。     

吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐对缺血再灌注所致肝损伤的保护作用

目的：探讨吡咯烷二硫代氨甲基甲酸盐(PDTC)对肝脏缺血再灌注(HIR)所致大鼠急性肝损伤(ALI)的保护作用及其作用机制。方法：Wister大鼠随机数字表法分为：HIR组，PDTC保护(HIR PDTC)组。HIR组阻断肝左叶及肝中叶的人肝血流60min后再灌注，PDTC组先经阴茎背静脉注射PDTC 120mg／kg后立即按HIR组致伤。分别采用EMSA法及免疫组化法检测再灌注后1，3，6，12h NF-κB活性及TNF-α表达，并用赖氏法检测血浆中ALT含量。另取大鼠20只，亦随机数字表法分为HIR组和PDTC保护组，观察ALT动态变化及生存率。结果：损伤后NF-κB结合活性明显升高，并于再灌注后3h达到高峰，TNF-α表达增加，同时血浆中ALT含量亦明显丹高，PDTC保护组NF-κB活性减弱，TNF-α表达减弱，ALT水平降低。PDTC保护组ALT异常时间缩短，生存率增加。结论：PDTC能通过抑制NF-κB的激活，减少致炎因子的基因表达与合成释放，减轻炎细胞浸润，从而对HIR所致ALI起到保护作用，有利于HIR损伤的康复。     

雷公藤氯内酯醇对急性肺损伤核因子-κB的调节功能观察

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)在急性肺损伤(ALI)中的作用及雷公藤氯内酯醇(T4)的调节功能.方法:实验分ALI组、雷公藤T4组、健康对照组.用迁移电泳法(EMSA)检测外周血单核细胞(PBMC)中NF-κB活性;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PBMC培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL10)含量.结果:与健康对照组比较,ALI组PBMC中NF-κB活性明显增强(P<0.01),PBMC 培养上清中TNF-α、IL-10含量均明显升高(P均<0.01);TNF-α含量随NF-κB活化而增高,两者呈显著正相关(r=0.79,P<0.01).与ALI组比较,雷公藤T4组PBMC中NF-κB活性显著下降(P<0.01);TNF-α、IL10含量亦明显下降(P<0.05和P<0.01).结论:ALI时PBMC中NF-κB明显活化,介导促炎、抗炎介质大量释放,参与ALI发生.雷公藤T4能明显抑制NF-κB活化及促炎介质TNF-α、抗炎介质IL10释放,调节促炎/抗炎反应失衡.     

大黄对脓毒症大鼠核因子-kB活化的抑制作用

目的:探讨脓毒症时肠道组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核因子-κB(NF-κB)活性的相关性,揭示大黄治疗脓毒症的有效机制.方法:采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症模型.分别在术后1、3、6、12、24、48 h活杀大鼠取肠黏膜组织,用酶联免疫吸附法测TNF-α、MCP-1的含量,用凝胶电泳迁移法测NF-κB的活性.在脓毒症模型基础上加用大黄治疗,分别于治疗后12、24、48、72 h活杀大鼠,用同样的方法检测TNF-α、MCP-1含量及NF-κB活性. 结果:脓毒症大鼠肠黏膜NF-κB活性及TNF-α、MCP-1含量均较相应对照组明显升高(P均<0.01);大黄治疗后能明显抑制升高的NF-κB活性和TNF-α、MCP-1含量(P均<0.05).结论:TNF-α、MCP-1是脓毒症早期激活的细胞因子,其释放与NF-κB活性密切相关;大黄可通过抑制NF-κB活性、减少炎症细胞因子释放而达到抑制炎症反应的作用.     

七氟醚预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清NF-κB、TNF-α、IL-6表达的影响

目的探究七氟醚(SEVO)预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠血清核因子(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)表达的影响。方法雄性SD大鼠70只,随机分为7组(n=10):(1)Shame组(假手术组)。(2)I/R组(单纯缺血再灌注组)。(3)BW1组:缺血前注射NF-κB特异性激动剂灰树花β-葡聚糖BW1 1.0 mg/kg,30 min后进行缺血再灌注。(4)SEVO+NO组:缺血前先吸入SEVO 30 min后,停止吸入165 min,不进行缺血再灌注。(5)SEVO组:缺血前30 min吸入SEVO维持30 min。(6)BW1+SEVO组:缺血前先注射BW1,30 min后,吸入SEVO。(7)SEVO+BW1组:缺血前先吸入SEVO 30 min后,立即注射BW1。对于SEVO处理组,SEVO持续吸入30 min后,停止吸入15 min以排除SEVO,心肌缺血30 min后,再灌注2 h。比较各组麻醉后即刻、吸入SEVO 15 min、缺血前、缺血15 min、再灌注1 h、再灌注2 h时的心率(HR)、平均动脉压(MAP)、收缩压与心率的乘积(RPP)情况。采用三苯基四唑氯化物(TTC)染色法测定心肌危险区域梗死面积和梗死区域面积。30只大鼠随机分为3组,每组10只,Shame组、I/R组、SEVO组大鼠处理同上。再灌注2 h后,腹主动脉取血,采用放射性免疫法分别测各组血清NF-κB、TNF-α、IL-6水平。结果吸入SEVO 15 min时,SEVO-NO组、SEVO组、BW1+SEVO组、SEVO+BW1组的HR、MAP、RPP水平均显著低于麻醉后即刻水平(P0.05)。各组危险区面积差异无统计学意义(P0.05)。与I/R组相比,SEVO组和BW1+SEVO组梗死区面积显著减小(P0.05);与SEVO组相比,SEVO+BW1组梗死面积显著增加(P0.05)。与Shame组相比,I/R组NF-κB、TNF-α、IL-6水平显著增加(P0.05);与I/R组相比,SEVO组NF-κB、TNF-α、IL-6水平显著下调(P0.05)。结论七氟醚预处理,可减少大鼠心肌缺血再灌注后梗死面积,保证血流动力学稳定,并通过抑制NF-κB信号通路活性来抑制TNF-α、IL-6分泌,保护心脏以免于受缺血再灌注的损伤。     

二烯丙基三硫对急性肺损伤小鼠肿瘤坏死因子-α表达及核转录因子-κB活性的影响

目的探讨二烯丙基三硫(DATS)对脂多糖(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及核转录因子-κB(NF-κB)活性的影响。方法复制LPS致ALI小鼠模型。实验动物按随机数字表法分为生理盐水对照组、ALI模型组、DATS预防组、DATS治疗组和DATS对照组。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组血清和肺组织匀浆上清液中TNF-α浓度;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组肺组织TNF-a mRNA表达;凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)检测肺组织NF-κB活性。结果ALI模型组2 h血清及肺组织TNF-α含量明显升高(P均＜0．01),6 h有所降低,但仍高于生理盐水和DATS对照组(P均＜0．01)DATS预防组2 h和6 h血清及肺组织TNF-α含量较ALI模型组均明显降低(P＜0．05或P＜0．01),但DATS治疗组无明显效果(P均＞0．05)。ALI模型组2 h肺组织TNF-αmRNA表达较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．01),DATS预防组可明显抑制肺组织中TNF-αmRNA表达(P＜0．05),但DATS治疗组无明显效果。ALI模型组肺组织NF-κB活性较生理盐水对照组和DATS对照组均明显升高(P均＜0．05),DATS预防组可明显抑制肺组织NF-κB活性(P＜0．05),但DATS治疗组的抑制效果不明显。结论预先给予DATS可抑制LPS诱导的ALI小鼠肺组织NF-κB活性和TNF-αmRNA表达,减少血清及肺组织中TNF-α的生成,具有一定的抗ALI作用。     

严重烫伤小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子α、蛋白激酶C的变化及调控

背景严重烫伤导致机体免疫系统各方面的功能紊乱,活化的巨噬细胞可分泌许多生物活性递质.烧伤后巨噬细胞功能紊乱与信号转导的关系目前尚不清楚.目的观察烧伤后不同时相点肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的变化及运用特异性调控剂H-7后小鼠腹腔巨噬细胞内核因子-κB(nuclearfactor-κB,NF-κB)活性及膜浆蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的变化,在信号转导的水平探讨PKC是否参与了巨噬细胞TNF-α的调控,阐明巨噬细胞功能紊乱的某些机制.设计以实验动物为研究对象的随机对照的实验研究.单位一所军医大学的烧伤研究所.材料实验于1999-01/12在解放军第三军医大学烧伤研究所实验室(国家级)完成.实验动物为健康清洁级近交系昆明小白鼠,32只.方法以本所小鼠常规烫伤模型造成体表面积15%Ⅲ度烫伤.实验按烫伤前及伤后不同时相随机分为6组,即0(正常对照组),2,6,12,24,48 h6组.收集腹腔巨噬细胞.采用放射免疫法检测TNF-α的含量,电泳迁移率改变分析法测NF-κB的活性,同位素掺入测膜浆PKC活性.主要观察指标①检测TNF-α的含量.②测定NF-κB的活性.③检测膜浆PKC的活性.结果烫伤后巨噬细胞分泌TNF-α亢进,于伤后12 h达到高峰,为(1085.65±122.99)ng/L,较正常对照组明显增高(t=14.92,P＜0.01).与正常对照组相比,伤后膜浆PKC活性升高,其中膜PKC活性于伤后2 h显著增高(t=7.930,P＜0.01),为(231.80±31.66)nmol/min·g.6h稍降,接近于正常(t=2.531,P＜0.05),为(174.29±16.80)nmol/min·g,12 h及24h迅速上升,至48h达到峰值(t=29.42,28.03,30.19,P＜0.01),分别为(512.10±33.42),(454.70±21.06)及(530.49±28.54)nmol/min·g.TNF-α和膜PKC的变化进行相关分析表明,二者呈显著的正相关(r=0.796 4,P＜0.05).EMSA图像显示,烫伤后NF-κB活性明显升高.以伤后12 h为调控点,经H-7作用后,NF-κB活性显著被抑制.结论烧伤后小鼠腹腔巨噬细胞TNF-α的分泌及PKC,NF-κB的活性明显被激活,PKC-NF-κB信号通路参与了TNF-α表达的调控,为烧伤过程中免疫功能的调整及康复干预提供了实验学数据.     

牛磺酸对大鼠局灶性脑缺血-再灌注时缺血区脑组织炎症反应的影响

目的探讨牛磺酸能否通过抑制缺血区脑组织的炎症反应对局灶性脑缺血-再灌注损伤具有保护作用。方法应用血栓栓塞法制作大鼠短暂性局灶性脑缺血-再灌注动物模型,应用免疫组织化学方法检测主要组织相容性复合体(MHC)抗原,研究牛磺酸对局灶性脑缺血2 h后再灌注22 h小胶质细胞活性的影响。应用免疫印迹方法研究牛磺酸对局灶性脑缺血2 h后再灌注22 h时核因子-κB(NF-κB)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的影响。结果牛磺酸可减少含MHCⅠ和Ⅱ抗原阳性小胶质细胞的数目,抑制局灶性脑缺血-再灌注时缺血区脑组织小胶质细胞激活。牛磺酸能抑制局灶性脑缺血-再灌注时缺血区脑组织NF-κB激活和TNF-α表达。结论牛磺酸可通过抑制局灶性脑缺血-再灌注时缺血区脑组织的炎症反应而发挥脑保护作用。     

重组人促红细胞生成素对大鼠颅脑损伤后NF-κB表达的影响

目的观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对创伤性颅脑损伤(TBI)后脑组织NF-κB活性及NF-κB mRNA表达的影响,探讨其在继发性颅脑损伤中的作用。方法 84只雄性SD大鼠建立颅脑损伤模型,随机分为颅脑损伤组(TBI组,n=42)和rhEPO治疗组(TBI-rhEPO组,n=42),于预定时间点行神经功能损伤评分(NSS),通过光镜观察创伤灶及周围脑组织变化,采用免疫组化方法检测脑组织中NF-κB及TNF-α的表达情况,RT-PCR检测NF-κB mRNA表达情况。结果颅脑损伤后12 h至7 d,TBI-rhEPO组NSS始终低于同一时间点TBI组(P<0.05);TBI组大鼠不同阶段NF-κB蛋白表达及mRNA表达明显升高,NF-κB表达水平与TNF-α表达水平呈正相关关系(r=0.519,P<0.05),且与组织炎症损伤程度一致,TBI-rhEPO组不同阶段NF-κB蛋白及mRNA表达均明显低于TBI组(P<0.05)。结论颅脑损伤早期应用rhEPO,可能通过抑制NF-κB活性,降低NF-κB、TNF-α的表达,从而抑制继发性炎症反应,减轻继发性颅脑损伤。