c-jun末端激酶在亚砷酸钠致人胚胎肝细胞损伤中的表达

目的探讨亚砷酸钠染毒对人胚胎肝(L-02)细胞中c-jun末端激酶(JNK)的变化。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150μmol/L的亚砷酸钠溶液中培养24 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况,采用流式细胞术检测染毒24 h时的细胞周期及细胞凋亡率;采用蛋白杂交(Western-blot)法检测JNK及p-JNK的蛋白表达水平。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率及G0-G1期构成比均较低,JNK、p-JNK的蛋白表达水平和S期构成比及凋亡率均较高;而G2-M期构成比在50μmol/L亚砷酸钠染毒组较低,在100、150μmol/L亚砷酸钠染毒组均较高,差异均有统计学意义(P0.05)。且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞凋亡率及JNK和p-JNK蛋白的表达水平均呈上升趋势,细胞存活率呈下降趋势。结论亚砷酸钠诱导L-02细胞凋亡可能与JNK及p-JNK表达的增加有关。     

丙烯酰胺对L-02胎肝细胞株细胞凋亡和原癌基因c-fos、c-jun表达的影响

目的观察丙烯酰胺(AA)对L-02胎肝细胞株细胞凋亡的影响以及对原癌基因c-fos、c-jun蛋白表达的影响。方法以不同终浓度AA(低剂量组:0.01和0.1mmol/L,中剂量组:0.5、1.0和2.5mmol/L,高剂量组:5.0和7.5mmol/L)对L-02细胞分别染毒12h和24h,CellTiter 96 MTS/PMS Assay法检测细胞存活率,流式细胞术法检测细胞凋亡,westernblot方法检测c-fos、c-jun蛋白表达水平。结果与对照组相比,低剂量染毒组细胞存活率略有升高,中、高剂量组则显著降低(P<0.05);中、高剂量(>2.5mmol/L)染毒组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05);染毒组c-jun、c-fos蛋白表达水平较对照组显著增高(P<0.05),且随着AA浓度的升高呈先升高后降低的趋势;随着染毒时间的延长,c-jun、c-fos蛋白表达水平也显著增高(P<0.05)。结论AA可引起细胞凋亡及原癌基因c-jun、c-fos蛋白表达增高。     

3种抗氧化剂对亚砷酸钠染毒人膀胱上皮细胞血管内皮生长因子表达的拮抗作用研究

目的探讨抗氧化剂褪黑素(melatonin,MEL)、N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl cysteine,NAC)、维生素C(Vitamin,VC)对砷诱导人正常膀胱上皮(SV-HUC-1)细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的拮抗作用。方法将处于对数生长期的SV-HUC-1细胞暴露于含终浓度分别为0(对照)、0.5、1、2、4、8、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒24 h,或者含终浓度分别为4、10μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基染毒0(对照)、4、12、24、48、72 h;联合暴露组在加入含终浓度分为4μmol/L亚砷酸钠的F12K完全培养基前30 min分别加入1%二甲基亚砜(DMSO)和抗氧化剂MEL、VC、NAC(终浓度分别为0.5、1、1 mmol/L),染毒24 h。分别采用Western blot法和RT-PCR法检测SV-HUC-1细胞VEGF蛋白和mRNA的表达水平。结果 10μmol/L亚砷酸钠染毒组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平呈上升趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠染毒12、24、48 h及10μmol/L亚砷酸钠染毒24和48 h后SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均升高,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长,各剂量组SV-HUC-1细胞VEGF mRNA的表达水平均呈先上升后下降的趋势。与对照组比较,4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平均增加,差异有统计学意义(P0.05)。与4μmol/L亚砷酸钠+DMSO染毒组比较,亚砷酸钠+NAC染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平较高,差异有统计学意义(P0.05);而亚砷酸钠与MEL和VC联合染毒组SV-HUC-1细胞中VEGF蛋白的表达水平无明显改变。结论砷能诱导人正常膀胱上皮细胞VEGF表达增加,NAC能增加VEGF表达。     

甲醛对肝细胞极低密度脂蛋白分泌外排相关基因的影响

目的观察甲醛对肝癌细胞株HepG2细胞内外甘油三酯(TG)含量及细胞内极低密度脂蛋白(VLDL)分泌外排相关基因表达水平的影响。方法以0、0.004、0.02、0.1 mmol/L甲醛分别处理人肝癌HepG2细胞24、48 h,采用甘油磷酸氧化酶法(GPO-POD)测定细胞内外TG含量,采用QRT-PCR法检测细胞内载脂蛋白B100(apo B100)、微粒体TG转运蛋白(MTTP)、载脂蛋白E(apo E)、TG水解酶(CES3)、二酰基甘油酰转移酶1(DGAT1)、包被蛋白Ⅱ(COPⅡ)、Sar1b、低密度脂蛋白受体(LDLR)基因的表达水平。结果与阴性对照组相比,0.004、0.1 mmol/L甲醛染毒48 h后HepG2细胞内TG含量减少,染毒24 h后上清中TG含量增加;染毒24 h后0.004、0.02、0.1 mmol/L甲醛组或染毒48 h后0.004 mmol/L甲醛组细胞内apo B100基因表达水平升高;染毒24 h后0.004 mmol/L甲醛组或染毒48 h后0.004、0.02、0.1 mmol/L甲醛组细胞内MTTP基因表达水平升高;染毒24 h后0.1 mmol/L甲醛组细胞内LDLR基因表达水平降低,染毒48 h后0.02、0.1 mmol/L甲醛组细胞内LDLR基因表达水平升高;上述差异均有统计学意义(P0.05)。结论甲醛可能通过增加肝细胞内apo B100和MTTP表达来促进VLDL的分泌外排。     

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯对HepG2细胞脂质代谢的影响

[目的]观察邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)及其代谢产物邻苯二甲酸(2-乙基己基)酯(MEHP)对人肝癌细胞株HepG2细胞脂肪代谢的影响,及其致肝损伤的作用机制。[方法]分别用不同浓度的DEHP(31.25、62.5、125、250、500、1 000μmol/L)、MEHP(3.125、6.25、12.5、25、50、100、250μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)处理HepG2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT试剂盒检测细胞活力。不同浓度的DEHP(10.0、250.0μmol/L)、MEHP(4.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.1%(体积分数)二甲基亚砜(溶剂对照)、0.5 mmol/L油酸(阳性对照)处理HepG2细胞48h,油红O染色法观察HepG2细胞脂肪累积。不同浓度的DEHP(2.0、10.0、50.0、250.0μmol/L)、MEHP(0.8、4.0、20.0、100.0μmol/L)、完全培养基(阴性对照)、0.5 mmol/L油酸、0.5μg/m L布雷德菌素A处理HepG2细胞24 h和48 h,Western blot法检测细胞内固醇元件调节蛋白(SREBP-1c)、肉毒碱棕榈酰基转移酶(CPT1A)、丙二酰辅酶A脱羧酶(MLYCD)和脂肪组织三酰甘油水解酶(ATGL)的蛋白表达。[结果]与阴性对照组相比,250.0~1 000.0μmol/L DEHP及50.0~250.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞存活率降低,差异具有统计学意义(P0.05)。染毒48 h后,10.0、250.0μmol/L DEHP染毒组与4.0、100.0μmol/L MEHP染毒组HepG2细胞内可见红色脂滴,且伴有脂滴融合现象。与阴性质对照组相比,250.0μmol/L DEHP或100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,50.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h,使CPT1A表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);10.0~250.0μmol/L DEHP或4.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48 h使MLYCD表达降低,差异具有统计学意义(P0.05);250.0μmol/L DEHP与20.0~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞24 h,10.0~250.0μmol/L DEHP与0.8~100.0μmol/L MEHP染毒HepG2细胞48h,可使ATGL表达降低,差异具有统计学意义(P0.05)。[结论]DEHP及MEHP染毒可引起HepG2细胞发生脂肪堆积,其过程可能与脂肪酸β-氧化受阻及三酰甘油水解受到抑制有关。     

亚硫酸钠对人正常二倍体肝细胞的损伤作用程序性坏死相关蛋白受体相互作用蛋白1表达的影响

目的探讨亚硫酸钠对人正常二倍体肝细胞(HL-7702)的损伤作用及程序性坏死相关蛋白受体相互作用蛋白1(RIP1)表达的影响。方法将处于对数生长期的HL-7702细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、0.01、0.1、1、10 mmol/L亚硫酸钠的培养基中培养2、4、12、24、48 h。采用CCK-8法检测细胞活性,采用全自动生化分析仪检测细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及乳酸脱氢酶(LDH)的活力,采用Western Blot法检测细胞RIP1蛋白的表达水平。结果与对照组相比,1、10 mmol/L亚硫酸钠染毒不同时间的HL-7702细胞存活率降低,差异有统计学意义(P0.05);且随着亚硫酸钠染毒浓度的升高,HL-7702细胞的存活率呈下降趋势。与对照组相比,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24、48 h HL-7702细胞上清液中的ALT活力较高;1 mmol/L亚硫酸钠染毒4、24 h及10 mmol/L亚硫酸钠染毒2、4 h HL-7702细胞上清液中的AST活力较低,而10 mmol/L亚硫酸钠染毒24、48 h HL-7702细胞上清液中的AST活力较高;10 mmol/L亚硫酸钠染毒2、4 h HL-7702细胞上清液中的LDH活力较低,而染毒24、48 h HL-7702细胞上清液中的LDH活力较高,差异均有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,各浓度亚硫酸钠染毒组HL-7702细胞中RIP1蛋白的表达水平均较高,差异多有统计学意义(P0.05)。结论程序性坏死可能参与了亚硫酸钠引起的肝细胞死亡,但其可能机制还有待于进一步研究。     

亚砷酸钠对人正常肝细胞凋亡及Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

目的探讨亚砷酸钠对人正常肝(L-02)细胞凋亡及Bax、Bcl-2 m RNA和蛋白表达的影响。方法将L-02肝细胞分别暴露于含0(对照)、50、100、150μmol/L亚砷酸钠的培养基中暴露24 h。采用MTT法检测L-02肝细胞的存活率,采用流式细胞术检测L-02肝细胞凋亡率,采用RT-PCR的方法检测Bax、Bcl-2 m RNA相对表达情况,采用Westernblotting方法检测L-02肝细胞中Bax、Bcl-2蛋白的表达情况。结果与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞的存活率均较低,凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着亚砷酸钠染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率上升趋势。与对照组相比,各浓度亚砷酸钠染毒组L-02细胞中Bcl-2、Bax m RNA和蛋白的表达水平均较高,100μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值也较高,而150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2 m RNA/Bax m RNA值及50、150μmol/L亚砷酸钠染毒组Bcl-2蛋白/Bax蛋白值均较低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论亚砷酸钠可抑制L-02肝细胞的生长,诱导细胞凋亡的发生;其机制可能与Bcl-2家族的激活有关。     

氢醌诱导下肝细胞XPV基因mRNA表达规律的研究

目的研究氢醌(HQ)对L-02肝细胞XPV基因mRNA表达的影响及其规律,探讨XPV基因在HQ所致肝细胞毒性过程中分子作用机制。方法体外培养的L-02肝细胞经40μmol/L的HQ诱导后,采用实时荧光定量PCR法检测不同时间点(6、12、24和48h)XPV基因mRNA的表达;并检测不同剂量(0、5、10、20、40、80和160μmol/L)HQ诱导24h后,各浓度组XPV基因mRNA的表达。结果在24h的时间范围内,XPV基因在mRNA水平上的表达无论是染毒组(40μmol/L)还是正常对照组,均具有随时间的延长而增加的趋势;到24h时,相对表达量达到最大值,当培养时间达到48h时,该基因的表达则有所下降;此外,在各时间处理组(6h、12h、24h和48h)中,染毒组L-02肝细胞内XPV基因在mRNA水平上的表达均高于正常对照组。各剂量HQ作用24h后,L-02肝细胞内XPV基因mRNA的表达在0～80μmol/L范围内随着剂量的增加而增加,以正常对照组XPV基因的相对表达量为1,各染毒剂量组内XPV基因mRNA的相对表达量分别增至1.20、2.02、2.37、2.67、4.40和2.32倍;80μmol/L时其相对表达量达到峰值,160μmol/L的HQ作用后,其表达却有所下降,但仍高于正常对照组。结论HQ可以诱导XPV基因mRNA的表达变化,并且呈现一定的时间和剂量依赖性,提示XPV基因可能参与了肝细胞对HQ的应答过程。     

亚硫酸钠对人正常二倍体肝细胞内二酰甘油酰基转移酶1和载脂蛋白E mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过研究亚硫酸钠对人正常二倍体肝(HL-7702)细胞内二酰甘油酰基转移酶1(DGAT1)和载脂蛋白E(apoE)mRNA和蛋白表达的影响,探讨亚硫酸钠诱发肝细胞脂肪积累效应及作用途径.方法 将处于对数生长期的HL17702细胞株分别暴露于终浓度为0(阴性对照)、10、2.5、0.5、0.1 mmol/L的亚硫酸钠溶液,并设立阳性对照(1.0 mmol/L油酸)组.分别于染毒24、48 h时,采用油红O染色法观察肝细胞内脂滴沉积,采用免疫沉淀和Western Blot法检测细胞内apoE和DGAT1蛋白的表达水平,采用qRT-PCR法检测肝细胞内apoE和DGAT1mRNA的表达水平.结果 与阴性对照组比较,仅10 mmol/L亚硫酸钠染毒24h时HL-7702肝细胞内DGATlmRNA表达水平明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).与阴性对照组比较,染毒24h、48 h时,10 mmol/L亚硫酸钠染毒组HL-7702肝细胞内DGAT1蛋白表达水平以及各浓度亚硫酸钠染毒组HL-7702肝细胞内apoE蛋白表达水平均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).阳性对照组可见明显的脂滴沉积,但亚硫酸钠染毒组均未见明显脂滴.结论 一定剂量的亚硫酸钠可引起肝细胞内DGAT1、apoE蛋白表达增高,导致肝细胞内甘油三酯分泌增加,从而引起肝细胞的脂肪蓄积.     

乙醇对胎鼠脑新皮质神经干细胞凋亡的影响

目的探讨乙醇对胎鼠神经干细胞凋亡的影响。方法将妊娠14 d胎鼠脑新皮质来源的神经干细胞暴露于终浓度分别为0(对照)、25、50、100 mmol/L的乙醇培养基溶液3 d。采用Annexin V/PI法检测细胞早期和晚期凋亡情况,采用JC-1探针法检测线粒体膜电位的改变,并检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白的表达。结果与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞的早期凋亡细胞率明显升高,差异有统计学意义(P0.05);而各浓度乙醇染毒组神经干细胞的晚期凋亡率无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,神经干细胞的早期凋亡细胞率呈上升趋势。仅100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞线粒体膜电位低于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bax mRNA的表达水平均上升,差异有统计学意义(P0.05);而Bcl-2和Caspase-3 mRNA的表达水平均无明显改变。且随着乙醇染毒浓度的升高,Bax mRNA表达量呈上升趋势。与对照组比较,50、100 mmol/L乙醇染毒组神经干细胞Bax蛋白的表达水平均升高,而Bcl-2/Bax蛋白的比值均降低,差异有统计学意义(P0.05);各浓度乙醇染毒组神经干细胞Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达水平均无明显改变。结论乙醇可引起神经干细胞早期凋亡,其机制可能与线粒体损伤和Bax表达上调有关。     

氧化应激在全氟辛烷磺酰基化合物诱导人胚胎肝细胞凋亡中的作用

目的探讨全氟辛烷磺酰基化合物(PFOS)致人胚胎肝(L-02)细胞凋亡的作用及其机制。方法将处于对数生长期的L-02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、50、100、150、200μmol/L的PFOS溶液培养24 h。采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,并测定细胞线粒体内活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的水平及线粒体膜电位,采用q RT-PCR法检测凋亡相关基因caspase-3、caspase-9、bax、bcl-2 m RNA的表达水平。结果与对照组比较,150、200μmol/L PFOS染毒L-02细胞的存活率均降低,而100、150、200μmol/L PFOS染毒组L-02细胞的凋亡率均增加,差异均有统计学意义(P0.05);且随着PFOS染毒浓度的升高,L-02细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。与对照组比较,各浓度PFOS染毒组L-02细胞内ROS和MDA水平均增加,而各浓度PFOS染毒组L-02细胞内SOD水平和100、150、200μmol/L PFOS染毒组L-02细胞内GSH水平和线粒体膜电位均较低,差异均有统计学意义(P0.05);且随着PFOS染毒浓度的升高,L-02细胞内ROS和MDA水平均呈上升趋势,而SOD、GSH水平和线粒体膜电位均呈下降趋势。与对照组比较,各浓度PFOS染毒组L-02细胞中caspase-3、caspase-9、Bax m RNA的表达水平均较高,而bcl-2、bcl-2/bax值均较低,除50μmol/L PFOS染毒组caspase-9外,差异均有统计学意义(P0.05﹚。结论在本实验剂量下,PFOS暴露可引起L-02细胞凋亡,其机制与PFOS诱导的氧化损伤和线粒体凋亡途径有关。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸组织雄激素结合蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织雄激素结合蛋白(ABP)mRNA及蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组和低(10支)、中(20支)、高(30支)剂量染毒组,各组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。实验组采用呼吸道静式染毒,每日1次,每次30 min。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western Blot法检测睾丸组织ABP mRNA及蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见,生精细胞排列紊乱疏松,支持细胞呈现空泡化。大鼠睾丸组织ABP mRNA和蛋白表达水平均随染毒剂量的增加而降低,染毒4周及12周后中、高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒6周后高剂量组ABP基因mRNA表达水平低于对照组,染毒4~8周后高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,染毒12周后低、中、高剂量组ABP蛋白表达水平低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可引起雄性大鼠睾丸组织受损,且睾丸组织ABP基因mRNA及蛋白的表达水平下降。     

葡萄糖对内皮细胞醛糖还原酶基因表达及活性的影响

目的研究葡萄糖对人血管内皮细胞醛糖还原酶基因表达及活性的影响,为糖尿病血管并发症提供理论依据。方法体外培养的人脐静脉内皮细胞,采用RT-PCR、生化测定等方法检测醛糖还原酶(AR)活性及mRNA表达。结果经5·5、11、22mmol/L葡萄糖处理后内皮细胞AR的mRNA及其活性均高于对照组(5.5mmol/L葡萄糖)(P<0.05或P<0.01),呈浓度依赖性,但44mmol/L葡萄糖组较22mmol/L葡萄糖组低(P<0.05)。在22mmol/L葡萄糖作用下,随着作用时间的延长(0、12、24h),AR的mRNA及活性增高呈时间依赖性(P<0.05或P<0.01),但48h较24h低(P<0.05)。结论葡萄糖能诱导内皮细胞AR基因表达,增强AR活性,且在一定范围内呈时间及浓度依赖性。     

香烟烟雾暴露对大鼠睾丸转铁蛋白mRNA及蛋白表达水平的影响

目的探讨香烟烟雾暴露对大鼠睾丸结构及睾丸组织转铁蛋白(Tf)mRNA及其蛋白表达水平的影响。方法清洁级成年雄性SD大鼠160只,随机分为对照组及低(10根香烟)、中(20根香烟)、高(30根香烟)剂量染毒组,各染毒组大鼠分别染毒2、4、6、8、12周,共16组,每组10只。染毒组大鼠采用呼吸道静式染毒,1次/d,30 min/次。观察大鼠睾丸组织结构,采用RT-PCR及Western blot法检测睾丸组织Tf mRNA及其蛋白表达水平。结果染毒组大鼠睾丸病理切片可见生精上皮层次减少,生精细胞排列疏松,支持细胞空泡化。染毒4、8、12周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf mRNA表达水平低于对照组和低剂量组,染毒8周时高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于对照组,染毒12周时中、高剂量组大鼠睾丸组织Tf蛋白表达水平低于低剂量组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论香烟烟雾暴露可导致雄性大鼠睾丸组织损伤,并抑制Tf基因及蛋白表达。     

Conjugated linoleic acid upregulates LDL receptor gene expression in HepG2 cells

Conjugated linoleic acid (CLA) exerts anticarcinogenic and antiatherosclerotic effects in animals. The present study was conducted to examine the effects of CLA on LDL receptor (LDLr) expression in HepG2 cells, and to evaluate whether the sterol response element binding protein 1 (SREBP-1) and acyl CoA:cholesterol acyltransferase (ACAT) were involved in the regulation of LDLr expression by CLA. When HepG2 cells were cultured with serum-free DMEM for 48 h, there was a three- to fivefold (P<0.05) increase in LDLr protein and mRNA levels. Incubation of HepG2 cells in serum-free medium supplemented with 25-hydroxycholesterol (25OH, 5 mg/L) for 24 h decreased LDLr protein and mRNA by 50-70% (P<0.05) and mature SREBP-1 by 20-40% (P<0.05). CLA, but not linoleic acid, antagonized the depressive effects of 25OH and increased both LDLr protein and mRNA abundance twofold (P<0.05). LDLr protein and mRNA abundance were not different when HepG2 cells were cultured with CLA (0.4 mmol/L) plus 25OH in the presence or absence of an ACAT inhibitor (58-035, 1 mg/L). Furthermore, CLA had no effect on SREBP-1 abundance. These results suggest that CLA upregulates LDLr expression via a mechanism that is independent of ACAT and SREBP-1.     

兴奋性氨基酸递质系统在乐果诱导星形胶质细胞活化中的作用

目的 探讨兴奋性氨基酸递质系统在乐果染毒后皮层星形胶质细胞活化中的作用.方法 新生大鼠皮层神经细胞传代3次后获得纯化的星形胶质细胞,分别加入终浓度为10-6、10-5、10-4mol/[的乐果,并用50和100 μmol/LN-甲基-N-天门冬氨酸(NMDA)受体非竞争性拮抗剂MK801对10-4mol/L乐果染毒组进行干预.染毒后48 h收获细胞,高效液相色谱-荧光检测系统(HPLC-FLD)方法测定细胞内兴奋性氨基酸递质含量,反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测NMDA受体NR2B亚基、谷氨酸(Glu)、谷氨酸转运体(GLT-1)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及S100β mRNA表达的变化,免疫荧光染色半定量检测GFAP以及S100β的蛋白表达.结果 各剂量染毒组GLASTmRNA表达下降为对照组的67.8%、68.6%和76.2%,差异有统计学意义(P＜0.05);10-4 mol/L染毒组Glu、Asp含量与对照组相比明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01);与对照组比较,10-4mol/L染毒组GFAP和10-5mol/L染毒组S100βmRNA表达,10-5、10-4mol/L染毒组GFAP蛋白表达,10-4mol/L染毒组S100β蛋白表达明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01),有剂量依赖趋势.对10-4mol/L染毒组给予50和100 μmol/L MK801干预后,GLT-1、GLAST mRNA表达水平较10-4 mol/L染毒组明显上升,差异有统计学意义(P＜0.01),NR2B mRNA表达进一步升高,与未干预前相比,差异无统计学意义(P＞0.05),但均明显高于对照组水平,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);100 μmol/L MK801干预后,Glu的含量升高为10-4mol/L染毒组的1.81倍,差异有统计学意义(P＜0.01);50和100μmol/LMK801干预后,GFAP转录及蛋白水平较未干预前明显下降,差异有统计学意义(P＜0.01),50 μmol/L干预组S100β蛋白表达水平仍然高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 乐果对兴奋性氨基酸递质系统的影响参与了星形胶质细胞的活化;NMDA受体阻断剂MK801有助于控制星形胶质细胞胶质化.

Abstract：

Objective To study the involvement of excitatory amino acid system in astrocytes activation caused by dimethoate. Methods Pure-cultured astrocytes were gained by three passages from primary cultured rat nerve cells, then treated with 10-6,10-5,10-4 mol/L dimethoate for 48 h, 50 μmol/L and 100μmol/L MK801, a NMDA receptor blocker, was used to intervene the effects induced by 10-4 mol/L dimethoate.HPLC-FLD was utilized to measure the concentrations of excitatory amino acid (EAA), RT-PCR was used to detect the expression levels of NR2B, GLT-1, GLAST, GFAP and S100β mRNA, and immunofluresence staining method was applied to measure the expression levels of GFAP and S100β proteins. Results The expression levels of GLAST mRNA in all exposure groups were 67.8% ,68.6% and 76.2% of control level,respectively, which were significantly lower than that of control group (P＜0.05); The concentrations of EAA significantly decreased in 10-4 mol/L dimethoate group, as compared with control group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA in 10-4 mol/L dimethoate group, of S100β mRNA in 10-5 mol/L dimethoate group, of GFAP protein in 10-4 mol/L and 10-5 mol/L dimethoate groups and S100β protein in 10-4 mol/L dimethoate group were significantly higher than those in control group (P＜0.01). The expression levels of GLT-1 and GLAST mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01), the expression levels of NR2B mRNA in 10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μmol/L MK801 groups increased significantly, as compared with control group (P＜0.05 or P＜0.01); the concentration of Glu in 10-4 mol/L dimethoate plus 100 μ mol/L MK801 group increased significantly, as compared with 10-4 mol/L dimethoate group (P＜0.01); the expression levels of GFAP mRNA and protein in10-4 mol/L dimethoate plus 50 μ mol/L or 100 μ mol/L MK801 groups decreased significantly (P＜0.01); S100β protein expression level in 50 μ mol/L MK801 intervention group was significantly higher than thatl in control group (P＜0.01). Conclusion Excitatory amino acid system involved in astrocytes activation caused by dimethoate. MK801 was useful to control astrocytes gliosis.     

7-硝基吲唑对氟致SH-SY5Y细胞凋亡及一氧化氮合成酶含量的影响

目的探讨神经元型一氧化氮合成酶(nNOS)抑制剂7-硝基吲唑(7-nitroindazole,7-NI)对氟致体外培养细胞生长、凋亡保护作用的机制。方法体外培养SH-SY5Y细胞,在培养液中加入不同浓度Na F(0、0.02、0.2、2.0、4.0 mmol/L),分别培养24、48、72 h,同时在各组细胞培养液中联合应用7-NI(10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L);于倒置显微镜下观察细胞生长,以CCK-8试剂盒方法检测细胞存活率,以比色法和硝酸还原酶法测定细胞培养液中NO含量及NOS活力,以流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果与对照组比较,氟浓度为0.2 mmol/L(低氟组)和2.0 mmol/L(高氟组)时,24、48、72 h后细胞存活率分别下降至(83.76±1.04)%,(70.27±1.20)%,(54.40±0.98)%和(52.17±1.07)%,(40.60±1.11)%,(29.50±1.40)%。10~(-4)mmol/L 7-NI可刺激细胞增殖,24 h细胞存活率为(105.96±3.44)%;10~(-3) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后的细胞存活率为(100±2.30)%;10~(-2) mmol/L 7-NI可使细胞存活率下降,24 h细胞存活率为(88.64±4.75)%。10~(-4)、10~(-3)、10~(-2) mmol/L 7-NI处理细胞24 h后细胞培养液中NO含量、NOS活力均降低,分别为(1.156±0.356)、(0.958±0.074)、(0.672±0.188)μmol/L和(0.403±0.089)、(0.398±0.010)、(0.103±0.076)U/ml。高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组的SH-SY5Y细胞凋亡指数升高至(8.7±2.3)%,高于对照组(P0.05);低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组的凋亡指数分别为(0.6±0.4)%和(1.0±0.2)%,与对照组差异无统计学意义(P0.05);低剂量7-NI组凋亡指数低于高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。染氟24、48、72 h后细胞培养液中NO含量及NOS活力升高,低氟组的NO含量、NOS活力分别为(3.074±0.160)、(5.604±1.374)、(10.173±1.307)μmol/L和(0.743±0.122)、(0.959±0.054)、(1.446±0.12)U/ml,高氟组分别为(8.974±0.919)、(14.729±1.241)、(20.976±0.712)μmol/L和(1.086±0.024)、(1.728±0.130)、(2.583±0.192)U/ml,高于对照组[(1.320±0.280)、(2.420±0.658)、(2.867±0.662)μmol/L,(0.452±0.012)、(0.517±0.072)、(0.607±0.013)U/ml],差异有统计学意义(P0.05)。与氟单独处理组相比,NaF联合应用7-NI后,各组NO含量及NOS活力均下降,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组相比,氟可使SH-SY5Y细胞凋亡指数升高,差异有统计学意义(P0.01),并随着氟染毒剂量及时间的增加,细胞凋亡指数随之增加;联合应用7-NI后,各组细胞凋亡指数下降,差异有统计学意义(P0.01)。氟可使SH-SY5Y细胞数量减少,形态变为圆形、不规则形,细胞存活率降低;低剂量(10~(-4)、10~(-3) mmol/L)7-NI组在相同视野下细胞数增加,高剂量(10~(-2) mmol/L)7-NI组细胞数明显减少,大部分细胞呈圆形或不规则形。结论氟中毒所致细胞凋亡可能与NOS活力和NO含量升高有关,7-NI可降低细胞凋亡指数。