肺耐药蛋白基因在急性白血病中的表达及临床意义

目的　检测急性白血病患者肺耐药蛋白 (Lungresistanceprotein ,LRP)基因mRNA表达 ,探讨其与多药耐药和预后的关系。方法　采用半定量逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测 47例急性白血病患者及 7例正常对照骨髓细胞LRP基因的表达。结果　正常骨髓细胞LRP基因表达阴性 ,2 5例初治急性髓细胞白血病 (AML)患者中 1 7例LRP基因表达阳性 ,1 2例初治急性淋巴细胞白血病 (ALL)中仅 1例阳性 ,1 0例复发难治患者 8例阳性 ,初治AML组及复发难治组较正常对照组相比表达率明显升高 ,差异有显著性 (P =0 .0 0 1 ) ,LRPmRNA表达水平与初次化疗不敏感及预后差有关 ,LRPmRNA阳性患者的完全缓解率明显低于表达阴性者 (分别为 3/1 1 ,4/5 ,P <0 .0 5)。结论　LRP基因表达水平与急性髓细胞白血病化疗效果及预后密切相关 ,是一项新的耐药指标 ,检测LRP的表达可以指导治疗 ,估计预后     

bcl-2基因在急性白血病细胞中的表达及其意义

目的 :探讨急性白血病 (AL)患者骨髓细胞中bcl- 2基因的表达及其与AL的分型、临床特征、疗效及预后因素的关系。方法 :采用免疫组化SP法检测 5 4例初治AL骨髓细胞的bcl- 2基因的表达情况 ,分析其与FAB分型、临床特征、疗效及预后因素的关系。结果 :(1)AL骨髓细胞中bcl- 2基因的表达显著高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,bcl- 2基因表达在急性髓系白血病 (AML)与急性淋巴细胞白血病 (ALL)无显著差异 ;(2 )按FAB分型AML各亚型比较 :bcl- 2在M 4及M5中的表达高于M1、M2和M3(P <0 .0 5 ) ;bcl- 2的表达与初诊时的白细胞数呈正相关 (R =0 .4 4 ,P <0 .0 5 ) ,与疗效呈负相关 (R =- 0 .4 0 ,P<0 .0 5 )。结论 :bcl- 2基因在AL骨髓细胞中呈高表达 ,可作为AL疗效观察及预后判断的指标之一。     

肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及临床意义

为了研究肺耐药蛋白基因和多药耐药相关蛋白基因在急性白血病骨髓细胞中的表达及其临床意义，采用半定量逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测初治急性白血病、复发难治白血病及正常对照骨髓细胞肺耐药蛋白基因(lung resistance protein，LRP)及多药耐药相关蛋白基因(multidrug resistance protein，MRP)的表达。结果显示，正常对照骨髓细胞LRP表达阴性，初治急性髓细胞白血病(AML)组及复发难治组LRP表达水平与正常对照组相比明显升高，增高的LRP mRNA水平与对初次化疗不敏感及预后差有关，LRP表达阳性患的完全缓解率明显低于表达阴性。经直线相关分析发现，LRP表达与MRP表达水平成正相关。结论：LRP可能是一项新的耐药指标，其高表达与急性髓细胞白血病的疗效及预后密切相关，同时检测LRP和MRP的表达可以指导治疗，估计预后。     

同源盒基因HoxA10在急性白血病中的表达及相关研究

本研究探讨HoxA10基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义.运用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法,检测50例急性白血病患者和10例对照者（7例正常人、3例ITP）中HoxA10mRNA的表达水平;分析其在急性白血病中的表达规律及与临床预后的关系.结果表明：HoxA1o在各型急性髓系白血病中均表达,在急性淋巴细胞白血病和部分对照者中低表达.3例正常人不表达HoxA10.HoxA10 mRNA表达水平在急性髓系白血病明显高于急性淋巴细胞白血病患者和对照组（P＜0.01）,在急性髓系白血病中,M1型和M2型表达水平高于M4型和M5型,在M3型有显著高表达.骨髓中原、幼细胞比例和HoxA10mRNA表达水平呈正相关关系（r=0.635,P＜0.01）.未缓解组9例患者HoxA10表达水平高于缓解组8例患者,但无显著差异（P=0.258）.1例M2患者和1例M5患者缓解后HoxA10不表达.结论：HoxA10在急性髓系白血病中有异常高表达,具有髓系特异性,可作为区别淋系和髓系的标志性基因,但不是肿瘤细胞特有的基因,而是一类调控造血的转录因子,能与多种协同因子共同影响白血病的发生和发展.HoxA10的表达水平与肿瘤细胞负荷有关,与急性白血病的疗效有一定关系.     

急性白血病中LRP基因表达与抗癌药耐药及临床疗效的关系

1　引　言肺耐药相关蛋白(LRP)基因是最近在非P-糖蛋白多种药物耐药肿瘤细胞系中发现的,国外有学者通过实验初步揭示了LRP基因与急性白血病化疗耐药有关[1]。我们从1997年10月至1998年11月用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测29例急性白血病LRP表达,同时用噻唑兰(MTT)法测药敏,分析LRP基因的表达水平与临床耐药的关系。2　对象和方法2.1　对　象我院收治的急性白血病患者共29例,按FAB分型包括急性淋巴细胞白血病L1型1例,急性淋巴细胞白血病L2型3例,急性白血病混合型2例,急性粒细胞白血病(AML)未分化型(M1)2例,AML部分分化型(…     

c-fes基因在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究观察了c—fes基因在急、慢性白血病患者骨髓细胞中的表达情况,并探讨其临床意义。采用实时定量逆转录-聚合酶链反应（RQ—PCR）方法,分别检测121例急、慢性白血病患者骨髓和20例正常人外周血单个核细胞中c-fesmRNA的表达水平。结果表明,急性髓系白血病（aML）患者组c-fes基因相对表达量（48．017±57．170）×10^-3高于正常对照组（0．152±0．398）×10^-3（P〈0．0001）;急性淋巴细胞白血病（ALL）患者组c—fes基因相对表达量（0．047±0．068）×10^-3。与正常对照组相比无差异（P=0．178）;慢性髓系白血病（CML）患者组c—fes基因相对表达量（21．605±24．818）×10^-3高于正常对照纽（P〈0．0001）。CML慢性期阳性率（80％）高于加速期（66．7％）和急变期（28．6％）,AML患者中C-fes基因阳性率最高的亚型是M2和M3,分别为80．77％、92．86％。初治AML（非M3）患者中,c-fes基因表达阳性患者的CR率（81．08％）高于不表达患者（40．00％）。结论：C-fes基因主要在髓系表达,在淋系中无表达或低表达;c-fes基因在髓系分化方面具有一定的作用,c-fes基因表达高的除M,外的AML患者CR率高,预后好。     

宫颈癌中耐药基因的表达及其临床意义

目的探讨多药耐药基因LRP、GST-π在宫颈癌中的表达特点及临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测LRP、GST-π基因在10例正常组织和52例宫颈癌组织中的mRNA表达情况。结果在宫颈癌组织中LRP、GST-π的阳性率表达分别为67.3%和59.6%。10例正常组织中LRP不表达,GST-π表达1例。宫颈癌组织中LRP、GST-π的表达高于正常组织(P<0.05)。两者的表达均与患者的淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期无关(P>0.05)。LRP、GST-π之间的表达无相关性。结论 LRP、GST-π在宫颈癌中较高的阳性率表达可能共同参与宫颈癌对顺铂的固有耐药机制,为协助临床选择化疗方案可能具有一定的指导意义。     

核干细胞因子基因在急性白血病细胞表达的检测和意义

目的检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在急性白血病细胞的表达情况,探讨NS基因与急性白血病发病机制之间的关系。方法从NS基因的3个变异体中筛选出共同序列设计特异性引物,应用逆转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)对白血病细胞系K562、HL60和急性粒细胞白血病(M1、M2a和M3),急性单核细胞白血病(M5a和M5b),急性淋巴细胞白血病(ALL)进行NS基因表达水平的检测,以健康人和良性贫血患者骨髓单个核细胞作为对照。PCR产物片段为418bp。结果K562、HL60明显高表达NS基因,它与内参相比灰度值分别为0·735±0·260、0·449±0·190;急性白血病病例有相似的结果。M1+M2a、M3、M5a、M5b、ALL的灰度值分别为0·687±0·210、0·408±0·160、0·866±0·270、0·448±0·190、0·403±0·190;对照组健康人和良性贫血不表达或极微弱表达NS基因;同一细胞类型白血病,细胞分化停滞在早期阶段的表达NS基因的水平明显高于细胞分化停滞在后期的白血病,如K562高于HL60;M1、M2a高于M3;M5a高于M5b(P<0·01)。结论NS基因在急性白血病细胞中呈高表达状态,这与白血病的发生、发展有一定关联;不同分化阶段的白血病细胞表达NS基因水平存在着差异。NS基因在急性白血病细胞的表达情况也显示了癌细胞和干细胞在某些方面的相似性,可能是一个潜在的基因治疗靶位。     

儿童肿瘤及急性白血病中ICAM-1(CD54)的表达及在CIK细胞免疫治疗中的临床意义

本研究旨在探讨细胞间黏附分子1(ICAM-1,CD54)在初诊儿童肿瘤及急性白血病细胞上的阳性表达率,以了解其分布规律及其临床意义。采用免疫组织化学方法检测46例儿童实体瘤的病理组织切片ICAM-1的阳性率,通过流式细胞仪检测60例儿童急性白血病细胞上ICAM-1的阳性率。儿童实体瘤包括淋巴瘤10例,肝母细胞瘤3例,神经母细胞瘤6例,横纹肌肉瘤2例,尤文氏肉瘤6例,纤维肉瘤2例,原始神经外胚层肿瘤5例,肾母细胞瘤11例,骨肉瘤1例;急性白血病包括急性淋巴细胞白血病(ALL)20例,急性非淋巴细胞白血病(ANLL)40例(M1 6例、M2 7例、M3 7例、M4 15例、M5 5例)。结果表明,儿童肿瘤组中3例肝母细胞瘤ICAM-1全部阳性,而在淋巴瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤及尤文氏肉瘤阳性率不高,纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤患儿中未见ICAM-1表达。急性白血病组中ALL的ICAM-1阳性率为55%,ANLL的M1、M2、M3型ICAM-1的阳性率为65%,M4、M5型为50%。结论:ICAM-1在儿童肿瘤、急性白血病细胞上的表达呈一定变异性,其在肝母细胞瘤及ANLL(M1、M2和M3)上阳性率高,而在纤维肉瘤、肾母细胞瘤及原始神经外胚层肿瘤等中不表达。     

非小细胞肺癌中肺耐药蛋白的表达及与临床病理特征的关系

目的 探讨肺耐药蛋白(LRP)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及与临床病理特征的关系.方法 运用荧光定量-聚合酶链反应(FQ-PCR)检测47例肺癌组织和14例正常组织LRP mRNA的表达.结果 LRP mRNA在癌组织、正常组织中表达阳性率分别为74.5%(35/47)、14.3%(2/14),正常组织中LRP mRNA表达值为0.19±0.17,癌组织中为0.58±0.24,癌组织中LRP mRNA表达明显高于正常组织,差异有统计学意义(t=5.72,P=0.001);LRP mRNA表达与患者年龄、性别、组织学分型、淋巴转移及临床分期无关(P＞0.05),而与肿瘤分化程度有关(P=0.001).结论 NSCLC中存在原发性耐药现象,LRP mRNA高表达在NSCLC对顺铂的原发性耐药中可能起重要作用.     

肿瘤相关基因chp2在白血病细胞中表达的研究

为了探讨人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达的特点，选择24例白血病患者、4种白血病细胞系及10名正常人外周血单个核细胞（PBMNC），用实时定量PCR（RQ—PCR）方法检测chp2基因的表达水平。结果显示，10例正常对照细胞chp2mRNA的表达检出率为80％，阳性的表达量为（0．744±0．682）×10^5cps／μl。白血病原代细胞和白血病细胞系chp2mRNA的表达量较正常对照组明显增高（p〈0．05），原代细胞中的7例急性髓细胞白血病（AML）、6例慢性髓细胞白血病（CML）、7例急性淋巴细胞白血病（ALL）和4例慢性淋巴细胞白血病（CLL）的表达量分别是（11．637±5.588）、（6．122±3．785）、（4．262±2．561）和（3．434±1．974）×10^5cps／μl；白血病细胞系中K562细胞、Jurkat细胞、HL-60细胞和M07e细胞的表达量为（5．243±1.852）、（4．463±1．621）、（4．137±1．837）和（2．578±1．137）×10^6cps/μl，白血病细胞系的表达量高于原代细胞。结论：人类肿瘤相关基因chp2在白血病原代细胞和白血病细胞系中表达水平明显增高，提示其在白血病细胞生长过程中发挥着重要的作用。     

CD56在急性白血病细胞中的表达及临床意义

为了探讨CD56在急性白血病中的表达情况及意义。采用多色流式细胞术（FCM）对70例急性白血病患细胞表面CD56及其它白细胞分化抗原表达进行了分析，结果表明，70例中有16例（22．86％）表CD56，急性髓性白血病（AML）的CD56阳性表达率（15／31，48．39％）明显高于急性淋巴细胞白血病（ALL）（1／35，2．86％）（P＜0．01），CD56在AML各亚型中表达也有差异，AML－M0，－M1和－M2中阳性率（11／15）明显高于AML－M3，－M4和－M5（4／16）P＝0．013）。15例CD56^ 的AML病例中表达HLA－DR13例（41．94％），两呈明显正相关（r=0.439,n=31,P=0.014,结论：CD56主要在AML中表达，对AML的诊断，预后判断及微小残留病的检测具有重要意义。     

急性髓系白血病细胞Flt-3表达及Flt-3/ITD突变分析

本研究探讨急性白血病（acute leukemia,AL）细胞株Flt-3基因表达和Flt-3/ITD突变与急性白血病特别是急性髓系白血病（acute myelood leukemia,AML）发病的关系.采用RT-PCR分析联合测序的方法检测82例白血病细胞株,其中包括20例AML细胞株和57例急性淋巴细胞白血病细胞株（ALL）,5株CML细胞株的Flt-3表达和Ht-3/ITD突变.结果表明：77例AL细胞株中有48例Flt-3表达阳性,阳性表达率为62%,其中20例AML细胞株中有12例阳性,阳性表达率为60%;57例ALL细胞株中有33例阳性,阳性表达率为58%.5例CML细胞株中有3例阳性,阳性表达率为60%.12例Flt-3表达阳性的AML中有1例AMOL细胞株存在有异常表达（阳性率为8.3%）,测序显示存在有29 bp的两个编码重复序列,其余Flt-3表达阳性的细胞株未检出重复序列.未分化B细胞系Flt-3基因表达阳性率明显高于成熟B细胞ALL（P＜0.05）.结论：Flt-3基因在不同种类的白血病细胞中存在着不同程度的表达,在其中1例AML中发现有Flt-3/ITD重复序列.Flt-3基因及Flt-3/ITD突变检测可能有助于ALL特别是AML的诊断.     

急性髓系白血病核仁磷酸蛋白基因及其突变检测方法的建立

本研究建立PCR技术检测白血病细胞核仁磷酸蛋白（nucleophosmin，NPM）基因及突变的方法。以白血病细胞系和白血病临床标本为研究对象，首先采用RT—PCR检测NPM mRNA表达水平，其次应用PCR方法检测NPM第12外显子，并对扩增产物进行测序分析，最后以插入NPMA型突变cDNA的质粒作为阳性模板，建立PCR检测NPM突变的方法并进行方法学评价，并采用此方法直接检测白血病细胞中是否存在NPM基因突变。结果表明：白血病细胞系NPM mRNA表达水平较正常单个核细胞对照组高，23例急性髓系白血病标本均不同程度地高表达NPM mRNA；采用PCR扩增联合测序分析发现，髓系白血病细胞系（THP1和K562）NPM基因组第12外显子无突变，但K562细胞NPM基因3’非编码区存在1个T碱基缺失；建立直接针对NPMA型突变cDNA的PCR方法，能特异扩增NPMA型突变基因；该方法重复性好，批内、批间变异系数分别为1．6％和3．1％，灵敏度为100PgcDNA；采用此方法从23例白血病临床标本中检出2例NPM突变阳性。结论：建立了检测NPM mRNA水平和A型突变的实验方法，发现白血病细胞高表达NPM mRNA水平，部分白血病患者NPM基因发生A型突变。     

急性髓系白血病中HtrA2和WT1基因的表达

本研究通过检测HtrA2和WT1基因在急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞及细胞系中的表达,探讨其表达水平与临床变量的关系及二者之间的相关性。应用RQ-PCR方法检测104例初诊AML患者的HtrA2和WT1基因表达水平;比较其表达量与正常对照的差别,并分析与年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、预后分型及治疗疗效的关系;比较治疗前后表达量的变化,分析HtrA2与WT1二者相关性。结果表明:AML患者骨髓细胞中HtrA2表达量显著低于正常对照组(P<0.01),而WT1则显著高于正常对照组(P<0.01);二者表达量与患者年龄、性别、白细胞计数无关;HtrA2在不同的NCCN预后分组中表达量无显著差异,而WT1在预后良好组表达量明显低于预后中等组(P=0.003);无论完全缓解(CR)组还是非完全缓解(non-CR)组HtrA2表达量在治疗后均显著高于治疗前(P<0.05),而WT1表达量只有在CR组治疗后才低于治疗前(P<0.01),non-CR组治疗后虽然也低于治疗前,但差异无统计学意义;HtrA2与WT1的表达水平呈弱负相关(r=-0.249,P=0.011)。结论:HtrA2和WT1表达与白血病的发生、发展密切相关,二者表达水平呈负相关,上调HtrA2基因的表达和干扰WT1基因的表达有望成为白血病治疗的靶点。     

肿瘤相关基因fgfr3mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义

本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系。应用RT—PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3mRNA的表达，并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性。96例白血病患者包括36例AML，29例ALL和31例CML。结果表明：fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达，而在HL-60和SHI-1细胞中无表达。AL组和CML组fgfr3基因的阳性率（分别为46．15％和51．61％）与对照组相比，差异有统计学意义（P〈0．05）。AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率（分别为44．44％和48．28％）均高于对照水平，差异有统计学意义（p〈0．05）。fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数（≥20×10^9／L）呈显著性正相关（P〈0．05）。ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr／abl融合基因的异常呈显著正相关（r=0．151，P〈0．05）。而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性。结论：AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达，提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病。     

SCL基因在白血病患者骨髓基质细胞中的表达

为了解白血病干细胞 (stemcellleukemia ,SCL)基因在白血病骨髓基质细胞 (BMSC)及骨髓细胞中的表达情况 ,收集 18例急性髓系白血病 (AML)、17例慢性粒细胞白血病 (CML)、7例急性淋巴细胞白血病 (ALL)和 33例正常骨髓标本的单个核细胞 (MNC)进行体外长期培养 ,分别收集悬浮细胞 (造血细胞 )和扩增后的贴壁细胞 (BMSC)。运用RT PCR ELISA检测SCL基因的表达 ,分析表达率 ,并以管家基因 β2 微球蛋白 (β2 M)为内参照进行半定量分析。结果发现 ,SCL基因在AML(2 7.8% )和CML(11.8% )的BMSC中的表达率均低于正常对照组 (6 9 7% ,P <0 .0 5 )。SCL基因在CML骨髓造血细胞中的表达率 (6 4 .3% )高于其对应的BMSC(P <0 .0 5 )。半定量分析SCL基因在AML骨髓造血细胞中的表达水平显著高于其对应的BMSC(P <0 .0 5 )。结论 :SCL基因在AML和CML的BMSC中的相对低表达状态可能与血液病造血调控的异常有关。     

急性髓系白血病Kindlins和血管生成素表达研究

本研究旨在探讨不同白血病细胞系、成人急性髓系白血病Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3的表达情况及其意义。采用RQ-PCR方法检测88例AML患者、9例非肿瘤患者(对照组)以及K562、KG-1a、U937、HL-60、Jurkat细胞株中Ang-1、Ang-2、Tie-2、Kindlin-2、Kindlin-3表达水平,分析阳性率及表达水平在AML患者与对照组间的差异,探讨上述5种基因之间及其与AML分型、预后的关系。结果表明,Ang-1,Ang-2,Kindlin-3在K562、KG-1a、HL-60、U937、Jurkat细胞系中均有表达,Tie-2仅表达于KG-1a、HL-60细胞系中,Kindlin-2表达于K562、KG-1a、HL-60中。5种基因均表达于AML患者及对照组中。Ang-1、Ang-2在起病时白细胞计数较高组的表达水平较高(P<0.001,P=0.001),在伴有t(8;21)和t(15;17)的AML患者中表达均较低(P<0.001,P=0.005)。Ang-1在NCCN预后良好组表达较低(P=0.020);Ang-1低表达组完全缓解率(CR)较高(P=0.027)。Kindlin-2在AML患者中表达水平较低(P=0.010),起病时白细胞计数较高组的表达水平较低(P=0.020),伴有t(8;21)和t(15;17)AML的表达均较高(P=0.016),治疗缓解后Kindlin-2及Kindlin-3表达明显升高(P<0.001,P=0.004)。结论:Ang-1与AML不良预后因素相关;Kindlin-2在AML中低表达,与AML良好预后因素相关,可能是一个预后较好的标志。