精子细胞中基因表达谱的研究

目的 研究成熟精子细胞中的基因表达。方法 采用限制性显示PCR（RD－PCR）获得大量正常和异常精子细胞中基因表达序列标签（EST）并以表达谱图的方式显示出来。结果 通过RD－PCR技术得到大量正常精子细胞和异常精子细胞的EST及部分差异表达EST。结论 RD－PCDR技术既能针对已知基因又能针对未知基因，快速收集大量长度适宜、大小均一、适于芯片制备的EST，较通过cDNA文库等方法得到靶基因片段具有独特的优势。     

Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用

目的观察Agilent 2100 Bioanalyzer 芯片分析系统(以下简称Bioanalyzer)在基因差异表达研究中的应用。方法应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段,然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析。结果Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段,并且通过对差异片段进行定量比较,发现了数个表达有明显差异的基因片段。结论Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值。     

一个表达序列标签的克隆——应用限制性显示技术

目的应用限制性显示PCR(restrictiondisplaypolymerasechainreaction,RD-PCR)技术分离克隆SH-SY5Y细胞的基因片段。方法从SH-SY5Y细胞中分离提纯mRNA,然后以Oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AⅠ酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物扩增后,与载体pMD18相连,克隆、测序。结果分离出一段cDNA,经Blast分析,发现与基因组17号染色体的一段序列具有高度的相似性,运用GenScan分析这段DNA序列,提示这段表达序列标签(expressedsequencetag,EST)可能是一个未知基因的一部分。结论RD-PCR技术是一种简便、有效的分离克隆基因片段的方法,运用生物信息学对EST的染色体定位以及下一步的实验可能具有一定的指导意义。     

应用RD-PCR方法制备K562细胞表达谱芯片基因探针

目的收集K562细胞表达谱芯片的基因片段。方法培养K562细胞,抽提其mRNA,反转录为cDNA,应用限制性显示PCR技术(RD-PCR)分离K562细胞不同组别的产物片段,分别行PCR扩增。结果制备了可用于基因芯片制作的基因探针片段。结论RD-PCR方法适合于基因芯片探针的收集。     

以基因芯片技术研究Kkay小鼠2型糖尿病相关基因

目的以基因芯片技术研究Kkay2型糖尿病小鼠的差异表达基因。方法以包含8192条小鼠的cDNA基因表达谱芯片研究Kkay2型糖尿病小鼠肝脏的基因表达谱。结果共筛选出差异表达基因154条,包括全长基因68条,表达序列标识(EST)86条;其中40条基因表达增加,114条表达降低。结论多数已知功能基因的表达异常与以往的研究结论是一致的;cDNA基因芯片技术能够高通量分析糖尿病相关基因。     

Agilent 2100 Bioanalyzer在基因差异表达研究中的应用

目的：观察Agilent2100 Bioanalyzer芯片分析系统（以下简称Bioanalyzer）在基因差异表达研究中的应用。方法：应用限制性显示技术分别从正常和热休克处理后的酿酒酵母细胞中分离出cDNA片段，然后再用Bioanalyzer和传统的琼脂糖凝胶电泳技术对RD-PCR产物进行检测分析。结果：Bioanalyzer能更快速、敏感地分离和显示差异表达的基因片段，并且通过对差异片段进行定量比较，发现了数个表达有明显差异的基因片段。结论：Bioanalyzer在基因差异表达研究中具有重要的应用价值。     

限制性显示-聚合酶链反应扩增苏云金杆菌基因片段的克隆与分析

目的运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)基因片段,并进行克隆、测序分析。方法设计特异性引物扩增长片段Bt基因,对扩增产物进行RD-PCR扩增,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定。提取阳性克隆质粒进行测序分析。结果运用RD-PCR技术,将长片断的基因(2 000-3 000 bp)分为多个短的片段,片段长度较为均一(200~600 bp)。测序结果表明,所扩增的片段均属于特异扩增的Bt基因。结论运用RD-PCR技术可以将长片段基因进行片段化,使其适用于基因芯片的探针。     

小鼠衰老相关新基因Arzc的克隆

目的鉴别和克隆与小鼠衰老相关的新基因.方法采用改进的差异显示反转录聚合酶链反应(DDRT-PCR)技术分析正常老化和年轻BALB/C小鼠大脑皮层mRNA的差异表达,差异显示的新表达序列标签(EST)经Northern杂交验证后,作为出发序列,利用生物信息学方法设计引物,以小鼠大脑皮层总RNA的反转录产物为模板通过PCR克隆全长cDNA.结果差异显示分析共获得表达差异明显的EST 42条,序列同源性分析显示其中29条为已知基因cDNA片段,13条可能为新EST.对新EST进行Northern杂交验证后,对确证在正常老化鼠皮层表达明显下调的1个EST,通过生物信息学方法克隆全长cDNA,得到1个新的1 382 bp的cDNA序列,命名为Arzc,获得GenBank注册号AY344585.该序列含有1个261 bp的开放阅读框,推测的编码多肽包含86个氨基酸残基,与噬菌体编码的重组酶/整合酶的一段氨基酸序列有较高同源性.结论鉴别并克隆到一个可能与小鼠衰老相关的新基因Arzc.     

限制性显示-聚合酶链反应扩增苏云金杆菌基因片段的克隆与分析

目的 运用限制性显示-PCR技术(RD-PCR)扩增苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)基因片段，并进行克隆、测序分析。方法 设计特异性引物扩增长片段Bt基因，对扩增产物进行RD-PCR扩增，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定。提取阳性克隆质粒进行测序分析。结果 运用RD-PCR技术，将长片断的基因(2000—3000bp)分为多个短的片段，片段长度较为均一(200～600bp)。测序结果表明，所扩增的片段均属于特异扩增的Bt基因。结论 运用RD-PCR技术可以将长片段基因进行片段化，使其适用于基因芯片的探针。     

利用RD技术对HCV-1b基因片段的克隆与分析

目的：利用限制性显示(RD)技术对丙型肝炎病毒1b亚型(HCV-1b)基因片段进行克隆与分析。方法：用限制性内切酶Sau3AⅠ消化HCV-1b cDNA，所得的限制性内切酶片段物进行RD-PCR扩增，扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定。结果：得到20个大小均一(200—1000bp)的限制性片段，测序结果表明，属于HCV-1b基因。结论：RD技术能快速收集大量长度适宜、大小相对均一的病毒基因片段，能很好地用于建立cDNA文库及制备诊断芯片探针。     

大肠癌微血管、明胶酶A的定量分析

目的　定量分析大肠癌微血管与明胶酶A的表达及探讨其意义。方法　应用免疫组化S -P法对 6 4例大肠癌进行CD34、明胶酶A染色 ,采用图像分析系统测量其微血管密度 (MVD)、微血管面积 (MVA)、CD34、明胶酶A的表达。结果　微血管与大肠癌的病理分级无相关 (P >0 .0 5 ) ,但与侵袭、淋巴结转移相关 (均P <0 .0 5 ) ;明胶酶A含量与大肠癌的分化程度、侵袭范围、淋巴结转移显著相关 (均P <0 0 5 )。结论　微血管、明胶酶A在大肠癌的发展、侵袭和转移中起重要的作用。     

应用PCR－SSCP方法初步分析入微小病毒B19基因变异

应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法初步分析了从华南地区收集的３份畸胎组织标本中人微小病毒Ｂ１９分离株，其电泳图谱与国外参考株相同，提示两者衣壳蛋白ＶＰ１编码区的基因结构可能无差异。     

原位杂交测肿瘤坏死因子mRNA在宫颈细胞及子宫内膜组织的定位表达

目的观察肿瘤坏死因子(mRNA)在宫颈细胞及子宫内膜组织的表达及其在不同病变组织中的分布特点。方法采用非同位素原位杂交法对3个传代的宫颈细胞系(HiSa、W12、NCx)、石蜡包埋的宫颈组织96例、子宫内膜组织75例进行了TNFmRNA定位表达的研究。结果TNFαmRNA在SiHa和W12细胞中有阳性表达,NCx细胞未见阳性表达;在宫颈组织中阳性表达见于上皮、间质、血管壁及平滑肌;子宫内膜癌组织中阳性表达见于间质单个核细胞和平滑肌细胞,对照组未见阳性表达。结论宫颈尖锐湿疣及宫颈鳞癌来源的上皮为TNF生成细胞之一;TNFmRNA表达强度与细胞增生程度有关;宫颈HPV感染对细胞内TNFmRNA表达有促进作用。     

胫骨前髁间隆突骨折的手术治疗

采用切开复位，比线缝合固定的方法治疗９０例胫骨前髁间隆突骨折，平均随访８个月，效果满意，未见骨折不愈合和膝关节不稳者。结果提示该手术是一简单有效的治疗方法。     

草果知母汤对点燃癫痫模型生长抑素mRNA的影响

运用脑组织原位杂交法，观察戊四唑点燃癫痫模型脑组织中ＳＳｍ ＲＮＡ 的表达及草果知母汤作用后的变化。结果：与正常对照组相比，模型组脑皮层ＳＳｍ ＲＮＡ 的含量明显升高（ Ｐ＜０－０１） ，海马中ＳＳｍ ＲＮＡ 的含量明显降低（ Ｐ＜ ０－００１） ；与模型组相比，西药组（ 苯巴比妥） 及中药组（ 草果知母汤） 皮层ＳＳｍ ＲＮＡ 含量明显降低（ Ｐ＜ ０－０５） 。降低皮层组织ＳＳｍ ＲＮＡ 的含量，可能是草果知母汤抗癫痫的作用途径之一。     

喉鳞癌中C—myc基因表达与预后

研究喉鳞癌中Ｃ－ｍｙｃ基因表达与预后的关系。方法应用免疫组织化学ＡＢＣ法检测６４例喉鳞癌、１０例喉乳头状瘤、６例喉正常粘膜组织中Ｃ－ｍｙｃ基因的表达。结果１．Ｃ－ｍｙｃ在上述３种组织中表达率分别为７０％、３０％、０％,差别有显著性（Ｐ＜０．０１）;２．Ｃ－ｍｙｃ表达与喉鳞癌ＴＮＭ分期、颈淋巴转移及５年生存期相关（Ｐ＜０．０５）。结论Ｃ－ｍｙｃ在喉上皮中的分布与其恶性程度相关,Ｃ－ｍｙｃ表达可作为喉鳞癌病情进展和预后不良的客观指标。     

党参对急性心肌缺血犬左室功能的影响

采用在体犬心脏冠状动脉左前降支上１／３ 处结扎，造成急性心肌缺血，观察党参对左室内压（ＬＶＰ）、左室舒张终末压（ＬＶＥＤＰ）、３０ 点心外膜心电图的影响。结果表明：结扎后３ｈ，党参组ＬＶＰ基本无改变，而空白对照组下降明显。党参组的ＬＶＥＤＰ均值和改变率显著低于对照组，同时能明显提高正常心电图的构成比，在一定程度上减少梗塞面积。提示党参可能是通过减少心肌供血的灌注阻力、维持灌注压力，从而改善心肌缺血的。     

双波长法测定增效黄连素胶囊TMP含量

采用双波长法,不经分离直接测定增效黄连素胶囊中TMP的含量,方法简便,快速、准确。回归方程为C=49.0196,△A—0.07843,r=0.99998,回收率为100.56％(n=5),Cv=0.204％。     

髋关节功能评估研究进展

髋关节是一个结构复杂的下肢关节,其功能是否正常,直接影响到机体的站立和行走功能,进而影响生活质量。慢性髋关节功能异常在老年人群中非常常见,继续发展可以恶化成股骨头坏死等严重疾病,需要通过髋关节置换术等手术进行治疗。髋关节功能评分法一直用于评估髋关节置换术前、术后情况。目前用于髋关节功能评估的方法与系统主要可以分为与髋关节功能相关的全身健康测定系统及全髋关节功能评价系统两大类。常用的评估系统有36条简短医疗结果调查问卷、Harris系统等。     

紫外脉冲激光对聚氯乙烯（PVC）塑料刻蚀产物的研究

利用四极质谱和离子能量分析器，测定了紫外激光刻蚀ＰＶＣ塑料产生的分子、原子和离子产物的质量分布和各种离子的平动能分布，研究了激光通量对刻蚀的影响，发现离子的产生需要比中性产物有更高的激光阈值，讨论了紫外激光对ＰＶＣ塑料的刻蚀剥离机理。